微生物试验-培养基的制备
实验一 培养基的制备消毒灭菌
(2) 装放待灭菌物品：将已包扎好的物品放入内桶。盖上锅盖，以两
两对称方式同时旋紧螺栓，勿使漏气。
(3) 加热排气：接通热源，同时打开排气阀，待见有大量水汽排出时，
维持3---5min，锅内空气排尽，关上排气阀。另外一种排气方法：先将排气 阀关闭，待加热升温内压达到5磅时再打开排气阀，等到压力表指针回到零， 关闭排气阀。
培养基的作用：微生物分离、培养、增殖、保藏及鉴定。
培养基配制原则
◆ ◆ ◆ ◆ ◆ ◆ ◆
选择适宜的营养物质 营养物质浓度及配比合适 控制pH条件 控制氧化还原电位
原料来源的选择
根据培养目的不同调配
灭菌处理
2 消毒和灭菌的原理
★ 消毒与灭菌是确保 微生物纯培养 （由一个菌体
生长繁殖的群体）的最基本的实验技术。
高 压 蒸 汽 灭 菌 锅
a 方法：一般121℃（1kg/cm2或15磅/英寸2） 20-30min。 b 适用：耐高温物品如培养基，无菌水，培养皿。 c 注意事项：灭菌开始排净冷空气；
灭菌终了，自然缓慢降压回零；
灭菌结束，趁热取出物品。
三 实验操作步骤
分组操作：分6组，5人1组。
◆ ◆ ◆
牛肉膏蛋白胨琼脂培养基（第1~2组做，每组600ml） 马铃薯糖琼脂培养基（第3~4组做，400ml） 高氏1号培养基（第5~6组做，200ml）
每组需要做的其它工作
（1）每组包1ml吸管5支（塞棉花）（示范） 。 （2）每组包培养皿2包（每包6个） （示范）。 （3）每组装9ml无菌水5管。 （4）每组装20ml无菌水2瓶（50ml三角瓶，内有玻璃珠）。
（5）装锅灭菌。
高压蒸汽灭菌
(1) 灭菌前的准备：将高压蒸汽灭菌锅的内桶取出，向外锅内加入适
微生物学实验-1培养基的制备与高压蒸汽灭菌
2. 放回内层锅，并装入待灭菌物品。 放回内层锅，并装入待灭菌物品。
3. 加盖，并将盖上的排气软管插入内层锅的 加盖， 排气槽内。 排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相 对的两个螺 栓。
4. 通电加热，待冷空气完全排尽后，关上排气 通电加热，待冷空气完全排尽后， 阀。当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维 当锅内压力升到所需压力时，控制热源， 持压力至所需时间。本实验用 持压力至所需时间。本实验用0.1Mpa，121.5℃， ， ℃ 20min灭菌。 灭菌。 灭菌 5. 灭菌所需的时间到后，关闭电源，让灭菌锅 灭菌所需的时间到后，关闭电源， 内温度自然下降，当压力表降至“ 时 内温度自然下降，当压力表降至“0”时，打开排 气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。 气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。 6. 将取出的灭菌培养基放入 ℃温箱培养 将取出的灭菌培养基放入37℃温箱培养24h， ， 经检查若无杂菌生长，即可待用。 经检查若无杂菌生长，即可待用。
6. 加塞 在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞，以 在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞， 阻止外界微生物进人培养基内而造成污染， 阻止外界微生物进人培养基内而造成污染，并保 证有良好的通气性能。 证有良好的通气性能。 7. 包扎 在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时 在棉塞外包一层牛皮纸， 冷凝水润湿棉塞，其外再用绳子扎好。 冷凝水润湿棉塞，其外再用绳子扎好。注明培养 基名称、组别、配制日期。 基名称、组别、配制日期。 8. 灭菌 将上述培养基以 0.103 MPa 121℃ ， ℃ 20min高压蒸汽灭菌。 高压蒸汽灭菌。 高压蒸汽灭菌
高压蒸汽灭菌
实验目的
了解高压蒸汽灭菌的基 本原理及应用范围。 本原理及应用范围。 学习高压蒸汽灭菌的操 作方法。 作方法。
细菌的接种与培养—培养基的制备(微生物检验课件)
培养基的主要成分及其作用
营养物质：蛋白胨、肉浸液及牛肉膏、糖类、血液、鸡蛋与动物血清、无机盐、 生长因子
水分 凝固物质：琼脂、明胶、卵白 抑制剂：常用的有胆盐、煌绿等抑制革兰阳性菌生长；亚碲酸盐、四硫磺酸盐
及多种抗生素等 指示剂：为了观察细菌是否利用分解糖类、氨基酸等物质，常在某些培养基中
培养基的制备程序
制备程序：调配、溶化、矫正pH、过滤澄清、分装、灭菌、鉴定7个主要步骤 分装量：琼脂斜面分装量约为试管容量的1/4，斜面长度约为试管长度的2/3；液
体培养基和半固体培养基为试管长度的1/3；琼脂平板平皿内径为9cm，倾注培 养基13-15ml，若内径为7cm，倾注培养基7-8ml 灭菌：高压蒸汽灭菌法最常用
原料称量
加热溶化
pH矫正
水
酚红 指示剂
培养基
培养基
比色管
目视
pH矫正
蒸 待馏 测水 管
标培 准养 比基 色
管
过酸
蒸 待 测馏 水 管
标准比培养基 色
管
相同
蒸 待馏 测水 管
标培 准养 比基 色
管
过碱
培养基分装
培养基的包扎
培养基的包扎
细菌生长繁殖的条件有哪些？ 叙述培养基的制备程序。 简述培养基的种类及用途。
加入一定种类的指示剂，如酚红、溴甲酚紫、增菌培养基 选择培养基 鉴别培养基 厌氧培养基
按物理性状分类 • 液体培养基 • 固体培养基 • 半固体培养基
基础培养基
基础培养基
含有基础生长所需的基本营养成分，最 常用的是肉浸液，俗称肉汤，主要成分 含牛肉浸液和蛋白胨。
生长繁殖方式：无性繁殖方式，即二分裂。 生长繁殖速度：多数细菌分裂一代需20～30min。结核分枝杆菌需
微生物实验实验一 微生物培养基的制备方法
实验一微生物培养基的制备方法一、培养基(medium)培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。
任何培养基中均需含有微生物所必需的能源、碳源、氮源、矿质元素、水和生长因素，但不同营养类型、不同种类的微生物对营养元素的要求又有很大差异。
目前已使用的各种培养基都是前人经过反复实践，比较设计的成果。
二、培养基的基本成分●能源、碳源：自养微生物以二氧化碳为碳源，光或无机物为能源，在无机物组成的培养基中生长。
例如化能自养型的氧化硫杆菌培养基中，加入粉末状硫为能源，以空气中的CO2为碳源。
异养微生物以有机物为碳源和能源，培养基中常需加入葡萄糖、蔗糖或麦芽糖、乳糖等单糖或双糖，有的可利用淀粉、纤维素等多糖，或利用动物组织中的糖类。
例如培养细菌常用的牛肉膏蛋白胨培养基，其中牛肉膏即为主要碳源和能源。
●氮源：自养微生物以含氮无机物铵盐、硝酸盐等为氮素营养，例如氧化硫杆菌以(NH4)2SO4为氮源；异养微生物以无机物铵盐、硝酸盐或含氮有机物为氮源。
自生固氮菌利用空气中的N2为氮素营养，其培养基中无须加入氮源，称为无氮培养基。
●矿质元素、生长因子：微生物生长繁殖需要P、K、Na、S、Mg、Ca等主要矿质元素以及Fe、Cu等微量元素，因此培养基中常加入K2HPO4、KH2PO4、MgSO4、NaCl、KCl、FeSO4等无机盐类；生长因子主要是调节微生物代谢活动的B族维生素，常由酵母膏、肝浸出液等提供。
许多天然成分的原料如牛肉膏、麦芽汁、玉米粉、豆芽汁等，含有各种无机元素和生长因子，不需另外添加。
三、培养基的类型根据原料来源不同，可将培养基分为合成培养基、半合成培养基与天然培养基。
●合成培养基：由化学成分已知的有机物和无机物配制而成。
成分精确，重复性强。
但营养局限，微生物生长缓慢。
适用于菌种分离、选育、遗传分析及生物测定等。
如培养放线菌的高氏培养基、培养霉菌的察氏培养基以及各种化能自养菌培养基等。
●半合成培养基：由某些天然物质与少量已知成分的化学物质配制而成。
培养基的制备
4)应用：为最常用的灭菌力法， 一般以 101．33kPa(121.3℃)处理15~20min，可 达到对物品进行灭菌的目的。凡耐高温和 潮湿的物品，如常用培养基、生理盐水、 衣服、纱布、玻璃器材等都可用本法灭菌。
【注意事项】
1.待灭菌的物品放置不宜过紧。 2.必须将冷空气充分排除，否则锅内温 度达不到规定温度，影响灭茵效果。 3.灭菌完毕后，不可放气减压，否则瓶 内液体会剧烈沸腾，冲掉瓶塞而外溢甚 至导致容器爆裂。需待灭菌器内压力降 至于大气压相等点才可开盖。 4.装培养基的试管或瓶子的棉塞上，应 包油纸或牛皮纸，以防冷凝水入内。
100ml蒸馏水，加热溶解后调节pH7.4-7.6，分装于试管
（分装量为试管的1/4~1/3） ， 121℃高压灭菌15-20min。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
【注意事项】
1. 灭菌时间和温度要严格控制。 2. 倾注培养基时，切勿将皿盖全部开启，以免空气 中尘埃及细菌等微生物的落入。倾注血琼脂时， 由于加血时琼脂表面容易产生气泡，倾注时应适 时转动锥形瓶，使气泡附于瓶壁，以减少血平板 表面的气泡。 3. 制备好的培养基应注明名称、制作日期，如琼脂 平板应将底(带培养基的平皿)在上，盖在下；用 牛皮纸包裹或装于保鲜袋内，以减少水分蒸发。 液体培养基应直立放置。制作好的培养基应存放 于冷暗处或4℃冰箱。
【方法】
一、常用培养基的制备
1.牛肉膏汤 0.3%牛肉浸膏+1%蛋白胨+0.5%NaCl +100ml蒸馏水，加热溶解后调
节pH7.4-7.6，分装于试管(分装量为试管的1/4~1/3)，121℃高压灭菌
15-20min。 2. 普通琼脂平板
0.3%牛肉浸膏+1%蛋白胨+0.5%NaCl + 2%琼脂粉+ 100ml蒸馏水，加 热溶解后调节pH7.4-7.6，121℃高压灭菌15-20min，冷却50 ℃，倒平 板(13-15ml)。
微生物实验
实验一、培养基的制备和消毒灭菌培养基的配制1.培养基：人工配制的供微生物生长繁殖或积累代谢产物所需的营养基质。
2.培养基的配制原则（1）目的明确：不同微生物所需营养基质不同，配制培养基的目的也有不同。
（2）营养协调：营养成分的比例和浓度要适当。
（3）理化适宜：渗透压、pH和氧化还原电位。
（4）经济节约。
实验步骤---斜面培养基的制备和灭菌计算→称量→加热溶化→调pH →过滤（可省略）→分装→加塞（附棉塞制作）→包扎(皮筋或绳子)→灭菌→摆斜面→无菌检查。
1.称量按照配方，准确称量各成份放于烧杯中。
对于不是粉状药品（如牛肉膏），应用烧杯和玻璃棒称量。
2.配制（1）向烧杯中加入适量的水，搅拌，使其溶解（可加热助溶）。
（2）如果配制固体培养基，在琼脂熔化时，需不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢出或烧焦。
一般要求琼脂沸腾3次，完全熔化后，补足所失水分。
3.调节pH值培养基溶解后，用pH试纸测pH，然后根据要求加酸或碱（一般用1M HCl和1M NaOH），要缓慢少量且多加搅拌。
培养基配方为自然pH时，不用调节。
4.过滤用滤纸或多层纱布，无特殊要求时可省去。
5.分装（1）将培养基分装入试管内或三角瓶内，管（瓶）口塞上棉塞。
固体培养基要趁热装。
（2）分装量①斜面：装量为管长的1/5。
②液体培养基：装量为管长的1/4。
③半固体培养基：装载量为管长的1/3。
（3）注意分装时要避免培养基粘染管（瓶）口，引起污染。
6.灭菌塞棉塞，包扎，灭菌。
培养基做完后，要求在2-4小时内灭菌，否则会被污染。
7.摆斜面灭菌完毕，冷却到60℃左右再摆斜面，以免产生过多冷凝水。
配制培养基时注意事项1.称量要准确，取药品的角匙不能混用。
2.加热融化时要不断搅拌，以免糊底和溢出,（每加热30s关掉电源，开盖看一次）。
3.蛋白胨极易吸湿，称取时动作要迅速。
5.节约药品。
实验二细菌的简单染色和革兰氏染色革兰氏染色法的基本步骤是：先用初染剂结晶紫进行初染，再用碘液媒染，然后用乙醇(或丙酮)脱色，最后用复染剂(如番红)复染。
环境微生物学实验
链霉菌形态观察
放线菌的孢子丝描绘图
孢子形状的观察（印片法）： 3、孢子形状的观察（印片法）： 取一盖片，轻轻放在菌落表面按压一下， 取一盖片，轻轻放在菌落表面按压一下，使 孢子贴附在盖片上， 孢子贴附在盖片上，然后在载片上加一小滴 0.1%美蓝染液（或加一滴水），将盖片带有孢 0.1%美蓝染液（或加一滴水），将盖片带有孢 美蓝染液 ）， 子的面向下，盖在染液上， 子的面向下，盖在染液上，用吸水纸吸去多余 的染液， 的染液，在高倍镜或油镜下观察孢子形状以及 断裂方式。 断裂方式。
3.穿刺接种： 3.穿刺接种： 穿刺接种 用接种针挑取菌种后， 用接种针挑取菌种后，插入深层固体培养基 ，（不要刺到底部），再沿原路拔出 不要刺到底部），再沿原路拔出， 内，（不要刺到底部），再沿原路拔出，此法 用于厌气性细菌接种、检查细菌的运动能力。 用于厌气性细菌接种、检查细菌的运动能力。 4.平板接种： 4.平板接种： 平板接种 将菌种接至培养皿的方法， 将菌种接至培养皿的方法，平板接种的目的 是观察菌落形态、分离纯化菌种， 是观察菌落形态、分离纯化菌种，活菌计数以 及在平板上进行各种试验时采用的一种接种方 可分为下面几种： 法，可分为下面几种：
实验二
消毒与灭菌
一、实验教学目标与基本要求 了解消毒和灭菌的原理，掌握各种灭菌 了解消毒和灭菌的原理， 方法的操作步骤。 方法的操作步骤。 二、实验内容： 实验内容： 1．干热灭菌法 ． 2．高压蒸汽灭菌 ． 3．紫外线灭菌法 ．
三、实验步骤 干热灭菌法 （一）干热灭菌法 1、原理 、 利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性 而达到灭菌的目的。 而达到灭菌的目的。 所需温度(160-170℃)，时间长 所需温度 ℃ ，时间长(1-2h)。 。 干热灭菌温度不能超过180℃，否则，包 注：干热灭菌温度不能超过 ℃ 否则， 器皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。 器皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。 2、步骤 、
微生物培养基配制实验报告（共5篇）
微生物培养基配制实验报告(共5篇) 培养基的制备与灭菌实验报告(详细)一、实验题目：培养基的制备与灭菌二、实验目的：1、明确培养基的配置原则，掌握配置方法。
2、了解灭菌的原理，学习掌握灭菌器的使用方法。
三、实验器材：1、药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。
2、仪器：三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。
四、实验原理：1、培养基的制备包括一下几种成分：（1）水分：主要成分。
（2）N源：包括无机氮和有机氮。
（3）C源：主要是含碳有机物、碳氢化合物等。
（4）无机盐：如NaCl、KH2PO4等。
微量元素：Cu、K、Mg、S、P、Zn。
有些还需要添加“生长因子”，通常是维生素类、某些氨基酸或核酸等。
2、培养基配置的原则根据不同的培养对象及培养目的，选用不同的培养基，但有机物总量不得超过15%，盐类一般不超过1%。
培养基有以下分类：按成分：天然培养基、合成培养基、半合成培养基按状态：固体培养基、半固体培养基、液体培养基按用途：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基培养基配好后应立即灭菌，防止营养物质中的微生物富集。
3、灭菌：用理化手段杀灭一切微生物的营养体，包括芽孢和孢子，在实验中应对所有仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消毒。
（1）高压蒸汽灭菌：将物品放入封闭的加压灭菌器，加热使灭菌锅套间的水沸腾产生蒸汽，将冷空气排尽，压力上升，使水沸点变高，导致菌体蛋白质变性，一般0.1MPa、121℃、15~30min 可以彻底灭菌，本次实验灭菌20min。
若是含糖培养基，110℃、30min。
（2）干热灭菌：微生物细胞内蛋白质因高温而凝固变性。
因高温，所以含水量小，不利于蛋白质受热变性，所以温度高，时间长。
（3）紫外灭菌：诱导胸腺嘧啶二聚体形成抑制DNA复制。
（4）过滤除菌：实验室中用微孔滤膜（孔径一般为0.22μm）。
除病菌需更小。
五、实验步骤：1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备依次准确称取0.5g牛肉粉、1.0g蛋白胨、0.5gNaCl放入烧杯，加入100mL水，用玻璃棒搅匀溶解，移入三角瓶，并加入1.5g琼脂。
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（三）实验准备
1、培养基的配置：
（1）牛肉膏蛋白胨培养基：1500ml
① 分装 7支×5 组试管，5~8ml/试管（18×180），占试 管的1/4~1/5 ； ② 剩余培养基分装至6个三角瓶中，200ml/三角瓶。 （2） PDA培养基：1000ml
①分装 7支×5组 试管，5~8ml/试管（ 18×180），占试 管的1/4~1/5；
实验六、培养基的制备
一、实验目的
1、掌握常用培养基配制的一般方法和步骤 。 2、了解微生物学实验的准备工作 ，包括棉塞制作， 试管包扎，培养皿的包装等。 3、了解高压蒸汽灭菌的基本原理并掌握其具体操 作方法。
二、实验材料
1、牛肉膏 蛋白胨 NaCl 马铃薯 蔗糖 琼脂
1mol/L NaOH 1mol/L HCl等 2、试管 三角瓶 烧杯 量筒 天平 pH试纸 棉花 培养皿 高压蒸汽灭菌锅等
2、制作程序：
称量 溶化 调pH 过滤 分装 灭菌 检测使用
3、具体步骤
（1）称量：按培养基配方比例依次称取牛肉膏，蛋白胨， NaCl放入小铝锅中。（牛肉膏：3.0g 蛋白胨： 10.0g
NaCl：5.0g 自来水：1000mL 琼脂：15～20g）
注意：牛肉膏常用玻棒挑取，放在称量纸上，称量后直接放 入水中，稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取 出纸片。
（2）溶化：搪瓷杯量取1000mL水加热后倒入小铝锅中，
记下刻度，用玻璃棒搅动继续加热，将药品完成溶解后，
补充水到所需总体积。如果配制固体培养基，将称好的琼
脂放入已溶的药品中，再加热溶化，最后补足所损失的水 分。
（3）调pH：在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基
的原始pH，如果偏酸，用滴管向培养基中滴加入1mol/L
三、实验内容
（一）牛肉膏蛋白胨培养基的制备
1、原理：牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛细菌 基本培养基，成分为牛肉膏，蛋白胨和NaCl，其中牛 肉膏为微生物提供碳源 、能源、磷酸盐和维生素，蛋 白胨主要提供氮源和维生素，而NaCl提供无机盐。在 配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。多用 于培养基细菌 ，因此要用稀酸和稀碱将其pH调至中性 微碱性，以利于细菌的生长繁殖。
②剩余培养基分装至4个三角瓶中，200ml/三角瓶。
2、无菌水的制作： （1）取洁净250ml三角瓶5支，精确量取自来水
100ml，包扎，灭菌备用；
（2）取洁净试管（18×180），定量加入9ml/试管， 7支×8组，灭菌备用。 3、试管斜面、三角瓶、培养皿的准备 （1）棉塞的制作
（2）培养皿的准备：十个一组，双层报纸包扎。
（3）移液枪头准备
四、实验报告
1、培养基定义及其分类。 2、常用培养基的配制过程及注意事项。
实验内容
实验一、显微镜的使用与单染色法 实验二、革兰氏染色与荚膜染色 实验三、放线菌形态观察与芽孢染色 实验四、霉菌形态观察与各大类微生物菌落特征
实验五、酵母菌形态观察、显微计数与显微测量技术
实验六、培养基的制备 实验七、菌种分离纯化技术与平板菌落计数 实验八、水质微生物学检测 实验九、消毒与灭菌技术
NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH，直至pH 达7.2～7.4。反之 ，用1mol/L HCl进行调节。
（4）过滤：如有沉淀，可用纱布或脱脂棉过滤。
（5）分装：按实验要求，可将配制好的培养基分装
入试管内或三角烧瓶内，塞好棉塞或包扎瓶口，做 好标记，灭菌备用。
（6）灭菌：高压蒸汽灭菌，121℃ 15~20分钟 （7）检测：灭菌物品过夜培养，确定无杂菌生长再
使用。
（二）马铃薯蔗糖琼脂培养基的制备
1、原理：马铃薯琼脂蔗糖培养基是一种半合成培养基，可用 来培养各种真菌。 培养基成分：
马铃薯（去皮）：200g 蔗糖：20g 琼脂：18g 水：1000ml
2、步骤
（1）量取1000mL自来水，倒入铝锅，记下刻度，加热。
（2）称取200g去皮马铃薯，切成小块放入铝锅，煮沸20分钟。 （3）用纱布过滤于搪瓷杯中，在倒入铝锅，加热至沸。 （4）加入称好的蔗糖和琼脂，不断搅拌至琼脂完全溶化，补足 水至1000 mL，再加热至沸。 （5）趁热分装到试管和三角瓶，包扎，做好标记，灭菌备用。 （6）试管琼脂培养基要摆成斜面。