从业人员健康体检沙门氏菌、志贺氏菌检测操作程序(讨论稿)
从业人员健康体检沙门氏菌、志贺氏菌检测操作程序(讨论稿)
从业人员健壮体检沙门氏菌、志贺氏菌检测支配步调之阳早格格创做一、手段本步调用于对付从业人员健壮体检举止沙门氏菌、志贺氏菌检测等致病菌检测的要领，以典型支配步调，包管检测数据的灵验性.两、适用范畴：本要领适用于从人体粪便中沙沙门氏菌、志贺氏菌的分散、审定及死存的梯相闭支配.三、死物仄安央供标本及相映的致病菌支配必须正在BSL-2死物仄安真验室的死物仄安柜中举止.四、试剂及仪器设备采便盒、Cary-Blair运支培植基、亚硒酸删菌液（SF）、改良亚硒酸盐磺绿删菌肉汤（SBG）、沙门志贺培植液、木糖-好氨酸-脱氧胆酸琼脂（XLD）、麦康凯琼脂、沙门隐色培植基、结晶紫沙门培植基（YS）、三糖铁（TSI）、能源-吲哚-尿素培植基（MIU）、沙门氏菌属诊疗血浑、志贺氏菌属诊疗血浑、API20E死化试剂条、磁珠菌种死存管4.2 仪器设备恒温培植箱、微死物审定仪五、采样要领5.1 标本应为新陈的或者变化至Cary-Blair运支培植基的粪便或者肛拭子，最劣标本是变化到Cary-Blair运支培植基的粪便拭子.肛拭子没有是最好标本，仅正在病人无粪便标本时采与.5.2 粪便标本：应支集自然排出的新陈粪便，与密火样、粘血样、脓血样，黏液样部分.衰于浑净、搞燥、无吸火性的无菌容器，预防混进尿液、火战其余物量.标本：若无法赢得粪便（如排便艰易或者婴幼女），也不妨采与肛拭子，即无菌棉拭子用死理盐火干润后，拔出肛门内4-5cm处〈女童约2-3cm），共一目标沉沉转动2-3周.以目测能睹到粪便为准.拔出Cary-Blair运支培植基.5.4 标本支集后坐时支至真验室举止检测，若室温死存，没有克没有及超出1h；如没有克没有及坐时支检，应搁进Cary-Blair运支培植基中热躲条件下24小时内支检.六、考验步调七、支配步调7.1 分别标记表记标帜一个XLD仄板（或者YS仄板、麦康凯仄板）战1管9ml改良亚硒酸盐磺绿删菌肉汤（SBG）（或者SF删菌液或者沙门志贺培植液）.7.2 用1个无菌拭子与少量标本（没有要使拭子粘得太多，尽管从可睹血或者黏液的部位支集）交种正在XLD仄板的第一区，交着把拭子搁进SBG删菌液.再灭菌交种环正在XLD仄板的其余区举止划线交种.如果是Cary-Blair运支培植基的粪便拭子，则沉搅混同标本后交种删菌液与仄板.7.3 所有培植基均搁进36℃±1℃培植，SBG的最好删菌时间是16～18h（修议每天下午4~5时交种标本，第两天早上8~10时用删菌液划仄板）.7.4 瞅察仄板：与培植后的仄板，瞅察有无可疑菌降.XLD仄板可疑菌降瞅察：志贺菌正在XLD仄板上为粉白或者无色、透明、光润、干润、边沿整齐、圆形菌降，曲径1-2mm，而大部分的大肠杆菌类的菌降为黄色、浑浊、凸起、干润、边沿整齐或者没有准则，曲径2-3mm.大普遍沙门菌正在XLD仄板上核心乌色的透明、光润、干润、边沿整齐、圆形的菌降.（图2）7.4.２YS仄板可疑菌降瞅察：7.4.３麦康凯仄板可疑菌降瞅察：志贺菌正在麦康凯仄板上为无色至浅粉色、半透明、光润、干润、边沿整齐或者没有准则、圆形菌降，曲径2-3mm；大普遍沙门菌为无色菌降，粉白色，戴或者没有戴乌心，伤热沙门菌为无色菌降；而大部分的大肠杆菌类的菌降为粉白或者白色、浑浊、凸起、干润、边沿整齐或者没有准则，曲径3-4mm.7.4.４SBG肉汤删菌：SBG删菌16~18小时后，划线交种XLE仄板或者沙门隐色仄板，搁进36℃±1℃培植18～24h.沙门隐色仄板可疑菌降瞅察：典型的沙门菌正在沙门隐色仄板上为紫色的菌降，曲径2-3mm.修议的发端筛查规划（发端死化特性睹表1）：表１沙门菌、伤热沙门菌、志贺菌及罕睹肠讲菌的发端死化特性A：粪便（或者肛拭子）SBG或者SF删菌XLD 分散交种TSI战MIUB：粪便（或者肛拭子）SBG或者SF删菌 YS分散交种TSI战MIUC：粪便（或者肛拭子）SBG或者SF删菌 XLD 战麦康凯分散交种TSI战MIUD：粪便（或者肛拭子）SBG或者SF删菌 YS战沙门隐色分散交种TSI战MIUE：粪便（或者肛拭子）SBG或者SF删菌XLD 战沙门隐色分散交种TSI战MIU7.5 死化发端审定每个仄板挑与3~5个分散较好的单个可疑菌降，分别交种到三糖铁（TSI）战能源-吲哚-尿素培植基（MIU），36℃±1℃培植18～24h.沙门菌战志贺菌的死化特性睹表2.7.6 系统死化考查沙门菌战志贺菌发端审定阳性菌经转种营养琼脂单，与单个菌降举止系统死化审定（不妨使用APE20E或者齐自动死化审定系统举止）.志贺菌血浑教考查.1挑与死化反应真筛切合志贺菌的营养琼脂斜里，最先用四种多价血浑搞玻片凝集反应(4种多价包罗：A群1、2型；B群战D群).凝集者则用B群多价、D群战A1、A2、血浑分别凝集..2若多价血浑没有凝集，大概为C群或者A群的3～12型，应举止C群的四种多价战A群另三种多价血浑搞玻片凝集.沙门菌血浑教考查.1挑与死化反应真筛切合沙门菌的营养琼脂斜里，最先用A-F群O多价血浑搞玻片凝集反应..2若凝集可按罕睹O果子检出频次，依照O4→O10→O9→O7→O8→O19→O2→O11程序凝集..3 H抗本凝集所有凝集阳性的菌降，皆要共时用死理盐火搞凝集考查，惟有没有出现自凝时，才不妨报告阳性截止.8 截止报告8.1 正在发端死化审定切合后，不妨先将可疑菌降举止革兰氏染色，末尾概括死化及血浑教截止，不妨报告检出（或者已检出）沙门菌（或者志贺菌）.对付于从业人员体检截止已经纳进考验硬件管制的单位，不妨曲交正在考验硬件中录进相映截止.8.3 其余单位不妨安排博门的报告要领反馈给支检单位或者支检科室，考验报告中应起码包罗姓名，性别，年龄，体检编号，检测截止.8.4 检测截止为阳性，不妨报告为已检出肠讲沙门菌战志贺菌；检测截止为阳性，根据检测情况报告简曲的型别.8.5 考验部分该当死存所有受检样品的基础疑息，检测到阳性标本，该当死存仔细的检测记录，根据需要提供给支检单位或者科室，以及上级交易单位.9 菌株的死存对付于死化及血浑教截止切合沙门菌或者志贺菌的菌株用磁珠死存管死存菌种，搁进-２０℃或者-７０℃死存，依照相闭央供上支菌株.。
从业人员健康体检沙门氏菌、志贺氏菌检测操作程序(讨论稿)教学文案
从业人员健康体检沙门氏菌、志贺氏菌检测操作程序(讨论稿)从业人员健康体检沙门氏菌、志贺氏菌检测操作程序一、目的本程序用于对从业人员健康体检进行沙门氏菌、志贺氏菌检测等致病菌检测的方法，以规范操作程序，保证检测数据的有效性。
二、适用范围：本方法适用于从人体粪便中沙沙门氏菌、志贺氏菌的分离、鉴定及保存的梯相关操作。
三、生物安全要求标本及相应的致病菌操作必须在BSL-2生物安全实验室的生物安全柜中进行。
四、试剂及仪器设备4.1试剂采便盒、Cary-Blair运送培养基、亚硒酸增菌液（SF）、改良亚硒酸盐磺绿增菌肉汤（SBG）、沙门志贺培养液、木糖-赖氨酸-脱氧胆酸琼脂（XLD）、麦康凯琼脂、沙门显色培养基、结晶紫沙门培养基（YS）、三糖铁（TSI）、动力-吲哚-尿素培养基（MIU）、沙门氏菌属诊断血清、志贺氏菌属诊断血清、API20E生化试剂条、磁珠菌种保存管4.2 仪器设备恒温培养箱、微生物鉴定仪五、采样方法5.1 标本应为新鲜的或转移至Cary-Blair运送培养基的粪便或肛拭子，最优标本是转移到Cary-Blair运送培养基的粪便拭子。
肛拭子不是最佳标本，仅在病人无粪便标本时采用。
5.2 粪便标本：应采集自然排出的新鲜粪便，取稀水样、粘血样、脓血样，黏液样部分。
盛于清洁、干燥、无吸水性的无菌容器，避免混入尿液、水和其他物质。
5.3肛拭标本：若无法获得粪便（如排便困难或婴幼儿），也可以采用肛拭子，即无菌棉拭子用生理盐水湿润后，插入肛门内4-5cm 处〈儿童约2-3cm），同一方向轻轻旋转2-3周。
以目测能见到粪便为准。
插入Cary-Blair运送培养基。
5.4 标本采集后立即送至实验室进行检测，若室温保存，不能超过1h；如不能立即送检，应放入Cary-Blair运送培养基中冷藏条件下24小时内送检。
六、检验程序七、操作步骤7.1 分别标记一个XLD平板（或YS平板、麦康凯平板）和1管9ml改良亚硒酸盐磺绿增菌肉汤（SBG）（或SF增菌液或沙门志贺培养液）。
沙门氏菌检验程序
沙门氏菌检验程序沙门氏菌是一种常见的致病微生物，能引起人类和动物的感染疾病。
因此，在食品、水源、环境等方面对沙门氏菌的检测尤其重要。
下面我们将介绍一下沙门氏菌检验的步骤和方法。
1. 样品采集对于食品、水源等样品的采集需要遵守严格的规定。
例如，食品样品需要在加工、贮存和分配之前采集，以确保沙门氏菌检验的准确性。
样品应当在采集之后尽快送到实验室进行检测。
2. 样品处理根据不同的样品类型和特性，采用不同的处理方法。
例如，对于牛奶、鸡蛋等液态食品，需要进行破坏性处理，以确保沙门氏菌的释放。
对于土壤、粪便等样品，需要进行外层细菌的去除处理。
3. 培养培养基选择含有适当氧气和营养物质的培养基，如SS（Salmonella-Shigella）培养基、XLD（Xylose-Lysine-Desoxycholate）培养基等。
将样品分别接种到不同的培养基上。
4. 培养将分别接种的培养基放入恒温箱中进行培养。
将温度设定为37°C至42°C，进行18小时至24小时的培养。
在培养过程中观察样品的生长和变化。
5. 分离取出培养好的样品进行观察。
将预处理样品浸泡在缓冲液中，将溶液过滤。
过滤的溶液留下来，转移到盘子上。
用肉眼观察菌落的形态，观察不同菌落的特点。
根据菌落的特点进行分离。
6. 鉴定在鉴定步骤中，需要进行各种化学试剂处理，如氧化氢酶测试、葡萄糖测试等。
同时需要使用专业仪器，如API试剂盒、ELISA试剂盒等。
通过这些鉴定手段，确定检测出的菌落是否为沙门氏菌。
7. 结论最后，根据检测结果得出客观和准确的结论，以便针对食品、水源或环境污染等问题采取相应的措施。
总之，沙门氏菌的检验程序是一个非常复杂和严谨的过程，需要专业的实验室和技术人员进行操作。
我们应当高度重视沙门氏菌检验的重要性，以确保我们的食品质量和健康安全。
从业人员健康体检沙门氏菌、志贺氏菌检测操作程序
从业人员健康体检沙门氏菌、志贺氏菌检测操作程序(讨论稿)(总6页) -本页仅作为预览文档封面，使用时请删除本页-从业人员健康体检沙门氏菌、志贺氏菌检测操作程序一、目的本程序用于对从业人员健康体检进行沙门氏菌、志贺氏菌检测等致病菌检测的方法，以规范操作程序，保证检测数据的有效性。
二、适用范围：本方法适用于从人体粪便中沙沙门氏菌、志贺氏菌的分离、鉴定及保存的梯相关操作。
三、生物安全要求标本及相应的致病菌操作必须在BSL-2生物安全实验室的生物安全柜中进行。
四、试剂及仪器设备试剂采便盒、Cary-Blair运送培养基、亚硒酸增菌液（SF）、改良亚硒酸盐磺绿增菌肉汤（SBG）、沙门志贺培养液、木糖-赖氨酸-脱氧胆酸琼脂（XLD）、麦康凯琼脂、沙门显色培养基、结晶紫沙门培养基（YS）、三糖铁（TSI）、动力-吲哚-尿素培养基（MIU）、沙门氏菌属诊断血清、志贺氏菌属诊断血清、API20E生化试剂条、磁珠菌种保存管仪器设备恒温培养箱、微生物鉴定仪五、采样方法标本应为新鲜的或转移至Cary-Blair运送培养基的粪便或肛拭子，最优标本是转移到Cary-Blair运送培养基的粪便拭子。
肛拭子不是最佳标本，仅在病人无粪便标本时采用。
粪便标本：应采集自然排出的新鲜粪便，取稀水样、粘血样、脓血样，黏液样部分。
盛于清洁、干燥、无吸水性的无菌容器，避免混入尿液、水和其他物质。
肛拭标本：若无法获得粪便（如排便困难或婴幼儿），也可以采用肛拭子，即无菌棉拭子用生理盐水湿润后，插入肛门内4-5cm处〈儿童约2-3cm），同一方向轻轻旋转2-3周。
以目测能见到粪便为准。
插入Cary-Blair运送培养基。
标本采集后立即送至实验室进行检测，若室温保存，不能超过1h；如不能立即送检，应放入Cary-Blair运送培养基中冷藏条件下24小时内送检。
六、检验程序七、操作步骤分别标记一个XLD平板（或YS平板、麦康凯平板）和1管9ml改良亚硒酸盐磺绿增菌肉汤（SBG）（或SF增菌液或沙门志贺培养液）。
沙门氏菌核酸检测标本采集、送检、处理流程
沙门氏菌核酸检测标本采集、送检、处理流程1. 引言沙门氏菌是一种常见的食物中毒细菌，其感染可导致急性肠道疾病。
为了准确、及时地检测沙门氏菌感染，核酸检测成为了一种重要的方法。
本文档将介绍沙门氏菌核酸检测的标本采集、送检及处理流程。
2. 标本采集为了确保沙门氏菌核酸的准确检测，标本采集是至关重要的一步。
以下是标本采集的步骤和要求：步骤：1. 手部清洁：操作人员应充分清洁双手，并佩戴一次性手套。
2. 样本选择：根据病情和临床需要，选择适当的标本类型进行采集，如食物、粪便、尿液等。
3. 采集：选择干燥、无菌的作为标本采集。
4. 采集样本：使用一次性取样棒、针管或无菌等工具，采集标本。
5. 标注信息：在采集上标注病人信息、样本类型、采集时间等重要信息。
要求：1. 采集过程要严格遵守无菌操作规范，以避免污染。
2. 避免采集其他细菌的污染，如需采集其他类型的标本，应分别采集。
3. 对于不同类型的标本，采集方法和采样量可能有所不同，需根据实际情况进行调整。
3. 送检标本的送检是确保准确检测的重要环节。
以下是标本送检的步骤和要求：步骤：1. 标本保存：采集后的标本需尽快送至实验室，如不能立即送达，应妥善保存，避免细菌培养。
2. 防护包装：将标本放置在密封的防护袋中，以防止泄漏和污染其他物品。
3. 标注信息：在防护袋上标注病人信息、样本类型、采集时间等重要信息。
要求：1. 标本运送时需遵守相关的规定和卫生要求，确保安全无菌。
2. 标本的运输温度应符合要求，避免温度过高或过低导致样本损坏。
3. 有条件的实验室可直接安排快递公司提供专业的运送服务。
4. 处理流程所送检的标本在实验室内需要进行一系列的处理步骤，以便准确检测沙门氏菌核酸。
以下是处理流程的步骤和要求：步骤：1. 样本接收：实验室接收标本后进行登记、确认信息，并记录进实验室管理系统。
2. 样本处理：根据标本类型和实验需要，进行样本的处理，如离心、溶解、分离等。
肠道沙门氏志贺氏菌检验方法探讨
肠道沙门氏志贺氏菌检验方法探讨【搞要】目的:了解本地区沙门氏菌和志贺氏菌的分布。
方法:对本地区1990年至2008年食品从业人员健康体检肠道门诊及肠道检测点患者检出的沙门氏菌、志贺氏菌进行分类统计。
结果:沙门氏菌977株,B群占57.22%;D1群占13.72%;E1群占11.88%。
志贺氏菌2522株,B群占80.53%;D群占15.82%;B群中以F2a、1a、1b为主。
结论:该区两菌分布情况与国内有关文献报道基本一致。
【关键词】沙门氏菌;志贺氏菌;分布沙门氏菌属广泛分布于自然界,通常寄居在人或动物肠道内。
本菌属中有的除引起肠道感染外,还能引起其它脏器或全身性感染,例如肠热症、败血症等。
志贺氏菌属亦称痢疾杆菌属,引起细菌性痢疾。
人对志贺氏菌易感,只需少量细菌进入肠道即可引起感染。
沙门氏菌属和志贺氏菌属也是引起食物中毒的重要病原菌。
1990～2008年本区疾控中心共检出沙门氏菌1138株、志贺氏菌2522株,分别作了鉴定。
1 对象与方法1.1 检测对象:本区食品从业人员健康体检、肠道门诊及肠道监测点患者。
1.2 检测依据:《标准操作规程》(上海市疾控中心);《卫生防疫细菌检验》;《沙门氏菌属诊断抗原表》(成都生物制成研究所);GB17012-1997感染性腹泻诊断标准及处理原则;GB16002-1995细菌性痢疾、阿米巴痢疾诊断标准及处理原则。
1.3 培养基:所用培养基均由上属市疾控中心提供,均在有效期内使用。
1.4 诊断血清:沙门氏菌属诊断血清和志贺氏菌属诊断血清均由成都生物制品研究所提供,均在有效期内使用。
2 病原学检验2.1 采样:调查中采集粪便(肛拭)标本,粪便标本保存于亚硒酸盐胱氨酸增菌液(每份10mL)内,血液标本分离血清后备用。
2.2 标本处理:粪便标本先转种SS、HE琼脂后,放(37±1)℃恒温箱21h,直接进行一次分离培养;同时再将增菌管继续放置于(37±1)℃恒温箱,增菌培养18h后再次转种上述鉴别培养基。
从业人员健康体检沙门氏菌、志贺氏菌检测操作程序(讨论稿)
从业人员健康体检沙门氏菌、志贺氏菌检测操作程序一、目的本程序用于对从业人员健康体检进行沙门氏菌、志贺氏菌检测等致病菌检测的方法，以规范操作程序，保证检测数据的有效性。
二、适用范围：本方法适用于从人体粪便中沙沙门氏菌、志贺氏菌的分离、鉴定及保存的梯相关操作。
三、生物安全要求标本及相应的致病菌操作必须在BSL-2生物安全实验室的生物安全柜中进行。
四、试剂及仪器设备4.1试剂采便盒、Cary-Blair运送培养基、亚硒酸增菌液（SF）、改良亚硒酸盐磺绿增菌肉汤（SBG）、沙门志贺培养液、木糖-赖氨酸-脱氧胆酸琼脂（XLD）、麦康凯琼脂、沙门显色培养基、结晶紫沙门培养基（YS）、三糖铁（TSI）、动力-吲哚-尿素培养基（MIU）、沙门氏菌属诊断血清、志贺氏菌属诊断血清、API20E生化试剂条、磁珠菌种保存管4.2 仪器设备恒温培养箱、微生物鉴定仪五、采样方法5.1 标本应为新鲜的或转移至Cary-Blair运送培养基的粪便或肛拭子，最优标本是转移到Cary-Blair运送培养基的粪便拭子。
肛拭子不是最佳标本，仅在病人无粪便标本时采用。
5.2 粪便标本：应采集自然排出的新鲜粪便，取稀水样、粘血样、脓血样，黏液样部分。
盛于清洁、干燥、无吸水性的无菌容器，避免混入尿液、水和其他物质。
5.3肛拭标本：若无法获得粪便（如排便困难或婴幼儿），也可以采用肛拭子，即无菌棉拭子用生理盐水湿润后，插入肛门内4-5cm处〈儿童约2-3cm），同一方向轻轻旋转2-3周。
以目测能见到粪便为准。
插入Cary-Blair运送培养基。
5.4 标本采集后立即送至实验室进行检测，若室温保存，不能超过1h；如不能立即送检，应放入Cary-Blair运送培养基中冷藏条件下24小时内送检。
六、检验程序七、操作步骤7.1 分别标记一个XLD平板（或YS平板、麦康凯平板）和1管9ml改良亚硒酸盐磺绿增菌肉汤（SBG）（或SF增菌液或沙门志贺培养液）。
从业人员健康体检沙门氏菌、志贺氏菌检测操作程序(讨论稿)
从业人员健康体检沙门氏菌.志贺氏菌检测操纵程序【1 】一.目标本程序用于对从业人员健康体检进行沙门氏菌.志贺氏菌检测等致病菌检测的办法,以规范操纵程序,包管检测数据的有用性.二.实用规模：本办法实用于从人体粪便中沙沙门氏菌.志贺氏菌的分别.判定及保管的梯相干操纵.三.生物安然请求标本及响应的致病菌操纵必须在BSL-2生物安然实验室的生物安然柜中进行.四.试剂及仪器装备采便盒.Cary-Blair输送造就基.亚硒酸增菌液（SF）.改进亚硒酸盐磺绿增菌肉汤（SBG）.沙门志贺造就液.木糖-赖氨酸-脱氧胆酸琼脂（XLD）.麦康凯琼脂.沙门显色造就基.结晶紫沙门造就基（YS）.三糖铁（TSI）.动力-吲哚-尿素造就基（MIU）.沙门氏菌属诊断血清.志贺氏菌属诊断血清.API20E生化试剂条.磁珠菌种保管管4.2 仪器装备恒温造就箱.微生物判定仪五.采样办法5.1 标本应为新颖的或转移至Cary-Blair输送造就基的粪便或肛拭子,最优标本是转移到Cary-Blair输送造就基的粪便拭子.肛拭子不是最佳标本,仅在病人无粪便标本时采取.5.2 粪便标本：应收集天然排出的新颖粪便,取稀水样.粘血样.脓血样,黏液样部分.盛于干净.湿润.无吸水性的无菌容器,防止混入尿液.水和其他物资.标本：若无法获得粪便（如排便艰苦或婴幼儿）,也可以采取肛拭子,即无菌棉拭子用心理盐水潮湿后,拔出肛门内4-5cm处〈儿童约2-3cm）,统一偏向轻轻扭转2-3周.以目测能见到粪便为准.拔出Cary-Blair输送造就基.5.4 标本收集后立刻送至实验室进行检测,若室温保管,不克不及超出1h;如不克不及立刻送检,应放入Cary-Blair输送造就基中冷藏前提下24小时内送检.六.磨练程序七.操纵步调7.1 分别标识表记标帜一个XLD平板（或YS平板.麦康凯平板）和1管9ml改进亚硒酸盐磺绿增菌肉汤（SBG）（或SF增菌液或沙门志贺造就液）.7.2 用1个无菌拭子取少量标本（不要使拭子粘得太多,尽量从可见血或黏液的部位收集）接种在XLD平板的第一区,接着把拭子放入SBG增菌液.再灭菌接种环在XLD平板的其余区进行划线接种.假如是Cary-Blair输送造就基的粪便拭子,则轻搅混杂标本后接种增菌液与平板.7.3 所有造就基均放入36℃±1℃造就,SBG的最佳增菌时光是16～18h（建议天世界午4~5时接种标本,第二天早上8~10时用增菌液划平板）.7.4 不雅察平板：取造就后的平板,不雅察有无可疑菌落.XLD平板可疑菌落不雅察：志贺菌在XLD平板上为粉红或无色.透明.滑腻.潮湿.边沿整洁.圆形菌落,直径1-2mm,而大部分的大肠杆菌类的菌落为黄色.混浊.凸起.潮湿.边沿整洁或不规矩,直径2-3mm.大多半沙门菌在XLD平板上中间黑色的透明.滑腻.潮湿.边沿整洁.圆形的菌落.（图2）7.4.２YS平板可疑菌落不雅察：7.4.３麦康凯平板可疑菌落不雅察：志贺菌在麦康凯平板上为无色至浅粉色.半透明.滑腻.潮湿.边沿整洁或不规矩.圆形菌落,直径2-3mm;大多半沙门菌为无色菌落,粉红色,带或不带黑心,伤寒沙门菌为无色菌落;而大部分的大肠杆菌类的菌落为粉红或红色.混浊.凸起.潮湿.边沿整洁或不规矩,直径3-4mm.7.4.４SBG肉汤增菌：SBG增菌16~18小时后,划线接种XLE平板或沙门显色平板,放入36℃±1℃造就18～24h.沙门显色平板可疑菌落不雅察：典范的沙门菌在沙门显色平板上为紫色的菌落,直径2-3mm.建议的初步筛查计划（初步生化特点见表1）：表１沙门菌.伤寒沙门菌.志贺菌及罕有肠道菌的初步生化特点A：粪便（或肛拭子）SBG或SF增菌XLD分别接种TSI和MIUB：粪便（或肛拭子）SBG或SF增菌YS分别接种TSI和MIUC：粪便（或肛拭子）SBG或SF增菌XLD和麦康凯分别接种TSI和MIUD：粪便（或肛拭子）SBG或SF增菌 YS和沙门显色分别接种TSI和MIUE：粪便（或肛拭子）SBG或SF增菌 XLD和沙门显色分别接种TSI和MIU7.5 生化初步判定每个平板挑取3~5个分别较好的单个可疑菌落,分别接种到三糖铁（TSI）和动力-吲哚-尿素造就基（MIU）,36℃±1℃造就18～24h.沙门菌和志贺菌的生化特点见表2.7.6 体系生化实验沙门菌和志贺菌初步判定阳性菌经转种养分琼脂单,取单个菌落进行体系生化判定（可以应用APE20E或全主动生化判定体系进行）.志贺菌血清学实验.1挑取生化反响实筛相符志贺菌的养分琼脂斜面,起首用四种多价血清做玻片凝聚反响(4种多价包含：A群1.2型;B群和D群).凝聚者则用B群多价.D群和A1.A2.血清分别凝聚..2若多价血清不凝聚,可能为C群或A群的3～12型,应进行C群的四种多价和A群另三种多价血清做玻片凝聚.沙门菌血清学实验.1挑取生化反响实筛相符沙门菌的养分琼脂斜面,起首用A-F群O多价血清做玻片凝聚反响..2若凝聚可按罕有O因子检出频率,按照O4→O10→O9→O7→O8→O19→O2→O11次序凝聚..3 H抗原凝聚所有凝聚阳性的菌落,都要同时用心理盐水做凝聚实验,只有不消失自凝时,才可以陈述阳性成果.8 成果陈述8.1 在初步生化判定相符后,可以先将可疑菌落进行革兰氏染色,最后分解生化及血清学成果,可以陈述检出（或未检出）沙门菌（或志贺菌）.对于从业人员体检成果已经纳入磨练软件治理的单位,可以直接在磨练软件中录入响应成果.8.3 其他单位可以设计专门的陈述格局反馈给送检单位或送检科室,磨练陈述中应至少包含姓名,性别,年纪,体检编号,检测成果.8.4 检测成果为阴性,可以陈述为未检出肠道沙门菌和志贺菌;检测成果为阳性,依据检测情形陈述具体的型别.8.5 磨练部分应当保存所有受检样品的根本信息,检测到阳性标本,应当保管具体的检测记载,依据须要供给应送检单位或科室,以及上级营业单位.9 菌株的保管对于生化及血清学成果相符沙门菌或志贺菌的菌株用磁珠保管管保管菌种,放入-２０℃或-７０℃保管,按拍照干请求上送菌株.。
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从业人员健康体检沙门氏菌、志贺氏菌检测操作程序
一、目的
本程序用于对从业人员健康体检进行沙门氏菌、志贺氏菌检测等致病菌检测的方法，以规范操作程序，保证检测数据的有效性。
二、适用范围：
本方法适用于从人体粪便中沙沙门氏菌、志贺氏菌的分离、鉴定及保存的梯相关操作。
三、生物安全要求
标本及相应的致病菌操作必须在BSL-2生物安全实验室的生物安全柜中进行。
四、试剂及仪器设备
4.1试剂
采便盒、Cary-Blair运送培养基、亚硒酸增菌液（SF）、改良亚硒酸盐磺绿增菌肉汤（SBG）、沙门志贺培养液、木糖-赖氨酸-脱氧胆酸琼脂（XLD）、麦康凯琼脂、沙门显色培养基、结晶紫沙门培养基（YS）、三糖铁（TSI）、动力-吲哚-尿素培养基（MIU）、沙门氏菌属诊断血清、志贺氏菌属诊断血清、API20E生化试剂条、磁珠菌种保存管
4.2 仪器设备
恒温培养箱、微生物鉴定仪
五、采样方法
5.1 标本应为新鲜的或转移至Cary-Blair运送培养基的粪便或肛拭子，最优标本是转移到Cary-Blair运送培养基的粪便拭子。
肛拭子
不是最佳标本，仅在病人无粪便标本时采用。
5.2 粪便标本：应采集自然排出的新鲜粪便，取稀水样、粘血样、脓血样，黏液样部分。
盛于清洁、干燥、无吸水性的无菌容器，避免混入尿液、水和其他物质。
5.3肛拭标本：若无法获得粪便（如排便困难或婴幼儿），也可以采用肛拭子，即无菌棉拭子用生理盐水湿润后，插入肛门内4-5cm 处〈儿童约2-3cm），同一方向轻轻旋转2-3周。
以目测能见到粪便为准。
插入Cary-Blair运送培养基。
5.4 标本采集后立即送至实验室进行检测，若室温保存，不能超过1h；如不能立即送检，应放入Cary-Blair运送培养基中冷藏条件下24小时内送检。
六、检验程序
七、操作步骤
7.1 分别标记一个XLD平板（或YS平板、麦康凯平板）和1管9ml改良亚硒酸盐磺绿增菌肉汤（SBG）（或SF增菌液或沙门志贺培养液）。
7.2 用1个无菌拭子取少量标本（不要使拭子粘得太多，尽量从可见血或黏液的部位收集）接种在XLD平板的第一区，接着把拭子放入SBG增菌液。
再灭菌接种环在XLD平板的其余区进行划线接种。
如果是Cary-Blair运送培养基的粪便拭子，则轻搅混合标本后接种增菌液与平板。
7.3 所有培养基均放入36℃±1℃培养，SBG的最佳增菌时间是16～18h（建议每天下午4~5时接种标本，第二天早上8~10时用增菌液划平板）。
7.4 观察平板：取培养后的平板，观察有无可疑菌落。
7.4.1 XLD平板可疑菌落观察：志贺菌在XLD平板上为粉红或无色、透明、光滑、湿润、边缘整齐、圆形菌落，直径1-2mm，而大部分的大肠杆菌类的菌落为黄色、混浊、凸起、湿润、边缘整齐或不规则，直径2-3mm。
大多数沙门菌在XLD平板上中心黑色的透明、光滑、湿润、边缘整齐、圆形的菌落。
（图2）
7.4.２YS平板可疑菌落观察：
7.4.３麦康凯平板可疑菌落观察：志贺菌在麦康凯平板上为无色至浅粉色、半透明、光滑、湿润、边缘整齐或不规则、圆形菌落，直径2-3mm；大多数沙门菌为无色菌落，粉红色，带或不带黑心，伤寒沙门菌为无色菌落；而大部分的大肠杆菌类的菌落为粉红或红色、
混浊、凸起、湿润、边缘整齐或不规则，直径3-4mm。
7.4.４SBG肉汤增菌：SBG增菌16~18小时后，划线接种XLE平板或沙门显色平板，放入36℃±1℃培养18～24h。
沙门显色平板可疑菌落观察：典型的沙门菌在沙门显色平板上为紫色的菌落，直径2-3mm。
7.4.4 建议的初步筛查方案（初步生化特征见表1）：
表１沙门菌、伤寒沙门菌、志贺菌及常见肠道菌的初步生化特征
A：粪便（或肛拭子）SBG或SF增菌XLD分离接种TSI和MIU
B：粪便（或肛拭子）SBG或SF增菌YS分离接种TSI和MIU
C：粪便（或肛拭子）SBG或SF增菌XLD和麦康凯分离接种TSI和MIU
D：粪便（或肛拭子）SBG或SF增菌YS和沙门显色分离接种TSI和MIU
E：粪便（或肛拭子）SBG或SF增菌XLD和沙门显色分离接种TSI和MIU
7.5 生化初步鉴定
每个平板挑取3~5个分离较好的单个可疑菌落，分别接种到三糖铁（TSI）和动力-吲哚-尿素培养基（MIU），36℃±1℃培养18～24h。
沙门菌和志贺菌的生化特征见表2。
7.6 系统生化试验
沙门菌和志贺菌初步鉴定阳性菌经转种营养琼脂单，取单个菌落进行系统生化鉴定（可以使用APE20E或全自动生化鉴定系统进行）。
7.7血清学试验
7.7.1 志贺菌血清学试验
7.7.1.1挑取生化反应实筛符合志贺菌的营养琼脂斜面，首先
用四种多价血清做玻片凝集反应(4种多价包括：A群1、2型；B 群和D群)。
凝集者则用B群多价、D群和A1、A2、血清分别凝集。
7.7.1.2若多价血清不凝集，可能为C群或A群的3～12型，应进行C群的四种多价和A群另三种多价血清做玻片凝集。
7.7.2 沙门菌血清学试验
7.7.2.1挑取生化反应实筛符合沙门菌的营养琼脂斜面，首先用A-F群O多价血清做玻片凝集反应。
7.7.2.2若凝集可按常见O因子检出频率，按照O4→O10→O9→O7→O8→O19→O2→O11顺序凝集。
7.7.2.3 H抗原凝集
7.7.3 所有凝集阳性的菌落，都要同时用生理盐水做凝集试验，只有不出现自凝时，才可以报告阳性结果。
8 结果报告
8.1 在初步生化鉴定符合后，可以先将可疑菌落进行革兰氏染色，最后综合生化及血清学结果，可以报告检出（或未检出）沙门菌（或志贺菌）。
8.2对于从业人员体检结果已经纳入检验软件管理的单位，可以直接在检验软件中录入相应结果。
8.3 其他单位可以设计专门的报告格式反馈给送检单位或送检科室，检验报告中应至少包括姓名，性别，年龄，体检编号，检测结果。
8.4 检测结果为阴性，可以报告为未检出肠道沙门菌和志贺菌；检测结果为阳性，根据检测情况报告具体的型别。
8.5 检验部门应该保留所有受检样品的基本信息，检测到阳性标本，应该保存详细的检测记录，根据需要提供给送检单位或科室，以及上级业务单位。
9 菌株的保存
对于生化及血清学结果符合沙门菌或志贺菌的菌株用磁珠保存管保存菌种，放入-２０℃或-７０℃保存，按照相关要求上送菌株。