薄层色谱和柱色谱
薄层色谱和柱色谱分离法
Rf = 溶质的最高浓度中心至原点中心的距离/溶剂前沿至原点中心的距离
薄层层析可适用小量样品（几到几十微克甚至0.01μg）的分离：也可用于多达５００mg样 品的分离，是近代有机化学中用于定性，定量的一种重要手段。
三、 仪器及试剂
硅胶薄板、展开缸、苏丹红乙醇溶液、间硝基苯胺乙醇溶液、苏丹红间硝基苯胺混合溶液、 乙酸乙酯：石油醚（5:95）
薄层色谱和柱色谱分离法
一、 实验目的
１．了解色谱分离的原理及其应用。
2．初步掌握薄层色谱和柱色谱的操作技能。
二、 实验原理
色谱法的基本原理是利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解性能（即分配）的不同， 使混合物的溶液流经该种物质，进行反复的吸附或分配等作用，从而将各组份分开。 流动的液体称为流动相，流动相可以是气体，也可以是液体；固定不动的物质称为固定相，可 以是固体也可以是液体（需吸附在支持剂上）。根据组分在固定相中的作用不同，分为吸附色 谱、分配色谱、离子交换色谱等。按操作条件可分为柱色谱、薄层色谱、纸色谱、气相色谱和 液相色谱等。层析缸ຫໍສະໝຸດ 层析板 试样点展开剂
展开版
四、 操作要点和说明
１． 铺板 本实验直接使用购买的薄层硅胶板，每人一块
２． 点样 用毛细管点样，样点距玻璃板１cm，样点直径不超过２mm，三个样点间距５-６mm。
３． 展开 薄层色谱的展开，需要在展开缸中进行如图。展开方式采用倾斜上行法。
４． 计算Rf值 准确地找出原点，溶剂前沿以及三个样品展开后斑点的中心，分别测量溶剂前沿和样点 在薄层板上移动的距离（如图），求出其Ｒf值。
柱色谱是利用各组分在固定相上的吸附能力和流动相的解析能力不同，使混合物随流动相 流过固定相，发生反复多次的吸附和解析过程，从而使混合物各组分分离开。所用仪器为色谱 柱。纸色谱、气相色谱和液相色谱看教材。
柱色谱和薄层色谱
3、显色
凡可用于纸色谱的显色剂都可用于薄层色谱。薄层色谱还可使用腐蚀性的显色剂如浓硫酸、
浓盐酸和浓磷酸等。对于含有荧光剂（硫化锌镉、硅酸锌、荧光黄）的薄层板在紫外光下观
察，展开后的有机化合物在亮的荧光背景上呈有色斑点。也可用卤素斑点试验法来使薄层色
3
谱斑点显色。本实验样品本身具有颜色，不必在荧光灯下观察。
3、鉴定化合物 在条件完全一致的情况，纯碎的化合物在薄层色谱或纸色谱中都呈现一定
的移
学 动距离，称比移值（Rf 值），所以利用色谱法可以鉴定化合物的纯度或确定两种性
大 质相似的化合物是否为同一物质。但影响比移值的因素很多，如薄层的厚度，吸附剂颗粒的
大小，酸碱性，活性等级，外界温度和展开剂纯度、组成、挥发性等。所以，要获得重现的
化 洗脱液。待蓝色色带分离出来后，最后用冰醋酸洗脱，分离出黄色的色带。 学 六、实验关键及注意事项：
1、点样时，各样点间距 1—1.5cm，样点直径应不超过 2mm，
大 2、柱层析时，柱子要致密紧实，无气泡。 昌 七、实验结果
偶氮苯的 Rf 值＝4.3cm/5.4cm＝0.796
南 苏丹Ⅲ的 Rf 值＝2.2cm/5.4cm＝0.407
薄层色谱的展开，需要在密闭容器中进行。为使溶剂蒸气迅速达到平衡，可在展开槽内衬一
滤纸。在层析缸中加入配好的展开溶剂，使其高度不超过 1cm。将点好的薄层板小心放入层
析缸中，点样一端朝下，浸入展开剂中。盖好瓶盖，观察展开剂前沿上升到一定高度时取出，
尽快在板上标上展开剂前沿位置。晾干，观察斑点位置，计算 Rf 值。
实验名称:柱色谱、薄层色谱
一、实验目的
1、了解色谱法分离提纯有机化合物的基本原理和应用。 2、掌握柱层析、薄层层析的操作技术。
薄层色谱与柱层析
叶绿素 叶绿素
叶黄素'， " 叶黄素
第三页，共50页。
色谱法的分类(fēn lèi)
1)根据流动相分类: 气相色谱—以气体作流动相 液相色谱—以液体作流动相 超临界色谱—流动相是在接近它的临界温度
和压力下工作(gōngzuò)的液体 2)根据固定相的附着方式分类 —固定相装在圆柱管中—柱色谱 —固定相涂敷在玻璃或金属板上—薄层色谱 —液体固定相涂在纸上—纸色谱
反相分配色谱：以亲脂性有机溶剂作固定(gùdìng)（液 ）相，以水或亲水性溶剂作移动相的分配色谱称为 反相分配色谱。当分离脂溶性或极性较小的成分， 如高级脂肪酸、油脂、游离甾体等物质时，常用反 相分配色谱。实践中有70%以上的分配色谱都采用 反相色谱。
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分配柱色谱的应用 分配柱色谱往往适用于分离水溶性或极性较大的组分，如生物
。
第九页，共50页。
Rf值测量(cèliáng)示意图
Rf与组分性质 (xìngzhì)、流动相 及溶解度有关 极性组分→易保留 ，Rf 小 非极性组分→易流 出, Rf大
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薄层固定相
按照固定相的种类，薄层板可分为正相薄层板（如 硅胶薄层板、聚酰胺薄层板）、反相薄层板（如 C18键合相薄层板）等。
） Rf值＋斑点颜色特征（原位化学反应） 多种展开剂体系展开进行验证 与其他技术联用
第二十三页，共50页。
展 开 (z hǎ n kā i) 后 的 薄 层 板
第二十四页，共50页。
（二）定 量
目视比较法
将不同量的标准品作为系列，同样样品分 别点在同一薄层上展开，显色后，目测比较斑点颜色的 深浅和面积大小，求出未知物含量的近似值，作为半定 量法，精密度为±10%。
常见的色谱法有哪几大类
常见的色谱法有哪几大类色谱法（chromatography）又称色谱分析、色谱分析法、层析法，是一种分离和分析方法，在分析化学、有机化学、生物化学等领域有着非常广泛的应用。
常见的色谱法主要有：柱色谱法、薄层色谱法、高效液相色谱法、气相色谱法、超临界流体色谱法。
1、柱色谱法原始的色谱方法，该方法将固定相注入下端塞有棉花或滤纸的玻璃管中，将被样品饱和的固定相粉末摊铺在玻璃管顶端，以流动相洗脱。
常见的洗脱方式有两种：一种是自上而下依靠溶剂本身的重力洗脱，另一种：自下而上依靠毛细作用洗脱。
收集分离后的纯净组分也有两种不同的方法：一种方法是在柱尾直接接受流出的溶液，另一种方法是烘干固定相后用机械方法分开各个色带，以合适的溶剂浸泡固定相提取组分分子。
柱色谱法被广泛应用于混合物的分离，包括：对有机合成产物、天然提取物以及生物大分子的分离。
2、薄层色谱法应用非常广泛的色谱方法，这种色谱方法将固定相涂布在金属或玻璃薄板上形成薄层，用毛细管、钢笔或者其他工具将样品点于薄板一端，之后将点样端浸入流动相中，依靠毛细作用令流动相溶剂沿薄板上行展开样品。
薄层色谱法成本低廉、操作简单，被用于对样品的粗测、对有机合成反应进程的检测等用途。
3、高效液相色谱法（HPLC）目前，应用多的色谱分析方法，高效液相色谱系统由流动相储液瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和记录器组成，其整体组成类似于气相色谱，但是，针对其流动相为液体的特点作出很多调整。
HPLC输液泵要求输液量稳定平衡；进样系统要求进样便利、切换严密；由于液体流动相黏度远远小于气体，为了减低柱压，高效液相色谱的色谱柱一般比较粗，长度也远小于气相色谱柱。
HPLC应用非常广泛，几乎遍及定量定性分析的各个领域。
4、气相色谱法气相色谱法是将氦或氩等气体作为载气(称移动相)，将混合物样品注入装有填充剂(称固定相)的色谱柱里，进行分离的一种方法。
分离后的各组分经检测器变为电信号并用记录仪记录下来。
色谱法薄层色谱和柱色谱
吸附竞争
固定相
流动相
吸附剂 （固定相）
比 由 样移于品值吸中R附各f ：剂组（分硅吸胶附、能氧力化不铝同等（，极强性极强性的）组对分
被R 吸= 附能斑力 点的越 最 强高 ）浓 ，度 当中 展心 开至 剂原 （点 中常 心常 的是 距具离 有
一f定极性的有展开机剂溶前剂沿）至流原 经点吸中附心的有距样离品展的开吸剂 比 性同比附 产 吸 分移能的移剂生较从值有 。 值时竞易吸R但关 是，争，附f 对， 一在展吸随剂同不 个一开附展上一同 特定剂，开解溶的 定条与极剂吸质溶 的件在质 常样性较较下相在 数和品小快难同色 （溶中的地，条谱定质的组移随件分性（各分动展下离分组组从；开进过析分分吸极剂行程的）对附性移色的依的（谱比据吸剂大动分流分移）子附上的较动离值。结剂解组慢相时是构。），不、
＞ 卤代烃、醚 ＞ 芳香烃 ＞ 烯 ＞ 环烷烃 ＞ 烷烃
二. 实验原理和实验技术
薄层色谱（TLC，薄层层析） 展开剂的选择：
选择展开剂时，要考虑样品各组分的极性、溶解度和吸附活性等因素。 一般情况下，溶剂的展开能力与溶剂的极性成正比。
溶剂的极性大
溶剂对化合物的解吸能力强
Rf 值大
常用展开剂的极性大小顺序（仅对硅胶和氧化铝适用）：
《有机化学实验》
色谱法
（薄层色谱、柱色谱）
一. 实验目的
学习薄层色谱和柱色谱技术的原理和应用； 掌握用薄层色谱和柱色谱分离和鉴定化合物的
操作技术。
二. 实验原理和实验技术
• 色谱法：分离、提纯和鉴定有机化合物的重要方法之一。
• 色谱法基本原理：利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解 性能（即分配）的不同，或其它亲和作用性能的差异，使混合物的 溶液流经该物质时进行反复的吸附或分配等作用，从而将各组分分 开。
薄层色谱和柱色谱实验报告
薄层色谱和柱色谱实验报告实验名称：薄层色谱和柱色谱实验目的：了解薄层色谱和柱色谱的基本原理和应用，掌握样品准备、修饰介质的选择、溶剂系统的优化和色谱分离技术的基本操作方法。
实验原理：1.薄层色谱原理：薄层色谱是利用物质在其固、液相之间的分配作用而进行分离的一种色谱方法。
在底片上涂上液相，待液相挥干后，在底片上成薄层状（约为0.2mm之厚）液相，然后在高温、低压的条件下进行分离。
它主要应用于化合物分离和检验、药物分离和分析等领域。
2.柱色谱原理：柱色谱是把某种固体颗粒填充于管柱内部，然后加入适当的流动相使待检样品浸泡在固定颗粒中并与固相上的不同物质发生不同程度的相互作用，从而实现样品的分离和纯化。
柱色谱主要应用于化合物分离、提纯和分析等领域。
实验步骤：1.薄层色谱：(1) 将样品用氯仿、乙酸乙酯等溶剂溶解。
(2) 取薄层色谱板，用细针在距离底端约0.5cm的位置上标记一个起始线，用相同距离的标记在另一侧标上终止线。
(3) 在起始线处使用毛刷将样品溶液均匀地涂在一个小片内，使样品呈现均匀的带状。
(4) 将板放在暗处让涂层彻底干燥，然后将板放入色谱槽，加入开发剂。
(5) 在开发剂移行至终止线前，拿出板晾干并进行显色。
在显色后，用各种方法对相应的化合物进行鉴定和鉴别。
2.柱色谱：(1) 将柱子放入固定支架中，并用滴管加入几滴洗涤液进行洗涤，直至所有洗涤液从柱子底部滴出。
(2) 用吸管将样品溶液加入柱子中，并用滴管加入移动相。
(3) 将收集瓶放在柱子下方，并向柱子中加入移动相，使溶液垂直流过柱子，直至柱子底部没有液体时停止收集。
(4) 将收集物送入旋转蒸发器中，将其浓缩至一定程度后进行结晶或涂层。
实验结果：1.薄层色谱：通过实验我们了解到了薄层色谱对于化合物分离和检验等方面的应用。
在实验中，我们成功的运用了薄层色谱法来完成了对某些化合物的分离和鉴别。
2.柱色谱：通过实验我们了解到了柱色谱对于化合物分离、提纯和分析等方面的应用。
柱色谱和薄层色谱分离技术
样品的收集
用硅胶作固定相过柱子的原理是一个吸附与解吸的平衡。所以如果样品与硅胶的吸 附比较强的话，就不容易流出。这样就会发生，后面的点先出，而前面的点后出。这时可 以采用氧化铝作固定相。另外，收集的试管大小要以样品量而定，特别是小量样品，如果 用大试管，可能一根就收到了三个样品， 如果都用小试管那工作量又太大。
减压柱层析在进行溶剂洗脱时是将溶剂在真空下全部抽出,使固定相“干”后才加入新的 洗脱剂作下一组分的收集.其原理相当于薄层层析的多次展开,它的分离效果可与薄层层析 媲美。
加压实例就不一一详举了，下面几个是最好。柱子长了，相应的塔板数就高。 柱子粗了，上样后样品的原点就小（反映在柱子上就是样品层比较 薄），这样相对的减小了分离的难度。试想如果柱子十厘米，而样 品就有二厘米，那么分离的难度可想而知，恐怕要用很低极性的溶 剂慢慢冲了。而如果样品层只有0.5厘米，那么各组分就比较容易 得到完全分离了。当然采用粗大的柱子要牺牲比较多的硅胶和溶剂 了，不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了（有些不环保 的说，不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费）。现在见到的柱 子径高比一般在1：5～10，书中写硅胶量是样品量的30～40倍，具 体的选择要具体分析。如果所需组分和杂质分的比较开（是指在所 需组分rf在0.2～0.4，杂质相差0.1以上），就可以少用硅胶，用 小柱子（例如200毫克的样品，用2cm×20cm的柱子）；如果相差不 到0.1，就要加大柱子，我觉得可以增加柱子的直径，比如用3cm的， 也可以减小淋洗剂的极性等等。
薄层色谱（TCL） 柱色谱
TLC的作用 •跟踪反应进程 •为柱层析选择适当的淋洗剂
a/l或b/l
=0.2~0.3
选择适当的展开剂是首要任务.。一般常用溶剂按照极性 从小到大的顺序排列大概石油迷<己烷<苯<乙醚 <THF<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇使用单一溶剂，往 往不能达到很好的分离效果，往往使用混合溶剂通常使 用一个高极性和低级性溶剂组成的混合溶剂，高极性的 溶剂还有增加区分度的作用，常用的溶剂组合有： Petroleum ether/Ethyl acetate, Petroleum ether/Ac etone, Petroleum ether/Ether, Petroleum ether/CH 2Cl2, CH2Cl2/ethyl acetate, ethyl acetate/ MeOH, CHCl3/ ethyl acetate
薄层色谱和柱色谱
实验名称:薄层色谱和柱色谱一、实验目的1、学习薄层色谱和柱色谱技术的原理和应用2、掌握薄层色谱和柱色谱分离技术和操作要点。
3、掌握如何正确的配置展开剂二、实验原理色谱法的基本原理是利用混合物各组分在固定相和流动相中分配平衡常数的差异。
简单地说就是当流动相流经固定相时，由于固定相对各组分的吸附或溶解性能的不同使吸附力较弱或溶解度较小的组分在固定相中移动的速度较快，在多次反复平衡过程中导致各组分在固定相中形成了分离的“色带“从而得到分离。
三、主要试剂规格及用量1%偶氮苯的甲苯溶液1%苏丹Ⅲ的甲苯溶液1%的羧甲基纤维素钠CMC水溶液硅胶G立即比为9:1的甲苯-乙酸乙酯。
四、实验装置图五、实验步骤一薄层色谱实验步骤1、薄层板的制备此实验中不考虑有直接的可用2、取两块薄层板分别在距一端1cm处用铅笔轻轻地画一条线作为起始线。
用分别两根毛细管分别取偶氮苯、苏丹甲苯溶液和其混合液放在起始线上取两个样点且两样点相距1到1.5厘米且样点的直径不超过2毫米。
如果样点颜色太浅可以等其变干后在重复几次。
3、用上述的甲苯-乙酸乙酯作为展开剂待样点干燥后小心放入已加入展开剂的广口瓶中点样一端应进入展开剂 0.5cm盖好瓶盖观察实验现象观察展开剂前沿上升至离板的上端1cm处取出尽快用铅笔在展开剂上升的前沿处划一记号比较两者的Rf值的大小。
二柱色谱实验步骤1、在色谱柱上端放一个干燥的漏斗将吸附剂倒入其中并轻轻的敲打色柱柱身使其填充均匀然后加入洗脱剂湿润。
2、当溶剂下降到吸附剂表面时立即开始使用色谱柱用滴管把样品溶液转移到上色谱柱中并用少量溶剂分几次洗涤柱壁上所沾试液直至无色。
样品加完后打开下旋塞使样品进入石英砂层后再加入洗脱剂进行洗脱。
3、在分有色物质是直接观察到分离后的“色带”然后用洗脱剂将分离后的“色带”依次自柱中洗脱出来再用适宜的溶剂将溶质萃取出来。
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制备色谱和分析色谱的比较
制备色谱 分离目的 色谱模型 仪器设备 分析色谱
单位时间内获得符合 获得混合物中各组分的信 纯度的物质量 息（定性定量） 非线性色谱 线性色谱 制备柱、高流量、大 高压稳流、高精度进样、 进样、低检测（高通 高灵敏检测（高重现性） 量）
2.制备薄层色谱
2.1制备薄层色谱法概述 2.2常规制备薄层色谱（PTLC）
点样工具：微量注射器；玻璃毛细管。 点样方法：液体直接点样法；固体添埋法。
样点式样：点型；线型；条型。
点样应注意的问题：
点样斑点的大小：一般点样斑点直径不大于 2mm；点样带应尽可能狭窄，以获 得更好的分离效果。如点样带太宽，可用高极性溶剂展开至点样带上方 2cm处 进行浓缩，然后将铺板干燥后再用展开剂展开。 点样量：适当的点样量，可使斑点集中，点样量过大，易拖尾或扩散；点样量 过少，不易检出。0.25mm薄层，一般点样量为几微克～几百微克作定性分析； 2mm层厚，点样量可达几十毫克～几百毫克作制备。 点样位置：距底边约1~2cm的起始线上，点与点之间的距离一般为1~1.5cm。
单一溶剂的极性顺序为（从小到大）： 石油醚→环己烷→四氯化碳→三氯乙烯→苯→甲苯→二氯甲 烷→氯仿→乙醚→乙酸乙酯→乙酸甲酯→丙酮→正丙醇→甲 醇→吡啶→乙酸 混合溶剂的极性顺序（从小到大）： 苯∶氯仿（1+1）→ 环己烷∶乙酸乙酯（8+2）→氯仿∶丙 酮（ 95+5 ） → 苯∶丙酮（ 9+1 ） → 苯∶乙酸乙酯（ 8+2 ） → 氯仿∶乙醚（9+1）→苯∶甲醇（95+5） →苯∶乙醚（6+4） →环己烷∶乙酸乙酯（1+1）→氯仿∶乙醚（8+2）→氯仿∶ 甲醇（99+1）→苯∶甲醇（9+1）→氯仿∶丙酮（85+15）→ 苯∶ 乙 醚（ 4+6 ） → 苯∶ 乙酸乙酯 （ 1+1 ） → 氯仿∶ 甲醇 （ 95+5 ） → 氯仿∶丙酮（ 7+3 ） → 苯∶乙酸乙酯（ 3+7 ） → 苯∶乙醚（1+9） →乙醚∶甲醇（99+1） →乙酸乙酯∶甲醇 （99+1）→苯∶丙酮（1+1）→氯仿∶甲醇（9+1）
泛的应用。
医药方面
由于薄层色谱的快速、简便与实效性，广泛应用于中草药品种鉴别和成分分
析、中成药鉴别和质量标准研究、合成药物的定性鉴别、纯度检查、稳定性考 察和药物代谢以及合成工艺监控分析、生化和抗生素研究等方面。 应用薄层扫描即薄层色谱与紫外分光光度或荧光光度分析联用，可进行各种 药物的定量分析。
• 设备简单（薄层板，点样器，展开缸…） • 操作方便（仪器自动化，直接与检测仪连用） • 分离快速（需十至几十分钟，同时展开多个试样） • 灵敏度及分离度（分辨率）高 • 处理样品量较大 • 适用于挥发性较小或热敏性物质
2.1.3基本原理
薄层色谱法是利用各成分对同一吸附剂吸附能力不同，使其在 流动相（溶剂）流过固定相（吸附剂）的过程中，连续的产生吸 附、解吸附、再吸附、再解吸附，从而达到各成分的互相分离的 目的。
常用商品硅胶
硅胶P----制备用硅胶
硅胶H----不含粘合剂 硅胶G----含煅石膏粘合剂 硅胶F----含荧光物质 硅胶F254----在254nm紫外光下呈强烈黄绿色荧光背景。
硅胶粒径范围影响
越细越均匀，分离度越高， 粒径范围宽，分离效率低，怎么办？
------薄层厚度的渐变 薄层厚度从底部到前沿逐渐加大，这样展开剂的速度随着展 开的进行逐渐变慢，样品谱带在展开过程中逐步富集，可保 持较窄的谱带。
生物样品与毒物分析
薄层色谱法分析的生物样品多为血清、血浆或尿液等,用来进行药物生物利 用度的分析,检测临床用药的血药浓度,以利于诊断临床疾病等。毒物分析如 植物毒素、真菌毒素、兴奋剂、药物中毒、走私毒品、农药以及尸检、刑 侦破案等方面的样品分析。
2.3加压制备薄层色谱（OPLC）
2.4离心制备薄层色谱 (CTLC) 2.5制备薄层色谱的应用
2.1制备薄层色谱法概述
2.1.1概念
薄层色谱是以适宜的固定相均匀涂布于平面载 体上，点样，然后以合适的溶剂展开，达到分 离、鉴定和定量的目的。常用TCL来表示。 属于固－液吸附色谱
2.1.2薄层色谱法特点
（2）流动相（ 展开剂）的选择
展开剂选择是能否达到理想分离的关键。在薄层色谱中，一般 先选择单一溶剂作展开剂，但对难分离组分，则需要使用二元、 三元甚至多元的混合溶剂。
在混合展开剂中 占比例较大的弱极性溶剂在展开剂中主要起溶解物质和基本分 离作用； 占比例小的强极性溶剂则起调整改善被分离物质的保留值及选 择性的作用； 中等极性的溶剂起着使极性相差较大溶剂混合均匀的作用。
（4）样品的收集
在确定色带位置后，可 用刮刀或一与真空收集器相 连的管形刮离器将该色带吸 附剂从板上刮下。后一种方 法因吸附剂持续与气流接触 ，所含的纯化合物有被氧化 的危险， 并不适用于易氧 化的物质。
脱脂棉
接真空泵
吸附剂 玻璃管
注意事项
a.无论采用何种回收方法，都应以极性尽可能小的溶剂将化合 物从吸附剂中提取出来(1g吸附剂约使用5m选择展开剂一般需要针对吸附剂的种类、活度和被分 离混合物的组成及各成分的性质结构等情况综合而定。 a.分离非极性物质，选择非极性展开剂和高活性吸附剂； b.分离强极性物质，选择强极性展开剂和活性低的吸附剂； c.分离中等极性物质，选择中等极性展开剂和活性的吸附剂。 小原则：被分离物质和展开剂之间的极性关系应符合“相似相 溶原理”。该原则可用于确定展开剂的大致范围。
常用显色剂
硫酸：硫酸-乙醇(1:1)溶液，喷后110℃烤15分钟，不同有机 物显不同的颜色； 0.05%高锰酸钾溶液：还原性物质显黄色，背景淡红色； 酸性重铬酸钾：5%重铬酸钾浓硫酸溶液，必要时150℃烤薄层； 5%磷钼酸乙醇溶液：喷后120℃烤，还原性物质显蓝色，再用 氨气熏，背景无色。
样品的浓度应在5％～10％左右。
图 3—28
各种点样方式示意图
（2）展开
将点好样的薄板与流动相接触，使两相相对运动并带动样品 组分迁移的过程称为展开。 展开的容器：除了专用的色谱缸外，常见玻璃标本缸、染色缸、 广口瓶、大量筒、大试管等可作为其代用品。
展开方式：上行法、下行法、双向法、梯次上行法。
2.2.3 薄层色谱的操作
（1）点样 上样是进行PTLC分离的一个最关键的步骤。
剂 (如己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯等)，点样后溶 剂能迅速挥发，以减少色斑的扩散。 上样之前薄层板最好先用甲醇展开一次，以除去可能存在 的杂质。 样品溶解：上样前先将样品溶于少量溶剂，难挥发性溶剂 可引起点样带变宽，因此最好选用挥发性溶
第七章 制备色谱技术
主要内容
1 2 3 概述 制备薄层色谱法 常规柱色谱技术
1.概述
采用色谱技术制备纯物质，即分离一种或多种色谱纯物质； “制备”这一概念指获得足够量的单一化合物。 化学结构、生物活性筛选 实验室研究 30~50mg
分析用标准品 小批量生产
产业化制备
>100mg >50g
>1000g
优点
分离所需时间短，扩散效应相应减小； 加压使得某些润湿能力较差的流动相也可应用； 与靠毛细管作用的色谱方法相比，OPLC由于采用更细颗 粒的吸附剂及更长的色谱板，因而分离效果更好。 适合分离小量（50~100mg）已经部分纯化了得样品。
2.4 离心制备薄层色谱法
离心薄层色谱技术主要是在经典的PTLC基础上运用离心力以 促使流动相加速流动，是一种强迫流动相移动的方法。
薄层厚度/mm
分离长度/cm 分离模式 组分分开方法 典型上样量/mg
0.5-2
18 线形 离线 50-150
0.5-2
18 线形 在线 50-300
1-4
12 环形 在线 50-500
分离谱带数
2-5
2-7
2-12
2.5制备薄层色谱的应用
薄层色谱法具有设备简单、操作方便、分离快速、灵敏度及 分辨率高等特点，在医药、生物、环境、食品等各领域得到了广
优点
分离速度快； 使用溶剂少，经济环保； 操作简单，占用空间小，性能稳定； 薄层板可反复使用，不需刮离吸附剂； 可进行梯度洗脱，条件更优化 ； 进样量大，一次最多可分离2g。 适合合成和天然产物的制备分离。
不同制备薄层色谱法的比较
参数 流动相迁移方法 PTLC 毛细作用 OPLC 加压 CTLC 离心
选择展开剂时的注意事项
对普通酸性组分：特别是离解度较大的弱酸性组分应在展开剂 中加入一定比例的酸，可防止拖尾现象； 对碱性物质：如某些生物碱，多数情况选用氧化铝为吸附剂， 选用中性溶剂为展开剂。若采用硅胶为吸附剂，则选用碱性展 开剂为宜；但对某些碱性较弱的生物碱可使用中性展开剂。 理想的展开剂应能使混合物分离后各组分的Rf值相差尽可能大， 各组分理想的比移值在0.2-0.8之间。
Rf的特性和应用： 在固定条件下，特定化合物的Rf值是一个常数。因此，在条 件完全相同的情况下，Rf值可以作为该化合物定性检定的物理 指标，就像测定熔点或其它物理常数一样。为了获得相同的色 谱条件，通常是把未知样和标准样同时滴加在同一块薄板上。
2.2常规制备薄层色谱法
2.2.1薄层板的制备
2.2.2色谱条件的选择
2.2.3薄层色谱的操作
2.2.1薄层板的制备
常采用湿法：平铺法和涂铺法。
硅胶
混合
黏合剂
平铺
涂铺器
自然干燥一夜 105-120℃活化
煅石膏 或羧甲基纤维素钠水溶液