抗坏血酸氧化酶活性测定试剂盒使用说明
抗坏血酸氧化酶(ascorbate oxidase ,AAO )活性测定试剂盒说明书
货号：QS1303 规格：50管/48样抗坏血酸氧化酶（ascorbate oxidase ，AAO）活性测定试剂盒说明书紫外分光光度法注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：AAO是定位于植物细胞壁的糖蛋白，属“蓝铜氧化酶”家族。
细胞壁内的抗坏血酸和AAO 与细胞壁的代谢和生长有着密切的联系。
AAO 氧化 AsA 所形成的 MDHA 可通过质膜上的细胞色素b还原，该过程中电子的跨膜运输能够促进细胞生长。
测定原理：AAO可直接氧化AsA，通过测定AsA的氧化量，可计算得AAO活力。
自备实验用品及仪器：低温离心机、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、可调式移液器、研钵、冰、蒸馏水。
试剂组成和配制：试剂一：液体50mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体50mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1瓶，4℃避光保存。
临用前加入5mL蒸馏水充分溶解。
粗酶液提取：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL 试剂一）进行冰浴匀浆。
16000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
AAO测定操作：1. 分光光度计预热30 min，调节波长到265 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂二在25℃水浴锅中预热30 min。
3. 依次在1 mL石英比色皿中加入100μL上清液、850μL预热的试剂二和50μL试剂三，迅速混匀后在265nm测定10 s和130 s光吸收A1和A2，△A =A1-A2。
AAO活性计算公式：(1). 按蛋白浓度计算AAO活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟氧化1nmol AsA 为1个酶活单位。
AAO(nmol/min /mg prot) = △A÷(ε×d）×V反总×109÷(Cpr×V样)÷T= 92.4×△A÷Cpr(2). 按样本质量计算AAO活性单位定义：25℃中每克样本每分钟氧化1nmol AsA 为1个酶活单位。
总抗氧化能力（FRAP 法）试剂盒说明书
总抗氧化能力（FRAP 法）试剂盒说明书微量法100T/96S 注 意：正式测定之前选择2-3 个预期差异大的样本做预测定。
研究意义：测定对象中各种抗氧化物质和抗氧化酶等构成总抗氧化水平。
在生物学、医学和药学研究中常常检测血浆、血清、唾液、尿液等各种体液，细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液及各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力。
测定原理：在酸性环境下，抗氧化物质还原Fe3+-三吡啶三吖嗪(Fe3+-TPTZ)产生蓝色的Fe2+-TPTZ 的能力反映了总抗氧化能力。
自备实验用品：恒温水浴锅、低温离心机、酶标仪、96 孔板和蒸馏水。
试剂组成和配制：提取液：液体120mL×1 瓶，使用前预冷。
试剂一：液体20 mL×1 瓶，避光保存。
试剂二：液体2 mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体2 mL×1 瓶，避光保存。
混合液(现配现用)：将试剂一、试剂二、试剂三按10:1:1 的比例混合，使用前37℃预温。
样品的制备：(1) 血清、血浆、唾液或尿液等液体样品血浆（制备时可以使用肝素或柠檬酸钠抗凝，不宜使用EDTA 抗凝）4℃，5000rpm 离心10min，取上清待测。
血清、唾液或尿液样品直接用于测定，也可以-80℃冻存（不宜超过30 d）后再测定。
(2) 组织样品按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
(3) 细胞样品按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细胞加入1mL 提取液），冰浴超声波破碎（功率200W，超声3s，间隔10s，重复30 次）；10000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
操作步骤：1、酶标仪预热30min，调节波长至593nm。
氧化酶试剂试纸使用介绍
氧化酶试剂，氧化酶试纸产品使用参见华越洋随带产品包装随带纸质说明书氧化酶试剂，氧化酶试纸产品介绍:英文名称： Oxidase reagent产品用途：用于O157:H7菌氧化酶试验，以及其他病理类菌属检测鉴别。
氧化酶试剂，氧化酶试纸使用方法：取一条滤纸，沾取试验菌的菌落少许。
然后加一滴1%的四甲基对苯二胺试剂，仅使滤纸湿润，不可过湿，在10s内出现红色者为阳性，10—60s 呈现红色者为延迟反应，60s以上出现红色者，按阴性处理，铁可催化试剂，不能使用，可用白金丝或玻璃棒取菌。
保存：2-8℃避光保存氧化酶试剂，氧化酶试纸氧化酶（oxidase）过氧化物酶体中的主要酶类，氧化酶约占过氧化物酶体酶总量的一半，包括：尿酸氧化酶、D-氨基酸氧化酶、L-氨基酸氧化酶和L-α-羟基酸氧化酶等。
各种氧化酶作用于不同的底物，其共同特征是氧化底物的同时，将氧还原成过氧化氢：RH2 + O2 →R + H2O2实验试剂：1%盐酸二甲基对苯二胺溶液：少量新鲜配制，干冰箱内避光保存。
1%α-萘酚－乙醇溶液。
试验方法：取白色洁净滤纸沾取菌落。
加盐酸二甲基对苯二胺溶液一滴，阳性者呈现粉红色，并逐渐加深；再加α-萘酚溶液一滴，阳性者于半分钟内呈现鲜蓝色。
阴性于两分钟内不变色。
以毛细吸管吸取试剂，直接滴加于菌落上，其显色反应与以上相同。
氧化酶试验(oxidasetest)氧化酶又名细胞色素氧化酶、细胞色素氧化酶C或呼吸酶。
试验用于检测细菌/是否有该酶存在。
原理是氧化酶在有分子氧或细胞色素C存在时，可氧化四甲基对苯撑二胺出现紫色反应。
假单胞菌属、气单胞菌属等阳性，肠杆菌科阴性，可区别。
血浆凝固酶：由金黄色葡萄球菌致病性菌株产生。
能使含有抗凝剂的人或兔血浆发生凝固。
在感染部位由于凝固酶的产生，使体液中的纤维蛋白原转变为纤维蛋白，沉积于细菌表面，可阻碍吞噬细胞对细菌的吞噬和杀灭作用。
凝固酶试验(coagulase test)原理：致病性葡萄球菌→凝固酶→血浆中纤维蛋白原(液态) 纤维蛋白(固态) →血浆凝固方法：①玻片法：检测结合凝固酶②试管法：检测游离凝固酶应用：作为鉴别葡萄球菌致病性的重要指标。
植物抗坏血酸氧化酶及多酚氧化酶活性的测定
植物抗坏血酸氧化酶及多酚氧化酶活性的测定作者:《果蔬贮藏加工学实来源:华南农大浏览数:2949 录入:2007-6-16 14:53:40 验指导》植物抗坏血酸氧化酶及多酚氧化酶活性的测定一、原理抗坏血酸氧化酶能利用空气中的氧氧化抗坏血酸成为脱氢抗坏血酸；多酚氧化酶可催化空气中的氧氧化多酚，成为相应的醌，形成的醌能被抗坏血酸还原。
因此，在酶提取液中加入抗坏血酸，可测定抗坏血酸氧化酶的活性，加入抗坏血酸及焦儿茶酚，可测定抗坏血酸及多酚氧化酶两者的活性，相减即可求出多酚氧化酶的活性。
抗坏血酸的消耗量，可用碘液滴定剩余的抗坏血酸。
碘酸钾在酸性条件下与碘化钾反应放出碘，放出的碘与抗坏血酸作用，将之氧化成脱氢抗坏血酸，多余的碘能使淀粉变为蓝色。
二、材料与设备材料：马铃薯块茎设备：水浴锅、台秤、离心机试剂：pH6.0 1/15mol/L磷酸缓冲液、0.1％抗坏血酸、0.02mol/L焦儿茶酚、10％三氯乙酸、1％淀粉。
0.05mol/L碘液：碘化钾2.5g溶于200ml蒸馏水，加冰醋酸1ml，再加0.1mol/L碘酸钾12.5ml，定容至250ml。
三、试验步骤（一）酶液制备：称取马铃薯块茎10.0g，用预冷pH6.0 1/15mol/L磷酸缓冲液，研磨匀浆，定容至50ml，在18-20℃水浴浸提30分钟，中间摇动数次，再于3000×g离心10分钟，取上清液，4℃保存备用。
（二）酶活性测定：１. 取6个三角瓶(50-100ml)，标上号码，分别加入下列试剂(ml)：┌──┬────┬───────┬─────────┬──┬─────┐│瓶号│ 蒸馏水│0.1％抗坏血酸│0.02mol/L焦儿茶酚│ 酶│煮5分钟酶│├──┼────┼───────┼─────────┼──┼─────┤│ 1 │ 4 │ 2 │ │ 2 │ ││ 1' │ 4 │ 2 │ │ 2 │ ││ 2 │ 4 │ 2 │ │ │ 2 ││ 3 │ 3 │ 2 │ 1 │ 2 │ ││ 3' │ 3 │ 2 │ 1 │ 2 │ ││ 4 │ 3 │ 2 │ 1 │ │ 2 │└──┴────┴───────┴─────────┴──┴─────┘1、3瓶各作一次重复，2、4瓶作空白将6个三角瓶放入18-20℃水浴反应5分钟,立即分别加入10％三氯乙酸1ml，摇匀，终止酶反应。
NADH氧化酶（NOX）活性检测试剂盒说明书
NADH氧化酶（NOX可见分光光度法货号：BC0630规格：50T/24S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件试剂一液体25 mL×1瓶4℃保存试剂二液体5 mL×1瓶4℃保存试剂三液体0.5 mL×1支-20℃保存试剂四液体70 mL×1瓶4℃保存试剂五液体10 mL×1瓶4℃保存试剂六粉剂×2瓶-20℃保存溶液的配制：试剂六：临用前加入9 mL双蒸水，用不完的试剂-20℃分装保存。
产品说明：NOX（EC 1.6.99.3）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，可在氧气存在下，直接将NADH氧化为NAD+。
该酶不仅参与NAD+的再生，而且与免疫反应密切相关。
NOX能够将NADH氧化为NAD+，NADH的氧化与2,6二氯酚靛蓝（DCPIP）的还原相偶联，蓝色的DCPIP被还原为无色的DCPIP，在600nm下测定蓝色DCPIP的还原速率计算出NADH氧化酶活性的大小。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰、蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：1.准确称取0.1g组织或收集500万细胞，加入1mL试剂一和10µL试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
2.将匀浆600g，4℃离心5min。
将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心10min。
3.将上清液转移至另一EP管中，即胞浆提取物，用于线粒体中泄露NOX活性测定。
4.沉淀即为线粒体，加入200µL试剂二和2µL试剂三，反复吹打充分混匀，用于NOX活性测定，并用于蛋白浓度测定。
甘油三酯（TG）试剂盒说明书
sdgsdgs成都分行东风浩荡合法规和法规和土壤突然图腾甘油三酯（TG）试剂盒说明书（酶法）【产品名称】中文名称：甘油三酯（TG）试剂盒（酶法）英文名称：TR IGL Y CE RI DES RE AGE N T K I T（Enzymatic method）【包装规格】60ml/盒（R-1：45ml×1, R-2：15ml×1），280ml/盒（R-1：70ml×3，R-2：70ml×1），300ml/盒（R-1：45ml×5，R-2：15ml×5），360ml/盒（R-1：90ml×3，R-2：90ml×1），400ml/盒(R-1：60ml×5，R-2：20ml×5)，2000ml/盒（R-1：500ml×3，R-2：500ml×1）。
【预期用途】本试剂用于测定人血清或血浆中甘油三酯（TG）的含量。
【检验原理】在第一反应中采用抗坏血酸氧化酶（AOD）消除抗坏血酸的影响；采用甘油激酶消去游离甘油的影响。
在第二反应中，通过甘油三酯生成的甘油与过氧化物酶（POD）作用生成醌系色素，由此可测得甘油三酯的含量。
第一反应：抗坏血酸氧化酶2抗坏血酸+ O2──────────→2脱氢抗坏血酸+ 2H2O甘油激酶游离甘油+ ATP ──────────→甘油-3-磷酸+ ADP甘油-3-磷酸氧化酶甘油-3-磷酸+ O2 ──────────→磷酸二羟丙酮+ H2O2（用过氧化氢酶消去）第二反应：脂蛋白酯酶甘油三酯+ H2O ──────────→甘油+ 脂肪酸甘油激酶甘油+ ATP ──────────→甘油-3-磷酸+ ADP甘油-3-磷酸氧化酶甘油-3-磷酸+ O2 ──────────→磷酸二羟丙酮+ H2O2P0D2H2O2 + 4-AA+TOOS + H3+O ─────→醌系色素+ 5H2OTOOS: N-Ethyl-N-（2-hydroxy-3-solfopropyl）-3-methylaniline, sodiumsalt, dihydrate 【主要组成成份】━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━试剂成份含量─────────────────────────────────R-1 抗坏血酸氧化酶≥3000U/L甘油激酶≥1000U/L甘油-3-磷酸氧化酶≥8000U/LTOOS 1.17mmol/L过氧化氢酶≥3000U/L─────────────────────────────────R-2 脂蛋白酯酶≥2000U/LPOD ≥20000U/L4-AA 2.5mmol/L━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━脂类校准血清人血清详见标示量，━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━*1. 不同批号试剂盒中的各组份，经检验符合产品性能指标的，可以互换。
抗坏血酸过氧化物酶(AsA-POD)检测试剂盒(AsA比色法)
抗坏血酸过氧化物酶(AsA-POD)检测试剂盒(AsA 比色法)产品：过氧化物酶(peroxisome ，POD)是以过氧化氢为电子受体催化底物氧化的酶，主要存在于细胞的过氧化物酶体中，以铁卟啉为辅基，可催化过氧化氢，氧化酚类和胺类化合物，具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。
抗坏血酸过氧化物酶(AsA-POD)是叶绿体中的专一性清除过氧化氢的酶，能够催化抗坏血酸(又称维生素C ，Vitamin C 或AsA)与过氧化氢反应。
Leagene 抗坏血酸过氧化物酶(AsA-POD)检测试剂盒(AsA 比色法)检测原理是以AsA-POD 催化AsA 与H 2O 2的反应，使前者被氧化成单脱氢抗坏血酸(MDAsA)，随着AsA 被氧化，吸光度不断下降，处测定吸光度，以吸光度变化所需酶量进行计算。
该试剂盒主要用于植物组织的裂解液或匀浆液、血清等样品中过抗坏血酸过氧化物酶活性，尤其适用于测定植物中AsA-POD 活性。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、 蒸馏水2、 研钵或匀浆器3、 离心管或试管4、 低温离心机操作步骤(仅供参考)：1、 准备样品：①植物样品：取0.5g 水稻、小麦叶片，加入预冷的AsA-POD Lysis Buffer 研磨或匀浆， 离心，留取上清液，即为AsA-POD 粗提液，-20℃冻存，用于抗坏血酸过氧化物酶的测定。
编号 名称TE1123 50T Storage试剂(A): AsA-POD Lysis Buffer 250ml 4℃ 试剂(B): AsA-POD Assay Buffer 100ml 4℃ 试剂(C): AsA 氧化剂 2×1ml RT 试剂(D): AsA Buffer 5ml 4℃ 试剂(F): 蛋白标准(BSA) 20mg RT 试剂(G): G250染色液 100mlRT 使用说明书1份②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃冻存，用于抗坏血酸过氧化物酶的测定。
植物体内抗坏血酸氧化酶和多酚氧化酶活性的测定
抗坏血酸氧化酶和多酚氧化酶活性的测定
【原理】
O C
O C
HO C HO C
O
1
抗坏血酸氧化酶
2 O2
OC OC
O
H2O
HC
HC
HO C H CH2OH
HO C H CH2OH
抗坏血酸氧化酶和多酚氧化酶活性的测定
【原理】O
C
HO C HO C
O I2
HC
HO C H CH2OH
O C
OC O 2HI
因此，多酚氧化酶的测定与抗坏血酸氧化酶的测 定类似，除了向反应体系中加入多酚氧化酶的底 物-多元酚类，还要加入抗坏血酸。多酚氧化酶 的活性，可以间接由抗坏血酸的消耗量求得。
抗坏血酸氧化酶和多酚氧化酶活性的测定
【仪器设备】 1．研钵：1个； 2．50 mL量瓶：1个； 3．50 mL三角瓶：9个； 4．微量滴定管：1支； 5．5 mL移液管1支、2 mL 2支、1 mL 6．恒温水浴。
抗坏血酸氧化酶和多酚氧化酶活性的测定
【方法步骤】
瓶号
试剂（mL）
备注
缓冲液 抗坏血酸 焦儿茶酚 酶溶液 偏磷酸
1
4
2
0
2
测定抗坏血酸氧化酶
2
4
2
0
2
同上
3
4
2
0
2
同上
4
4
2
0
2
1
空白测定
5
3
2
1
2
测定多酚氧化酶
6
3
2
1
2
同上
7
3
2
1
2
同上
8
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抗坏血酸氧化酶活性测定试剂盒使用说明
分光光度法货号：BC1260
规格：50管/48样
产品说明：
AAO是定位于植物细胞壁的糖蛋白，属“蓝铜氧化酶”家族。
细胞壁内的抗坏血酸和AAO 与细胞壁代谢和生长有着密切的联系。
AAO氧化AsA所形成的MDHA可通过质膜上的细胞色素b还原，该过程中电子的跨膜运输能够促进细胞生长。
AAO可直接氧化AsA，通过测定AsA的氧化量，可计算得AAO活力。
实验中所需仪器及设备：
低温离心机、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、可调式移液器、研钵、冰、蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体×1瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。
临用前加入10mL蒸馏水充分溶解。
操作步骤：
一、粗酶液提取：
按照组织质量g：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL 试剂一）进行冰浴匀浆。
16000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
二、AAO测定操作：
1.分光光度计预热30min，调节波长到265nm。
2.试剂二在25℃水浴锅中预热30min。
3.空白管：依次在1mL石英比色皿中加入100µL蒸馏水、850µL预热的试剂二和
50µL试剂三，迅速混匀后在265nm测定10s和130s光吸收A1和A2，△A空白管=A1-A2。
4.测定管：依次在1mL石英比色皿中加入100µL上清液、850µL预热的试剂二和50µL试剂三，迅速混匀后在265nm测定10s和130s光吸收A3和A4，△A测定管=A3-A4。
三、AAO活性计算：
（1）按蛋白浓度计算
AAO活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟氧化1µmol AsA为1U。
AAO(U/mg prot)=(△A测定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反总×106÷(Cpr×V样)÷T
=0.0924×(△A测定管-△A空白管)÷Cpr
（2）按样本质量计算
AAO活性单位定义：25℃中每毫克样本每分钟氧化1µmol AsA为1U。
AAO(U/g)=(△A测定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反总×106÷(W×V样÷V样总)÷T
=0.0924×(△A测定管-△A空白管)÷W
ε：AsA在265nm处摩尔吸光系数为 5.42×104L/mol/cm；d：比色皿光径（cm），1 cm；V反总：反应体系总体（L），1000µL=1×10-3L；106：1mol=1×106µmol；Cpr：上清液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒；V样：加入反应体系中上清液体（mL），100µL=0.1mL；V样总：加入提取液体，1mL；W，样本质量，g；T：催化反应时间（min），2min。