【高中生物】高中生物知识点：土壤中微生物的分离与计数
高中生物备课资料 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数 新人教版选修1
落数在50个左右为最好。
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㈢.设置对照：
设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素 对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。
设置对照的方法：
空白对照：不给对照组任何处理因素。
条件对照：给对照组施以部分实验因素，但不是所要研究的 处理因素。 自身对照：对照组和实验组都在同一研究对象上进行。
原因：因为热泉温度70～800C，淘汰了绝大 多数微生物只有Taq细菌被筛选出来。
启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的
要求，到相应的环境中精去选版p寻pt 找。
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2、实验室中微生物的筛选原理：
人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营
养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生
物生长。
要分离一种微生物，必须根据该微生物的特点，包
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注意事项
①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30— —300的平板上进行计数。
②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三 个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出 菌落平均数。
③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。
④涂布平板法所选择的稀释度很重要，一般以
三个稀释度中的第二个稀释度所出现的平均菌
1.4g 2.1g 0.2g 10.0g
尿素
1.0g
琼脂
15.0g
①从物理性质看此培养基属于哪类？从功能上属
于哪类培养基？
固体培养基 选择培养基
②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？
碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素
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4、培养基选择分解尿素的微生物的原理
培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物 才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微 生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发 育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选 择出分解尿素的微生物。
土壤微生物分离纯化及测数.
土壤微生物别离纯化及测数土壤微生物|别离纯化及测数来源：生物秀时间：2021-5-28一、实验目的要求了解土壤微生物的别离纯化及测数的根本原理。
学习并掌握微生物别离纯化技术方法。
学习并掌握微生物平板菌落计数的技术方法。
二、根本原理土壤是微生物生活的大本营，其中含有大量不同类型的微生物，可按照一定的方法将各类微生物通过别离进行纯培养，并能对特定类群进行数量测定。
根本原理是通过稀释使菌体细胞充分分散，单细胞得以生长发育形成菌落，可使用稀释法或平板划线法进一步纯化，还可通过平板菌落计数，推算单位重量土壤样品含有微生物的数量。
三、实验步骤〔一〕土壤样品采集在待测田块上，假设田块面积小于50平方米那么按对角线三点采样，假设田块面积大于50平方米按对角线五点采样。
采样一般定点于耕作层0--20cm，先除去表土 1--2cm，以无菌铲采土足量充分混匀后用无菌塑料袋分装。
〔二〕好气性细菌的别离纯化及测数1.制备土样稀释液吹吸三次混匀无菌操作另留一管不稀释留作对照〔C K〕2.培养基的准备融化牛肉膏蛋白胨培养基，融化后保温在48℃。
并取6个无菌培养皿，分别在皿底贴好标签，注明10-5、10-6、CK〔每个稀释度要两个平行皿，对照要两个平行皿〕。
3.倾注法接种先按10-6，10-5的顺序将不同稀释度菌悬液接入对应平皿中〔每个平皿接入1ml〕，再向每个平皿倾注约15ml的牛肉膏蛋白胨培养基〔48℃〕待冷凝，混合均匀。
4.保温培养将已经接种的平皿静置10min后，放入温箱倒置培养3--5日〔30℃〕，观察结果。
5.分区划线法纯化平板划线别离，其划线方法有以下两种：6.计数要求30~300之间计数。
CK除外。
每克湿土样细菌数量＝平均菌落数×稀释倍数土壤样品水分系数1∕〔1—样品水分百分数〕土壤样品细菌数量〔个∕克干土〕＝每克湿土样细菌数量×样品水分系数四实验报告及思考题记录计数结果并计算土壤样品含菌数。
高二生物人教版选修一讲义专题二课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、研究思路1．筛选菌株(1)原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物的生长。
(2)选择培养基：允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。
2．统计菌落数目(1)常用方法：稀释涂布平板法。
当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。
通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
(2)测定微生物数量的常用方法还有显微镜直接计数法。
3．设置对照：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。
二、实验设计土壤取样→样品的稀释→微生物的培养与观察1．土壤取样一般要铲去表层土，因为绝大多数细菌分布于距地表约3～8_cm的土壤层。
2．样品的稀释：不同的微生物需要稀释的倍数不同。
(填表)3.(1)培养：不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。
(2)观察：每隔24_h统计一次菌落数目，最后选取菌落数目稳定时的记录作为结果。
三、操作提示1．无菌操作：取土样用的小铁铲和盛土样的信封都要进行灭菌；称取土样要在火焰旁进行，稀释样品要在火焰旁操作。
2．做标记：对平板和试管进行标记，尤其进行系列稀释时要按照稀释度递增的顺序将试管排列成行。
3．制定计划：对于耗时较长的生物实验，要事先规划时间，以便提高工作效率。
四、菌种鉴定1．原理：分解尿素的细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，使培养基的碱性增强。
2．方法：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素。
1．筛选菌株分析下表所示培养基的配方，回答下列问题：为微生物提供碳源的物质是葡萄糖，提供氮源的物质是尿素。
(2)该培养基是否具有选择作用，为什么？提示：是。
绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，本培养基以尿素为唯一氮源，可以分离得到产生脲酶的微生物(即分解尿素的微生物)。
高中生物人教版土壤中分解尿素的细菌分离与计数实验教案
高中生物人教版土壤中分解尿素的细菌分离与计数实验教案一、实验目的本实验旨在通过分离与计数实验的方法，了解土壤中分解尿素的细菌数量，并掌握相关实验操作和分析技巧。
二、实验原理土壤是生物多样性最大的生态系统之一，其中存在着丰富的微生物群落，包括分解尿素的细菌。
土壤中的细菌首先被分离出来，然后通过计数方法估算其数量。
三、实验仪器与试剂1. 实验仪器：平板计数器、显微镜、培养皿、离心机等。
2. 实验试剂：含有尿素的培养基、无菌蒸馏水等。
四、实验步骤1. 样品收集：在实验地点随机选取不同位置的土壤样品，用清洁铲子或者均匀切割的方法，收集土壤样品。
2. 细菌分离：将采集到的土壤样品稀释至一定倍数，如稀释至10^-4。
3. 细菌培养：将稀释后的土壤样品取1 mL加入含有尿素的培养基中，混匀后均匀涂布在培养皿上。
重复操作至少3次。
4. 培养：将培养皿置于恒温培养箱中，温度设定为适合细菌生长的温度（一般为25-37摄氏度），培养时间至少为24小时。
5. 细菌计数：取培养好的培养皿，将每一块区域上的菌落用平板计数器计数。
6. 数据分析：根据计数结果，计算出每个培养皿上的细菌数量，并求平均值。
五、实验注意事项1. 取样时要随机选取不同位置的土壤样品，以保证样品的代表性。
2. 实验操作要严格无菌，避免其他微生物的污染。
3. 培养皿在涂布培养基时要注意均匀涂布，避免菌落重叠。
4. 培养箱的温度要适合细菌生长，同时要确保培养箱的密封性。
5. 实验结束后，要正确消毒实验器材和废弃物。
六、实验结果与讨论根据计数结果，可以得到每个培养皿上细菌的数量。
通过统计多个培养皿的平均值，可以估计土壤中分解尿素的细菌总数量。
进一步分析不同样品之间的差异，可以研究土壤中细菌群落的分布情况以及环境因素对细菌数量的影响。
七、实验拓展1. 可以进一步研究土壤中其他种类微生物的数量和群落结构，比如真菌、放线菌等。
2. 可以收集不同类型土壤样品，比如草地土壤、农田土壤等，比较它们中细菌数量的差异。
高考生物复习_2.2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
练一练 测定土壤中细菌数量一般选 10 10 10 倍的稀释液进行平板培养；而真菌的 10 倍稀释， 数量，一般选用100、1000、 其原因是（ ） A 细菌个体小，真菌个体大 B 细菌易稀释真菌不易稀释 C 细菌在土壤中含量比真菌高 D 随机的，没有原因
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下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是( ) A. KH2PO4、NA2HPO4、MgSO4.7H2O、 葡萄糖、尿素、琼脂、水 B. KH2PO4、NA2HPO4、MgSO4.7H2O、 葡萄糖、琼脂、水 C. KH2PO4、NA2HPO4、MgSO4.7H2O、 尿素、琼脂、水 D. KH2PO4、NA2HPO4、MgSO4.7H2O、 点此播放教学视频 牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水
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练一练
用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的 数目，其结果际值一致 D.比实际值可能高也可能低
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2.土壤中分解尿素细菌的计数
有些细菌含有尿素分解酶，能将尿素琼脂培养基中的尿素分 解生成氨，氨溶于水变成氢氧化铵，导致培养基变成碱性， 使酚红指示剂呈现红色。
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2、间接计数法：最常用稀释平板计数法。 含菌数较少的情形下，也可以完成计数。
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实践案例
土壤中好气性细菌的计数
测定土壤中的含菌量可以作为判定土壤肥力的一个 重要指标。 活动程序： 1、制备土壤稀释液 ①取土壤表层土样 ②称取1g土样，放入99ml无菌水锥形瓶中，振荡 20min，即成100倍稀释液。 ③移液、稀释 用同样方法可制成 104 105倍的系列稀释菌液。
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高中生物专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数教学案含解析新人教版选修1
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、研究思路1．筛选菌株(1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH 等)，同时抑制或阻止其他微生物的生长。
(2)选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。
2．统计菌落数目(1)活菌计数法：常用稀释涂布平板法。
①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。
通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
②计算公式：每克样品中的菌株数＝(C ÷V )×M 。
C ：代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数。
V ：代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)。
M ：代表稀释倍数。
③统计方法：为了保证结果准确，一般设置3～5个平板，选择菌落数在30～300的平板进行计数，并取其平均值。
(2)显微镜直接计数法：在显微镜下直接观察和计数微生物的数量。
3．设置对照(1)对照实验：指除了被测试的条件外，其他条件都相同的实验。
1.实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH 等)同时抑制或阻止其他微生物的生长。
2．在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。
3．测定微生物数量的常用方法有活菌计数法和显微镜直接计数法。
稀释涂布平板法常用来统计活菌的数目，但统计结果往往比活菌的实际数目低。
4．只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，因此可用尿素作为唯一氮源的选择培养基分离能分解尿素的细菌。
5．鉴定分解尿素细菌的方法是在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，依据是否变红进行判断。
(2)主要目的：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。
二、实验设计1．土壤取样从富含有机质、酸碱度接近中性且潮湿的土壤取样。
高中生物二 微生物的培养与用 课题2 土壤中分
角顿市安康阳光实验学校课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、选择题1．关于土壤取样的叙述错误的是( C )A．土壤取样，应选取肥沃湿润的土壤B．先铲去表层土3 cm左右，再取样C．取样用的小铁铲和信封在使用前不用灭菌D．应在火焰旁称取土壤[解析] 取样用的小铁铲和信封在使用前需要进行灭菌处理，C错误。
2．在分解尿素菌的分离和鉴定中，对先后用到的两种培养基，叙述正确的是( B )A．加入酚红指示剂作为选择培养基，再加入唯一碳源作为鉴别培养基B．加入唯一氮源作为选择培养基，再加入酚红指示剂作为鉴别培养基C．加入唯一氮源作为鉴别培养基，再加入酚红指示剂作为选择培养基D．加入唯一碳源作为选择培养基，再加入酚酞指示剂作为鉴别培养基[解析] 在分解尿素菌的分离和鉴定中，应该先加入尿素作为分解尿素菌的唯一氮源，分解尿素菌合成的脲酶，能分解尿素，产生氨，氨呈碱性；然后加入酚红指示剂培养细菌，指示剂将变为红色。
3．需要在火焰旁操作的有( D )①土壤取样②称取土壤③稀释土壤④涂布平板⑤微生物的培养A．①②③④⑤B．②③④⑤C．③④⑤D．②③④[解析] 土壤中尿素分解菌的分离和计数中除土壤取样外，其余均需要无菌操作。
4．分离土壤中分解尿素菌的实验操作中，对于获得纯化的尿素分解菌的单菌落影响最大的是( C )A．制备浸出液的土壤取自土壤的表层B．涂布前涂布器未在酒精灯外焰上灼烧灭菌C．牛肉膏蛋白胨培养基中添加尿素作为氮源D．接种操作者的双手未用酒精棉进行消毒[解析] 制备浸出液的土壤取自土壤的表层与纯化的尿素分解菌的单菌落有关但影响不大，A错误；涂布器未在酒精灯外焰上灼烧灭菌可能会造成污染，与纯化的尿素分解菌的单菌落有关但影响不大，B错误；该培养基必须以尿素为唯一的氮源，不能使用牛肉膏蛋白胨培养基或在其中添加尿素作为氮源，该操作对实验影响最大，C正确；接种操作者的双手未用酒精棉进行消毒，可能会造成污染，但与纯化的尿素分解菌的单菌落有关但影响不大，D错误。
【精品】实验四 土壤微生物的分离和计数
【精品】实验四土壤微生物的分离和计数实验目的：1.掌握土壤微生物的分离方法。
2.利用平板计数法和涂布法等方法进行土壤微生物的计数。
实验原理：1.微生物分离法微生物分离法是将微生物从混合物或样品中分离出来的方法，是微生物学中最常用的一种基本方法。
常用的方法有稀释平板法、涂布法等。
2.平板计数法平板计数法又称菌落计数法，是通过数目测定评估微生物数量的方法。
通常在固体培养基上用微生物悬液接种，培养出菌落，以评估菌群密度。
计算微生物数量时应选择符合菌落特征的一个菌落，如颜色、密度、大小等，并使用总体积、稀释因子及加样体积计算。
3.涂布法涂布法又称涂布分离法，是一种快速、容易、简单、实用的微生物分离和计数方法。
方法是取少量样品加入到无菌的琼脂培养基中，将琼脂培养基均匀地涂布在培养皿中，然后在恰当的温度下和时间内使菌落正常增殖及显像，最后计算菌落单位体积的数量。
实验材料和设备：1.土壤样品；化学试剂：蒸馏水、1%碳酸氢钠溶液、1%双氧水溶液、1.5%琼脂等。
2.培养皿；吸管；移液管；吸胶头；灭菌器；微量注射器等。
实验步骤：1.准备样品：取土壤样品，干燥，粉碎，筛选出粒径较小的部分备用。
2.制备0.1g/ml的悬液：取粉碎好的土壤样品0.1克，加入到10ml的蒸馏水中，用吸管吸取混合后的液体，摇匀后待沉淀，取稠泥状上清液，稀释成0.1g/ml的土壤悬液。
3.平板法计数：取一定体积的土壤悬液接种在称量好的琼脂平板上，进行涂布，涂布均匀后，放置在恰当的温度下，培养约24小时，以单个菌落的数量（单位：cfu/ml）计数，并使用公式计算微生物数量。
4.涂布法计数：用吸管吸取一定体积的土壤悬浊液，加入到10ml的液体琼脂培养基中，均匀地涂布在培养皿中，在适当的温度下和时间内使菌落正常增殖及显像，然后计算菌落单位体积的数量。
实验记录和数据处理：1.记录实验过程、结果和分析。
2.计算平板菌落数量和涂布法菌落数量。
3.对实验结果进行分析比较，得出结论。
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【高中生物】高中生物知识点：土壤中微生物的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数：
1.分离菌株的想法
(1)自然界中目的菌株的筛选
① 依据：根据其对生活环境的要求，在相应的环境中寻找。
②实例：pcr技术过程中用到的耐高温的taqdna聚合酶，就是从热泉中筛选出来的taq细菌中提取出来的。
（2）实验室筛选目标菌株
①原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度.ph等），同时抑制或阻止其他微生物生长。
培养基中分解尿素微生物的选择原则：培养基的氮源为尿素。
只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，尿素被用作氮源。
缺乏脲酶的微生物不能分解尿素，并且由于缺乏氮源而不能生长、发育和繁殖。
因此，可以用这种培养基选择分解尿素的微生物
②方法：能合成脲酶的细菌才能分解尿素。
配制以尿素为唯一氮源的培养基，能够生长的细菌就是能分解尿素的细菌。
2.菌落数的计算方法
(1)稀释涂布平板法（间接）
① 当样品稀释度足够高时，培养基表面生长的菌落来自样品稀释液中的活细菌。
②通过统计平板上的菌落数来推测样品中大约含有的活菌数。
（2）显微镜直接计数
3．分解尿素的细菌的鉴定细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强。
在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素。
4.实验过程
土壤取样→样品的稀释→将稀释液涂布到以尿素为唯一氮源的培养基上→挑选能生长的菌落→鉴定
知识发展：
1、taq细菌是耐高温的微生物。
2.培养基对微生物有选择性作用。
在配置培养基时，根据某一种或某一种微生物的特
殊营养要求，添加一些物质或排出一些营养物质，以保持其他微生物的生长，或根据某些
微生物对某些物理和化学因素的抗性，向培养基中添加化学物质，以筛选未确定的微生物。
这种培养基称为选择性培养基。
3、测定微生物数量的方法：
① 直接计数法：常用显微镜直接技术，一般适用于纯培养悬浮液中各种单细胞细菌
的计数。
②间接计数法：常用稀释平板计数法，平板培养基上长出一个菌落就代表原待测样品
中一个微生物个体。
4、通常用来作为菌种鉴定的重要依据的是菌落。