细菌内毒素检测技术与应用
内毒素检测方法
内毒素检测方法内毒素是一种存在于细菌细胞壁内的毒素，它们可以引起严重的免疫反应和炎症反应，对人体健康造成严重危害。
因此，及早检测和监测内毒素的水平对于预防和治疗相关疾病至关重要。
本文将介绍一些常见的内毒素检测方法，希望能为相关领域的研究人员提供帮助。
首先，内毒素检测的常用方法之一是内毒素生物学活性检测法。
这种方法利用动物模型或细胞培养来检测样品中的内毒素活性。
常见的动物模型包括大鼠、小鼠和兔子等，而细胞培养则是利用哺乳动物细胞来检测内毒素的活性。
这种方法的优势在于可以直接测量内毒素的生物学活性，但缺点是需要使用动物或细胞，操作复杂且耗时。
其次，内毒素检测的另一种常见方法是内毒素结构化学检测法。
这种方法利用色谱、质谱等技术来检测样品中内毒素的化学结构。
通过分析内毒素的化学成分和结构，可以快速准确地确定样品中内毒素的含量和种类。
这种方法的优势在于操作简单、快速高效，但需要专业的仪器设备和技术支持。
此外，内毒素检测的第三种常见方法是内毒素生物化学检测法。
这种方法利用生物化学反应来检测样品中的内毒素含量。
常见的生物化学检测方法包括内毒素酶联免疫吸附测定法（ELISA）、内毒素凝集酶试剂盒法等。
这些方法操作简单、快速，且灵敏度高，能够准确测定样品中的内毒素含量。
最后，内毒素检测的新兴方法之一是内毒素生物传感器检测法。
这种方法利用生物传感器来检测样品中的内毒素含量，具有操作简单、快速高效的特点。
生物传感器可以利用生物体内的生物反应来检测内毒素的含量，具有高灵敏度和快速反应的优势。
综上所述，内毒素检测方法包括内毒素生物学活性检测法、内毒素结构化学检测法、内毒素生物化学检测法和内毒素生物传感器检测法等。
每种方法都有其独特的优势和适用范围，研究人员可以根据实际需求选择合适的方法进行内毒素检测。
希望本文所介绍的内毒素检测方法能够为相关领域的研究工作提供一定的参考和帮助。
内毒素检测方法
内毒素检测方法内毒素是一种存在于细菌细胞壁中的有毒物质，其存在会对人体健康造成严重威胁。
因此，及早发现和检测内毒素的方法至关重要。
本文将介绍几种常用的内毒素检测方法，希望能对相关领域的科研工作者和实验人员有所帮助。
首先，最常用的内毒素检测方法之一是内毒素检测试剂盒法。
这种方法的优势在于操作简单，结果快速。
通常情况下，只需要将待测样品加入试剂盒中，按照说明书进行操作，就能得到内毒素的检测结果。
然而，这种方法也存在一定的局限性，例如无法区分内毒素的具体种类，只能判断内毒素的存在与否。
其次，内毒素检测的另一种方法是内毒素生物学检测方法。
这种方法通过利用生物学特性来检测内毒素的存在，例如利用小鼠或大鼠来进行生物学反应检测。
这种方法的优势在于能够检测到不同种类的内毒素，并且结果比较准确。
但是，这种方法也存在一些缺点，例如操作复杂、耗时较长，而且对实验动物的使用也存在一定的伦理争议。
另外，还有一种常用的内毒素检测方法是内毒素生化检测方法。
这种方法通过利用内毒素与特定生化试剂的反应来进行检测，例如内毒素与内毒素结合蛋白的结合反应等。
这种方法的优势在于能够定量检测内毒素的含量，结果比较准确。
但是，这种方法也存在一些局限性，例如对实验条件要求较高，操作技术要求严格等。
综上所述，内毒素检测方法有多种，每种方法都有其独特的优势和局限性。
在实际应用中，需要根据具体的实验目的和条件选择合适的内毒素检测方法。
同时，也需要不断地探索和研究新的内毒素检测方法，以提高内毒素检测的准确性和效率，保障人体健康。
希望本文所介绍的内毒素检测方法能够对相关领域的科研工作者和实验人员有所帮助，促进内毒素检测技术的不断进步和创新。
细菌内毒素检查法应用指导原则
细菌内毒素检查法应用指导原则细菌内毒素检查法应用指导原则1. 引言在当前社会背景下，食品安全问题备受关注，并且细菌内毒素作为食品中的一种重要污染物质也越来越受到重视。
为了确保食品的安全性，细菌内毒素检查成为一项非常重要的工作。
本文将从深度和广度的角度来评估细菌内毒素检查法的应用指导原则，并根据该主题进行讨论。
2. 细菌内毒素检查法的概述细菌内毒素是由细菌产生的一种有毒物质，它们可以污染食品并对人体健康造成潜在威胁。
细菌内毒素检查法的应用非常重要。
该方法一般包括样品准备、提取和分析等步骤。
通过采用适当的检测技术和方法，可以准确可靠地检测细菌内毒素的存在和含量。
3. 细菌内毒素检查法的准备工作在进行细菌内毒素检查之前，必须进行一些准备工作。
需要确定检测的细菌种类和内毒素类型，以便选择适当的检测方法。
样品的收集和保存也是一项关键工作，应该注意避免污染或降解。
还需要准备相关的实验室设备、试剂和标准品等。
4. 细菌内毒素检查的主要技术方法目前，细菌内毒素检查主要采用生物学方法和化学方法两种主要技术。
生物学方法包括毒素制备、生物学活性试验和鉴定等步骤，通常用于细菌内毒素的初步筛查。
而化学方法则依靠物质的化学性质或光学性质来进行分析和检测，常用的方法包括高效液相色谱法、气相色谱法和质谱法等。
5. 细菌内毒素检查的应用指导原则为了保证细菌内毒素检查的质量和准确性，应遵循以下应用指导原则：5.1 样品选择：应根据实际情况选择适当的样品进行检测，要注意样品的来源、存储和处理方式。
5.2 样品制备：样品必须按照规定的方法进行提取和制备，确保细菌内毒素的稳定性和提取效率。
5.3 适当的检测方法：应根据细菌种类和内毒素类型选择适当的检测方法，确保检测结果的准确性和可靠性。
5.4 外部质量控制：在进行细菌内毒素检查时，应严格遵循外部质量控制的要求，包括使用标准品进行校准和内毒素的稀释等。
5.5 结果解释和评估：在得到检测结果后，需要对结果进行解释和评估，确保对检测结果的理解和使用是正确的。
细菌内毒素测定技术—细菌内毒素检查方法
知识点：光度测定法
四、结果判断 若供试品溶液所有平行管的平均内毒素浓度乘以稀释
倍数后小于规定的内毒素限值，判定供试品符合规定；若 大于或等于规定的内毒素限值，判定供试品不符合规定。
注：本检查法中，“管”的意思包括其他任何反应容 器，如微孔板中的孔。
技能点：凝胶限度试验操作规程
检验供试品中的内毒素含量是否小于限值的定性方法，按下表制 备溶液A、B、C和D。使用稀释倍数为MVD并且已经排除干扰的供 试品溶液来制备溶液A 和B。按鲎试剂灵敏度复核试验项下操作。
3、如果供试品溶液的所有平行管均为阳性，应记为内 毒素的浓度大于或等于最大的稀释倍数乘以λ。
4、若内毒素浓度小于规定的限值，判定供试品符合规 定。若内毒素浓度大于或等于规定的限值，判定供试品不 符合规定。
知识点：光度测定法
一、方法
光度测定法分为浊度法和显色基质法。 浊度法系利用检测鲎试剂与内毒素反应过程中的浊度 变化而测定内毒素含量的方法。根据检测原理，可分为终 点浊度法和动态浊度法。 显色基质法系利用检测鲎试剂与内毒素反应过程中产 生的凝固酶使特定底物释放出呈色团的多少而测定内毒素 含量的方法。根据检测原理，分为终点显色法和动态显色 法。
试。复试时，溶液A需做4支平行管，若所有平行管均为阴性，判定供试品 符合规定；否则判定供试品不符合规定。
技能点：凝胶限度试验操作规程
4、阳性对照结果出现阴性，可能是由于内毒素工作品效价标 示不准确或效价衰退或失败；稀释内毒素没有使用旋涡混合器或 稀释操作不当；鲎试剂效价标示不准确或效价衰退或失效；反应 试管放入水浴保温前试管中内容物没有摇匀造成。阴性对照出现 阳性结果可能是由于鲎试剂或者水污染，试验器具污染，试验过 程操作不当污染造成。
A：没有超过MVD并且通过干扰试验的供试品系列稀释液。 B：供试品阳性对照。（为确证不存在干扰作用） C：标准内毒素系列。（为确证本次试验的操作和环境都符合要求。）D：阴性对照。
细菌内毒素检测方法
细菌内毒素检测方法细菌内毒素是一种由细菌产生的有毒物质，它能够对人体和动物产生严重的危害。
因此，及时准确地检测细菌内毒素的存在就显得尤为重要。
在本文中，我们将介绍几种常见的细菌内毒素检测方法，希望能够为相关领域的研究人员和实验人员提供一些参考和帮助。
首先，生物学法是一种常见的细菌内毒素检测方法。
这种方法利用动物或细胞培养来检测细菌内毒素的存在。
通过观察动物或细胞的生理反应，可以判断细菌内毒素的毒性和浓度。
这种方法的优点是可以模拟真实的生物体内环境，结果比较真实可靠。
但是，这种方法需要较长的时间和较高的成本，且存在一定的伦理道德问题，因此在实际应用中受到一定的限制。
其次，生化学法也是一种常用的细菌内毒素检测方法。
这种方法利用生物化学技术，通过检测特定的生物标志物或化学物质来判断细菌内毒素的存在。
生化学法的优点是操作简单、快速、灵敏度高，可以对多种细菌内毒素进行检测。
但是，这种方法需要较为专业的实验技术和设备，且对样品的处理和保存要求较高。
最后，分子生物学法也是一种常见的细菌内毒素检测方法。
这种方法利用分子生物学技术，通过检测特定基因或DNA序列来判断细菌内毒素的存在。
这种方法的优点是具有高度的特异性和灵敏度，可以对微量的细菌内毒素进行检测。
但是，这种方法需要较为复杂的实验操作和分析技术，且成本较高。
综上所述，针对不同的实验目的和条件，可以选择合适的细菌内毒素检测方法。
生物学法适合于对细菌内毒素毒性和浓度进行研究，生化学法适合于快速、大批量的检测，分子生物学法适合于对特定细菌内毒素的高灵敏度检测。
在实际应用中，也可以结合多种方法进行综合检测，以提高检测的准确性和可靠性。
希望本文的介绍能够为相关领域的研究人员和实验人员提供一些参考和帮助。
细菌内毒素检测方法
细菌内毒素检测方法细菌内毒素是一类由细菌产生的有毒物质，它们可以对人体和动物产生严重的危害。
因此，对细菌内毒素进行及时、准确的检测显得尤为重要。
本文将介绍几种常见的细菌内毒素检测方法，以供参考。
首先，常见的细菌内毒素检测方法之一是生物学检测法。
这种方法利用动物、细胞或其他生物体对内毒素的反应来进行检测。
例如，利用小鼠腹腔注射内毒素，观察其生理反应来判断内毒素的存在与否。
虽然这种方法具有较高的灵敏度和特异性，但由于涉及动物实验，存在一定的道德和法律问题，因此在实际应用中受到一定的限制。
其次，化学检测法也是一种常用的细菌内毒素检测方法。
该方法利用化学试剂与内毒素发生特定反应，通过观察反应产物的形成或颜色变化来判断内毒素的存在与否。
例如，内毒素在特定条件下可与Limulus试剂发生凝集反应，形成凝集物。
这种方法具有操作简便、结果快速的优点，但也存在一定的特异性和灵敏度问题。
另外，免疫学检测法也是一种常见的细菌内毒素检测方法。
该方法利用抗体与内毒素特异性结合，再通过染色、发光等方式来检测结合产物，从而判断内毒素的存在与否。
例如，ELISA法是一种常用的免疫学检测方法，它具有高度的特异性和灵敏度，且可以进行高通量检测，因此在实际应用中得到了广泛的应用。
最后，分子生物学检测法也是一种较为先进的细菌内毒素检测方法。
该方法利用PCR、基因芯片等技术，通过检测内毒素相关基因或基因产物来判断内毒素的存在与否。
这种方法具有高度的特异性和灵敏度，且可以进行多重检测，因此在临床诊断和科研领域得到了广泛的应用。
综上所述，针对细菌内毒素的检测方法有生物学检测法、化学检测法、免疫学检测法和分子生物学检测法等多种选择。
在实际应用中，可以根据需要的特异性、灵敏度、操作简便性等因素来选择合适的检测方法。
希望本文所介绍的内容能够对相关人士有所帮助。
细菌内毒素检查法中凝胶法在药品中的应用及经验总结
细菌内毒素检查法中凝胶法在药品中的应用及经验总结1. 引言1.1 细菌内毒素检查法中凝胶法的概述细菌内毒素检查法中的凝胶法是一种常用的检测方法，用于检测药品中的内毒素水平。
内毒素是一种细菌产生的毒素，当进入人体后会引起一系列的炎症反应，严重时甚至会导致休克和死亡。
在药品生产过程中，内毒素检查是至关重要的环节。
凝胶法是内毒素检查中常用的一种方法，它通过将待测物与内毒素结合后形成凝胶来检测内毒素的含量。
凝胶法具有操作简单、检测快速、灵敏度高等优点，因此在药品中被广泛应用。
通过凝胶法检查药品中的内毒素含量，可以有效保障药品质量，避免因内毒素引起的不良反应。
凝胶法也存在一些局限性，如对不同类型内毒素的检测可能存在差异，需要结合其他方法进行验证。
细菌内毒素检查法中的凝胶法在药品生产中有着重要的应用价值，可以帮助生产商及时发现和控制内毒素的含量，从而保障药品安全有效。
在未来的研究中，我们可以进一步探索凝胶法在内毒素检查中的应用前景，提高检测灵敏度和准确性，为药品质量控制提供更好的保障。
2. 正文2.1 凝胶法在药品中的应用凝胶法是细菌内毒素检查法中常用的一种方法，其在药品中的应用具有重要意义。
凝胶法通过将待测药品与内毒素结合后在凝胶中形成沉淀的方式，实现内毒素的检测。
药品中可能存在的内毒素会与凝胶中的配体发生反应，形成可见的凝胶线或沉淀，从而判断药品中是否存在内毒素。
凝胶法在药品中的应用可以帮助制药企业提前发现产品中的内毒素问题，有效保障药品的质量和安全性。
通过凝胶法检测药品中的内毒素含量，可以及时调整生产工艺、选择合适的原料，从而降低内毒素对产品质量的影响，保障患者的安全用药。
凝胶法还可以用于药品质量控制中的内毒素检查，帮助企业建立起完善的内毒素检测体系。
通过不断优化凝胶法的操作流程和技术手段，可以提高内毒素检查的准确性和可靠性，为药品生产提供更加有效的质量保障。
【内容已达200字】凝胶法在药品中的应用不仅可以帮助企业提高产品的质量和安全性，还可以为药品行业的科研和发展提供支持。
细菌内毒素检测应用指南
5.1.9 Guidelines for Using the Test for Bacterial Endotoxins 细菌内毒素检测指南01/2010:50110 Page 520-523 翻译时间：2012/12无菌检测（2.6.1）的目的，和所有药典检测项目相同，是给检验员提供确认某种物料符合欧洲药典要求的方法。
既没有强制生产商执行此类检测，也没有排除修订药典方法或其它方法的可能性，前提是生产商认可对于存在争议的物料用药典方法检验应符合规定。
1.介绍革兰氏阴性菌是药品受热源污染造成毒素反应的最常见原因。
它们的热源反应要比其它大多数热源物质高。
这些内毒素是脂多糖。
尽管有少量的热源结构不同，结论通常是产品中没有内毒素说明不含热源物质，并且能排除不含非内毒的热源物质。
如果有干扰内毒素和鲎试剂反应的因素可能掩盖内毒素的存在。
因此，检验员若想代替个论中细菌内毒素的家兔热源检测法，需要证明有对相关产品有效的方法，可能需要增加排除干扰因素的程序。
如细菌内毒素检验（2.6.14）中说明，必须提供以下两方面信息才能判断检测样品有效：✓建立检测用物料的适用性。
应确保BET水和其他试剂中不含内毒素，并检查鲎试剂的灵敏性与供应商标注是否相符；✓由于待测产品可能影响检测，应在有产品和无产品条件下测试鲎试剂灵敏性。
2项灵敏度值不得有明显差异。
2.6.14细菌内毒素检测说明了去除干扰因素的方法：如果有干扰，在执行去除干扰测试后，需执行另外一项测试检查干扰是否真正被中和或移除。
本通则解释了细菌内毒素方法中要求的原因，然后讨论了读数和结果解读的内容。
如果用鲎试剂代替药典个论规定的家兔热源检测法，则属于变更方法需要验证；11部分给出了怎样进行验证的一些指南。
每个产品的个论中给出了细菌内毒素的参照方法，如果没有说明参照方法，则使用方法A。
如果没有使用参照方法，实验员必须证明该方法适合该产品，并且检测结果应与参照方法得出的结果一致。
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• 例子：如果用鲎试剂灵敏度为0.25EU/ml，注射用
头孢曲松钠舒巴坦钠的最低有效浓度为：
• 4、样品稀释过程中加液量的计算
稀释过程中，假设从溶液S1取（X）ml溶液稀释
（n）倍至S2，加液量为（y）,则满足
Y=（n-1）* x
• 例子：如从溶液S1取0.5ml稀释3.8倍至S2,则加液
量为： Y=（3.8-1）* 0.5=1.4（ml）,即0.5ml的
• 例子2：注射用人头孢孟多酯钠，成人每日剂量为
2.0~8.0g，分3~4次给药，一日最高剂量不超过
12g.
• 2、最大有效稀释倍数（MVD）
--供试品MVD按下式计算：MVD=cL/λ
A.C为供试品浓度，其中当L以EU/ml表示时，c
为1.0ml/ml；
B.M为内毒素限值；
C.λ 为鲎试剂的灵敏度（凝胶法）或标准曲线
S1加1.4ml稀释液即得S1的3.8倍稀释液S2。
• 5、计算
A、2010版药典：紫杉醇注射液细菌内毒素检查：
取本品，加内毒素检查用水稀释制成每1ml中含
紫杉醇0.15mg或更低浓度，依法检查每1mg紫杉醇
中含内毒素的量应小于0.40EU，问应该选用灵敏度
为多少的鲎试剂来做检测？？
解答：
λ =MVC*L=MVC*0.4EU/mg
原检查的药品约20种。 – 2000年,国际调和委员会使USP,EP和JP达成《BET的国际 调和案》,统一的BET法收载于USPXXIV版NF19的第二增补 本中,并于2001年1月1日生效
• 2)国内
–1983年,由11个单位参加的卫生部鲎试剂研究协作组的 成立。 –1988年,卫生部颁布《细菌内毒素检查法》和鲎试剂标 准 –1991年,卫生部部颁标准规定4种药品可使用细菌内毒素 检查法。
– 鲎试剂的灵敏度越来越高
凝胶法最高达0.0075EU/ml,商品试剂0.015EU/ml 定量 法高达0.001EU/ml
• 4)BET应用的领域越来越广
– 药品检验 – 药品生产过程质控 – 临床应用:辅助诊断 – 其它领域:食品卫生,环境保护
二、细菌内毒素的理论基础
• 1、细菌内毒素 • 2、鲎试剂 • 3、BET检查用水 • 4、BET检查程序 • 5、5,2005年版细菌内毒素检查法 • 6、相关参数的计算 • 7、试验相关知识
药典要求：MVC ≤0.15mg/ml，
则选用鲎试剂灵敏度 λ
≤0.15mg/ml*0.4EU/mg=0.06EU/ml
B、注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠细菌内毒素：
取本品，用内毒素检查用水制成每1ml中含
0.6mg的溶液，依法检查，每1mg本品中含内毒素的
量应小于0.050EU，问应该选用灵敏度为多少的鲎
异性鲎试剂。
• 2)鲎试剂的规格
(1)单次实验试剂
(2)多次试验试剂
• 3)鲎试剂的质量标准
(1)灵敏度
●
定义：在细菌内毒素检查法规定的条件下，能使鲎试
剂产生阳性的标准内毒素的最低浓度，单位为EU/ml。常用
的鲎试剂的灵敏度有：0.25、0.125、0.03。
(2)自身凝集：阴性对照在37度4h不产生阳性反应。
• 1、细菌内毒素
1)化学成分及特性
– 革兰氏阴性细菌细胞壁的产物
– 是高分子量脂多糖复合物(LPS)
单体分子量介于10,000至20,000道尔顿 典型地以
100,000至500,000道尔顿的聚合体形式存在
(1)特性
- 致热性：内毒素作用于人体细胞,使之释放内原性热原,
再刺激下丘脑体温调节中枢, 引起发热反应。 - 耐热性：需要在250摄氏度干热30分钟才能彻底灭活。 - 分子极性：多糖链有亲水性,脂肪链具有疏水性,在水中 呈不均匀分布 。 - 酸碱性：与强酸强碱水解反应。 - 鲎反应性： 能与鲎试剂发生多级酶促反应,形成凝胶。 除上述性质外,LPS还有许多其它的生物活性
• 3、BET发展趋势与特
• 1)BET技术的发展趋势
(1)细菌内毒素检查取代热原检查
- BET法所具有的优点:快速,灵敏,可标准化等
(2)走向统一的BET法
- WHO实现了内毒素的国际标准品(IS)的效价
(IU)与各国内毒素标准品的效价(EU)的统一,即
1IU=1EU。
• 2)BET技术及应用发展的特点
(1)BET方法呈多样化
–凝胶法 –比浊法 - 动态比浊法 - 终点比浊法 –比色法 - 动态比色法 - 终点比色法
(2)BET趋向自动化
– 凝胶法 恒温设备方面,干式恒温仪器逐步取代水浴恒温 箱
– 定量BET 试管式定量检测仪 酶标板式定量检测仪 全自
动的BET系统 专用的数据软件
• 3)BET试剂的发展
最低点浓度（光度法）。
• 例子：如果使用鲎试剂灵敏度为0.25EU/ml，注射
用头孢曲松钠舒巴坦钠（浓度为10mg/ml，
L=0.2EU/mg）的最大有效稀释倍数为：
• 3、最低有效浓度（MVC）
MVC=λ /L
A. λ 为鲎试剂的灵敏度（凝胶法）或标准曲线
最低点浓度（光度法）；
B.L为内毒素限值；
每步稀释于旋涡混合器混合30秒
0.1mlTAL+0.1mlCSE（RSE），平行4管 NC：0.1mlTAL+0.1mlBET水，平行2管
封口，混匀 37℃±1℃,60±2min 结果判断：反应管缓缓倒转1800 阳性（+）：凝胶不变形，不从管壁滑脱者 阴性（-）：凝胶不能保持完整，从管壁滑脱者 实验有效：NC管全部呈阴性（- -） 2.0λ管全部呈阳性（+ + + +） 0.25λ管全部呈阴性（- - - -） 数据处理：灵敏度测定值λc＝antilg(∑X/4) X：为反应终点浓度的对数值（lg） 鲎试剂灵敏度标示值λ有效： 2λ≥λc≥0.5λ 反应终点浓度是系列浓度递减的内毒 素溶液中最后一个呈阳性结果的浓度
细菌内毒素检测技术与应用
一、细菌内毒素检测技术的应用与进展
• 1、热原 • 2、历史回顾-鲎试剂与细菌内毒素检查 • 3、BET的发展趋势与特点
• 1、热原
--热原是指临床上引起哺乳动物发热反应的物质。
--Webster将热原定义为“ 致热剂”。
• 1)早期的热原研究
– 静脉疗法的研究与热原的研究密切相关 – 在18,19世纪有很多关于静脉疗法的报道,所有病人在注射 后都伴随有发热反应,当时的医生都深信发热对人体有益 – 1912年,Hort和Penfold阐明注射发热的真正本质,将细菌
细菌性疾病》,阐述了细菌内毒素使鲎血凝固的现象.随后 ,Bang 和Levin发明了鲎试剂。 – 1980年,FDA发表使用鲎试剂检查人用和兽用注射药终成 品内毒素的准则;美国药典20版(USPXX)收载BET法。
– 1989年英国药典收载BET法 – 1991年日本药局方收载
BET法。
– 1999年,USPXXIV版规定670种药品用BET法检查,保留热
试剂来做检测？？
解答：
λ =MVC*L=MVC*0.050EU/mg
药典要求：MVC =0.6mg/ml，
则选用鲎试剂灵敏度 λ
=0.6mg/ml*0.050EU/mg=0.03EU/ml
五、凝胶法细菌内毒素检查技术
• 1、凝胶法BET试验程序 • 2、试验器具 • 3、鲎试剂灵敏度复核 • 4、干扰初筛试验 • 5、检查法 • 6、实验相关知识及技巧
反应温度的要求（37 ± 1 ℃ ）
• 3、鲎试剂标示灵敏度的复核试验
1）实验目的
A、验证实验的条件是否满足BET实验的要求；
B、验证实验人员的操作技能是否满足BET实验的
要求；
C、验证实验所用试剂是否满足BET实验的要求；
D、验证实验所用器具是否满足BET实验的要求；
2）实验步骤
A、开启恒温仪器预热；
(2)化学结构
–含有3个截然不同的区域 O-特异侧链 核心多糖 类脂A
• 2)细菌内毒素与热原的关系
– 内毒素是热原之一种。
– 医药工业接受的观点是,内毒素是目前医药工
业中最普遍和最主要的外源性热原,控制内毒素污
染就等于控制热原污染。
• 3) 标准内毒素与环境内毒素
–标准内毒素
–环境内毒素(主要检测对象)
• 4) 标准内毒素溶液的制备
– 中国药典2005年版BET法要求,将细菌内毒素国
家标准品用BET检查用水溶解后,需在旋涡混合器上
混匀15分钟,以后每稀释一步均应在旋涡混合器上
混合30秒钟.其他国家的BET法也有类似的要求.
– 具有两极活性的内毒素分子在水中呈现不均匀 分布
• 5)内毒素的清除方法
(1) 冲洗 (2) 蒸馏
(3) 反渗透
(4) 超滤
(5) 活性炭吸附
• 6) 内毒素的灭活方法
(1) 酸/碱水解 (2) 氧化(H2O2)
(3) 干热(180 ℃ 2h或250 ℃ 30min)
• 2、鲎试剂
1)鲎试剂的分类
(1)种类：美洲鲎试剂
和中国鲎试剂；
(2)检测方法：凝胶法
和光度法；
(3)特异性：普通和特
孵育仪器
混合食品 涡旋混合仪 其它 试管架、异丙醇浸泡的无纺布、镊 子、剪刀、砂轮、标记笔、锡箔纸
1）试验器具的要求及处理；
A、玻璃器皿需经除热原处理，以除去可能存在的
外源性内毒素，常用方法是玻璃器皿经清洗后
≥250 ℃干烤至少30min；
B、塑料器械应选用标明无内毒素并且对试验无干
扰的器械；
• 2）孵育反应仪器
• 1、内毒素限值
--一般按公式 L=K/M 来确定。
A.L为供试品的细菌内毒素限值；