实验7 食用菌母种的制作与转管技术
食用菌实验
操作方法： ①将实验用的材料用品和仪器用具准备好、摆放整齐，并 按照超净工作台的使用方法使其处于工作状态。 ②在超净工作台的无菌区，按照无菌操作规程，进行常规 的手部消毒和器械的烧灼灭菌。随后用75%酒精棉球对 子实体进行表面消毒。 ③可以直接将子实体沿菌柄迅速纵向撕开，用灼烧灭菌后 的尖头镊子移取菌盖、菌柄交界处组织块（绿豆大小）。 移至试管斜面培养基的适当位置，迅速塞上棉塞。 ④将分离的试管放在25℃恒温箱培养，培养期间每天都要 检查菌种的萌发与生长情况，对污染的试管及时挑选、 处理。经过7～10 d培养，菌丝体长满试管，即为纯菌 种。
三、方法步骤 1．种菇选择 选择生长健壮、无病虫害、菇形正、大小适中、颜色 正常、尚未散发孢子、七八分成熟的子实体作为分离材料， 最好在第一潮菇中采摘，保持菇体洁净备用。 2．母种分离方法 （1）组织分离法。此法是生产中最常用的方法，它操 作简便，菌丝萌发快，分离所得的菌种遗传性较稳定，在 培养基条件适宜的情况下，能保持原有菇种的优良性状和 特性。
5．培养
接种后，在恒温培养箱中闭光培养，及时淘汰杂菌污 染的试管，一般10 d左右菌丝可长满管。
实验二
食用菌菌种的分离技术
一、目的要求 了解食用菌菌种分离基本原理，通过操作熟悉掌握子 实体组织分离、担孢子采集关键技术。 二、实验材料 1．材料用品 平菇、香菇等新鲜子实体、试管斜面培 养基、三角瓶培养基、95%酒精、75%酒精棉球、记号笔等。 2．仪器用具 超净工作台、酒精灯、尖头镊子、接种 针、接种铲、刀片、金属丝、培养皿、废物罐等。
3. 母种培养基的灭菌 按照手提式高压蒸汽灭菌锅的操作规程对培养基进行 灭菌。一般121℃灭菌30min。灭菌结束后待温度、压力降 到“0”，打开锅盖，让锅内多余蒸气逸出，利用锅体余 热烘干棉塞后取出已灭菌物品；趁热将试管摆成斜面，培 养基以试管长度的1/2到2/3为宜，斜面试管上应覆盖洁净 的厚毛巾或几层纱布，防止试管内产生过多的冷凝水。斜 面制成后，如不马上使用，可在5℃的冰箱中保存待用。
食用菌母种制作的两种简易方法
食用菌母种制作的两种简易方法
一、灰树花母种制作
1. 收集准备
选择新鲜的床树花，将彩色的花芯拆开，将母种和母粉分离出来，然后收集并保存在干燥的玻璃杯中。
2.加工加工
将母粉放入清水中浸泡2~3小时，然后用手轻轻挤压，将母粉中的器官质质因子都细化拌和均匀，待水质变得透明后即可取出。
3.蒸煮蒸煮
将母粉放入不锈钢锅中，将水添加到母粉的一半位置，然后加入适量盐及其他调料，浓度不应过于浓稠，并将温度调节到90~100℃，蒸煮数小时，直到母粉颜色发生变色，再加入适量的植物油使其更加香，即熟母粉即可回收。
二、松露母种制作
1.收集准备
选择新鲜的松露，将其细切粉末，并加入少量水混合成浆，导出松露的母种。
2.提取精粹
将提取的母种放在碗里，过滤掉母粒状的淤泥，然后将其加入少量水重复搅拌，分离母粉与母粒，然后用一滤纸将母粉过滤至精粹完成。
3.蒸煮母粉
将精粹放入不锈钢锅中，然后加入水、盐、酱油等调料，并加入植物油以香，将温度控制在90~100℃，不时的翻动内容物蒸煮30分钟，再加入少量冷水即可取出。
做出的母粉可直接拌入食物中食用。
食用菌生产技术实训指导教材
《食用菌生产技术》实训指导教材
实训一食用菌形态结构观察
一、目的要求
观察食用菌菌丝体的生长状态，利用显微镜认识食用菌的营养体和繁殖体的微观结构，利用徒手切片观察食用 菌子实体的微观结构，通过对食用菌子实体形态特征的观察，让学生们了解和熟悉各种食用菌子实体的类型和特征 ，并能根据子实体的外形进行分类。
三、内容和方法步骤
（一）菌丝体形态特征观察
1、菌丝体宏观形态观察。①观察平菇、草菇、金针菇、木耳、银耳及香灰菌、蘑菇、猴头、灵芝等食用菌的试 管斜面菌种或PDA平板上生长的菌落，比较其气生菌丝的生长状态，并观察菌落表面是否产生无性胞子。②观察菌 丝体的特殊分化组织：蘑菇菌柄基部的菌丝束；密环菌的菌索；茯苓的菌核；虫草等子囊菌的子座。
3、灭菌：
若采用高压蒸汽灭菌，则标准为1.5kg∕c/128C,1〜2h。如果采用常压蒸汽灭菌，则标准为I。(
TC下8〜10h。
(三)接种
将已灭菌的培养料瓶移入事先消毒过的接种箱内，母种管、用具及手要进行消毒。等培养料温降至35℃左右时 ，按无菌操作方法进行接种，用接种铲取菌种一块放入种瓶内培养料的孔隙边，并使菌丝紧贴在培养料上，塞上棉 签，贴上标签，注明菌种名称和接种日期。
2、菌丝体微观形态观察。①菌丝水浸片的制作：取一载玻片，滴一滴无菌水于载片中央,用接种针挑取少量平 菇菌丝于水滴中，用两根接种针将菌丝拔散。盖上盖玻片，避免气泡产生。②显微观察：将水浸片置于显微镜的载 物
台上，先用10倍的物镜观察菌丝的分支状态，然后转到40倍物镜下仔细观察菌丝的细胞结构等特征，并辩认有 无菌丝锁状联合的痕迹。
4、狗子滤纸保藏法将蘑菇或灵芝置入己消毒的接种箱里的插菇铁丝架上，插菇铁丝架立于装有灭菌滤纸条的培 养皿内，待担抱子弹射在滤纸条上之后，用无菌锻子将载有担抱子的滤纸条移入灭菌的空试管内，塞入棉塞剪平,用 石蜡融封,干燥、低温保藏。
食用菌母种的制作方法：培养基配制，灭菌、菌种分离、培养及管理
食用菌母种的制作方法：培养基配制，灭菌、菌种分离、培养及管理一、食用菌菌种瓶的选择用100毫升医用盐水瓶代替试管作盛装培养基的容器。
二、培养基的配制1．配方：马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂18～20克，水1000毫升。
2．制作：马铃薯挖去芽眼，去皮洗净，切成薄片后加水，在铝锅中煮沸25～30分钟，用4层纱布过滤，取滤液放入铝锅中，加入琼脂，小火加热并不断搅拌，待琼脂溶化后加入葡萄糖，加开水补足1000毫升，搅匀，趁热装入盐水瓶中，每瓶装8～10毫升，塞上棉塞棉塞要求干燥、松紧、长度合适，再用牛皮纸包住棉塞及瓶口部分，用胶圈扎紧瓶口。
三、灭菌采用高压灭菌，若没有专用高压锅，可用家用高压锅进行灭菌。
方法是：将装好培养基的菌种瓶放置在高压锅中，瓶间留有空隙，不可堆放过紧，以利蒸汽循环，灭菌彻底。
当压力表指针指到0．05时，打开放气阀，集中排出冷空气，使压力降到零时，关闭排气阀进行升压灭菌，自动放气后保持30分钟家用普通高压锅灭菌1．5小时，让其自然冷却，取出放置在接种箱中备用。
四、菌种分离主要采用组织分离法。
通常是从食用菌子实体内部分离纯菌种，操作时，从子实体内切取一小块组织，放在培养基中培养可长出纯菌种，且菌丝萌发快，遗传性状稳定，后代不易发生变异。
1．种菇消毒：种菇采下后，切去菌柄，放入洗净的盘内，在装有紫外灯的接种箱内照射20～30分钟。
2．接种块切取：在已消毒的接种箱内，撕开子实体，用经酒精灯火焰杀菌冷却的小刀，在菌柄与菌盖交接处内部切取黄豆大小组织块，放入菌种瓶内培养基上培养。
3．接种块选择部位：接种块选择部位因食用菌种类不同而异，菇体肥厚的种菇，在菌盖外缘菌盖皮和菌褶交接处切取组织块进行分离。
菌体小、盖薄、柄空的菌类如金针菇，应快速击掉菌盖，用接种针钩取菌柄顶端生长点组织进行分离。
菌肉极薄菌柄中空孢子不易萌发的伞菌类，可采用子实层分离法，选取半破膜的子实体，移入培养基上，菌丝萌发后即转入新的培养基上。
一般食用菌母种(一级种)制作
一般食用菌母种(一级种)制作母种制作的基本工艺流程为母种(由科研单位、大专院校、菌种保藏专门机构引进)一培养基制备一接种一培养检查一成品。
(一)常用培养基及配方培养基是食用菌菌种生长所需营养的基质。
培养基要具备四个条件，第一，要含有所培养的菌株生长所需要的各种营养物质，如糖类、有机氮、矿物质等。
第二，所含养分浓度和状态要利于食用菌的吸收和利用。
如食用菌母种培养基使用葡萄糖的浓度多在2％左右，过高和过低都不利于菌丝的生长；食用菌对氮素的吸收优先吸收有机氮，因此，原种和栽培种的培养基中应添加有机氮源，如麦麸、米糠等。
第三，要有适宜的酸碱度(pH)，食用菌多数喜偏酸性，pH5.0～6.5。
第四，经过严格灭菌，保持无菌状态。
这最后一点是要通过灭菌才能达到的，然而，灭菌的高温能破坏培养基中的许多化学成分，并能降低pH。
这一点必须在配制时就考虑到。
这就要求从使用的营养型药品试剂上，要尽量选用热稳定性好的种类，配制时，灭菌前的pH要略高于使用时所需的适宜酸碱度。
一般高压蒸汽灭菌0．1～0．12兆帕30分钟，培养基的pH下降0．1～0．3。
高压灭菌切勿压力过高，时间过长，以利培养基保持良好的营养和适宜的pH。
目前食用菌母种生产上使用的都是固体培养基，以琼脂(洋菜)为凝固剂，琼脂的用量从10～24克不等，这依琼脂的质量而定，使用时用量要参考产品使用说明书。
此外，当制作相同培养基时，高温季节要较常量多用些，以利凝固，低温季节可按常量使用；较酸的培养基也要较pH较高的培养基琼脂用量多些。
1．通用培养基通用培养基有多种配方，几乎通用于各类食用菌，常用的配方如下：(1)PDA培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基) 马铃薯(去皮)200克，葡萄糖20克，琼脂10或20克，水1升。
(2)综合马铃薯培养基马铃薯(去皮)200克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁0．5克，琼脂10或20克，水1升。
(3)马铃薯麦麸综合培养基马铃薯200克，麦麸100克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁0．5克，琼脂10或20克，水1升。
食用菌母种生产技术
食用菌母种生产技术食用菌母种生产技术母种生产主要包括培养基制备、纯种分离或转管扩大、培养等环节。
一、母种培养基制备1.母种培养基常用配方（1）PDA培养基：马铃薯(去皮，下同)200克，葡萄糖20克，琼脂18-20克，水l000毫升。
（2）加富PDA培养基①综合PDA培养基：马铃薯200克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾3克，硫酸镁1.5克，维生素B110毫克，琼脂18-20克，水1000毫升。
②蛋白胨－综合PDA培养基：在加富PDA培养基①中添加5克蛋白胨。
③麦麸－PDA培养基：在培养基（1）中添加100克麦麸。
④麦芽汁－PDA培养基：在培养基（1）中添加50克大麦芽。
（3）鲜蘑菇浸出液培养基：鲜蘑菇200-250克，葡萄糖20克，琼脂18-20克，水1000毫升。
将蘑菇切碎，煮30分钟，取其液汁。
（4）粪汁培养基：干马粪或牛粪150克，葡萄糖20克，琼脂20克，水1000毫升。
将马粪或牛粪打碎，煮沸30分钟，取其溶液。
（5）完全培养基（CM）培养基：蛋白胨2克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾0.46克，硫酸镁0.5克，磷酸氢二钾1克，琼脂18-20克，水1000毫升。
2.母种培养基制作方法不同配方培养其制作方法基本相同，现以综合PDA培养基为例介绍其制作方法。
（1）培养基制作。
将土豆洗净、去皮、挖去芽眼及变青绿部分，称取200克，切成约长宽各2厘米厚3毫米左右的薄片，在1200毫升水煮沸10－15分钟，然后用4－6层纱布过滤，倒掉残渣并洗净铝锅。
将滤液倒入锅内，加清水补足 1000毫升，同时放入琼脂并重新开始加热，最好小火加热，不断搅拌至琼脂完全溶化，再用纱布过滤一次，补水至1000毫升。
最后依次将称好的葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁和维生素加入，继续加热并搅拌至全部溶化，停止加热。
如果要加入蛋白胨需将蛋白胨用冷水溶化后加入，可以避免蛋白胨因结块而分散不均。
图3－11 试管分装（2）分装试管。
左手持3-4支试管，管口朝上，令下端整齐，上移试管至漏斗软管，插入试管内约3厘米。
母种转管及培养实训报告
一、实验目的1. 掌握母种转管及培养的基本操作流程；2. 熟悉无菌操作技术，确保菌种纯度；3. 了解食用菌母种在培养过程中的注意事项，提高菌种繁殖能力。
二、实验原理母种转管及培养是指将原始菌种接种到培养基上，经过一定时间的培养，使其繁殖成一定数量的菌丝体，以便进行后续的菌种扩繁和栽培。
无菌操作技术是保证菌种纯度的重要手段。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：马铃薯、葡萄糖、琼脂、水、食用菌菌种、无菌试管、无菌培养基、酒精灯、接种针、接种环、镊子、酒精棉球、火焰炉、培养箱等。
2. 实验仪器：天平、三角瓶、烧杯、漏斗、玻璃棒、剪刀、棉花、线绳、牛皮纸、皮筋、纱布等。
四、实验步骤1. 培养基配制（1）称取马铃薯200g，去皮，切成小块，加水1200-1300ml，煮沸20min；（2）用双层纱布过滤，取滤液1000ml；（3）将滤液加热至将沸腾时，加入琼脂15-20g，不断搅拌；（4）待琼脂完全溶解后，加入葡萄糖20g，搅拌均匀；（5）用精密pH试纸检测pH值，调整至自然pH值；（6）将培养基分装到无菌试管中，每管约10ml，塞上棉塞；（7）将试管置于高压蒸汽灭菌器中，121℃灭菌30min。
2. 接种（1）将灭菌后的试管取出，待其冷却至室温；（2）用火焰炉烧灼接种针、接种环，待其冷却；（3）用接种针从原始菌种中挑取少量菌丝，接种到无菌培养基上；（4）用火焰炉烧灼接种针、接种环，待其冷却；（5）将接种后的试管放入培养箱中，25℃恒温培养。
3. 转管（1）待菌丝长满试管斜面后，用火焰炉烧灼接种针、接种环，待其冷却；（2）用接种针将菌丝挑取到新的无菌培养基上；（3）将接种后的试管放入培养箱中，25℃恒温培养。
4. 培养与观察（1）定期观察菌丝生长情况，记录菌丝生长速度、颜色、形态等；（2）发现杂菌感染时，及时挑除；（3）待菌丝长满试管斜面后，即可进行后续的菌种扩繁和栽培。
五、实验结果与分析1. 在实验过程中，严格按照无菌操作技术进行操作，确保菌种纯度；2. 通过观察菌丝生长情况，发现菌丝生长速度较快，颜色正常，无杂菌感染；3. 经过转管培养，菌丝繁殖能力得到提高。
实验7 食用菌母种的制作与转管技术
实验注意事项
（1）组织块分离法对于胶质的耳类及菇体较小较薄的菇类，如金 针菇等不太适宜。 （2） 此法应严格遵循无菌操作。 （3）纯化菌丝长至斜面1/2时，挑尖丝转管，培养成再生母种。 （4）控制菌龄菌丝即将长满斜面（一般7～10天）终止培养。分 别用于菌种保藏或繁衍原种。 （5）出菇试验将再生母种扩成原种、栽培种，使其出菇。看产量、 质量、形态、长势、抗性如何，鉴定为优质菌种后，才可供生产 使用。
应用：此法适宜多数食用菌，是野外工作者和种菇专 业户必须掌握的一种方法。
实验原理
2.钩悬法 是一种特别适用于耳类，也适用于伞菌类的多孢分离
法。
实验原理
3.孢子印分离法 取成熟子实体经表面消毒
后，切去菌柄，在20～ 24℃静置一天，大量孢子 落下形成孢子印。 接种环沾少量孢子在试管 培养基上划线培养。
（0.3～0.4立方厘米）大组织，放入斜面培养基上。迅速 塞上棉塞。
如已开伞的种菇、则选菌盖与菌柄交界处的菌肉。 如种菇已受雨淋，吸水较多，应取菌褶作为接种材料。
母种分离视频
实 验 步骤
5. 培养 取接组织的斜面试管放置于
25℃的培养箱中培养。 6. 转管
在菌丝长满斜面之前，菌丝生 长最旺盛时，挑取菌丝进行转管扩 繁。
结果与思考题
1.如何避免因污染而造成的组织分离的失败？ 2.判断你所分离的母钟是否标准？ 3.孢子分离的母种为何一定要做出菇试验？
实验材料
材料：平菇、香菇、杏鲍菇较成熟的子实体 用具：培养皿；试管斜面培养基；酒精灯，接种刀，
75%酒精，消毒液；冰箱；培养箱等。 培养基：PDA斜面培养基
实 验 步骤
1. PDA培养基的配置 配方： 马铃薯浸粉； 5.0g /L；葡萄糖20.0g /L；琼脂 20.0g /L ；
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2.钩悬法 是一种特别适用于耳类，也适用于伞菌类的多孢分离 法。
实验原理
3.孢子印分离法
取成熟子实体经表面消毒 后，切去菌柄，在20～ 24℃静置一天，大量孢子 落下形成孢子印。
接种环沾少量孢子在试管
培养基上划线培养。
实 验 材 料
材料：平菇、香菇、杏鲍菇较成熟的子实体 用具：培养皿；试管斜面培养基；酒精灯，接种刀， 75%酒精，消毒液；冰箱；培养箱等。
母种分离视频
实 验 步骤
5. 培养
取接组织的斜面试管放置于
25℃的培养箱中培养。 6. 转管 在菌丝长满斜面之前，菌丝生 长最旺盛时，挑取菌丝进行转管扩 繁。 母种转管视频
实验注意事项
（1）组织块分离法对于胶质的耳类及菇体较小较薄的菇类，如金 针菇等不太适宜。
（2） 此法应严格遵循无菌操作。
实验7
食用菌母种制作与转管技术
实验目 的
掌握了解食用菌组织分离的方法和实际操 作技术； 明确食用菌组织分离在食用菌生产中的重 要性。
实验原理
母种
原种
栽培种
实验原理
1.组织分离法：用子实体的某一部
分来分离菌种的方法。
优势：方法简便，后代不易发生变 异，是食用菌栽培中防止品性退化， 保持优良品种特性常用的一种手段。 应用：此法适宜多数食用菌，是野外工作者和种菇专 业户必须掌握的一种方法。
（3）纯化菌丝长至斜面1/2时，挑尖丝转管，培养成再生母种。 （4）控制菌龄菌丝即将长满斜面（一般7～10天）终止培养。分
别用于菌种保藏或繁衍原种。
（5）出菇试验将再生母种扩成原种、栽培种，使其出菇。看产量、 质量、形态、长势、抗性如何，鉴定为优质菌种后，才可供生产 使用。
结果与思考题
1.如何避免因污染而造成的组织分离的失败？ 2.判断你所分离的母钟是否标准？ 3.孢子分离的母种为何一定要做出菇试验？
培养基：PDA斜面培养基
实 验 步骤
1. PDA培养基的配置
配方： 马铃薯浸粉； 5.0g /L；葡萄糖20.0g /L；琼脂 20.0g /L ；
氯霉素0.1g /L。 制法：称取40g溶于1L蒸馏水中，煮沸溶解。分装试管或锥形瓶，
121℃高压灭菌15min。
实 验 步骤
2.种菇的选择
选择无病虫害、典型、八成成熟的食用菌子实体。
3. 环境和种菇消毒 在接种箱内，用镊子夹着燃烧的酒精棉球迅速擦拭菇 体。
或选用的子实体用0.1％开汞水或70％酒精表面消毒，
用无菌水冲洗并用无菌纱布擦去表面水分。
实 验 步骤
4.取接组织 将菇体撕开，用无菌尖头镊在柄盖交界处取绿豆粒 （0.3～0.4立方厘米）大组织，放入斜面培养基上。迅速 塞上棉塞。 如已开伞的种菇、则选菌盖与菌柄交界处的菌肉。 如种菇已受雨淋，吸水较多，应取菌褶作为接种材料。