丝状真菌形态观察共27页
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丝状真菌的鉴定
鉴定得分
数量及 百分比(%)
使用布鲁克丝状真菌库
v1.0 ≥2.0 ≥1.7 ＜1.7 错误
联合布鲁克和BMU数据库 ≥2.0 ≥1.7 ＜1.7 错误
55 67 37 7
90 104 0 7
(49.5) (60.4) (33.3) (6.3) (81.1) (93.7) (0) (6.3)
111株毛霉：根霉属(48)，毛霉属(41)，横梗霉属(11)，根毛霉属(4)，小 克银汉霉属(5)，共头霉属(2)
染色：乳酸酚棉兰染色
02 丝状真菌MALDI-TOF MS鉴定
MALDI-TOF MS鉴定丝状真菌
样品制备 ➢ 直接转移法 ➢ 甲酸提取法—推荐
数据库 ➢ 商业数据库 ➢ 补充数据库
其他影响因素 ➢ 黑色素抑制 ➢ 沙氏葡萄糖液体培养基旋转培养
MALDI-TOF MS-毛霉目真菌的鉴定
• Centraalbureau voor Schimmelcultures (hppt://www.cbs.knaw.nl)
04 常见丝状真菌鉴定
曲霉-直接镜检
曲霉-分生孢子头
分生孢子 瓶梗 顶囊 分生孢子柄
梗基
足细胞
烟曲霉 Aspergillus fumigatus
黄曲霉 Aspergillus flavus
毛霉目真菌-直接镜检
孢囊孢子
柱孢囊
囊轴
囊托
顶囊 孢囊梗
匍匐菌丝
单孢囊
假根
厚壁孢子
粉孢子
毛霉目基本结构
接合孢子 茎孢子
Lichtheimia
横梗霉（Lichtheimia）, 毛霉（Mucor）, 根毛霉（Rhizomucor）和根霉（Rhizopus）的孢子囊特征
丝状真菌：霉菌
霉菌菌丝的细胞结构
霉菌的细胞结构
具有典型的真核生物的细胞结构： 细胞壁（几丁质），细胞膜，细胞核，细胞质 细胞器（液泡，线粒体，内质网，核糖体，泡 囊，膜边体，高尔基体、微管、微体） 储藏物（糖原，脂肪滴等）
霉菌的菌落特征
质地疏松，呈絮状、 蜘蛛网状、绒毛状 或 地毯状。 形态大，分为： 局限性生长 （青霉，曲霉） 蔓延性生长 （根霉，毛霉） 干燥
菌丝的特化
1）菌环：菌丝交织成套状 2）菌网：菌丝交织成网状
菌丝的特化
3）匍匐菌丝、假根，功能是固着和吸收营养。
光镜下颜色较深
菌丝的特化
4）附着枝：
菌丝的特化 5）吸器：
菌丝的特化
6）附着胞：
菌丝的特化
7）菌核：
菌丝的特化
7）菌核： 假菌核，是寄生性真菌与宿主共同形成，例如冬虫夏草， 真菌寄生于鳞翅目昆虫，使虫体转变为假菌核，当孢子
颜色丰富，正反，中 心与边缘常不一致。
各种霉菌，在一定培 养基上形成的菌落大 小、形状、颜色等相 对稳定，所以菌落特 征也为分类依据之一。
繁殖方式
霉 菌 的 繁 殖 方 式
孢子
菌丝片段
有性孢子
无性孢子
芽孢子
卵孢子 接合孢子 子囊孢子 担孢子 孢囊孢子 分生孢子 节孢子 后垣孢子 厚垣孢子
霉 菌 的 无 性 孢 子
霉菌的无性孢子及特征
孢子名称 染色体 倍数 内生或 形成特征 外生 孢子形态 举例
节孢子
n
外生 外生
菌丝断裂 部分菌丝细胞质变圆、 浓缩，周围生出后壁而 成
分生孢子梗顶端细胞特 化而成的单个或簇生孢 子 孢子囊内 有鞭毛能游动的孢囊孢 子 出芽形成
成串短柱状 圆形、柱形
真菌形态观察
铅锌矿：1-3G-1 孢子细小圆形孢子生长密集孢子颜色浅菌落：白色绿白菌丝粗干燥边缘不光滑反面白色绿白色菌落周围生长白色菌丝极易挑取4-3J-2-1 孢子白色孢子很少孢子生长于菌丝之间无隔膜孢子小圆形菌落：白色菌丝絮状边缘不光滑反面白色菌落中部湿润不易挑取4-3G-1-2 孢子圆形无隔膜孢子散生菌丝多菌落：白色菌丝干燥生长密集絮状边缘光滑反面黑色易挑取4-3J-1-2 菌丝棕黑无隔膜孢子很少菌丝也少孢子生于菌丝中间菌落：绿白菌丝绒毛状生长茂盛反面黑绿边缘不光滑易挑取4-4G-3 菌丝无隔膜孢子少圆形孢子生于菌丝顶端菌落：橙黄色菌丝绒毛状边缘不光滑反面褐色4-4-Y-1 菌丝棕黑孢子正萌发圆形孢子生长密集有重叠菌落：绿白菌丝干燥反面黑色不易挑取4-3J-2 孢子棕黑圆形散生有重叠菌丝极少菌落：灰色黑灰菌丝细边缘不光滑反面黑色易挑取空白：细菌呈粒状极小无菌水散生菌落：暗绿边缘一圈淡绿色菌落细小粉状反面白色菌落细致极不易挑取1-#G-3 孢子棕黑孢子多无隔膜孢子生于菌丝间菌落：银白色菌落干燥生长稀疏放射状边缘不光滑反面黑色易挑取拮抗：4-4G-1 无菌丝孢子生长密集小圆形棕黑色孢子有重叠菌落：橙黄菌丝絮状边缘光滑反面橙色不易挑取11-#J-4 孢子长椭圆形圆形菌丝少生长紧密菌落：白色菌丝粗放射状生长茂盛边缘不光滑反面棕色易挑取8#Y-2 菌丝多棕绿棕黑无隔膜孢子少生于菌丝顶端菌落：绿白白色灰色夹杂菌丝小绒毛状边缘不光滑反面黄色不易挑取4-#J-3 菌丝多极细银灰孢子少生于菌丝顶端无隔膜菌落：绿白色白色菌丝絮状边缘不光滑反面灰黑不易挑取11#Y-5 菌丝少量棕黑孢子散生圆形7#J-7 无菌丝孢子黄棕细小无规则圆形生长密集有重叠菌落：白色正反颜色一样边缘光滑菌落光滑生长密集易挑取7#J-8 无菌丝孢子生长密集银白色细小不规则圆形菌落：黄白菌丝极细菌落圆形反面白色边缘不光滑易挑取8#G-2 无菌丝孢子小银白生长不密集散生菌落：绿白菌丝细反面黄色边缘不光滑不易挑取11#Y-1 孢子多棕黑菌丝多有隔膜菌丝大粗孢子生于菌丝中菌落：银白菌落较透明菌丝细小绒毛状中部接培养基处湿润边缘不光滑反面颜色接近培养基不易挑取5#G-3 棕色孢子小圆形生长密集菌丝极少菌落：白色菌丝生长密集边缘不光滑反面白色易挑取8#J-3 孢子少菌丝无棕黑孢子极小粒聚集生长菌落：黄色菌丝生长密集边缘不光滑反面棕黑易挑取7#J-1 菌丝多孢子少生于菌丝内棕黑菌丝长交叉孢子生于菌丝中菌落：白色菌丝，边缘不光滑菌丝粗长生长放射状边缘反面白色不易挑取7#J-5 菌丝少孢子多棕色圆形较大菌丝无隔膜孢子生于菌丝顶部菌落：中部接培养基处湿润，绒毛状菌丝，菌丝生长稀疏，放射状，边缘不光滑，反面白色，不易挑取5#Y-4 橙黄有隔膜菌丝多长条生长密集孢子扁圆生于菌丝头部菌落：黄白，菌丝细，绒毛状，生长稀疏，反面暗红，边缘不光滑，易挑取。
最新实验五放线菌、真菌形态观察及各类微生物菌落特征观察PPT课件
2 实验原理
放线菌形态结构介于细菌与真菌之间，菌体由无隔、 分支状菌丝构成，可分为基内菌丝和气生菌丝两类， 基内菌丝伸入营养基质内；气生菌丝位于营养基质 上方。在发育过程中，气生菌丝分化形成孢子丝， 孢子丝产生孢子。孢子丝形态因菌种不同而不同， 有直线形、波曲形、螺旋状等形态，而孢子一般有 球形、圆柱形、椭圆形等。
4 实验步骤
▲ 借助放大镜分别观察各类微生物的菌落的 大小，表面粗糙及含水分状况，边缘，致 密程度、透明程度，及厚度等特征，并填 写记录表。
▲ 根据观察结果总结各类微生物菌落的一般 特征。
表1 细菌、放线菌、真菌菌落形态特征观察
描述的特征
菌落特征
微生物种类
大小 表面 边缘 致密 厚薄 透明 色泽 程度 程度 程度
1 实验目的要求
▲学习并掌握水浸片法制备标本片的方法 ▲观察黑根霉的菌丝形态特征（自制片） ▲观察曲霉、青霉的典型菌丝特征（示范片） ▲按要求绘制黑根霉形态图
2 实验原理
霉菌由粗大、有隔或无隔分支状菌丝构成，菌丝分为基内菌 丝、气生菌丝，气生菌丝上产生多种无性、有性孢子，孢子 着生部位、排列方式以及孢子形态可作为真菌鉴定的重要依 据。菌丝特化形成假根等特化菌丝。
实验五放线菌、真菌形态观察 及各类微生物菌落特征观察
实验内容
一 各类微生物菌落特征观察 二 放线菌形态观察 三 酵母菌形态观察 四 霉菌形态观察
酵母菌菌落特征
与细菌相似
比细菌大而厚， 不透明，表面光滑、 湿润、粘稠，易用 针挑起。多呈乳白 色。
青 霉 菌 落
霉菌的菌落特征 比细菌菌落大，由菌丝组 成疏松的绒毛状、絮状或 蜘蛛网状，有的无固定大 小，延至整个培养基中， 产色素，使菌落显色。
微生物学课件第二章 真核微生物的形态、构造和功能 第三节 丝状真菌——霉菌
第三节 丝状真菌——霉菌
霉菌（mould, mold）
霉菌是丝状真菌的一个 俗称，意即“会引起物品霉变 的真菌”。
霉菌通常是指菌丝体 较发达又不产生大型肉质 子实体结构的真菌。
一、分布及与人类的关系
1. 在自然界分布极广 2. 有用物品的生产 3. 基础理论研究中良好的试验材料 4. 食物、工农业制品的霉变 5. 引起动植物和人的疾病 6. 在自然界物质转化中有十分重要的作用
延伸区 硬化区
次生细胞壁形成区
成熟区 隔膜区
几丁质（内） 蛋白质（外）
几丁质层（内） 蛋白质层 葡聚糖蛋白网层 葡聚糖层
菌丝内壁向内延伸 而成的环片状构造
粗糙脉孢霉菌丝尖端的成熟和分化
（二） 菌丝体及其各种分化形式
由许多菌丝相互交织而成的一个菌丝集团 称菌丝体（mycelium，复数mycelia）。
1. 在自然界分布极广
霉菌同人类的生产、生活 关系密切，是人类实践活动中 最早认识和利用的一类微生物。
2. 有用物品的生产
（1）工业： 青霉素、灰黄霉素等抗生素； 柠檬酸、延胡索酸等有机酸； 淀粉酶、纤维素酶等酶制剂； 维生素、甾体激素、酒精等化工医药产品。
（2）食品： 酱油的酿造和干酪的制造。
（1）结构简单的子实体
子实体
（2）结构复杂的子实体
分生孢子头（conidial head） 无性
特 结构简单
孢子囊（sporangium）
化
有性 —— 担子( basidium )
的
气
分生孢子器（pycnidium）
生
无性 分生孢子座（sporodochium）
菌 丝 结构复杂
分生孢子盘（acervulus）
真 菌 的 各 种 菌 丝 形 态
霉菌（mould, mold）
霉菌是丝状真菌的一个 俗称，意即“会引起物品霉变 的真菌”。
霉菌通常是指菌丝体 较发达又不产生大型肉质 子实体结构的真菌。
一、分布及与人类的关系
1. 在自然界分布极广 2. 有用物品的生产 3. 基础理论研究中良好的试验材料 4. 食物、工农业制品的霉变 5. 引起动植物和人的疾病 6. 在自然界物质转化中有十分重要的作用
延伸区 硬化区
次生细胞壁形成区
成熟区 隔膜区
几丁质（内） 蛋白质（外）
几丁质层（内） 蛋白质层 葡聚糖蛋白网层 葡聚糖层
菌丝内壁向内延伸 而成的环片状构造
粗糙脉孢霉菌丝尖端的成熟和分化
（二） 菌丝体及其各种分化形式
由许多菌丝相互交织而成的一个菌丝集团 称菌丝体（mycelium，复数mycelia）。
1. 在自然界分布极广
霉菌同人类的生产、生活 关系密切，是人类实践活动中 最早认识和利用的一类微生物。
2. 有用物品的生产
（1）工业： 青霉素、灰黄霉素等抗生素； 柠檬酸、延胡索酸等有机酸； 淀粉酶、纤维素酶等酶制剂； 维生素、甾体激素、酒精等化工医药产品。
（2）食品： 酱油的酿造和干酪的制造。
（1）结构简单的子实体
子实体
（2）结构复杂的子实体
分生孢子头（conidial head） 无性
特 结构简单
孢子囊（sporangium）
化
有性 —— 担子( basidium )
的
气
分生孢子器（pycnidium）
生
无性 分生孢子座（sporodochium）
菌 丝 结构复杂
分生孢子盘（acervulus）
真 菌 的 各 种 菌 丝 形 态
丝状真菌形态观察
实验四 结 束
�
The major classes of fungi
Oomycetes(卵菌纲) Zygomycetes(接合菌纲) Ascomycetes(子囊菌) Basidiomycetes(担子菌纲) Deuteromycetes(半知菌纲)
观察霉菌的形态) 实验程序(观察霉菌的形态)
青霉, 青霉,黑曲霉观察
Mucor racemosus Geotrichum candidum Aspergillus niger Penicillium notatum Rhizopus oryzae
Several types of sexual spores
Oospores(卵孢子) Zygospores(接合孢子) Ascospores(子囊孢子) Basidiospores(担孢子)
实
验
四
丝状真菌形态的观察
丝状真菌形态的观察
目的要求 实验材料 实验程序 思考题
目的要求
学习观察丝状真菌形态的基本方法 加深理解丝状真菌的形态特征
实验材料
青霉, 丝状真菌培养物 :青霉,黑曲霉 水浸片法:根霉, 水浸片法:根霉,白地霉 显微镜,载玻片,接种环,解剖针,酒精灯, 显微镜,载玻片,接种环,解剖针,酒精灯, 镊子等. 镊子等. 乳酚油,碘液,酒精,蒸馏水等. 乳酚油,碘液,酒精,蒸馏水等.
囊轴columella 囊轴 囊托apophysis 囊托 孢子囊sporangium 孢子囊
匍匐菌丝stolon 匍匐菌丝 假根rhizoid 假根
孢子囊 sporangium
囊轴columella 囊轴
囊托apophysis 囊托 孢囊孢子sporangiospores 孢囊孢子
丝状真菌观察法
（1） 大小：它反映生长或发育速度，通常测量菌落的直径。
（2） 颜色：包括菌落表面子实体、气生菌丝、菌核的颜色和基内的颜色，还应注意培养基颜色的变化。
（3） 菌落表面的纹饰：如皱纹、辐射沟纹、同心环、整个菌落致密或疏松等。
（4） 菌落的质地：即菌落外观呈毡状、绒毛状、棉絮状、粉粒状、革质状，有无成束状或绳状的气菌丝。
丝状真菌观察法
丝状真菌地鉴定主要根据形态特征。形态特征包括群体形态和个体形态。
1 群体形态 群体形态即菌落的形态。观察菌落形态时多采用固定的培养基，将固体培养基制成平板，以点植法接种，即用接种针尖沾取少后于25－28℃培养一定时间（如2、4、7、10天）进行观察，观察时可用肉眼或借助放大镜、低倍镜、解剖镜等。观察的要点一般包括下列几项：
乳酸苯酚液的组成：
乳酸（比重1.20） 20克
石炭酸（结晶） 20克
甘油（比重1.25） 40克
蒸馏水 20克
参考文献：中国科学院微生物研究所 菌种保藏手册 773～774
（5） 菌落的高度：菌落扁平或凸起，中心部分凸起或凹陷。气生菌丝的高度。
（6） 菌落的边缘：全缘、锯齿状、树枝状等。
（7） 渗出物：指菌落表面有无液滴、液滴的颜色和数量。
2 个体形态 个体形态指菌丝的特征，子实体的形态(如孢子囊。子囊壳、子囊、担子果等的形态)，孢子的形态（如孢囊孢子、分生孢子、芽孢子、节孢子、厚垣孢子、卵孢子、接合孢子、担孢子等）。由于丝状真菌的个体大都较小，必须制成载片标本在显微镜下观察。丝状真菌的制片比较简单，通常将乳酸苯酚（Lactophenol）液一滴，滴于载片上，再用解剖针挑取欲观察的培养物置此液滴内，并且用针尖将其分散开勿使成团，盖好盖片即得载片标本。这种载片可保存数月，如盖片四周涂封漆则可保存数年。
（2） 颜色：包括菌落表面子实体、气生菌丝、菌核的颜色和基内的颜色，还应注意培养基颜色的变化。
（3） 菌落表面的纹饰：如皱纹、辐射沟纹、同心环、整个菌落致密或疏松等。
（4） 菌落的质地：即菌落外观呈毡状、绒毛状、棉絮状、粉粒状、革质状，有无成束状或绳状的气菌丝。
丝状真菌观察法
丝状真菌地鉴定主要根据形态特征。形态特征包括群体形态和个体形态。
1 群体形态 群体形态即菌落的形态。观察菌落形态时多采用固定的培养基，将固体培养基制成平板，以点植法接种，即用接种针尖沾取少后于25－28℃培养一定时间（如2、4、7、10天）进行观察，观察时可用肉眼或借助放大镜、低倍镜、解剖镜等。观察的要点一般包括下列几项：
乳酸苯酚液的组成：
乳酸（比重1.20） 20克
石炭酸（结晶） 20克
甘油（比重1.25） 40克
蒸馏水 20克
参考文献：中国科学院微生物研究所 菌种保藏手册 773～774
（5） 菌落的高度：菌落扁平或凸起，中心部分凸起或凹陷。气生菌丝的高度。
（6） 菌落的边缘：全缘、锯齿状、树枝状等。
（7） 渗出物：指菌落表面有无液滴、液滴的颜色和数量。
2 个体形态 个体形态指菌丝的特征，子实体的形态(如孢子囊。子囊壳、子囊、担子果等的形态)，孢子的形态（如孢囊孢子、分生孢子、芽孢子、节孢子、厚垣孢子、卵孢子、接合孢子、担孢子等）。由于丝状真菌的个体大都较小，必须制成载片标本在显微镜下观察。丝状真菌的制片比较简单，通常将乳酸苯酚（Lactophenol）液一滴，滴于载片上，再用解剖针挑取欲观察的培养物置此液滴内，并且用针尖将其分散开勿使成团，盖好盖片即得载片标本。这种载片可保存数月，如盖片四周涂封漆则可保存数年。
丝状真菌的鉴定
• Centraalbureau voor Schimmelcultures (hppt://www.cbs.knaw.nl)
04 常见丝状真菌鉴定
曲霉-直接镜检
曲霉-分生孢子头
分生孢子 瓶梗 顶囊 分生孢子柄
梗基
足细胞
烟曲霉 Aspergillus fumigatus
黄曲霉 Aspergillus flavus
丝状真菌的鉴定
北京大学第一医院皮肤科
主讲人：余进
余进 主任医师
北京大学第一医院 教授、博士生导师
中国微生物学会临床微生物学委 员会青年委员会副主任委员及真 菌学组副组长
中国微生物学会医学微生物学与 免疫学专委会真菌学组副组长
01
目
02
03
录
04
05
丝状真菌形态鉴定
丝状真菌MALDI-TOF MS鉴定 丝状真菌DNA测序鉴定 常见丝状真菌鉴定 总结
镰刀菌—直接镜检
镰刀菌形态特征
瓶梗
复出芽细胞
单瓶梗
复瓶梗
大分生孢子
小分生孢子
芽生孢子
厚垣孢子
足细胞
茄病镰刀菌Fusarium solani
尖孢镰刀菌 Fusarium oxysporum
层生镰刀菌 Fusarium proliferatum
轮状镰刀菌 Fusarium verticillioides
絮状表皮癣菌 Epidermophyton floccosum
05 丝状真菌鉴定总结
感谢聆听
少根根霉 Rhizopus arrhizus
不规则毛霉 Mucor irregularis
微小根毛霉 Rhizomucor pusillus
棘状小克银汉霉 Cunninghamella echinulata
04 常见丝状真菌鉴定
曲霉-直接镜检
曲霉-分生孢子头
分生孢子 瓶梗 顶囊 分生孢子柄
梗基
足细胞
烟曲霉 Aspergillus fumigatus
黄曲霉 Aspergillus flavus
丝状真菌的鉴定
北京大学第一医院皮肤科
主讲人：余进
余进 主任医师
北京大学第一医院 教授、博士生导师
中国微生物学会临床微生物学委 员会青年委员会副主任委员及真 菌学组副组长
中国微生物学会医学微生物学与 免疫学专委会真菌学组副组长
01
目
02
03
录
04
05
丝状真菌形态鉴定
丝状真菌MALDI-TOF MS鉴定 丝状真菌DNA测序鉴定 常见丝状真菌鉴定 总结
镰刀菌—直接镜检
镰刀菌形态特征
瓶梗
复出芽细胞
单瓶梗
复瓶梗
大分生孢子
小分生孢子
芽生孢子
厚垣孢子
足细胞
茄病镰刀菌Fusarium solani
尖孢镰刀菌 Fusarium oxysporum
层生镰刀菌 Fusarium proliferatum
轮状镰刀菌 Fusarium verticillioides
絮状表皮癣菌 Epidermophyton floccosum
05 丝状真菌鉴定总结
感谢聆听
少根根霉 Rhizopus arrhizus
不规则毛霉 Mucor irregularis
微小根毛霉 Rhizomucor pusillus
棘状小克银汉霉 Cunninghamella echinulata