promega 小提质粒提取说明书
质粒小提sop
1.仪器设备 名称Heal Force 其林贝尔 仪器制造 湖南平方科技
货号 Neofuge TS-8S TG16 –WS
2.试剂 名称 蛋白胨 酵母提取物 NaCl
氨苄青霉素钠 硫酸卡那霉素
甘油
厂商 Oxoid Oxoid 国药 Addin Addin 国药
货号 Lp0042 Lp0041 10019318 A105483-100g K103025-100g 10010618
3. 质粒小提操作方法 （1）取培养过夜的菌液8000rpm离心3min。 （2）弃上清，用枪吸取残留的液体，使细胞沉淀尽可能干燥。 （3）菌体沉淀重悬浮于250μl溶液P1中(用枪反复吹匀)。 （4）加入250μl溶液P2(盖紧管口，温和颠倒离心管数次，以混匀内容物(千万不要振荡)， 静置5 min。 （5）加入350μl溶液P3，盖紧管口，温和颠倒离心管数次，使沉淀混匀。12000rpm离心 10分钟。 （6）上清液移入吸附柱管中（提前用平衡液BL平衡），吸附1-2min，12000g离心1min， 重复此步骤一次。 （7）弃上清，向柱中加入500ulPW漂洗液，12000rpm离心1分钟，重复此步骤一次。 （8）弃上清，空管子在12000rpm离心3分钟。 （9）将吸附柱盖子打开，放入烘箱静置3min，同时预热一管水备用。 （ 10 ） 取 新 的 1.5mlEP 管 ， 在 吸 附 柱 的 膜 中 间 加 入 50ul 预 热 的 水 ， 静 置 吸 附 2min ， 12000rpm离心3分钟。
(完整word版)质粒提取试剂盒说明书(word文档良心出品)
E.Z.N.A Plasmid Miniprep Protocol 质粒小规模提取试剂盒Product Number D6942 and D6943,D6944注意：1．使用之前，把试剂盒中的一小管RNA酶加入溶液Ⅰ. 4℃保存2．加60ml 100%乙醇到DNA Wash Buffer Concentrate中.室温保存除试剂盒外还需准备：可达到13000×g的离心机无核酸酶的离心管无菌去离子水或TE缓冲液纯乙醇操作规程：(提取过程在室温下进行)：1.在10-20ml试管中，将携带有所需质粒的E.coli接种到5ml LB培养基LB（含氨苄青霉素50μg/ml），37cº振荡培养12-16h。
需特别指出的是：endA阴性的E.coli菌株用于常规质粒提取，如DH5α和JM109.2. 取1.5~5ml菌液室温10000×g离心1min，去上清3. 加250µl溶液Ⅰ（含RNase A），涡漩振荡器震荡至菌体完全悬浮。
（用移液枪吹打进行重悬浮）4.加入250µl溶液Ⅱ，温和颠倒离心管4~6次，获得澄清的裂解液。
最好室温孵育2min，剧烈混合会使剪切染色体DNA，降低质粒纯度。
(储存溶液Ⅱ应拧紧瓶盖)5.加350µl溶液Ⅲ，温和颠倒数次混合，至出现白色絮状沉淀6.室温13000×g离心10min，紧凑的白色沉淀就会形成，迅速进行到下一个步骤7.特别小心吸取上清，移至洁净的装配好容积2ml离心管的吸收柱中。
要保证没有吸入沉淀和细胞碎片。
室温10000×g离心1min，至裂解物完全通过吸收柱8.弃滤过液，加500µl Buffer HB，10000×g离心1min，清洗吸收柱，除去残余蛋白质保证DNA的纯度以备后续试验使用。
如果接下来的步骤对质粒纯度要求不高，如酶消化法等其它筛选方法，此步可省略9.弃滤过液，再用100%乙醇稀释的750µl Wash Buffer清洗吸收柱，10000×g离心1min，弃过滤液。
OMEGA小提试剂盒提取质粒步骤(无内毒)
OMEGA小提试剂盒提取质粒步骤(中文翻译版)1、将携带目的质粒的大肠杆菌接种于含10~15ul基础培养基/氨苄西林培养介质的50ml培养瓶中。
2、室温下500×g离心10min。
3、弃去上清，剩余沉淀物中加入500ul的SolutionⅠ/RNase A，彻底混匀。
4、将混悬液移至新的2ml离心管中，加入500ul SolutionⅡ，轻柔彻底混匀，可得清亮的细菌裂解物，室温下孵育2min（混匀时用力过大，可破碎出染色体DNA，使目的质粒纯度下降）。
5、向4中液体加入250ul预冷的Buffer N3，轻柔、彻底混匀，直到出现白色絮状沉淀，4℃≥12000×g离心10min（可室温，最好4℃）（Buffer应彻底混匀，若混合物粘稠呈棕色或呈球状，应多混匀几次以中和溶液，溶液的彻底中和对于获得好的产出是必要的）。
6、小心吸取并将上清液转移进新的1.5ml离心管1：0.1的比例向上清液中加入ETR Solution 混匀溶液并于冰上孵育10min，孵育过程中颠倒几次以混匀（加入ETR Solution后，细菌裂解物将出现浑浊，但冰上孵育后将变澄清）（勿用2ml离心管收集上清，因为2ml离心管中有太多液体时，ETR Solution将悬浮于溶液中）。
7、将6中液体于42℃孵育5min，溶液将再次变浑。
室温下12000×g离心3min，ETR Solution 将于离心管底部形成蓝色层。
8、将上层水相转移入新的2ml离心管中，按1：0.5的比例加入无水乙醇（室温，96~100％），轻柔混匀，室温下孵育1~2min。
9、将8中的溶液取700ul到柱子中，组装收集管，室温下1000×g离心1min，弃去收集管中通过柱子的液体，柱子和收集管重复利用。
10、重复9中步骤，直到收集的细菌裂解物全部用完。
11、将500ul Buffer HB加入柱子中，室温下1000×g离心1min，弃去收集管中废液（目的：将残存的蛋白污染物除去，是获得高质量DNA所必需的）。
promega公司全血DNA提取试剂盒说明书
CTM050 修改于 5/09
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Wizard®基因组 DNA 纯化试剂盒简明操作步骤
1. 10ml 全血样品：向无菌 50ml 离心管内加入 30ml 细 注释：若在步骤 6 中另加了核裂解液，那么应加入 4ml 蛋
胞裂解液。
白沉淀液（而不是 3.3ml）。
重要：血样样品必须使用 EDTA、肝素或柠檬酸的 9. 2,000 x g 室温离心 10 分钟。
彻底重悬才能有效裂解白细胞。
普洛麦格（北京）生物技术有限公司 电话：800 810 8133，010 58256268 网址：;
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Wizard®基因组 DNA 纯化试剂盒简明操作步骤
6．向重悬细胞溶液中加入核裂解液（300ul 血样的加 12．300ul 血样的于 13,000-16,000 x g 室温离心 1 分钟；3ml
仅供实验室使用。每个试剂盒包含的试剂，足够进行 100 次从 300ul 全血中提取基因组 DNA 的实验：
z 500ml z 250ml
Cell Lysis Solution Nuclei Lysis Solution
z 100ml z 50ml z 25ml
Cell Lysis Solution Nuclei Lysis Solution Protein Precipitation Solution
Solution）（300ul 血样的加 100ul；3ml 血样的加 250ul），
65oC 孵育 1 小时溶解 DNA。期间可轻弹管壁混匀溶液。 8．向核裂解物中加入蛋白沉淀液（300ul 血样的加 100ul； 也可以室温或 4oC 孵育过夜。
3ml 血样的加 1.0ml；见下列注释），用涡旋振荡器剧 16. 2-8oC 保存 DNA。
Promega试剂盒提取DNA说明
Promega全血DNA小量提取试剂盒DNA抽提SOP1、实验场所：分子生物实验室（暂定）2、实验着装：隔离衣，塑胶手套3、实验准备：耗材：高压灭菌的黄、蓝tip和1.5mL离心管架仪器：已校准移液器（100，200，1000uL）、高速离心机、振荡器试剂：Promega全血DNA小量提取试剂盒、异丙醇、70%乙醇4、实验步骤：1）从4℃冰箱中取出装有全血的抗凝管，上下颠倒3次混匀，静置待上方盖的血液流下。
2）用镊子取N个1.5mL EP管（N=预抽提DNA血样数）垂直放于EP管架上，用防水marker笔按DNA编号在管壁和管盖上做好标记，并在DNA抽提实验记录本上对应记录血样编号、姓名及DNA编号。
保持EP管盖打开。
3）用1mL移液器取900uL cell lysis solution加入已备好1.5mL EP管中。
4）打开抗凝管盖，取300uL全血（注意勿沾血于移液器上），转移到上述1.5mL EP 管中。
每取一个血样，换一个tip头。
5）盖上EP管，室温下孵育10min。
6）室温下13000转/min离心20秒（不可延时）。
7）取出后，观察下方白色小斑块沉淀，如有则继续下一步，没有则再离心20秒。
8）打开EP管盖，手捏EP管底部，倾斜EP管口弃去部分红色上清，因表面张力无法弃去所有红色上清，抬高EP管，注视白色斑块，用100 uL移液器在不碰到白色斑块的前提下，尽量将红色上清吸尽。
9）盖上EP管，用手指弹EP管底物，将白色斑块重悬。
10）加300uL Nuclei Lysis Solution入上述EP管中，盖上EP管，上下颠倒10次混匀。
11）打开EP管，加100uL Protein Precipitation Solution入上述EP管中，盖上EP管，振荡器上振荡20秒。
12）室温下13000转/min离心3min。
13）在离心时，准备N个新的已消毒1.5EP管于管架上，标记DNA编号于管壁和管盖上。
promegaDNA组织提取试剂盒
PromegaDNA提取试剂盒的使用方法一、使用前的准备工作Proteinase k solution:用无核酸酶的水把蛋白酶K稀释成20mg/ml，按照自己的每次平均使用量分装，储存在-20℃，融化时要在冰上融化，反复冻融会降低Proteinase K的活性消化液配制：在tube中混合下面各种反应物，使用前放在冰上。
Wizard SV Wash solution（洗脱液）的配制：按照瓶子标签上要求的量，添加95%的乙醇到Wizard sv solution 中，做上标记，室温保存。
PromegaDNA提取试剂盒的使用方法步骤（离心机法）0、将Nuclease-Free Water 放在65℃的水浴锅中1、剪取动物组织20mg，分成相同的2份，放在1.5ml的离心管中，样品中决不能含有软骨组织，否则会阻塞柱子2、每份样品中添加275ul先前准备的消化液，确保消化液能够完全覆盖样品，如果不能覆盖，将样品再剪得小点3、把样品放到55℃的水浴锅或加热块中孵育16-18小时（过夜），蛋白酶K消化过夜后2000g离心，取上清液到1.5ml的离心管中。
4、向样品中添加250ul的Wizard SV Lysis Buffer,漩涡混匀5、处理后的产物尽快进行下面的操作，如果不能进行下面的操作，应该把它放在-70℃下保存，使用时应该冻融或者放在55℃温和解冻6、将收集管做上标记，将柱子放在收集管上，把整个1.5ml离心管内的溶解产物转移到柱子中。
13000g离心3分钟，目的是让基因组吸附在柱子中，如果仍有残留液体，可以重新13000g离心一分钟7、倒掉收集管中的液体，把柱子重新放回收集管上8、检查一下乙醇是否已经添加到Wizard SV Wash Solution中9、每个样品中添加650ul的Wizard SV Wash Solution（真空抽滤要加800ul），13000离心1分钟10、去除溶液，将柱子重新放置在集合管中11、重复9-10步3次，（一共需要洗4次）12、洗剂结束后，清空收集管中的水13000g离心2分钟13、去掉收集管，取相同数量的1.5ml的离心管做上标记，将柱子将在 1.5ml的离心管上，添加250ul65℃的Nuclease-FreeWater 到柱子中，室温孵育2分钟，13000g离心1分钟（要溶液，勿扔）14、再在柱子中添加250ul的Nuclease-Free water，室温孵育2分钟，13000g离心1分钟15、扔掉柱子，将收集的纯化的DNA储存在-20℃至-70℃。
质粒小提说明书
质粒小提实验步骤这个操作方案可以从过夜培养的1.0-5.0 ml 培养物能得到5-30 μg 的高拷贝数的质粒或1-10 ug低拷贝数的质粒DNA。
如果需要提高低拷贝数质粒的产量，按下面的低拷贝数的方案。
1. 将带有目的质粒的E.coli 接种于裝有5 ml LB/氨苄青霉素的10-20ml 的培养管，37℃搖床培养12~16 h，以扩增质粒。
用一个10-20ml 培养管或培养瓶，其体积至少有培养基的4 倍。
建议使用endA 敏感型的E. coli 菌株来作常规质粒的分离，例如DH5α®和JM109®等菌株。
2. 取1.5~5.0 ml 的菌液，于室温下10,000 x g 离心1min 以沉淀菌种。
3. 倒出或吸出培养基，弃去。
往沉淀中加入250 μlSolutionⅠ/RNaseA 混和液，漩涡振荡使细胞完全重新悬浮。
细胞沉淀的完全重悬对于获得高的产量是十分重要的。
4. 往重悬混和液中加入250 μl Solution Ⅱ，轻轻颠倒混匀7-10 次。
如有必要，可把裂解液置于室温静置2min，避免剧烈混和裂解液，否则会使染色体DNA 断裂而使得到的质粒纯度降低。
裂解反应不要超过5min。
（当使用完SolutionⅡ以后，须盖紧其瓶盖保存好，避免与空气中的CO2 反应。
）5. 往上述混和液中加入125 ul 冰浴Buffer N3，并温和地上下颠倒离心管数次混匀，直至形成白色絮狀沉淀。
6. 室温下，≥12000 x g 离心10min。
7. 小心将上清倒入干净的1.5ml 离心管中，加入0.1 倍体积的ETR 溶液（蓝色）至上清液中，颠倒试管7-10 次，然后于冰浴中静置10 min。
注意：在加入ETR 溶液后，裂解液可能出现浑浊，但冰浴后将逐渐转为澄清。
8. 将上述裂解液于42℃下静置5 min。
裂解液又将再次出现浑浊。
此时，立即于25℃ 12，000 x g 离心3min，ETR 溶液将在试管底部形成蓝色分层。
promega公司全血DNA提取试剂盒说明书
彻底重悬才能有效裂解白细胞。
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Wizard®基因组 DNA 纯化试剂盒简明操作步骤
6．向重悬细胞溶液中加入核裂解液（300ul 血样的加 12．300ul 血样的于 13,000-16,000 x g 室温离心 1 分钟；3ml
次）裂解红细胞。2,000 x g 室温离心 10 分钟。
温异丙醇。
4. 尽可能将上清移弃干净，勿搅动白色沉淀。离心管里
会剩余大约 1.4ml 液体。
注释：为避免 DNA 被蛋白污染，在含蛋白沉淀的离心管
内保留少许上清，勿吸取得过于彻底。
若是冷冻过的血样，另加 30ml 细胞裂解液，颠倒 5-6
次混匀，重复 3-4 步骤直到沉淀接近白色。从冷冻血 11. 轻轻颠倒以混匀溶液，直至白色线状 DNA 形成块状沉
上述加有细胞裂解液的离心管中。颠倒离心管 5-6 次混
II. 从全血（300ul 或 3ml）中提取基因组 DNA 的操作
匀。
步骤
经我们测试，从 EDTA、肝素及柠檬酸抗凝管保存的新 鲜全血中提取的基因组 DNA 对于随后的 DNA 操作， 包括 PCR，没有任何不利影响。抗凝血样本可在 2-8 oC 保存至多 2 个月，但保存时间越长，DNA 产量会下降 越多。
烈振荡 10-20 秒。可能有蛋白小团块出现。
III. 从全血（10ml）中提取基因组 DNA
注释：若在步骤 6 中另加了核裂解液，那么 300ul 血样
的应加 130ul 蛋白沉淀溶液；3ml 血样的应加 1.3ml 蛋 经我们测试，从 EDTA、肝素及柠檬酸抗凝管保存的新鲜全
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Wizard○R Purefection Plasmid DNA Purification System protocol
所用试剂盒为Promega公司的Wizard○R Purefection Plasmid DNA Purification System，能够去除对细胞有害的细菌内毒素。
具体操作步骤如下：
（1）将5ml 培养过夜的阳性菌在室温(24℃)下10000×g离心10 min。
弃上清，将离心管倒置至吸水纸上去除剩余水分。
（2）加入250µl 重悬液，振荡至完全重悬。
（3）加入250µl细胞溶解液，颠倒离心管6～8次，彻底混匀。
室温孵育5min。
（4）加入350µl中和液，立即颠倒离心管6～8次，彻底混匀。
（5）室温下10000×g离心细菌溶解产物20min，上清移至新的1.5 ml 离心管，再次离心20 min，将上清移至新离心管。
（6）彻底摇匀除内毒素树脂，加50µl到离心管中，室温孵育10 min，在孵育过程中每隔3 min剧烈振荡5 sec。
（7）将离心管放置于磁珠分离架使溶液变清，颠倒磁珠分离架和离心管，去除附着在离心管壁和顶盖上的液体。
放置至液体澄清后30 sec，吸取上清至新离心管，弃去沉淀。
（8）加入200 µl GTC（5M/L），与上步分离的上清剧烈振荡混和。
如果GTC产生沉淀，37℃加温10min，冷却到25℃使用。
（9）彻底重悬磁珠，加150 µl至溶液中，剧烈振荡混和，室温孵育2～3 min。
（10）将离心管放置于磁珠分离架使溶液变清，颠倒磁珠分离架和离心管，去除附着在离心管壁和顶盖上的液体。
放置至液体澄清后30 sec，弃上清，离心管继续放置2～3min，去除剩余液体。
（11）将离心管从磁架上取出，加入200 µl 4/40洗脱液。
剧烈振荡15sec 重悬磁珠微粒。
4/40洗脱液可以去除无关蛋白，如核酸酶。
（12）将离心管放置于磁珠分离架使溶液变清，颠倒磁珠分离架和离心管，去除附着在离心管壁和顶盖上的液体。
放置至液体澄清后30 sec，弃上清，离心管继续放置2～3min，去除剩余液体。
（13）将离心管从磁架上取出，加入1.0 ml 80％乙醇洗涤微粒。
剧烈振荡10sec，将离心管放置于磁珠分离架使溶液变清，颠倒磁珠分离架和离心管，去除附着在离心管壁和顶盖上的液体。
放置至液体澄清后30 sec，弃上清，离心管继续放置2～3min，去除剩余液体。
（14）重复操作步骤（13）两次。
（15）洗涤完最后一遍后，打开离心管盖，放置在磁珠分离架10min，去除残余液体。
（16）将离心管从磁架上取出，加入240 µl 去离子水，振荡10sec，在室温孵育1min。
将离心管放置于磁珠分离架使溶液变清，颠倒磁珠分离架和离心管，去除附着在离心管壁和顶盖上的液体。
放置3 min后，将上清小心移至新离心管中。
14000g离心10min，上清移至新管中，同时计算上清体积。
（17）加入0.5体积醋酸铵（7.5M/L）和2.5体积95％乙醇，混匀后室温下14000×g离心15 min。
小心吸出上清，用1ml 70％乙醇洗涤沉淀，室温下14000×g离心5 min。
小心吸去上清，空气中干燥5 min，用30 µl去离子水溶解。
（18）分别取1ul，2ul，3ul反应产物电泳，估计质粒浓度。
（19）用分光光度计测OD值及核酸浓度。