微生物学实验报告--第八周

年级：2009 专业：医学检验班级：一班姓名：赵富海学号：2009221792

实验八、细菌的药物敏感试验

【K-B法】

菌种（均为幼龄菌）：金黄色葡萄球菌1.5×108/ml、大肠埃希菌1.5×108/ml

药物纸片：青霉素、庆大霉素、新诺明、环丙沙星

方法：

1.涂菌（棋盘划线法），室温放10min；

2.贴药敏纸片，注意间距（大于24mm）和边距（大于15mm）；

3.置35℃24h判读结果。

结果如图所示：

金黄色葡萄球菌

金黄色葡萄球菌抗菌药物敏感性试验评价结果

实验结论：金黄色葡萄球菌对青霉素耐药，对庆大霉素、新诺明、环丙沙星敏感。

【试管稀释法】

菌种：金黄色葡萄球菌1.5×108/ml、大肠b1.5×108/ml

抗生素：庆大霉素32u/ml

方法：

1.对倍稀释抗生素

2.加菌液0.1ml/管，摇均35℃16—18h

3.判读MIC

试验操作如下图所示：

注意:设立对照管(肉汤对照管,待测菌生长对照管和质控菌生长对照管) 结果判断: 不出现肉眼可见生长的最低药物浓度为该药对该细菌的MIC. 如图：

实验结论：MIC=原药物浓度(32u/ml) ×稀释倍数(1:24)=2u/ml

【联合药敏试验】（示教）

金黄色葡萄球菌大肠b

结果判断：

金黄色葡萄球菌联合药敏试验结果判读：

①青+链=青单+链单→相加作用

②青+红=青单+红单→相加作用

③青+万=青单+万单→相加作用

④青+林＞青单+林单→协同作用

大肠b联合药敏试验结果判读：

①青+红=青单+红单→相加作用

②青+链=青单+链单→相加作用

③青+林=青单或林单→无关作用

④青+南＞青单+南单→协同作用

【实验讨论】

1．K-B法原理

将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上。纸片中所含有的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断地向纸片周围区域扩散形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度。并与该药对测试菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关关系，即抑菌圈愈大，MIC 愈小。

2. K-B法影响因素

①培养基的质量，如PH、深度、硬度和表面湿度等；

②药敏纸片的质量，含药量和保存方式；

③接种菌量正确与否是影响结果的重要因素之一，取决于比浊标准的配制，正确使用和保存；

④试验操作质量：接种细菌后贴片时5~15分钟；

⑤孵育条件，温度和时间：培养时间16~18h,不要超过24h。

3．稀释法原理：

以水解酪蛋白（MH）液体培养基将抗生素作不同浓度的稀释，然后种入待测细菌，定量测定抗菌药物对被测菌的最低抑菌浓度(MIC)或最低杀菌浓度（MBC）。

4. 稀释法影响因素：培养基、接种菌量、蛋白质结合率、抗菌药物的配制、结果观察的时间等因素均能影响本试验的结果。

5．抗生素药物敏感性试验（AST）的意义

①可预测抗生素治疗的效果，既AST试验结果为“敏感”时，治疗可能有效；试验结果为“耐药”时，使用该药物治疗肯定失败；

②指导临床医生选择使用抗生素，AST的结果往往在给予病人经验性治疗24~48h之后，若AST结果为“敏感”，该治疗为有效，若结果为“耐药”，即应更换药物；

③提供所选择药物的依据；

④监测耐药性，分析耐药菌的变迁，掌握耐药菌感染病的流行病学，控制和预防耐药菌感染的发生和流行。

6．通过此次实验掌握纸片扩散法（K-B法）、试管稀释法的原理、操作方法、结果的判读及其临床意义，并掌握联合药敏试验结果的观察、判断。