酶促反应动力学实验报告
酶促反应动力学实验
生化教研室 朱欣婷
2.非竞争性抑制曲线图 非竞争性抑制曲线图
生化教研室 朱欣婷
[下次实验预习] 下次实验预习]
核酸的分类，以及在细胞中的分布情况。 1. 核酸的分类，以及在细胞中的分布情况。 核酸的组成。 2. 核酸的组成。 离心技术的定义及离心机的正确使用。 3. 离心技术的定义及离心机的正确使用。 实验六的实验原理及操作。 4. 实验六的实验原理及操作。
生化教研室 朱欣婷
思 考
1.米氏常数（Km）有无单位？为什么？ 1.米氏常数（Km）有无单位？为什么？ 米氏常数 2.本实验中能否不用计算反应速度， 2.本实验中能否不用计算反应速度，直接以各管 本实验中能否不用计算反应速度 测得的光密度代表各管中酶的反应速度行不行？ 测得的光密度代表各管中酶的反应速度行不行？ 为什么？ 为什么？ 3.如果不用本实验原理中所列的几种变换公式， 3.如果不用本实验原理中所列的几种变换公式， 如果不用本实验原理中所列的几种变换公式 是否还可以从实验结果求出Km值 如有应如何求？ 是否还可以从实验结果求出Km值?如有应如何求？ Km
生化教研室 朱欣婷
（一）底物浓度对酶促反应速度的影响
当底物浓度较低时,V随[S]的增大而急剧上升, 当底物浓度较低时,V随[S]的增大而急剧上升,两 ,V 的增大而急剧上升 者成正比关系.随着底物浓度继续增加, 者成正比关系.随着底物浓度继续增加,反应速度 增加,而幅度不断下降,若继续加大[S] [S]反应速度就 增加,而幅度不断下降,若继续加大[S]反应速度就 不再增加,达到一个极限值V 不再增加,达到一个极限值Vmax.
酶促反应动力学实验.
酶动力学综合实验实验（一）——碱性磷酸酶Km值的测定【目的要求】1.了解底物浓度对酶促反应速度的影响2.了解米氏方程、Km值的物理意义及双倒数作图求Km值的方法。
【实验原理】1、碱性磷酸酶：碱性磷酸酶是广泛分布于人体各脏器器官中，其中以肝脏为最多。
其次为肾脏、骨骼、肠和胎盘等组织。
但它不是单一的酶，而是一组同功酶。
本实验用的碱性磷酸酶是从大肠杆菌中提取的。
2、米氏方程：Michaelis-Menten 在研究底物浓度与酶促反应速度的定量关系时，导出了酶促反应动力学的基本公式，即：错误！未找到引用源。
(1) 式中：v表示酶促反应速度，错误！未找到引用源。
表示酶促反应最大速度，[S]表示底物浓度，错误！未找到引用源。
表示米氏常数。
3、错误！未找到引用源。
值的测定主要采用图解法，有以下四种：①双曲线作图法（图1-1，a）根据公式（1），以v对[s]作图，此时1/2错误！未找到引用源。
时的底物浓度[s]值即为Km值，以克分子浓度（M）表示。
这种方法实际上很少采用，因为在实验条件下的底物浓度很难使酶达到饱和。
实测错误！未找到引用源。
一个近似值，因而1/2错误！未找到引用源。
不精确。
此外由于v对[S]的关系呈双曲线，实验数据要求较多，且不易绘制。
②Lineweaver- Burk作图法双倒数作图法（图1-1，b）实际工作中，常将米氏方程（式（1））作数学变换，使之成为直线形式，测定要方便、精确得多。
其中之一即取（1）式的倒数，变换为Lineweaver- Burk方程式：错误！未找到引用源。
(2)以错误！未找到引用源。
对错误！未找到引用源。
作图，即为y=ax+b形式。
此时斜率为错误！未找到引用源。
，纵截距为错误！未找到引用源。
把直线外推与横轴相交，其截距相交，其截距即为—错误！未找到引用源。
③Hofstee作图法（略）把（2）式等号两边乘以错误！未找到引用源。
，得：错误！未找到引用源。
(3)以v对错误！未找到引用源。
酶促反应动力学实验报告
酶促反应动力学实验报告酶促反应动力学实验报告摘要：本实验旨在研究酶促反应的动力学过程。
通过测量不同底物浓度下酶催化反应速率的变化，分析酶的催化特性和底物浓度对反应速率的影响。
实验结果表明，酶促反应速率与底物浓度呈正相关关系，但随着底物浓度增加，反应速率逐渐趋于饱和。
1. 引言1.1 酶的作用1.2 酶促反应动力学2. 实验方法2.1 材料准备2.2 实验步骤3. 实验结果与分析3.1 反应速率与底物浓度关系曲线3.2 酶活性计算公式及计算结果4. 讨论与结论4.1 反应速率与底物浓度关系解释4.2 实验误差及改进方案1 引言1.1 酶的作用酶是一类生物催化剂，能够加速生物体内化学反应的进行。
它们通常是蛋白质或核酸分子，并具有高度特异性。
在细胞内，酶参与调节代谢途径、合成新物质以及降解废物等重要生物过程。
1.2 酶促反应动力学酶促反应动力学研究酶催化反应速率与底物浓度、温度和pH等因素之间的关系。
其中，底物浓度是影响酶催化速率的重要因素之一。
当底物浓度较低时，反应速率随着底物浓度的增加而迅速增加；当底物浓度较高时，反应速率逐渐趋于饱和。
2 实验方法2.1 材料准备- 酶溶液：根据实验要求选择合适的酶溶液。
- 底物溶液：根据实验要求配置不同浓度的底物溶液。
- 缓冲液：用于维持实验环境中恒定的pH值。
- 试管或微孔板：用于进行反应混合和观察。
- 分光光度计：用于测量反应混合液的吸光度变化。
2.2 实验步骤1. 准备一系列不同浓度的底物溶液，并标明其浓度。
2. 在试管或微孔板中分别加入相同体积的酶溶液和不同浓度的底物溶液，混合均匀。
3. 将反应混合物放入分光光度计中，设置适当的波长并记录吸光度值。
4. 在一定时间间隔内，测量吸光度值的变化，并记录下来。
5. 根据实验数据计算反应速率。
3 实验结果与分析3.1 反应速率与底物浓度关系曲线根据实验数据绘制反应速率与底物浓度关系曲线。
实验结果显示，随着底物浓度的增加，反应速率也增加。
酶催化反应动力学的测定实验报告
酶催化反应动力学的测定实验报告引言：酶是一类底物特异性高、效率高的蛋白质催化剂，对生命体的正常代谢过程具有重要的调控作用。
酶催化反应动力学是研究酶催化速率与底物浓度、温度等因素之间关系的实验方法。
本实验旨在通过测定过氧化氢酶催化过氧化氢分解反应速率随底物浓度变化的关系，探究酶催化反应的动力学特性。
实验材料与方法：1. 实验材料：- 过氧化氢酶储备液- 过氧化氢底物液- 磷酸盐缓冲液（pH 7.0）- 酶抑制剂：肼，对苯二酚2. 实验仪器：- 分光光度计- 温度控制设备- 酶解反应体系3. 实验步骤：1) 预先配制过氧化氢酶催化反应所需的底物液。
2) 准备一系列不同浓度的底物液，如0.2%、0.4%、0.6%、0.8%和1.0%。
3) 将每种底物液分别加入试管中，保持温度一致，加入过氧化氢酶储备液。
4) 使用分光光度计，以固定波长对反应过程进行连续测量，并记录反应速率随时间的变化。
5) 通过计算反应速率与底物浓度之间的关系，确定酶催化反应的动力学特性。
结果与讨论：本实验通过测定过氧化氢酶催化过氧化氢分解反应在不同底物浓度下的速率，得到了一组反应速率与底物浓度之间的数据。
根据实验数据，我们绘制出反应速率随底物浓度变化的曲线图。
实验数据表明，反应速率随底物浓度的增加而增加，但随着底物浓度继续增加，反应速率逐渐趋于饱和。
这反映了酶催化反应中的酶与底物结合能力饱和的特点。
为了进一步验证实验结果的可靠性，我们进行了反应速率对时间变化的监测。
结果显示，反应速率随时间的增加而逐渐减小，表明酶活性随着时间的推移会受到某种因素的限制，可能是酶活性的衰减或底物浓度的减少。
通过对实验数据的进一步分析，我们可以得到酶催化反应速率与底物浓度之间的动力学关系。
常见的动力学模型有米氏方程、麦克斯韦-伯尔赛方程等，它们可以描述酶催化反应速率与底物浓度之间的定量关系。
结论：通过本实验，我们成功测定了酶催化反应动力学特性。
实验结果显示反应速率与底物浓度之间存在一定关系，呈现出饱和曲线的特点。
酶促反应动力学实验
1/[S]
非竞争性抑制
1/V
抑制剂↑ 无抑制剂
1/[S]
反竞争性抑制
1/V
抑制剂↑ 无抑制剂
1/[S]
实验所用的抑制剂是磷酸氢二钠。
操作
1、不同浓度基质液的配制：
管号 试剂
（1） （2） （3） （4） （5） （6） （7） （8） （9）
0.01 mol/L基质 0 1 1 1 1 1 1 2 3 液（ml）
❖ 酶活性计算及Km值求取
1、在37°C下保温15分钟产生1mg酚为1个酶活性单位，从标准曲线查出释放的 酚量（ug），以此计算处各管的酶活性（v）。
2、以1/v为纵坐标、1/S为横坐标，在坐标纸上作图，求出酶的Km值。
A v 1/v 1/S
Km＝？
四、抑制剂对酶促反应的影响
竞争性抑制作用
1/V
3、酶催化反应的典型曲线
是随着时间的延长，反 应速度下降，由起初的
V
直线变为曲线。
测定酶活性的所有反应
速率的比较都必须依赖 该曲线的线性部分，因 此要测定最初反应速度， 即底物浓度变化在底物 起始浓度的5％以内的 速度。
Vmax [S]
4、实验对象：碱性磷酸酶（AKP）
碱性磷酸酶
磷酸苯二钠
苯酚＋磷酸氢二钠
＋
4-氨基安替比林
碱性条件 K3Fe（CN）6
醌衍生物（红色）
一、pH对酶促反应速度的影响 ❖ 碱性磷酸酶（AKP）的最适pH值是10。
二、温度对酶促反应速度的影响 ❖ 碱性磷酸酶（AKP）的最适温度是37℃。
三、底物浓度对酶促反应速度的影响 ——碱性磷酸酶米氏常数的测定
米-曼氏（Michaelis-Menten）
酶促反应动力学实验报告
酶促反应动力学实验报告14301050154 杨恩原实验目的：1.观察底物浓度对酶促反应速度的影响2.观察抑制剂对酶促反应速度的影响3.掌握用双倒数作图法测定碱性磷酸酶的Km值实验原理：一、底物浓度对酶促反应速度的影响在温度、pH及酶浓度恒定的条件下，底物浓度对酶的催化作用有很大的影响。
在一般情况下，当底物浓度很低时，酶促反应的速度(v)随底物浓度[S]的增加而迅速增加，但当底物浓度继续增加时，反应速度的增加率就比较小，当底物浓度增加到某种程度时反应速度达到一个极限值(即最大速度Vmax)。
底物浓度和反应速度的这种关系可用米氏方程式来表示(Michaelis-Menten方程)即：式中Vmax为最大反应速度，Km为米氏常数，[S]为底物浓度当v=Vmax/2时，则Km=[S]，Km是酶的特征性常数，测定Km是研究酶的一种重要方法。
但是在一般情况下，根据实验结果绘制成的是直角双曲线，难以准确求得Km和Vmax。
若将米氏方程变形为双倒数方程(Lineweaver-Burk方程)，则此方程为直角方程，即:以1/V和1/[S]分别为横坐标和纵坐标。
将各点连线，在横轴截距为-1/Km，据此可算出Km值。
本实验以碱性磷酸酶为例，测定不同浓度底物时的酶活性，再根据1/v和1/[S]的倒数作图，计算出其Km值。
二、抑制剂对酶促反映的影响凡能降低酶的活性，甚至使酶完全丧失活性的物质，成为酶的抑制剂。
酶的特异性抑制剂大致上分为可逆性和不可逆性两类。
可逆性抑制又可分为竞争性抑制和非竞争性抑制等。
竞争性抑制剂的作用特点是使该酶的Km值增大，但对酶促反映的最大速度Vmax值无影响。
非竞争性抑制剂的作用特点是不影响[S]与酶的结合，故其Km值不变，然而却能降低其最大速度Vmax。
本实验选取Na2HPO4作为碱性磷酸酶的抑制物，确定其抑制作用属于哪种类型。
实验步骤：实验一:底物浓度对酶促反应速度的影响1.取试管9支，将0.01mol/L基质液稀释成下列不同浓度：管号试剂2.另取9支试管编号，做酶促反应：管号试剂3.混匀，37 ℃水浴保温5分钟左右。
酶促反应实验报告结果
一、实验目的1. 探究不同底物浓度对酶促反应速率的影响。
2. 确定酶的最适温度和pH值。
3. 观察并分析抑制剂对酶活性的影响。
二、实验材料1. 试剂：淀粉酶、蔗糖酶、葡萄糖、淀粉、蔗糖、果糖、葡萄糖氧化酶、柠檬酸、氢氧化钠、硫酸铜、盐酸、氯化钠等。
2. 仪器：恒温水浴锅、酸度计、酶标仪、电子天平、移液器、滴定管、试管等。
三、实验方法1. 底物浓度对酶促反应速率的影响实验a. 在一系列试管中加入不同浓度的底物溶液（葡萄糖、淀粉、蔗糖、果糖）。
b. 加入适量的淀粉酶或蔗糖酶，立即记录反应时间。
c. 每隔一定时间取出一小部分反应液，加入适量的硫酸铜溶液，观察颜色变化。
d. 记录反应速率与底物浓度的关系。
2. 酶的最适温度和pH值实验a. 将淀粉酶或蔗糖酶溶液分别置于不同温度（如20℃、30℃、40℃、50℃、60℃）的水浴锅中。
b. 将酶溶液分别置于不同pH值（如pH 3、pH 5、pH 7、pH 9、pH 11）的缓冲溶液中。
c. 观察并记录酶活性与温度、pH值的关系。
3. 抑制剂对酶活性的影响实验a. 在一系列试管中加入不同浓度的抑制剂（如柠檬酸、氢氧化钠、氯化钠）。
b. 加入适量的淀粉酶或蔗糖酶，立即记录反应时间。
c. 观察并记录抑制剂对酶活性的影响。
四、实验结果与分析1. 底物浓度对酶促反应速率的影响实验结果显示，随着底物浓度的增加，酶促反应速率逐渐加快。
在底物浓度较低时，反应速率与底物浓度呈线性关系；当底物浓度继续增加时，反应速率趋于稳定。
这说明酶促反应速率与底物浓度之间存在一定的关系。
2. 酶的最适温度和pH值实验结果显示，淀粉酶和蔗糖酶的最适温度分别为60℃和50℃。
在最适温度下，酶活性达到最大值。
当温度过高或过低时，酶活性逐渐降低。
pH值对酶活性也有一定的影响，淀粉酶的最适pH值为7，而蔗糖酶的最适pH值为5。
3. 抑制剂对酶活性的影响实验结果显示，柠檬酸和氢氧化钠对淀粉酶活性具有抑制作用，而氯化钠对酶活性没有明显影响。
酶促反应动力学实验
A、B 、 管加好 后，置 于水浴 锅中预 温5min
预温后 将A、 、 B管混合 管混合 并开始 计时， 计时， 准 确反应 13min
显色 向每个试 管 中各加入 2ml
0.03175g /L碘液， 碘液， 碘液 观 察现象
（一） 操 实验器材 作 方 法
冰箱 试管架 管
恒温水浴锅 移液枪及枪头 胶头滴管 吸量管架
试管 吸量 烧杯
（一） 操 实验试剂 作 方 法
PH6.8的缓冲液 PH6.8的缓冲液 0．03175g/L碘液 03175g/L碘液
Na0.5%淀粉的0.5%氯化钠溶液 0.5%淀粉的0.5%氯化钠溶液 淀粉的0.5%
实验步骤
一、制管
管号 PH6.8的 缓冲液 （ml） A 含NaCl的 0.5%淀粉 液（ml） 稀释100 倍的唾液 （ml） 1（0℃） 2（室温） 3（37℃） 4（50℃） 5（70℃） 6（室温） 2 2 2 2 2 2 用2ml的 蒸馏水代 替
2
2
2
2
2
B
1
1
1
1
1
1
实验步骤
预温 混合反应并计时
酶促反应动力学实验
1 底物浓度对酶活性的影响 ——碱性磷酸酶Km值的测定 碱性磷酸酶Km ——碱性磷酸酶Km值的测定
酶促反应动力学实验
2.1 温度对酶活性的影响
实验原理
每种酶都有其最适温度， 每种酶都有其最适温度， 高于或低于此温度酶的活性都 降低。一般而言， 降低。一般而言，若酶处于过 高的温度环境中， 高的温度环境中，会使酶活性 永久丧失； 永久丧失；而若处于极低温度 的环境中只会使酶活性受到抑 一旦温度适宜， 制，一旦温度适宜，酶又会全 部或部分的恢复其活性。 部或部分的恢复其活性。
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酶促反应动力学实验报告
引言
酶是一类催化化学反应的蛋白质，它们在生物体内发挥着至关重要的作用。
酶促反应动力学是研究酶催化反应速度的学科，通过实验可以深入了解酶催化反应的机理和动力学参数。
本实验旨在探究酶促反应的动力学特性，并对实验结果进行分析和讨论。
材料与方法
材料
•酶溶液
•底物溶液
•缓冲液
•反应容器
•定量移液器
方法
1.准备反应溶液：将一定量的酶溶液、底物溶液和缓冲液按一定比例混合，制
备出合适的反应溶液。
2.设定实验条件：调节反应温度、pH值等实验条件，使其与生物体内环境接
近。
3.开始反应：在反应容器中加入一定量的反应溶液，并立即启动计时器。
4.定时取样：在不同时间点，用定量移液器取出一定体积的反应液体样品。
5.快速停止反应：在取样后立即向反应容器中加入适量的反应停止剂，使反应
迅速停止。
6.测定反应产物：使用合适的实验方法，测定取样时刻反应液中的反应产物的
浓度。
结果与分析
初始速率测定
在实验中，我们首先对反应体系的初始速率进行了测定。
通过在不同时间点取样并快速停止反应，我们测定了不同时间点的反应产物浓度，并计算出了初始速率。
观察速率与底物浓度的关系
为了探究反应速率与底物浓度之间的关系，我们固定其他实验条件不变，改变底物浓度，观察反应速率的变化。
通过在不同底物浓度下进行实验，并记录反应速率的数据，我们建立了速率与底物浓度之间的关系曲线。
实验结果显示，速率随着底物浓度的增加而增加，但达到一定浓度后，速率趋于饱和，不再随底物浓度的增加而增加。
酶催化反应的动力学方程
根据实验结果，我们可以得到酶催化反应的动力学方程。
一般来说，酶催化反应的速率与底物浓度的关系可以用Michaelis-Menten方程描述：
V = (Vmax * [S]) / (Km + [S])
其中V为反应速率，[S]为底物浓度，Vmax为最大反应速率，Km为米氏常数。
结论
酶促反应动力学实验通过测定酶催化反应的速率与底物浓度的关系，探究酶催化反应的动力学特性。
通过对实验结果的分析和讨论，我们得出以下结论： 1. 反应体系的初始速率可以通过测定不同时间点的反应产物浓度来计算得到。
2. 反应速率与底物浓度之间存在一定的关系，速率随底物浓度的增加而增加，但达到一定浓度后趋于饱和。
3. 酶催化反应的动力学方程可以用Michaelis-Menten方程来描述。
本实验结果对于深入理解酶催化反应的机理和动力学参数具有重要意义，有助于开发酶的应用和设计更高效的酶催化反应体系。
参考文献
[1] Michaelis, L.; Menten, M. L. (1913). “Die Kinetik der Invertinwirkung”. Biochem. Z. 49: 333–369.。