实验室常用梅毒检测方法的评价

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河南职工医学院学报

ＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｅｎａｎＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅｆｏｒＳｔａｆｆａｎｄＷｏｒｋｅｒｓＶ０１．２０Ｎｏ．６Ｄｅｃ．２００８实验室常用梅毒检测方法的评价

孟德娣，房功思

（安徽医学高等专科学校医学技术系，安徽合肥２３０６０１）

［关键词］梅毒；ＲＰＲ；ＴＰＨＡ；ＴＲＵＳＴ；ＥＬＩＳＡ；订Ａ—ＡＢＳ；ＰＣＲ

［中图分类号］Ｒ３７７＋．１［文献标识码］Ａ［文章编号］１００８—９２７６（２００８）０６—０６２２－０３

梅毒是一种经典的通过性和母婴传播的疾病，其传染性强，感染后可以引起全身各组织、器官的损害，危害较大。近年来，梅毒的发病率呈上升趋势。在梅毒诊断中，由于抗体效价或方法特异性等原因使诊断结果常出现偏差，因此，高效的梅毒实验室诊断已成为大势所趋，对控制梅毒蔓延意义重大。临床实验室合理、有效地选用检测方法，避免错诊、误诊、漏诊是非常必要的。

目前梅毒的检测多采用血清学试验，本文仅对我国实验室常用的梅毒螺旋体检测方法回顾、总结如下。

１快速血浆反应素试验（ＲＰＲ）

快速血浆反应素试验，是一种常用的梅毒血清学筛选试验，检查的是人体内的反应素。该试验原理是用未经处理的活性炭颗粒（直径３—５ａｍ）吸附ＶＤＲＬ抗原…（０．０３％心拟脂、０．２１％卵磷脂、０．９％胆固醇，用无水乙醇配制）。此颗粒如与待检血清中反应素结合，便形成黑色凝集块，可肉眼观察结果，也可将标本倍比稀释（１：２、１：４—１：３２）进行半定量试验，对疗效和判断是否再感染有一定价值。该试验操作简便、快速，可用肉眼判断结果，不需特殊器材，易于推广，可广泛应用于普查、筛选。但是反应素试验特异性不强。梅毒螺旋体破坏组织可使机体产生反应素，而其他破坏机体的过程也可产生反应素，所以患者ＲＰＲ试验阳性，不一定感染梅毒螺旋体。人体某些生理或病理状态，如怀孕、病毒性肝炎、上呼吸道感染、肺结核、肺炎、亚急性细菌性心内膜炎、类风湿性关节炎、ＳＬＥ（系统性红斑狼疮）、风湿性心脏病、干燥综合征、慢性肾炎和海洛因成瘾等，ＲＰＲ都可以呈假阳性；同时，由于梅毒感染者下疳出现最初几天内血清反应素抗体效价较低，ＲＰＲ试验可能呈阴性结果口】。因此，ＲＰＲ一般只作为初筛手段，不能单独据其结果诊断梅毒感染，而应对患者进行全面检查，密切随访，并采用其他试验进行确定。

２甲苯胺红不加热试验（ＴＲＵＳＴ）

ＴＲＵＳＴ试验同样是检测梅毒患者血清中存在着的反应素。ＴＲＵＳＴ试验采用ＶＤＲＬ抗原重悬于特制的甲苯胺红溶液中，当待测血清中存在反应素时，即与其发生凝集反应，出现肉眼可见的粉红色凝块。ＴＲＵＳＴ法成本低廉、快速、直观，作为梅毒的初筛试验，ＴＲＵＳＴ试验在一般的中小型及基层医院被广泛使用。但ＴＲＵＳＴ法为人工操作、判读，易受到室温及技术操作等因素影响，结果的判断方面主观性较强，易出现漏判和错判，同时存在与ＲＰＲ同样的特异性低、敏感度不高的缺点，尤其对早期和治疗期梅毒可呈阴性反应，且其结果不易保存、查阅，故只作为一项梅毒感染的筛选试验ｐ１。

３梅毒螺旋体血凝试验（ＴＰＨＡ）

ＴＰＨＡ试验是一种检测梅毒螺旋体特异性抗体的特异的、灵敏的被动血凝试验。试验血球为用梅毒螺旋体特异性抗原包被经过醛化和鞣化的鸡红细胞，对照血球为未用上述抗原包被的经过醛化和鞣化的鸡红细胞，如果是阳性标本，当和致敏的鸡红细胞混合后，抗体和抗原的结合会引起致敏血球的凝集，在血凝板底部形成凝集块，如为阴性标本，则血细胞在孔底形成致密的沉淀。ＴＰＨＡ检测目标物为梅毒特异性抗体，是目前公认的梅毒诊断试验，主要用于筛检阳性标本的确诊Ｈ１。但ＴＰＨＡ试剂价格较高，操作较繁琐费时，不利临床快速诊断，同时因该特异性抗体存在时间过长，患者即便经过正规抗梅毒治疗，仍可出现阳性结果，甚至可终生检出阳性．故该法对梅毒治疗效果无判定价值¨－。

收稿日期：２００８—０６—１０

作者简介：孟德娣（１９７９一）．女，安徽省合肥市人．学士，助教．现从事临床检验技术教学和科研工作。万方数据

第６期孟德娣。等实验室常用梅毒检测方法的评价

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４梅毒螺旋体ＥＬＩＳＡ试验（ＥＬＩＳＡ）

梅毒螺旋体ＥＬＩＳＡ试验是随着近年梅毒螺旋体基因工程的研制成功而发展起来的一种血清学检测方法，是利用重组梅毒螺旋体ＴＰ４７、ＴｍＰＡ抗原包被微孔板和辣根过氧化物酶标记的ＴＰ４７、ＴｍＰＡ抗原夹心法检测血清中的梅毒特异性抗体¨Ｊ，该试验使用基因工程方法制备重组抗原代替以往使用的野生型梅毒螺旋体抗原，易于纯化，极大提高了试验的敏感性和特异性。目前，虽然梅毒ＥＬＩＳＡ试验的临床应用依然存在争议¨。９１，但ＥＬＩＳＡ法具有诸多其他检测方法不可比拟的优点，仍然得到广泛的使用。ＥＬＩＳＡ试剂廉价，试验方法操作简便，敏感性、特异性高，稳定性好，不受溶血和纤维蛋白影响，可自动化进行，结果清晰，并可与全自动免疫分析系统结合进行加样检测与分析，采用电脑软件处理、保存、传输数据，使检测更客观准确，数据管理更规范化，是目前梅毒血清学诊断试验的首选方法。需注意的是ＥＬＩＳＡ法检测时，如果血清中梅毒抗体浓度过高。会产生钩状效应¨…。对于大型采供血机构来说，进行大量血液样本筛查．可利用ＥＬＩＳＡ和ＴＲＵＳＴ两种方法的互补来提高梅毒的检出率和准确性，保证血液质量，同时也可以最大限度地避免不必要的血液资源浪费，以及消除假阳性给无偿献血者造成的精神压力…】。

５荧光密螺旋体抗体吸附试验（ＦＴＡ—ＡＳＳ）

ＦＴＡ—ＡＢＳ试验以完整形态的Ｎｉｃｈｏｌ梅毒螺旋体作为抗原，空气中干燥，丙酮固定，加上经吸收剂（用非致病性密螺旋体Ｒｅｉｔｅｒ株提取制备而成）处理过的病人血清（去除非特异性蛋白，提高特异性），再加入荧光素一异硫氰酸荧光素（ＦＩＴＣ）标记的抗人免疫球蛋白，与血清梅毒螺旋体抗体结合¨“。在荧光显微镜下，螺旋体均匀地发出中等或高强度的苹果绿色荧光为阳性，均匀地发出弱苹果绿色荧光为弱阳性，呈微弱黄色光或观察不到荧光为阴性。ＦＴＡ—ＡＢＳ试验虽然操作过程复杂，但具有高度特异性和敏感性，在第一期梅毒前几天即可测出特异性抗体，是目前诊断梅毒的金标准。但是它有一些局限性，是客观检测但难以标准化，在合并抗人类免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）感染时ＦＴＡ—ＡＢＳ有假阳性‘１３１。

６ＰＣＲ法

ＰＣＲ法是较新的方法，它能对生殖器溃疡进行早期鉴别诊断，区分梅毒、生殖器疱疹及软下疳¨“。虽然上述血清学实验室诊断是梅毒诊断的主要方法，但其对Ｉ期梅毒、伴艾滋病梅毒、神经梅毒等敏感性低，不能区分母体梅毒与胎传梅毒¨５。，不能判断传染性。ＰＣＲ法在Ｉ期梅毒的诊断中灵敏性高于血清学方法，其原因是机体感染梅毒后须３—４周才产生抗体¨“。梅毒螺旋体现在还不能人工培养，检测ＴＰ主要有暗视野或直接荧光染色（ＤＦＡ）镜检，ＰＣＲ试验在此情况下显示其独特的优越性。但当前诊断梅毒的ＰＣＲ仍存在引物的非特异性、对血清／全血、ＣＳＦ等敏感性低等缺点Ⅲ１。而且当皮损开始愈合、分泌物减少、血清学试验阳性反应时，采用ＰＣＲ方法就不合适¨“。另外，ＰＣＲ方法易受标本中的组织和细胞碎片等物质抑制，导致ＰＣＲ假阴性结果‘１９３。

除上述几种常用方法外，梅毒快速检测试纸条也逐步在各实验室得到了认可和应用。快速检测试纸条虽克服了检测时间长、试剂昂贵等缺陷，但国内暂时未有详细报道其灵敏性和特异性效果，因此不可用于确诊试验旧”２２。。

采用ＲＰＲ、ＴＲＵＳＴ进行初筛，初筛阳性者根据具体情况和实验室条件采用ＥＬＩＳＡ、ＦＴＡ—ＡＢＳ、ＴＰＨＡ、ＰＣＲ等方法进行确认试验是目前而言简便、行之有效的诊断策略。随着科技的飞速发展，梅毒螺旋体的诊断方法日新月异，可选用方法除以上外。还有许多可借鉴的技术，如胶体金免疫层析法（ＧＩ—ＣＡ）、免疫印迹试验等。各种方法都有独特的优点和缺点，检验人员应从具体情况出发，因地制宜，发展和完善梅毒诊断方法，指导临床及时治疗梅毒患者，对控制梅毒的蔓延有重要意义。

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［责任编校：赵唯贤］

非侵入性产前基因诊断研究进展

李璨１’２，曾昭书２，郑红２

（１．郑州市中心医院妇产科，河南郑州４５０００７；２．郑州大学基础医学院，河南郑州４５００５２）

［关键词］产前诊断；分子遗传；孕妇外周血；胎儿细胞

［中圈分类号］Ｒ３９４．３［文献标识码］Ａ［文章编号】１００８—９２７６（２００８）０６—０６２４－０４

产前诊断是指对胎儿进行先天性缺陷和遗传性疾病的诊断，包括相应筛查，其项目包括遗传咨询、医学影像、生化免疫、细胞遗传和分子遗传等。目前进行产前分子遗传诊断主要是用侵人性的取样方法，如羊膜腔穿刺术、胎儿脐血穿刺等，其采样途径、诊断方法对胎儿构成影响，可能造成自然流产、胎儿损伤、羊水持续渗漏感染及栓塞等严重后果…。但是，自八十年代以来发展起来的从孕妇的宫颈涂片、尿液、血液中分离胎儿的细胞或遗传物质进行诊断的方法，其采样途径对胎儿不构成影响，故属于非侵人性产前诊断技术，且可将诊断时间提前至孕４—５周，因此目前获得较多关注¨１。本文就孕妇外周血中获取胎儿细胞诊断胎儿分子遗传状况的研究现状作一综述。１母体中存在的胎儿细胞

妊娠的机制非常复杂。妊娠期间。母体与胎儿之间时刻发生着物质交换，胎儿通过胎盘从母体获得发育所必需的营养和Ｏ：，其代谢废物则通过胎盘进入母体血液中。在此过程中，胎儿的一些成分如滋养细胞、可溶性ＤＮＡ片段等也不可避免的进入到母体血液中，可以反映胎儿的遗传状况，这是非侵入性产前基因诊断的生理基础。Ｓｃｈｍｏｒｌ在１８９３年就已报道在死于子痫的孕妇肺循环中发现滋养叶细胞；Ｗａｌｋｎｏｗｓｋａ在１９６９年报道了在怀男性胎儿的孕妇血循环中发现了核型为４６，ＸＹ的淋巴细胞，提示这种细胞来自男性胎儿。

新近研究表明，存在于母血循环中的胎儿细胞主要有四类：胎儿滋养细胞、胎儿淋巴细胞、胎儿有

收稿日期：２００８—０７—１０

作者简介：李臻（１９７７一）．女，河南省郑州市人，硕士，主治医师．从事优生优育技术、妇科肿瘤防治及科研工作。万方数据