基因工程复习重点
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绪论1.理论上的三大发现：（1）1944年，美国微生物学家Avery证明基因就是DNA分子，提出 DNA是遗传信息的载体。
（2）1953年，美国科学家Watson 和英国科学家Crick提出 DNA Double Helix model。
1958年，Meselson 和Stahl证明 DNA半保留复制。
（3）1968年，Nirenberg、Holley和Khorana解读了遗传密码及其在蛋白质合成方面的技能而分享诺贝尔生理医学奖。
2.技术上的三大发现:（1）限制性核酸内切酶的发现（1962年Arber ）（2）DNA连接酶的发现（1967Gellert）（3）基因工程载体的发现3.基因工程研究的内容：(1)从生物有机体复杂的基因组中，分离出带有目的基因的DNA片段。
(2)在体外，将带有目的基因的DNA片段连接到能够自我复制并具有选择标记的载体分子上，形成重组DNA分子。
(3)将重组DNA分子引入到受体细胞(亦称宿主细胞或寄主细胞)。
(4)带有重组体的细胞扩增，获得大量的细胞繁殖群体(菌落)。
(5)从大量的细胞繁殖菌落中，筛选出具有重组DNA分子的细胞克隆。
(6)将选出的细胞克隆的目的基因进行进一步研究分析；(7)将目的基因克隆到表达载体上，导入寄主细胞，使之在新的遗传背景下实现功能表达，产生出人类所需要的物质。
第二章基因克隆所需的工具酶一、限制性内切酶1．限制性核酸内切酶:是一类能够识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列，并由此切割DNA双链结构的核酸内切酶。
它们主要是从原核生物中分离纯化出来的。
限制作用：是指一定类型的细菌可以通过限制性酶的作用，破坏入侵的外源DNA(如噬菌体DNA等)，使得外源DNA 对生物细胞的入侵受到限制修饰作用：生物细胞(如宿主)自身的DNA分子合成后，通过修饰酶的作用：在碱基中特定的位置上发生了甲基化而得到了修饰，可免遭自身限制性酶的破坏。
2．核酸内切限制酶的类型：I型、II型、III型3．核酸内切限制酶的命名法由H．O．Smith和D．Nathans(1973)提议的命名系统4.Ⅱ型核酸限制性内切酶的基本特性：a. 在DNA分子双链的特异性识别序列部位，切割DNA分子产生链的断裂；b. 2个单链断裂部位在DNA分子上的分布，通常不是彼此直接相对的；c.??? 因此，断裂的结果形成的DNA片段，也往往具有互补的单链延伸末端。
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Southern blotting：即DNA印迹杂交，以碱基互补配对为原则，将DNA影印转移与标记探针进行高特异性杂交的方法。
Cosmid：黏粒载体，含有λ噬菌体的cos位点和质粒的复制子，是专门为克隆大片段设计的载体。
cDNA library：利用某种生物的总mRNA合成cDNA，再将这些cDNA与载体连接，转入细菌细胞中进行保存和扩增称cDNA文库。
RACE：通过反转录和PCR技术进行cDNA末端快速扩增，得到基因转录本的未知序列，从而获得mRNA完整序列的方法。
RT-PCR：即逆转录PCR，先用逆转录酶作用于mRNA，以寡聚dT为引物合成cDNA 第一链，然后用已知一对引物，扩增嵌合分子的一种方法。
MCS：包含多个限制酶切位点的一段短的DNA序列。
插入失活：若把外源DNA片段插入到载体的选择标记基因中而使此基因失活，丧失其原有的表现特性，此方法叫插入失活。
PCR：是模拟体内DNA复制条件，应用DNA聚合酶反应，特异性扩增某一DNA片段的技术。
mRNA差异显示技术：根据真核生物mRNA带有3’poly(dA) 的结构，合成poly(dT)12MN引物与mRNA的3’端互补，在反转录酶的作用下合成cDNA－mRNA 杂交分子。
然后合成5’随机引物(10bp) 和poly(dT)12MN引物，PCR扩增获得所有mRNA的cDNA分子。
巢式PCR：巢式PCR使用两对PCR引物扩增完整的片段。
第一对PCR引物扩增片段和普通PCR相似。
第二对引物称为巢式引物（因为他们在第一次PCR扩增片段的内部）结合在第一次PCR产物内部，使得第二次PCR扩增片段短于第一次扩增。
实时荧光定量PCR：在PCR反应体系中加入荧光基因，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析。
蛋白质印迹法：又称免疫印迹法，在蛋白质凝胶电泳和固相免疫测定基础上发展起来的蛋白质检测技术，检测蛋白样品中是否存在抗原，也可以评价新抗体的特异性。
大学基因工程复习归纳重点复习资料
基因工程复习归纳第一章绪论1.基因工程的定义：是指按照人们的愿望，经过严密的设计，将一种或多种生物体（供体）的基因与载体在体外进行拼接重组，然后转入另一种生物体（受体/宿主）内，使之按照人们的意愿稳定遗传、并表达出新的性状的技术。
2.基因工程概念的发展：遗传工程→DNA重组技术→分子/基因克隆（Molecular/Gene→基因工程→基因操作。
应用领域以“基因工程”、“DNA重组”为主基因工程基因工程的历史性事件1973：Boyer和Cohen建立DNA重组技术1978：Genetech公司在大肠杆菌中表达出胰岛素1982：世界上第一个基因工程药物重组人胰岛素上市1988：PCR技术诞生1989：我国第一个基因工程药物rhIFNα1b上市2003: 世界上第一个基因治疗药物重组腺病毒-p53上市3.基因工程的三大关键元件基因（供体）：外源基因、目的基因载体：能将外源基因带入受体细胞，并能稳定遗传的DNA分子（克隆载体、表达载体）。
宿主（受体）：，能摄取外源DNA、并能使其稳定维持的细胞（组织、器官或个体）。
4.基因工程的基本步骤（切、接、转、增、检（大肠杆菌是中心角色）（1）目的基因的获取：从复杂的生物基因组中，经过酶切消化或PCR扩增等步骤，分离出带有目的基因的DNA片断。
（2）重组体的制备：将目的基因的DNA片断插入到能自我复制并带有选择性标记（抗菌素抗性）的载体分子上。
（3）重组体的转化：将重组体（载体）转入适当的受体细胞中。
（4）克隆鉴定：挑选转化成功的细胞克隆（含有目的基因）。
（5）目的基因表达：使导入寄主细胞的目的基因表达出我们所需要的基因产物。
第二章 DNA重组克隆的单元操作一、用于核酸操作的工具酶1.限制性核酸内切酶(主要存在于原核细菌中，帮助细菌限制外来DNA的入侵)。
限制性核酸内切酶的功能与类型其中II型限制性核酸内切酶：切割位点专一，适于DNA重组，是DNA重组中最常用工具酶。
生物技术概论基因工程部分复习重点
1、PCR：一种模拟DNA体内复制过程的体外DNA复制过程，在一个离心管的缓冲液体系中，加入DNA模板，d-NTPs、引物和DNA聚合酶，通过变性、退火、延伸三个温度的不断循环，使目标DNA得到快速大量的复制，需要两条合成的寡核苷酸片断和耐热的DNA聚合酶。
2、启动子：在基因序列中，标志着转录起始的可以被RNA聚合酶识别的位点（DNA区段），一般位于基因的上游。
3、终止子：位于基因的编码序列之外（一般在下游）的一段标志着转录停止的RNA聚合酶识别位点。
4、Ti质粒：根癌农杆菌核外的一种环状双链DNA分子，约200kb，Ti质粒的结构上可分为毒性区、T-DNA区、结合转移区、复制起始区。
5、SD序列：位于起始密码子上游的一段保守序列，为细菌核糖体有效结合和翻译起始所必须，一般长约3-9bp，位于起始密码子上游3-11碱基的位置，它与16S核糖体RNA的3端互补，控制翻译的起始。
6、反义链：下链或模板链，在基因的DNA双链中，转录时作为mRNA合成模板的那条单链。
7、基因文库：是指汇集了某一生物基因组DNA全部序列的重组体DNA群体（转化子群）。
具体来说，构建基因文库时，首先将代表某一生物类型的全部DNA片段分别插入到特定载体上，然后将重组载体导入到宿主细胞并获得大量的含有重组载体的克隆（一般为单菌落或噬菌斑）。
8、DNA探针：经放射性或非放射性物质标记已知的特定的DNA序列。
9、载体构建：用限制性酶切取目的基因，再用同一种限制酶切开质粒，用连接酶把目的基因和质粒连接起来的过程。
10、转化：将普通的质粒分子导入受体细胞的过程。
11、感受态细胞：经过处理后处于容易接受外源DNA状态的细胞。
12、多克隆位点：克隆载体中的一段用于插入外源DNA片段的特定区域，由一系列的紧密相连的限制性内切酶位点组成，而且每个限制性内切酶位点应该在整个载体中是唯一的。
13、选择标记基因：在基因工程中的一类用于选择转化细胞（菌）的抗性基因，通常是一些抗生素抗性基因，比如对氨苄青霉素、四环素氯霉素、卡那霉素以及潮霉素等具有抗性的基因，这样，通过在培养基中加入特定的抗生素就可以选择得到转化的细胞（菌）。
基因工程复习重点
二、简答题1、说明限制性内切核酸酶的命名原则要点。
答：限制性内切核酸酶采用三字母的命名原则,即属名+种名+株名的各一个首字母,再加上序号. 基本原则: 3-4个字母组成,方式是:属名+种名+株名+序号; 首字母: 取属名的第一个字母,且斜体大写;第二字母: 取种名的第一个字母,斜体小写;第三字母: (1)取种名的第二个字母,斜体小写;(2)若种名有词头,且已命名过限制酶,则取词头后的第一字母代替.第四字母: 若有株名,株名则作为第四字母,是否大小写,根据原来的情况而定,但用正体. 顺序号: 若在同一菌株中分离了几种限制酶,则按先后顺序冠以I,Ⅱ,Ⅲ,…等,用正体.2、什么是限制性内切核酸酶的星号活性？受哪些因素影向？答：Ⅱ类限制酶虽然识别和切割的序列都具有特异性，但是这种特异性受特定条件的限制，即在一定环境条件下表现出来的特异性。
条件的改变，限制酶的特异性就会松动，识别的序列和切割都有一些改变，改变后的活性通常称第二活性，而将这种因条件的改变会出现第二活性的酶的右上角加一个星号表示，因此第二活性又称为星号活性。
概括起来，诱发星活性的因素有如下几种：(1)高甘油含量(>5％, v／v)；(2)限制性内切核酸酶用量过高(>100U／ugDNA)；(3)低离子强度(<25 mmol／L)；(4)高pH(8.0以上)；(5)含有有机溶剂，如DMSO，乙醇等；(6)有非Mg2+的二价阳离子存在(如Mn2+，Cu2+，C02+，Zn2+等)。
3、影响DNA连接酶催化连接反应的因素有哪些？答：（1）DNA的纯度（2）DNA甲基化的程度（3）酶切消化反应的温度（4）DNA的分子结构（5）核酸内切限制酶的缓冲液4、什么是Klenow酶？有哪些活性？在基因工程中有什么作用？答：Klenow酶是1974年Klenow用枯草杆菌蛋白酶水解DNA聚合酶I，得到两个片段，其中大片段的分子量为75kDa，它具有5'-3'聚合酶和3'-5'外切核酸酶的活性，小片段具有5'-3'外切核酸酶活性。
基因工程复习知识点
基因工程复习资料一、知识点1.根据基因工程的定义，能替代基因工程的术语。
2. 含有II型限制性内切酶切位点的DNA 片段的特点。
3.已知一双链DNA分子，分别用限制酶Ⅰ、限制酶Ⅱ切割单独切割得到不同片段；同时用限制酶Ⅰ和限制酶Ⅱ切割时，得到另外的片段，据此分析该双链DNA分子结构及酶切位点情况。
4．质粒分子生物学的描述。
5．在植物基因工程中广泛使用的载体。
6．质粒带有α互补的 lacZ'标记基因，那筛选培养基中加入显色底物和诱导物分别为？7．载体常用的选择性标记：抗生素、生化标记、营养缺陷型标记的包括哪些（要能区分缩写符号）。
8．DNA双链是靠什么化学键维持？9．能有效区分重组子与非重组子的是方法有哪些？10．离体cDNA 合成中所涉及的工具酶是有哪些？11．强化基因转录的元件是哪些？12．基因调控元件中属于负调控顺式作用元件的是哪些？13．关于包涵体的叙述。
14. 在单子叶、双子叶植物及动物的遗传转化过程中，应用最成功的间接转化法分别是什么15. 在对转基因植物进行分子鉴定时，检测外源基因的整合、表达、转录，分别可以采用哪些方法？16．细菌存在限制-修饰的现象，其生理意义是什么？17．Taq DNA 聚合酶的发现使得 PCR 技术的广泛运用成为可能，是利用其哪个特点？18．关于柯斯质粒（cosmid）描述。
19．Cosmid、 -DNA 、 Plasmid几种常用载体的装载量大小比较20．载体质粒 pBR322上的两个选择性标记： Ap r、 Tc r。
它们分别含有一个单一酶切位点： Pst I 、 Sph I。
若将一外源基因插入Ap r中的Pst I位点，那么转化子和重组子如何筛选，若插入Sph I又如何筛选？21．DNA-DNA,DNA-RNA分子杂交的化学原理是什么（靠什么维持其双链稳定性）？22．cDNA 法获得目的基因的特点表现为？23．原核生物启动子的特征是有哪些？24．强化 mRNA 翻译的元件是哪些？25．高等哺乳类动物基因在大肠杆菌中高效表达时，包涵体形成的原因是？26.动物基因转移法中的胚胎干细胞法有何特点？（）27. 如何正确理解基因漂移？28.熟悉pBR322、pUC18/19载体的组成元件及作用、简写所代表的含义。
基因工程复习资料
基因工程复习资料第一章核酸的制备1.主要步骤：分、切、接、转、筛、表2.基因工程的概念：基因工程又称基因堆叠技术和dna重组技术，就是以分子遗传学为理论基为础，以分子生物学和微生物学的现代方法为手段，将不同来源的基因按预先设计的蓝图，在体外构建杂种dna分子，然后导入活细胞，以改变生物原有的遗传特性、获得新品种、生产新产品。
第二章基因工程工具酶1.生物催化剂：核酶、抗体酶、模拟酶。
2.限制性内切核酸酶：定义：限制性内乌核酸酶就是一类能够辨识双链dna中特定核苷酸序列（辨识序列），并在识别序列上使每条链的一个磷酸二酯键断开的内脱氧核糖核酸酶。
命名：限制性内乌核酸酶通常就是以第一次抽取至这类酶的生物的种名的第一个字母和种名的第一、第二个字母命名的，有的在后面还加菌株（型）代号中的一个字母。
如果从同一种生物中先后提取到多种限制性内切核酸酶，则依次用罗马数字ⅰ、ⅱ、ⅲ表示。
并且名称的前三个字母须用斜体，第一个字母用大写。
3.dna连接酶：定义：dna连接酶也称dna黏合酶，在分子生物学中扮演一个既特殊又关键的角色，那就是连接dna链3‘-oh末端和，另一dna链的5’-p末端，使二者生成磷酸二酯键，从而把两段相邻的dna链连成完整的链的一种酶。
种类：大肠杆菌dna连接酶、t4dna连接酶、tscdna连接酶、真核生物细胞辨认出的连接酶，例如酶ⅰ、酶ⅱ、酶ⅲ等多种类型。
4.dna片段的相连接方法：①具互补黏性末端dna片段之间的连接：可用e?colidna连接酶，也可用t4dna连接酶。
②尼奥罗末端dna片段之间的相连接：就可以用t4dna连接酶，并且必须减少酶的用量。
③dna片段末端修饰后进行连接：dna片段末端同聚物加尾后进行连接，可按互补粘性末端片段之间的连接方法进行连接；粘性末端修饰成平末端后进行连接；dna片段5′端脱磷酸化后进行连接；dna片段加连杆或衔接头后连接。
5.dna聚合酶：①定义：dna聚合酶就是指用dna单链为模板，以4种脱氧核苷酸为底物，催化剂制备一条与模板链序列优势互补的dna新链的酶。
基因工程复习提纲
1.1 DNA重组技术的基本工具一、基因工程的概念基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。
基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，又叫做DNA重组技术。
概念分析①基因工程技术的原理：基因重组②目的：创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。
③操作水平：DNA分子水平④操作环境：体外⑤优点：克服远缘杂交不亲和障碍，定向改造生物性状从结构上分析，为什么不同生物的DNA能够重组?(1)DNA的基本组成单位都是四种脱氧核苷酸。
(2)双链DNA分子的空间结构都是规则的双螺旋结构(1)基因是控制生物性状的独立遗传单位。
(2)遗传信息的传递都遵循中心法则。
(3)生物界共用一套遗传密码。
二、基础理论和技术的发展催生了基因工程（一）基础理论的重大突破①DNA是遗传物质的证明 1944年，艾弗里等人通过不同类型肺炎双球菌的转化实验，不仅证明了生物的遗传物质是DNA，还证明了DNA可以从一种生物个体转移到另一种生物个体，艾弗里等人的工作可以说是基因工程的先导。
②DNA双螺旋结构和中心法则的确立1953年，沃森和克里克建立了DNA双螺旋结构模型。
1958年，梅赛尔松和斯塔尔用实验证明了DNA的半保留复制。
中心法则阐明了遗传信息流动的方向。
③遗传密码的破译人们认识到，自然界中从微生物到人类共用一套遗传密码，而且为基因的分离和合成等提供了理论依据。
（二）技术发明使基因工程的实施成为可能①基因转移载体的发现 1967年，罗思和赫林斯基发现细菌拟核DNA之外的质粒有自我复制能力，并可以在细菌细胞间转移，这一发现为基因转移找到了一种运载工具②工具酶的发现科学家发现了多种限制酶、连接酶、逆转录酶，这些发现为DNA的切割、连接以及功能基因的获得创造了条件。
③DNA合成和测序技术的发明④DNA体外重组的实现⑤重组DNA表达实验的成功 1973年，博耶和科恩选用仅含单一EcoRI酶切位点的载体质粒pSC101，使之与非洲爪蟾核糖体蛋白基因的DNA片段重组。
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考试题型
一、填空（共10题 10分）
二、单项选择题（共20题 20分）
三、英文名词解释（共8题 32分）
四、简答题（共6题 30分）
五、综合题（共1题 8分）
幻灯片2
第一章
1、名词解释：
Gene Engineering HGP（Human Genome Project）
Gene Therapy 基因诊断
2、简述重组DNA操作一般步骤。
3、了解基因工程发展史上的重大事件。
4、了解基因工程研究内容。
5、简述基因工程的主要操作内容。
6、请举两个基因工程应用的具体例子并加以说明。
幻灯片3
第二章第三章第四章
1、名词解释：
载体（Vector）、质粒（Plasmid）、穿梭载体（shuttle vector）、质粒的不相容性、多克隆位点（multiple cloning sites，MCS）、a-互补、粘性末端、 cos位点、考斯质粒（Cosmid）、穿梭载体（Shuttle vector）、pBR322、pSC101、噬菌粒（phagemid or phasmid）、人造染色体载体、细菌人造染色体（BAC）、酵母人造染色体（YAC）、工具酶、限制修饰系统（R-M System）、同位酶、同尾酶、同裂酶、星星活性(Star activity)、 Klenow酶、T-载体
幻灯片4
2、载体的功能及其应具备的条件。
3、质粒的基本特征是什么？质粒的不相容性的分子机制是什么？
4、在构建质粒载体时，对天然质粒进行修饰改造？
5、正选择标记lacZ′的显色原理（ a-互补的原理）是什么，有何应用？
6、λ噬菌体的包装限制是什么？
7、核酸限制性内切酶类型及主要特性是什么？
8、限制性内切酶如何命名？命名原则是什么?
9、限制性内切酶基本特征是什么？
10、简述影响限制性核酸内切酶酶切的反应条件的因素。
幻灯片5
11、引起星星活性的因素是什么？如何抑制？
12、 DNA连接酶的基本功能是什么？
13、大肠杆菌DNA聚合酶I的基本功能是什么？
14、大肠杆菌DNA聚合酶I 大片段的基本功能是什么？
15、S1核酸酶的基本功能是什么？
16、碱性磷酸酶的的基本功能是什么？根据来源不同可分为几种？它们之间有何区别？
17、质粒提取原理、试剂、过程。
第五章
1、名词解释：
凝胶电泳、探针（probe）、探针标记、杂交、Northern杂交（Northern Hybridization）、Southern杂交（Southern Hybridization） PCR、荧光定量PCR、生物芯片、基因芯片(Gene chip) 、蛋白芯片、基因库（gene pool）、基因文库（Gene library or Gene bank）、基因组文库、cDNA文库（cDNA library）、酵母双杂交系统（Tow-Hybrid System）、
幻灯片7
2、简述琼脂糖凝胶电泳的原理（分离原理和检测原理）。
3、常用的缓冲液有那些？它们有何区别？
4、琼脂糖凝胶电泳参数有那些？影响DNA迁移率的因素有那些?
5、核酸分子杂交的基本原理是什么？主要包括那些类型？有何区别？ Northern杂交、Southern杂交和Western的异同？
6、探针标记的方法有那些？其过程如何？切口平移法标记探针的原理？随机引物法标记探针的原理？
7、 PCR技术的原理和过程是什么？
8、 PCR技术的基本成分有那些？各有何要求？
9、引物设计要遵守的原则有那些？
10、荧光定量PCR的优点是什么？
幻灯片8
11、评价基因文库的质量标准有那些？
12、简述基因组文库的构建过程。
13、简述cDNA文库的构建过程。
14、简述酵母双杂交系统的基本原理及其应用。
15、简述Sanger双脱氧链终止测序法的基本原理及其过程。
16、简述Maxam-Gilbert化学修饰测序法的基本原理及其过程。
17、作为受体细胞应具备的条件有那些？
18、实验室常用的基因工程受体细胞有那些？
19、简述大肠杆菌作为基因工程受体菌的优缺点。
20、简述酵母菌表达外源基因的优缺点。
幻灯片9
第六章
1、名词解释：
重组率感受态原生质体转化转导（Transduction）转化率感受态细胞（Competent Cell）
2、简述基因工程的操作过程。
3、提高重组率的方法有那些？
4、原生质体的转化主要包括那些过程？
5、影响转化率的因素有那些？
6、转化细胞的扩增操作的目的是什么？
7、转化子的筛选和鉴定方法有那些？
幻灯片10
8、如何区别：转化子与非转化子、重组子与非重组子、目的重组子与非目的重组子。
9、什么叫抗药性筛选法、HAT选择法？
幻灯片11
第七章
名词解释：T-Vector T-DNA
1、简述基因克隆的方法有那些？
2、简述鸟枪法克隆目的基因的基本战略。
3、简述鸟枪法克隆目的基因的局限性。
4、简述cDNA法克隆目的基因的基本战略。
5、简述cDNA法克隆目的基因方法之一差异分离程序。
6、简述cDNA法克隆目的基因的局限性。
7、简述PCR克隆目的基因的基本程序。
8、如何设计探针序列？
幻灯片12
9、简述DNA化学合成的用途。
10、简述基因文库的构建程序。
11、如何从基因文库中筛选目的基因？
12、在基因组文库的构建过程中，如何避免外源DNA片段之间的连接？
13、基因组文库重组克隆如何排序？
幻灯片13
第八章
名词解释：包涵体（Inclusion Bodies）
1、什么叫表达载体（Expression vector）？简述作为表达载体应具有的元件有那些？
2、简述一个好的表达系统的标准是什么？
3、简述大肠杆菌作为基因工程受体菌的优缺点。
3、简述作为基因工程宿主必须具备的主要条件
4、简述外源基因在大肠杆菌中进行高效表达应考虑的因素有那些？
5、如何克隆启动子和终止子？
6、核糖体结合位点对外源基因表达有何影响？
7、密码子对外源基因表达有何影响？
幻灯片14
8、简述包涵体（Inclusion Bodies）及其性质，包涵体形成机制。
9、简述以包涵体形式表达目的蛋白的优缺点。
10、如何对包涵体形式表达目的蛋白进行后处理？
11、简述以分泌形式表达目的蛋白的优缺点。
12、简述蛋白质的分泌机制。
13、如何构建分泌型目的蛋白表达系统？
14、简述以融合形式表达目的蛋白的优缺点。
15、融合蛋白表达质粒的构建原则是什么？
16、融合型异源蛋白如何回收？
17、简述以寡聚形式表达目的蛋白的优缺点。
18、如何构建寡聚型目的蛋白表达系统？
幻灯片15
19、简述以整合形式表达目的蛋白的优缺点。
20、如何构建蛋白酶抗性或缺陷型表达系统的构建？
21、简述基因工程菌遗传不稳定性的表现与机制。
22、改善基因工程菌不稳定性的策略有那些？
23、简述利用重组大肠杆菌生产人胰岛素。
幻灯片16
第九章
1、简述酵母菌表达外源基因的优缺点。
2、外源基因到入酵母菌的方法有那些？
3、转化质粒在酵母细胞中的命运如何？
4、简述利用重组酵母菌生产乙肝疫苗。
幻灯片17。