详细介绍抗体的生产制备
抗体纯化工艺
抗体纯化工艺一、概述抗体纯化工艺是制备高纯度、高活性抗体的关键步骤之一。
该工艺包括多个步骤，如细胞培养、抗体捕获、杂质去除和抗体纯化等，旨在获得纯度高、活性好的抗体产品。
本文将详细介绍抗体纯化工艺的各个步骤及相关技术方法。
二、细胞培养1.细胞株选择–选择适合抗体生产的细胞株，如CHO细胞、HEK293细胞等。
–考虑细胞株的稳定性、表达水平和生长特性等因素。
2.培养基配方优化–根据细胞株要求，优化培养基的成分，如碳源、氮源、生长因子等。
–添加适量的抗生素保持培养的无菌状态。
3.培养条件控制–控制培养室的温度、湿度和二氧化碳浓度等参数。
–定期检测培养液的pH值和溶氧含量，并进行适当调整。
三、抗体捕获1.细胞收获–选择最佳的细胞收获时间点，通常在细胞进入衰老期前进行。
–使用适当的方法（如离心、超滤等）将培养液中的细胞分离出来。
2.细胞破碎–使用机械方法或化学方法将细胞破碎，释放抗体和细胞内组分。
–注意选择合适的破碎条件，以保持抗体的完整性和活性。
四、杂质去除1.固体杂质的去除–使用离心、滤膜等方法去除细胞碎片、沉淀和残留的细胞碎片等固体杂质。
–选择合适的离心速度和滤膜孔径，以避免抗体的损失。
2.溶液杂质的去除–使用离子交换、凝胶过滤、亲和层析等方法去除溶液中的蛋白质、DNA、RNA等杂质。
–根据目标抗体的特性选择合适的去除方法。
五、抗体纯化1.亲和层析–使用亲和介质（如蛋白A、蛋白G、蛋白L等）将目标抗体从其他成分中分离出来。
–根据目标抗体的种类选择合适的亲和介质。
2.离子交换层析–利用抗体与离子交换介质之间的电荷相互作用进行分离。
–通过调整pH值、盐浓度等参数来实现对抗体的选择性吸附和洗脱。
3.凝胶过滤层析–利用凝胶过滤介质的孔径大小选择性地分离抗体。
–根据抗体的分子量和亲和性选择合适的凝胶过滤介质。
4.逆流色谱–利用逆流色谱技术实现对抗体的纯化和富集。
–通过改变流动相和温度等条件来调节抗体与逆流色谱介质之间的相互作用。
抗体的制备方法与原理
抗体的制备方法与原理抗体是一种能够识别和结合特定抗原的蛋白质，广泛应用于医学诊断、治疗和研究领域。
抗体的制备方法包括动物免疫和体外选择性放大两种主要途径。
以下将详细介绍这两种方法及其原理。
一、动物免疫法制备抗体动物免疫法是制备多种特异性抗体的主要方法，常用的动物包括小鼠、兔子、大鼠等。
制备抗体的主要步骤如下：1.抗原选择：首先需要选择目标抗原，可以是蛋白质、多肽、糖蛋白、核酸等。
抗原应具有免疫原性，能在动物体内引起免疫反应。
2.免疫原免疫：将抗原与适当的佐剂混合后注射到动物体内，佐剂可以增强抗原的免疫原性，如完全弗氏佐剂、佐科克佐剂等。
注射的剂量和时间间隔需根据具体实验目的和动物种类进行优化。
3.收集血清和分离抗体：免疫一定时间后，收集动物的全血或血清，离心分离血清，其中包含了目标抗体。
4.抗体纯化：通常使用亲和层析、凝胶过滤层析等方法将血清或血浆中的抗体纯化出来。
亲和层析是最常用的抗体纯化方法，利用特定配体或抗原结合柱将目标抗体捕获，再洗脱得到纯抗体。
二、体外选择性放大法制备抗体体外选择性放大法是指通过技术手段进行人工放大和筛选特定抗体，主要包括以下步骤：1.生成抗体文库：将来自多个个体免疫系统的B细胞或血浆细胞收集起来，提取RNA或DNA，然后利用逆转录酶合成cDNA或文库，得到抗体基因的cDNA文库。
2.构建抗体显示系统：将抗体基因文库插入适当的表达载体中，如噬菌体、酵母、哺乳动物细胞表达系统等。
3.筛选特异性抗体：利用高通量筛选技术，如细胞表面展示、比对深度测序等，可通过抗原结合的特异性来筛选出具有高亲和力的抗原结合片段或全长抗体。
4.抗体表达和纯化：通过选择后的抗体基因进行表达，再经过蛋白纯化和检验等步骤，最终得到目标抗体。
抗体制备的原理主要是基于免疫系统的免疫应答机制。
当机体受到抗原的刺激后，机体会产生一系列免疫应答，其中包括B细胞的活化和分化。
经过抗原的结合和识别，B细胞会分泌具有高亲和力的抗体。
单克隆抗体制备流程
单克隆抗体制备流程单克隆抗体是一种来源于单一B细胞克隆的抗体，具有高度的特异性和亲和力，被广泛应用于生物医药领域。
其制备流程主要包括免疫原制备、动物免疫、细胞融合、筛选和鉴定等步骤。
下面将详细介绍单克隆抗体制备的流程。
1. 免疫原制备。
首先需要准备纯化的抗原蛋白，可以是蛋白质、多肽、细胞膜蛋白等。
抗原蛋白的纯度和活性对单克隆抗体的制备至关重要，因此需要进行严格的纯化和活性检测。
通常采用亲和层析、离心、电泳等方法进行抗原蛋白的提取和纯化。
2. 动物免疫。
将纯化的抗原蛋白注射到小鼠或兔子等动物的体内，诱导其产生特异性抗体。
在免疫过程中，需要注意控制免疫程序，监测抗体滴度，以及合理调整免疫方案，以提高单克隆抗体的产量和质量。
3. 细胞融合。
从免疫动物中获取脾细胞或骨髓细胞，与骨髓瘤细胞（如SP2/0、NS-1等）进行融合，得到杂交瘤细胞。
杂交瘤细胞具有较高的产抗体能力，能够长期稳定地分泌单克隆抗体。
4. 筛选和鉴定。
通过ELISA、免疫印迹、细胞免疫荧光等方法对杂交瘤细胞培养上清液进行筛选和鉴定。
筛选出特异性较强的单克隆抗体阳性杂交瘤细胞，并进行亚克隆的鉴定，最终获得单克隆抗体细胞株。
5. 扩大培养和纯化。
将筛选出的单克隆抗体细胞株进行扩大培养，获得大量的单克隆抗体上清液。
然后采用亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤等方法对单克隆抗体进行纯化，获得高纯度的单克隆抗体制剂。
总结。
单克隆抗体制备流程是一个复杂而又精细的过程，需要在每个环节都严格控制条件，确保单克隆抗体的产量和质量。
通过上述步骤的实施，可以获得高效、高纯度的单克隆抗体，为生物医药领域的研究和应用提供有力支持。
简述单克隆抗体的制备过程
简述单克隆抗体的制备过程单克隆抗体的制备过程主要分为以下几个步骤：
1. 免疫原制备：首先需要准备免疫原，即待检测的抗原物质。
免疫原可以是蛋白质、多肽、糖类等各种生物分子。
在免疫原制备的过程中，需要注意选择合适的纯度、稳定性、活性等因素，并对其进行适量的处理和加工，以确保其具有较好的免疫原性能。
2. 动物免疫：将免疫原注入到动物体内（如小鼠、兔子等），让其自身免疫系统产生抗体。
免疫的方式可以是皮下、腹腔或肌肉注射等，不同的免疫方式会对抗体的种类和数量产生影响。
此外，需要注意控制免疫过程中的免疫原剂量和免疫频率，以免对动物造成损伤。
3.细胞融合：在免疫后，从免疫动物的脾脏等免疫器官中抽取免疫细胞（主要是B细胞）和肿瘤细胞进行细胞融合（如用聚乙二醇等），以形成杂交瘤细胞。
由于肿瘤细胞具有无限增殖能力，可以保证后续获得足够的单克隆抗体。
4.筛选单克隆：在进行细胞融合之后，需要进行筛选并获得单克隆抗体。
筛选包括对细胞培养物中的单克隆进行筛选和鉴定，主要有免疫荧光筛选、酶联免疫吸附测定、流式细胞术等方法。
在筛选过程中，需要对单克隆进行鉴定，包括对其亲和力、特异性、精确度等性质进行测定。
5.大规模生产：最后，需要进行大规模单克隆抗体的生产。
通常
采用的是培养杂交瘤细胞，以获得足够的单克隆抗体。
在培养过程中，需要注意细胞培养条件和产物提取方法，以保证单克隆抗体的质量和
效能。
总之，单克隆抗体的制备过程相当复杂且耗费时间，需要经过多
个环节的把控。
最终获得的单克隆抗体具有高度特异性和亲和力，可
以被广泛应用于生命科学、医药等领域。
抗体药物工艺流程
抗体药物工艺流程抗体药物是一种利用人工合成或改造的抗体来治疗疾病的药物。
其制备过程主要包括抗体的选择、表达和纯化、特定药物结构的构建以及体内外活性评价等步骤。
以下将详细介绍抗体药物的工艺流程。
1.抗体选择抗体的选择是抗体药物制备的第一步，通常通过抗原呈现、高通量筛选和抗体亲和力评估等方法进行。
在这个步骤中，需要明确目标疾病的靶点，并找出可以与其结合的抗体。
2.抗体表达和纯化抗体的表达和纯化是制备抗体药物的重要步骤。
一般来说，可以使用多种系统对抗体进行表达，包括真核细胞（如CHO细胞）和革兰氏阳性或阴性细菌（如大肠杆菌）。
在抗体表达过程中，需要选择适当的表达载体、优化培养条件，并使用亲和色谱、离心和滤过等方法对抗体进行纯化。
3.亚类选择和改造为了增强抗体药物的效力和稳定性，通常需要对抗体的常规IgG结构进行改造。
其中一种主要的改造方式是选择合适的亚类，如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4，以增强抗体的效力和稳定性。
4.抗体结构的构建抗体结构的构建包括引入特定的功能模块，如毒素链、放射性同位素或药物等，以实现抗体药物的特定治疗效果。
在这个步骤中，需要对抗体的结构进行合理的设计和工程改造。
5.体内外活性评价在抗体药物的制备过程中，需要对其在体内外的活性进行评价。
在体内评价中，可以通过小鼠模型或其他动物模型来研究抗体药物的生物学活性、药代动力学和药效学等指标。
在体外评价中，可以通过抗体结合实验、细胞毒性实验和酶联免疫吸附实验等方法来评估抗体的亲和力、特异性和潜在毒性等。
6.临床试验和生产经过前期的活性评价后，抗体药物进入临床试验阶段。
临床试验主要包括三个阶段，分别是I期、II期和III期临床试验。
在临床试验过程中，需要对药物的安全性、有效性和剂量响应进行评价。
当药物通过临床试验后，可以申请生产上市。
总结起来，抗体药物的制备过程主要包括抗体的选择、表达和纯化、亚类选择和改造、抗体结构的构建以及体内外活性评价等步骤。
详细介绍抗体的生产制备 PPT
• 增加抗原的表面积，并改变抗原的活性基团构型，从而增强抗原的免疫原性； • 佐剂与抗原混合能延长抗原在局部组织的存留时间，降低抗原的分解速度，使
抗原缓慢释放至淋巴系统中，持续刺激机体产生高滴度的抗体； • 佐剂可以直接或间接激活免疫活性细胞并细胞破碎：提取细胞可溶性抗原，需将细胞破碎，常用方法有冷热交替 法、超声破碎法，反复冻融法、自溶法和酶处理法等。
（3）蛋白提纯
① 超速离心法：常用密度梯度介质有蔗糖、甘油；
② 选择性沉淀法（盐析沉淀法）：其原理是根据蛋白质理化特 性的差异，采用各种沉淀剂或改变某些条件促使蛋白质抗原 成分沉淀，从而达到纯化的目的。如选用33～50％饱和度的 硫酸胺收集沉淀物；
大家应该也有点累了，稍作休息
大家有疑问的，可以询问和交流
1）细胞性抗原或颗粒性抗原
细胞性抗原：主要包括人、动物的细胞，还有细菌、螺旋体及寄生虫等。 如菌体（O）抗原的制备：选择标准菌株，接种于斜面或平板培养基表面；置 温箱37℃ 培养24h，用适量的无菌生理盐水刮下菌苔，移入无菌含有玻璃珠的 三角瓶中，充分摇匀菌体；100 ℃ 水浴2～2.5h杀菌并破坏鞭毛抗原。取处理 过的菌液，检测有无活菌的存在，合格后用无菌生理盐水稀释成每毫升8亿～ 10亿个细菌，加入苯酚（石炭酸）至最终浓度为5％，即为O抗原。
▪ 单克隆抗体（monoclonal antibody, mAb）:由一个识别一种抗原表位的B细 胞克隆产生的同源抗体。高度均一、特异性强、效价高、少或无交叉反应 性。
多克隆抗体（抗血清）的制备流程
抗原
半抗原+载体
佐剂 免疫动物（3-5次）
测效价 动物采血，分离血清
抗血清纯化、鉴定、保存
抗体制备与使用实验指南_概述及解释说明
抗体制备与使用实验指南概述及解释说明1. 引言1.1 概述在生物科学研究中，抗体制备与使用是一项关键的实验工作。
抗体具有高度的特异性和亲和力，可以用于检测、定位和纯化特定分子或细胞结构。
因此，准确、可靠地制备和使用抗体对于科学研究的进展至关重要。
1.2 文章结构本文将以详细而全面的方式介绍抗体制备与使用的实验指南。
首先，我们会概述整篇文章的结构，并简要说明各个部分的内容。
接下来，我们将讨论抗体制备与使用的概念及其在科学研究中的应用。
然后，详细解释抗体制备实验流程中的各个步骤，并介绍相关方法和技术。
最后，我们会探讨抗体使用实验流程中需要注意的事项，并提供标定、优化以及特异性验证等方面的方法。
1.3 目的本文旨在为研究人员提供一份全面且易于理解的实验指南，帮助他们更好地理解和掌握抗体制备与使用技术。
通过本文所提供的内容，读者将能够了解不同类型的抗体制备方法、抗体选择与设计原则、抗体应用范围与限制等知识。
同时，我们也将详细讲解实验流程中的关键步骤，并提供一些常用的技术和方法。
通过学习本文，读者将能够正确地使用抗体进行科学研究，并在实验设计和结果解读方面取得更好的成果。
以上是“1. 引言”部分的内容，希望对你的长文撰写有所帮助。
如需继续撰写其他部分，请再告诉我需要撰写哪个部分的内容。
2. 抗体制备与使用实验指南概述：2.1 抗体制备方法介绍:抗体制备是指通过免疫动物或体外细胞培养等手段，获得能够特异性识别和结合特定抗原的抗体。
常用的抗体制备方法包括小鼠单克隆和多克隆抗体制备、大规模生产抗体以及重组技术获得单克隆抗体等。
每种方法有其优缺点，在选择时需根据实验需要和研究对象的特性进行权衡。
2.2 抗体选择与设计原则：在抗体选择时，要考虑目标分子的免疫原性、表达情况和应用需求等因素。
同时，还需要关注抗体的特异性、亲和力以及交叉反应性等指标，确保选用的抗体能够准确且可靠地检测目标分子。
此外，还需要考虑实验条件、成本和供应商信誉等方面的因素。
抗体生产工艺流程
抗体生产工艺流程一、引言抗体是生物学研究和临床应用中非常重要的工具，其生产工艺流程对于抗体的质量和效能具有至关重要的影响。
本文将介绍一般抗体生产的工艺流程，包括抗原制备、免疫动物选择、免疫程序、抗体纯化和质量控制等环节。
二、抗原制备抗原是诱导机体产生抗体的关键物质。
一般来说，抗原可以是蛋白质、多肽、糖蛋白、糖等生物大分子。
抗原制备的关键是纯化目标蛋白并使其具有足够的免疫原性。
通常的制备方法包括基因工程表达、细胞培养、组织提取等。
三、免疫动物选择免疫动物的选择是抗体生产中的重要环节。
一般常用的免疫动物有小鼠、兔子、大鼠等。
选择免疫动物时需要考虑其免疫系统的特点、抗原的物种特异性以及抗体的用途等因素。
例如，小鼠免疫系统较为成熟，抗原物种特异性较高，适合用于制备单克隆抗体。
四、免疫程序免疫程序是指将抗原注射到免疫动物体内，诱导其产生抗体的过程。
免疫程序通常包括初次免疫、增强免疫和最后的免疫。
初次免疫是为了激活免疫系统，使其产生抗原特异性的抗体。
增强免疫是为了增加抗体产量和提高抗体的亲和力。
最后的免疫是为了收集免疫动物体内的抗体。
五、抗体纯化抗体纯化是将免疫动物体内的抗体从其他成分中分离出来的过程。
一般的纯化方法包括亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤等。
亲和层析是指利用抗体与其结合的特定配体（如蛋白A、蛋白G等）进行分离。
离子交换层析是根据抗体与离子交换树脂之间的相互作用进行分离。
凝胶过滤则是根据抗体的分子大小进行分离。
六、质量控制质量控制是抗体生产中非常重要的环节，其目的是确保抗体的质量和效能。
常用的质量控制方法包括SDS-PAGE、Western blot、ELISA等。
SDS-PAGE可以用于检测抗体的纯度和分子量。
Western blot可以检测抗体的特异性和亲和力。
ELISA可以用于定量测定抗体的浓度。
七、总结抗体生产工艺流程是一个复杂而严谨的过程，涉及到多个环节和技术。
在实际操作中，需要根据具体情况进行合理选择和优化。
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2）可溶性抗原
可溶性抗原主要包括蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、脂多糖、酶、补体、细菌外
毒素、核酸等。它们大多数来源组织细胞，成分复杂。制备这类抗原时，首 先需将组织和细胞破碎，然后再从组织和细胞匀浆中提取目的成分，提纯后
的抗原需鉴定后才能用做免疫原。
（1）组织匀浆的制备：所有的组织必须是新鲜的或低温保存的。器官或组织
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放射免疫法： 以不同稀释度的抗血清与优质标记抗原（放射
性核素标记）混合，孵育24h后，测定其结合率（用液体闪烁
计数仪测定Ag*－Ab或游离Ag*）。通常以结合率为50%的血清 稀度为效价。如某抗血清的结合率为50%时的稀释度为1： 15000，则该血清的效价就是1：15000。抗血清的效价，除由 抗血清本身的性质决定外，还受标记抗原的质量、孵育时间，
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3、佐剂的作用机制
佐剂的作用机制归纳起来主要有如下几种：
①可增强抗原的表面积和改变抗原活性基团构型，从而增强抗原的免疫原性。
②佐剂与抗原混合一起注入机体，可改变抗原的物理性状，形成抗原储存库，延
长抗原在局部组织的滞留时间，有利于抗原的缓慢释放。
③增强吞噬细胞的吞噬作用（被佐剂吸附的抗原易被吞噬细胞吞噬），促进对抗 原的处理，刺激淋巴细胞增生，从而增强和扩大免疫应答的效应。
所用稀释液的成分及其pH等因素的影响，在工作中必须引起
注意。
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双向扩散法：利用大分子抗原和抗体在琼脂平板上扩散，两者在相交处产
生沉淀线，以观察和判断抗血清中是否有抗体及其浓度。
琼脂板的制备：100ml pH7.1 的磷酸盐缓冲液加到15g的琼脂内，于水浴 中加温，搅拌，使琼脂完全溶解，趁热用纱布过滤，待溶液冷却到65℃左
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分离纯化方法的比较
方 法 原 理
离心力和物质沉降 系数的差别 盐析作用 分子筛的排阻作用 离子基团的交换作 用
优 点
缺 点
应 用
离心分离法
操作简单 操作简单，成本低，重 复性较好 分辨力强，不引起蛋白 质变性 分辨力强，分离量大
分辨率低 分辨率低，纯化倍 数低 成本高 费时间，酸碱用量 大 一种配体只分离一 类物质，局限性 大 成本高
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（一）抗原的制备 （二）免疫动物 （三）免疫血清的收集、分离和保存 （四）抗体的纯化 （五）免疫血清的鉴定
（六）免疫失败的可能原因及应采取的措施
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（一）抗原的制备
免疫原（immunogen）指能刺激机体免疫系统产生特异性抗体或 致敏淋巴细胞；抗原最重要的性质是免疫原性（immunogenicity） 免疫原—天然抗原、人工合成抗原； 蛋白质、多糖、脂类、核酸抗原；
温箱37℃ 培养24h，用适量的无菌生理盐水刮下菌苔，移入无菌含有玻璃珠的 三角瓶中，充分摇匀菌体；100 ℃ 水浴2～2.5h杀菌并破坏鞭毛抗原。取处理
过的菌液，检测有无活菌的存在，合格后用无菌生理盐水稀释成每毫升8亿～
10亿个细菌，加入苯酚（石炭酸）至最终浓度为5％，即为O抗原。
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右时，加入叠氮钠（NaN3），使其在溶液中的浓度为0.1%。用移液管把琼
脂放在干净平皿或玻片上，约3mm厚，待其冷却，完全凝固后，用打孔器 打孔。中央孔内加适量抗原（容量为50μl），周围各孔内分别加入50μl
1：2、1：4、1：8、1：16、1：32及不稀释的抗血清，37℃下孵育24h，
观察有无沉淀线产生，以判断血清的稀释度。
良好的佐剂应当具备以下条件：
• 增加抗原的表面积，并改变抗原的活性基团构型，从而增强抗原的免疫原性；
• 佐剂与抗原混合能延长抗原在局部组织的存留时间，降低抗原的分解速度，使 抗原缓慢释放至淋巴系统中，持续刺激机体产生高滴度的抗体；
• 佐剂可以直接或间接激活免疫活性细胞并使之增生，从而增强了体液免疫；
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第一节 多克隆抗体的制备与纯化
克隆（clone）:是指无性繁殖细胞系，是由单一个祖先细胞分裂繁殖而形成 的一簇细胞纯系。在这个家族的所有成员中，如无突变发生，其基因是完 全相同的。 多克隆抗体（polyclonal antibody , pAb）：用一种包含多种抗原决定簇的 抗原免疫细胞，可刺激多个B细胞克隆产生针对多个抗原表位的不同抗体。 多获得的免疫血清实际上是含有多种抗体的混合物，即多克隆抗体。
免疫原的分类： （一）细胞性抗原制备： 绵羊红细胞（SRBC）- 溶血素； 细菌- 抗菌抗体（动物免疫血清）
（二）可溶性抗原制备：
指蛋白质、多糖和脂类等。
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1）细胞性抗原或颗粒性抗原
细胞性抗原：主要包括人、动物的细胞，还有细菌、螺旋体及寄生虫等。
如菌体（O）抗原的制备：选择标准菌株，接种于斜面或平板培养基表面；置
特性的差异，采用各种沉淀剂或改变某些条件促使蛋白质抗
原成分沉淀，从而达到纯化的目的。如选用33～50％饱和度 的硫酸胺收集沉淀物；
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③ 凝胶层析法（分子筛层析）：蛋白质分子按大小被分离；
④ 离子交换层析；带电的生物大分子和离子交换色谱填料 上的离子基团进行交换而被分离纯化。以离子交换剂为固定 相，依据流动相中的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可 逆交换时的结合力大小的差别而进行分离；
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2）抗血清的采集
采集：颈动脉放血、心脏采血、静脉采血 分离：室温自然凝固1～2h，然后放4℃冰箱过夜，待血块收 缩后分离血清，有些血清须经56℃30min 使补体灭活。 保存：4℃保存—存放3个月至半年 低温保存（-70 ℃ ～-20 ℃ ）—2至3年，忌反复冻融 真空干燥保存—4-5年
细胞因子佐剂：
IL-2 IL-1 IFNr（羊痘病毒γ干扰素受体） CSF（集落刺激因子）等
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2、 佐剂的免疫生物学作用
①增强抗原免疫原性：使无或微弱免疫原性的物质变成持久或 强的免疫原； ②增强机体对抗原刺激的反应性：提高初次应答和再次应答所
产生的抗体滴度；
③改变抗体类型：使产生抗体由IgM型转变为IgG型； ④引起或增强迟发性超敏反应。
免疫间隔时间是影响抗体产生的重要因素，其中首次与第二次免疫的间隔
时间尤为重要，一般以10～20天为佳，二次后间隔时间一般为7～10天， 若间隔时间太长，则刺激减弱，抗体效价不高。
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（三）免疫血清的收集
1）采血前测抗体效价
在第2次加强免疫后2周，从兔耳缘静脉取2～3ml血，制备血清，检测
⑤ 亲和层析：利用生物大分子的生物特异性如抗原抗体、
激素受体、IgG和葡糖球菌蛋白A（SPA）； ⑥ 制备电泳技术。
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⑦ 其它
聚丙烯酰胺凝胶胶内蛋白 可将抗原所在的电泳条带（或蛋白点）切下,研磨后直接用以动物免疫。 NC膜结合蛋白 将含目的分子的蛋白进行SDS-PAGE电泳，转移至NC膜上，丽春红显色至清晰 显示目的条带，取目的条带置于加有PBS的1.5ml离心管中，用PBS洗至无色，继而 剪碎、研磨，用于动物免疫。
抗体效价。如未达到预期效价，需再进行加强免疫，直到满意时为止。当抗
体效价达到预期水平时，即可放血制备抗血清。 抗血清的效价：就是指血清中所含抗体的浓度或含量。效价测定的方法常
用的是放射免疫法，此法对所有的抗体均适用。某些由大分子（如蛋白类）
抗原所产生的抗体，可用双向扩散等方法测定。前者测定的效价极为精确。 而后者则粗糙得多。
单克隆抗体（monoclonal antibody, mAb）:由一个识别一种抗原表位的B细 胞克隆产生的同源抗体。高度均一、特异性强、效价高、少或无交叉反应 性。
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多克隆抗体（抗血清）的制备流程
抗原 半抗原+载体 佐剂
免疫动物（3-5次）
测效价
动物采血，分离血清
抗血清纯化、鉴定、保存
纯度鉴定：常用区带电泳法鉴定。
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3）半抗原
半抗原物质多数为低分子质量的物质，如：多糖、多肽、甾体激素、脂 肪胺、类脂质、核酸、某些药物及其它化学药品； 常用载体：蛋白质类如：牛血清白蛋白、人血清清蛋白、兔血清清蛋白
等。多肽聚合物：如多聚Lys（赖氨酸）
大分子聚合物：如羟甲基纤维素；
• 具有无毒性或副作用低的特点。
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1、佐剂的种类
佐剂一般包括以下几类： ①无机佐剂：如氢氧化铝、明钒等 ②生物性佐剂：如结核分枝杆菌、卡介苗、小棒状杆菌、百日咳杆菌、革兰 阴性杆菌内毒素、霍乱毒素的B亚单位、胞壁酰二肽和细胞因子等； ③人工合成佐剂： 如双链多聚肌苷酸：胞苷酸（poly I：C）、双链多聚腺苷
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二、动物免疫
（一）免疫动物的选择
选择动物时应考虑以下因素： ①抗原来源与动物种属的关系。抗原的来源与免疫动物种属差异越远，其免疫源 性越强，免疫效果越好，而同种系或亲缘关系越近，免疫效果越差。
②动物个体的选择。适龄、健康、体重符合要求的正常动物（以雄性为佳）；抗
体需要量少时，选用家兔、豚鼠和鸡等小动物；抗体需要量大时，可选用绵 羊、山羊、马、驴等大动物。
获得后立即去除表面的包膜或结缔组织以及大血管，在4 ℃水浴或冰浴中将
洗净的组织剪成小块，加入适量生理盐水，装入捣碎机破碎制成组织匀浆。 （2）细胞破碎：提取细胞可溶性抗原，需将细胞破碎，常用方法有冷热交替 法、超声破碎法，反复冻融法、自溶法和酶处理法等。
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（3）蛋白提纯