曲霉菌检测 曲霉菌感染检测经典方法
曲霉检测标准
曲霉检测标准
曲霉菌是一种真菌，腐生真菌，常见于霉变谷物、霉变谷物或其他霉变有机物中。
关于曲霉的检测标准，侵袭性曲霉病的临床诊断需符合1项宿主因素、1项临床标准和1项微生物学标准。
其中微生物学标准包括无菌标本微生物分析、无菌标本培养以及组织核酸检测等。
具体标准如下：
1. 无菌标本微生物分析：通过针吸或活检获得标本，进行组织病理学、细胞病理学或直接显微镜检，示菌丝或黑酵母样形态，同时伴随组织损伤证据。
2. 无菌标本培养：从临床或影像学显示的病灶部位（正常无菌部位），通过无菌操作位获取标本，示透明或着色的霉菌。
3. 血：同时存在感染的过程中，血培养示霉菌（注：血培养发现曲霉，多提示污染，此处霉菌不代表曲霉）。
4. 组织核酸诊断：福尔马林固定石蜡包埋组织中发现霉菌时，PCR和DNA 测序检测到真菌DNA。
此外，曲霉菌抗原检测的正常值通常在1到之间。
抗原在气道中的持续存在会诱发局部炎症并形成黏液栓塞，从而导致中心性支气管扩张、嗜酸性粒细胞浸润等。
以上信息仅供参考，如需获取更多详细信息，建议查阅相关文献或咨询专业医生。
曲霉菌的实验报告
一、实验目的1. 了解曲霉菌的基本特征及其生长条件。
2. 掌握曲霉菌的分离、纯化和培养方法。
3. 分析曲霉菌在不同环境条件下的生长情况。
二、实验原理曲霉菌（Aspergillus）是一种广泛分布于自然界中的丝状真菌，属于子囊菌亚门。
曲霉菌具有丰富的种类，其中许多种类在食品、制药和生物技术等领域具有重要作用。
本实验旨在通过观察曲霉菌的形态特征和生长情况，了解其生长条件，为后续研究提供基础。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 曲霉菌菌种- 马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基- 水浴锅- 灭菌锅- 显微镜- 纱布- 烧杯- 量筒- 移液管- 灭菌器2. 实验仪器：- 灭菌操作台- 高压蒸汽灭菌器- 紫外线消毒灯- 电子天平四、实验方法1. 曲霉菌的分离与纯化（1）取一小块曲霉菌菌种，用无菌镊子将其接种于PDA培养基平板中央。
（2）将平板置于28℃恒温培养箱中培养3-5天，待菌落长成后，用无菌接种环挑取单菌落，接种于新的PDA培养基平板上。
（3）重复步骤（2）2-3次，直至获得纯化的曲霉菌菌种。
2. 曲霉菌的培养与观察（1）将纯化的曲霉菌菌种接种于PDA培养基平板中央，置于28℃恒温培养箱中培养。
（2）定期观察曲霉菌的生长情况，记录菌落形态、颜色、质地等特征。
（3）利用显微镜观察曲霉菌的菌丝、分生孢子梗、分生孢子等形态特征。
3. 曲霉菌在不同环境条件下的生长情况（1）将纯化的曲霉菌菌种分别接种于不同温度（10℃、20℃、30℃、40℃）的PDA培养基平板中央。
（2）将平板置于恒温培养箱中培养，观察并记录曲霉菌在不同温度下的生长情况。
（3）重复步骤（1）和（2），分别改变培养基的湿度、pH值等条件，观察曲霉菌的生长情况。
五、实验结果与分析1. 曲霉菌的形态特征曲霉菌菌落呈放射状扩展，表面光滑，质地紧密，初期白色，后期逐渐变为灰白色或棕色。
菌丝细长，有隔膜，分生孢子梗直立，顶端产生分生孢子。
2. 曲霉菌在不同温度下的生长情况在28℃恒温条件下，曲霉菌生长旺盛，菌落直径可达5-7cm。
曲霉菌检测技术要点及Troubleshooting
样本采集 患者准备
样本保存、运输
报告应用
13
报告签发
样本检测
如何保证检测质量？
人 环 机
法
14
料
曲霉菌的特点
霉菌的分布
– 占空气中真菌的12%来源于百科– 空气中真菌前三甲：
Cladosporium：37% Non-sporing：22.5% Yeast：18.3%
– 灰尘中真菌前三甲：
Yeast：50.6% Cladosporium：17%
Aspergillus:12%
来源于现代医药卫生20
15
曲霉菌的检测首要重视环境问题
以下工作应在超净台内完成： 试剂盒和耗材拆包装及密封 样本取样并加处理液
16
实验前准备
样本记录表
Step 4
– 准备一份可以识别微孔板上受检血清和对照血清的图表。用 其中一孔作为阴性对照血清使用（R3），两孔作为Cut-off对 照血清（R4），一孔用于阳性对照血清（R5）。
R3<0.4; R5>1.5
10
临床GM检测流程
11
曲霉菌抗原检测试剂盒
操作注意事项及技术要点
12
实验室工作流程
• 确保使用去离子水稀释洗液 • 如果用洗板机，确保正确注入洗液 • 按照说明书要求比例进行稀释 • 弃掉污染的R9并使用新的 • 不要把剩余的显色液重新倒回试剂瓶
42
曲霉菌抗原检测试剂盒-Troubleshooting Guide
问题 可能的原因 解决方案
• 丢弃污染的终止液并更换新的 • 不要把剩余的终止液倒回试剂瓶 • 避免终止液接触金属物品
解决方案
• 确保加入了50 µl 处理后的对照上清
曲霉菌感染的临床表现和诊断完整版
曲霉菌感染的临床表现和诊断完整版曲霉菌(aspergillus)是广泛存在于自然界的真菌，属于真菌的一个亚型，为典型的丝状菌，属于常见的条件致病性真菌，广泛分布于自然界，水、土壤、空气、发霉的食物、衣服等均是曲霉菌易生存的场所。
它们对生长环境的要求不高，能在6~55℃以及相对低湿度的环境中生长，曲霉能产生大量的孢子，并可通过空气传播进行大范围的扩散。
曲霉孢子约2～5μm大小，在空气中可呈现悬浮状态，孢子由呼吸道进入人体后可引起曲霉菌感染，人的呼吸系统如鼻窦、咽部、气管支气管及肺部最易受累，可在呼吸系统内寄生、定植进而播散至全身，可累及支气管、肺、胃肠道、神经系统、骨骼、皮肤、黏膜、眼和鼻等多器官系统，患者免疫系统受损严重则可能引发侵袭性曲霉病。
流行病学和危险因素目前，曲霉菌感染的病例正逐年增加，据保守估计，目前全球约有20多万例慢性肺曲霉病患者，480多万例过敏性支气管肺曲霉病患者，其中我国约有4万多例慢性肺曲霉病患者，49万例过敏性支气管肺曲霉病患者，16万例侵袭性肺曲霉病患者。
病例逐年增加的原因之一便是免疫抑制人群的增长，如恶性肿瘤患者、或其他长期接受放、化疗治疗以及骨髓造血干细胞移植患者中，会出现粒细胞缺乏，而中性粒细胞作为体内抗曲霉菌的主要免疫细胞，主要通过黏附菌体、脱颗粒和释放活性氧等非吞噬方式杀灭菌丝或孢子，粒细胞的缺乏是发生曲霉菌感染的最常见危险因素。
近期研究发现，肺曲霉菌病在没有明显免疫缺陷的人群中也可能会有所增加，比如ICU患者、有创机械通气患者、患肺纤维化、COPD、支气管扩张或呼吸窘迫综合征等肺部疾病或基础病的患者。
另外，严重的呼吸道病毒感染，包括流感病毒、呼吸道合胞病毒、SARS-CoV-2等也会损害肺上皮细胞，为曲霉菌定植提供了入口。
在治疗时使用的糖皮质激素或其他免疫调节药物也可能会加剧肺曲霉菌感染。
某些药物的使用，包括酪氨酸激酶抑制剂、CAR-T疗法也会增加曲霉菌感染风险。
霉菌检测方法
霉菌检测方法
霉菌检测方法主要有以下几种：
1. 空气采样法：通过空气采样器采集环境空气中的霉菌颗粒，然后将颗粒落在培养基上进行培养，最后统计出霉菌的数量。
常用的空气采样器有印记培养法（尘埃滚筒采样器）、空气采样盘等。
2. 表面采样法：将待检表面用含有菌落计数培养基的拭子或涂布子擦拭，并将拭子或涂布子放在培养基上培养，然后统计出霉菌的数量。
常用的表面采样方法有印记培养法、涂布法、拭子法等。
3. 非培养法：非培养法通过分子生物学技术，如PCR（聚合酶链反应）、实时荧光定量PCR、蛋白质检测和DNA测序等方法，直接检测霉菌的DNA、RNA或蛋白质，从而快速准确地确定霉菌的存在。
4. 环境检测仪器：现在市场上也有一些专门用于霉菌检测的仪器，如光学显微镜、荧光显微镜、红外热成像仪等，通过观察霉菌的形态、颜色或热量分布等特征，来判断是否存在霉菌。
需要注意的是，不同的检测方法适用于不同的场景和目的，选择适合的霉菌检测方法需要结合具体情况进行综合考虑。
曲霉菌检测的新方法——GM试验
曲霉菌检测的新方法——GM试验曲霉菌检测的新方法——GM试验半乳甘露聚糖（glactomannan，GM）是曲霉和青霉细胞壁多糖，当菌丝生长时，半乳甘露聚糖从薄弱的菌丝顶端释放，是最早释放的真菌抗原。
检测血清、肺泡灌洗液、胸腹水等标本中GM含量（即GM试验）可以早期诊断侵袭性曲霉菌感染。
血清GM试验的临床价值1.鉴别侵袭与定植：曲菌感染时持续释放入血，定植时仅间断、极少释放入血；2.早期诊断曲霉菌感染：可早于临床症状和影像学异常1周；3.反映感染程度：GM释放量与菌量成正比，可以反映炎症反应严重性；4.指导临床治疗：血液等标本GM试验连续2次阳性，常提示需抗曲霉菌治疗；5.疗效监测：如检测值连续2次低于诊断界值，可认为病情缓解。
监测人群：血液系统恶性肿瘤、中性粒细胞减少、同种异体干细胞移植、COPD、不明原因发热尤其伴肺部不规则浸润影等。
监测频率：建议连续动态监测（≥2次/周）。
试验结果判断：连续两次检测≥0.5，或单次≥1.0考虑阳性，可提示或诊断曲霉菌感染。
标本采集：静脉采血2-4ml（专用无热原采血管）。
标本送检：蚌埠医学院第一附属医院安徽呼吸系病临床基础省级实验室（）检测及报告时间：每周二、五上午检测，下午报告检测及结果解读：徐亮（）；张永（、3086405）附件1：GM试验联合G试验种属G试验GM试验念珠菌属＋－镰刀菌属＋－隐球菌属－＋曲霉菌属＋＋青霉/拟青霉＋＋接合菌纲－－附件2：《侵袭性肺部真菌感染的诊断标准与治疗原则》专家共识之微生物学标准a)合格痰液经直接镜检发现菌丝，真菌培养2次阳性（包括曲霉属、镰刀霉属、接合菌）；b)支气管肺泡灌洗液经直接镜检发现菌丝，真菌培养阳性；c)合格痰液或支气管肺泡灌洗液直接镜检或培养新生隐球菌阳性；d)支气管肺泡灌洗液或痰液中发现肺孢子菌包囊、滋养体或囊内小体；e)血液等标本曲霉菌半乳甘露聚糖抗原（简称GM）检测连续2次阳性；f)血液标本真菌细胞壁成分1,3-β-D葡聚糖（G试验）连续2次阳性；g)血液、胸液标本隐球菌抗原阳性。
侵袭性曲霉菌感染检查方法
如对您有帮助，可购买打赏，谢谢侵袭性曲霉菌感染检查方法导语：治疗疾病前身体检查是很关键的，对患者身体检查能够很好的掌握患者病情，这样对疾病治疗有很好帮助，同时也能够避免选择错误的治疗方法，减治疗疾病前身体检查是很关键的，对患者身体检查能够很好的掌握患者病情，这样对疾病治疗有很好帮助，同时也能够避免选择错误的治疗方法，减少对患者身体损害，侵袭性曲霉菌感染检查方法都有什么呢，这类疾病在检查上，也是有很多方式，下面就详细的介绍下。
侵袭性曲霉菌感染检查方法：曲霉菌属是一种丝状真菌，通过孢子形式进行繁殖。
自然界中分布广泛，如土壤，水，食物，腐烂的植被等，主要经空气传播。
大多数健康人群的免疫系统能够抵抗曲霉菌的侵袭，而免疫受损或接受免疫抑制药物治疗的个体则易致病。
侵袭性曲霉菌病(InvasiveAspergillosis，简称IA)是致病的最严重的一种形式：曲霉菌孢子通过呼吸道入侵体内，随血液循环侵犯其它器官和部位，如鼻窦，眼睛，皮肤，肾脏和中枢神经系统等。
然而IA的早期诊断仍是当前较难攻克的医学难题之一。
近些年的一份研究报告数据显示，IA的发病率和死亡率逐年上升，整体死亡率达到58%.①主要发生于临床化疗，移植后免疫抑制和高剂量激素治疗患者，如：恶性血液病，骨髓移植，实体器官移植和移植物抗宿主疾病等。
涉及临床科室有血液科，移植科(中心)，呼吸科，风湿免疫科，ICU，皮肤科等。
目前的诊断仍主要是一些传统的方法，即X-射线或CT扫描，组织培养，组织活检等，这些方法或特异性不高或检测周期较长，尤其组织活检时样本的采集无疑使病患雪上加霜，且很难早期诊断侵袭性曲霉病。
导致患者长期的抗真菌药物治疗，这样不仅增加了治疗成本，而且增加了药物毒性作用，对患者造成进一步预防疾病常识分享，对您有帮助可购买打赏。
霉菌酵母菌检测方法国标
霉菌酵母菌检测方法国标
根据国家标准GB 4789.15-2016，食品实验室检测霉菌酵母菌的方法包括以下步骤：
1. 倾注培养法：使用无菌吸管吸取25mL样品至盛有225mL无菌稀释液（蒸馏水或生理盐水或磷酸盐缓冲液）的适宜容器内（可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）或无菌均质袋中，充分振摇或用拍击式均质器拍打1min～2min，制成1:10的样品匀液。
取1mL 1:10样品匀液注入含有9mL无菌稀释液的试管中，另换一支1mL无菌吸管反复吹吸，或在旋涡混合器上混匀，此液为1:100的样品匀液。
按此操作制备10倍递增系列稀释样品匀液。
每递増增稀释一次，换用1支1mL无菌吸管。
选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释的同时，每个稀释度分别吸取1mL样品匀液于2个无菌平皿内。
同时分别取1mI无菌稀释液加入2个无菌平皿作空白对照。
置水平台面待培养基完全凝固。
2. 镜检：挑取有代表性的菌落做镜检，要慎之又慎。
不同的形态的菌落做镜检，如使用倾注法，同一种酵母可能会出现不同的形态。
因此，挑取有代表性的菌落做镜检，我们要慎之又慎。
不则可能会做重复工作或漏检。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
曲霉菌感染检测经典方法-GM试验
半乳甘露聚糖（Galactomannan，GM）抗原检测曲霉菌感染的经典血清学方法之一，简称GM试验。
半乳甘露聚糖是曲霉菌特有的细胞壁多糖成份，当机体感染曲霉菌后，随着菌丝生长，半乳甘露聚糖从薄弱的菌丝顶端释放出来，是最早释放的抗原，被认为是一种可靠的侵袭性曲霉菌感染早期诊断的生物标记物。
半乳甘露聚糖抗原具有热稳定性和可溶性，通常可在血清，脑脊液和肺泡灌洗液中检测。
GM的释放量通常与感染的菌量成正相关，可反映机体感染的程度。
每周两次使用GM试验对高危患者的病情和治疗效果进行监测和评估。
临床中的高危人群是免疫功能缺陷和高剂量服用激素患者，如：恶性血液肿瘤，实体器官移植，移植物抗宿主疾病患者等，所以GM的应用科室通常分布在血液科，移植科（中心），肿瘤科，呼吸科，ICU，皮肤科和儿科。
GM试验的开展除了在公立医院实验室辅助临床医生诊断侵袭性曲霉菌病外，还可在大型私立实验室和一些制药公司做新抗真菌药物的药效评估。
GM抗原检测是欧洲癌症研究和治疗组织（European Organization for Research and Treatment Cancer, EORTC）和真菌病研究组（Mycoses Study Group, MSG）推荐的侵袭性曲霉菌病的真菌学检测标准之一，美国Bio-Rad公司研发的用于检测血清中GM抗原的曲霉菌抗原检测试剂盒（PlateliaTM Aspergillus Ag），在2014年初获得CFDA批准。
Bio-Rad公司的曲霉菌抗原检测试剂盒（PlateliaTM Aspergillus Ag）（见下图）采用酶联免疫双抗体夹心分析法检测血清中半乳甘露聚糖抗原。
经典的ELISA检测流程，灵敏度性和特异性分别达到了92.1% 和97.5%，[1] 最低检出限为0.4ng/ml，可在临床症状出现前6天和诊断前10 天即可检出GM抗原，[2] 真正实现侵袭性曲霉菌病的早期诊断。
该试剂盒操作灵活，简单快捷，无需额外设备，半定量分析可实现高危患者抗真菌药物治疗后GM抗原动力学的跟踪和检测，尤其人性化的12*8孔板条设计能满足不同标本量需求的用户，为科室节省了检测成本。
[1] Maertens, J., and al. 2007 Optimization of the Cutoff Value for the Aspergillus Double-Sandwich Enzyme Immunoassay CID.44:1329-36
[2]Marr,KA,Balajee SA,Mclaughlin L,Tabouret M,Bentsen C,Walsh TJ.2004.Detection of galactomannan antigenemia by enzyme immunoassay for the diagnosis of invasive aspergillosis:variables that affect performance.J Infect Dis.Aug 1;190（3）：641-9.。