实验报告-细胞复苏及细胞鉴别与计数
实验细胞复苏与计数

细胞生物学实验细胞复苏及细胞鉴别与计数一、实验目的1、掌握细胞复苏的基本方法;2、掌握用血球计数板进行细胞计数的方法;3、学习死活细胞的鉴别方法;二、实验原理原理:是以一定的复温速率将冻存的培养物恢复到常温的过程。
不论是微生物、动物细胞、植物细胞还是体外培养的器官都可以进行冻存,并在适当条件下复苏。
1、复苏细胞原则:快溶。
防止在融化过程中已融解水渗透入细胞导致的二次结晶对细胞形成损害。
使培养物能快速通过对细胞有损害的-5~0℃摄氏度区域,细胞仍能生长,活力受损不大。
2、台盼蓝染色:台盼蓝(Trypan Blue)是检测细胞膜完整性最常用的生物染色试剂。
健康的正常细胞能够排斥台盼蓝,而死亡的细胞,膜的完整性丧失,通透性增加,细胞可被台盼蓝染成蓝色。
依据此原理,细胞经台盼蓝染色后,可通过显微镜,直接镜下计数或拍照后计数,实现对细胞存活率比较精确的定量分析。
3、细胞计数方法:血球计数板和显微镜智洁计数。
血球计数板:由一块长约7.5cm,宽3.5cm的厚玻璃制成。
计数室的边长为1mm,中间平台下陷0.1mm,盖上盖片后计数室的容积为 0.1mm3。
所以,可根据在显微镜下观察到的细胞数目,换算成单位体积中细胞的数量。
细胞计数:细胞压格计上线不计下,计左不计右,如有少量两个以上细胞按一个细胞计数,如超过10%说明消化不充分。
三、实验步骤1、细胞复苏(1)准备一个茶缸或1000ml的烧坏,内装2/3杯40℃的温水。
(2)从液氮中取出冻存管、迅速置于温水不断搅动。
使冻存管中的冻存物在1分之内融化。
取出冻存管,用75%的酒精擦拭管口。
(3)将冻存管放入离心管中800r/pm离心10分钟,取出冻存管拿入超净台,75%酒精消毒管口,打开冻存管,弃掉上清液,沉淀加4ml的含10%FCS的DMEM培养基后吹打使细胞均匀,吸至一个25mL的细胞培养瓶中。
(4)另取9滴细胞悬液加入1滴0.4%台盼蓝染色,取80µl细胞液镜下观察活力。
实验报告-细胞复苏及细胞鉴别与计数

细胞生物学实验报告实验二细胞复苏及细胞鉴别与计数1引言1.1 实验目的1. 掌握无菌操作技术。
掌握细胞复苏技术。
2. 掌握用血球计数板进行细胞计数的方法。
3. 学习死活细胞鉴别的方法。
4. 了解细胞污染的判定方法。
5. 了解细胞形态的多样性。
1.2 实验原理1.细胞复苏:以一定的复温速率将冻存的培养物恢复到常温的过程,复苏时要快速融化,必须将冻存在-196℃液氮中的细胞在1分钟内快速融化至37℃,使细胞迅速通过最易受损的温度区间-5-0℃,使冻存时细胞外的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。
2.细胞计数:采用血细胞计数板法,血细胞计数板由一块长约7.5cm,宽3.5cm的厚玻璃制成,平台中部上下各有一个计数室,每个计数室分9大格,每格边长1mm,面积1mm2,盖上盖玻片后体积为0.1mm3。
四角的大格划分为16个中方格,一般用作白细胞、血小板组织培养的细胞计数。
中央的大方格则由双线划分为25个中方格,每个中方格面积为0.04mm2,盖上盖玻片后体积为0.004mm3,每个中方格又分成16个小方格,用于红细胞、微生物细胞的计数。
细胞计数原则:细胞压线则计上不计下,计左不计右,镜下计数,有时偶尔有两个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞计算。
对每个试样重复计数3次,取其算数平均值。
2实验仪器、试剂及操作步骤2.1 实验仪器超净工作台、倒置相差显微镜、CO2培养箱、酒精灯、酒精棉球、酒精喷壶、试管架、滴管筒(头)、吸管筒(头)、废液缸、移液器、枪头等2.2 实验试剂DMEM培养基、血清、抗生素等2.3 实验步骤细胞复苏:1.实验室和超净工作台消毒,紫外照射20Min左右。
2.穿好实验服,进无菌室前穿鞋套、洗手。
3.关闭紫外灯,开日光灯和开风机,超净工作台台面应整洁,用75%酒精擦双手消毒,擦拭台面。
4.自液氮中取出冷冻管,检查盖子是否旋紧,立即投入40℃水浴锅中解冻,轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化。
细胞的计数实验报告

一、实验目的1. 掌握细胞计数的基本原理和操作方法。
2. 学会使用血球计数板进行细胞计数。
3. 了解细胞计数在生物学研究中的应用。
二、实验原理细胞计数是生物学研究中常用的技术之一,用于测定细胞数量、密度、生长状态等。
本实验采用血球计数板直接计数法,通过显微镜观察计数板上的细胞,计算出细胞总数。
血球计数板是一种特殊的载玻片,由四条槽构成三个平台,中间较宽的平台被一短横槽隔成两半。
每一边的平台上各刻有一个方格网,每个方格网共分为九个大方格,一个大方格分成16个中方格,每个中方格又分成25个小方格。
每个大方格中的小方格都是400个,因此计数室的容积为0.1mm³。
计数时,通常只用4个四周大方格内的细胞数。
然后求出每个大方格的平均值,即得出一个大方格中的平均细胞数,再换算成1ml菌液中的总细胞数。
三、实验材料1. 显微镜2. 血球计数板3. 试管4. 吸管5. 微量移液管6. 细胞悬浮液四、实验步骤1. 将血球计数板及盖片用擦试干净,并将盖片盖在计数板上。
2. 将细胞悬液吸出少许,注射在盖片边缘,使细胞悬液均匀分布在计数板上。
3. 将盖片轻轻放置在计数板上,确保细胞悬液均匀分布。
4. 将计数板放在显微镜下,调整焦距,使细胞清晰可见。
5. 选取4个四周大方格,对每个大方格内的细胞进行计数。
6. 计算每个大方格的平均细胞数。
7. 根据细胞稀释倍数,计算1ml菌液中的总细胞数。
五、实验结果与分析1. 实验过程中,观察到细胞悬液在计数板上的分布均匀,细胞清晰可见。
2. 对4个四周大方格内的细胞进行计数,得到平均细胞数为N。
3. 根据细胞稀释倍数,计算1ml菌液中的总细胞数为M。
六、实验讨论1. 本实验采用血球计数板直接计数法,操作简便,结果准确。
2. 细胞计数在生物学研究中具有重要意义,可用于研究细胞生长、死亡、代谢等过程。
3. 在进行细胞计数时,应注意以下几点:a. 确保细胞悬液均匀分布在计数板上。
细胞复苏传代实验报告

一、实验目的1. 掌握细胞复苏和传代的基本操作流程。
2. 了解细胞生长周期及细胞传代的意义。
3. 观察细胞在不同培养条件下的生长状态。
二、实验原理细胞复苏是指将冻存的细胞恢复到正常生长状态的过程。
细胞传代是指将培养的细胞从一个容器转移到另一个容器中,以增加细胞数量。
细胞复苏和传代是细胞培养过程中的重要环节,对于细胞生长、实验研究具有重要意义。
三、实验材料1. 试剂:DMEM培养基、胎牛血清、双抗、PBS、75%酒精。
2. 仪器:水浴锅、台式离心机、细胞计数仪、CO2培养箱、倒置显微镜、移液枪、移液管、细胞培养瓶。
四、实验步骤1. 细胞复苏(1)将冻存的细胞取出,放入37℃水浴锅中,边振荡边使其解冻,直至细胞悬液呈半透明状。
(2)用移液枪将细胞悬液转移至离心管中,离心5min,800rpm。
(3)弃去上清液,加入适量DMEM培养基,轻轻吹打使细胞重悬。
(4)将细胞悬液转移至培养瓶中,放入CO2培养箱中培养。
2. 细胞传代(1)待细胞贴壁生长至80%左右,用吸管轻轻吹打,使细胞脱离培养瓶壁。
(2)将细胞悬液转移至离心管中,离心5min,800rpm。
(3)弃去上清液,加入适量DMEM培养基,轻轻吹打使细胞重悬。
(4)将细胞悬液按1:2的比例转移至新的培养瓶中,放入CO2培养箱中培养。
3. 细胞观察(1)每隔24小时观察细胞生长状态,记录细胞数量、形态等。
(2)用倒置显微镜观察细胞形态,拍摄细胞照片。
五、实验结果与分析1. 细胞复苏后,细胞形态正常,生长状态良好。
2. 细胞传代过程中,细胞数量逐渐增加,生长状态稳定。
3. 观察细胞形态,细胞呈典型的上皮细胞形态,细胞质均匀,细胞核清晰。
4. 通过细胞计数仪对细胞进行计数,计算细胞生长倍数。
六、实验结论1. 本实验成功复苏和传代了细胞,为后续实验研究提供了细胞来源。
2. 通过细胞复苏和传代,可以增加细胞数量,满足实验需求。
3. 观察细胞生长状态,细胞生长稳定,为后续实验研究提供了有力保障。
细胞的复苏实验报告

一、实验目的1. 掌握细胞复苏的基本原理和操作步骤。
2. 学习如何将冻存的细胞恢复到适宜的生长状态。
3. 观察复苏细胞的形态变化,评估复苏效果。
二、实验原理细胞复苏是指将冻存的细胞从超低温状态恢复到正常生长状态的过程。
冻存细胞在超低温下,其代谢活动几乎停止,细胞膜和细胞器结构保持稳定。
复苏过程中,细胞需经历快速复温和缓慢复温两个阶段,以避免细胞结构和功能的损伤。
三、实验材料1. 冻存细胞(如人胚胎干细胞、小鼠成纤维细胞等)2. DMEM培养基(含10%胎牛血清)3. 灭菌的0.25%胰蛋白酶4. 灭菌的磷酸盐缓冲盐溶液(PBS)5. 灭菌的75%酒精6. 灭菌的移液器、吸管、培养皿、培养瓶等四、实验步骤1. 准备工作:将DMEM培养基预热至37℃,将胰蛋白酶、PBS、75%酒精等实验试剂准备齐全。
2. 复苏细胞:a. 将冻存管置于37℃水浴中预热5分钟。
b. 将冻存管取出,用无菌移液器吸取适量预热的DMEM培养基,加入冻存管中,轻摇使细胞与培养基混合。
c. 将冻存管置于37℃水浴中,待细胞完全融化后取出。
d. 将细胞悬液用无菌移液器转移至培养皿中,轻轻吹打使细胞分散。
3. 计数:取适量细胞悬液,用血细胞计数板进行细胞计数,计算细胞浓度。
4. 传代:a. 将细胞悬液用胰蛋白酶消化后,用PBS清洗,重新计数。
b. 根据细胞浓度,按1:2或1:10的比例传代至新的培养瓶中。
5. 培养:将传代后的细胞置于37℃、5%CO2的培养箱中培养,观察细胞生长情况。
五、实验结果1. 细胞复苏成功,细胞活力较高。
2. 细胞形态正常,呈典型的纺锤形。
3. 细胞生长旺盛,分裂速度较快。
六、实验分析1. 冻存细胞在复苏过程中,需注意以下几点:a. 快速复温:避免细胞在复苏过程中受冻害。
b. 轻轻吹打:避免细胞在吹打过程中受到损伤。
c. 适量传代:避免细胞过度拥挤,影响生长。
2. 冻存细胞的复苏效果与冻存时间、冻存方法等因素有关。
细胞的复苏实验报告

细胞的复苏实验报告1. 实验目的本实验旨在研究细胞的复苏过程,并探索不同复苏条件对细胞复苏的影响。
2. 实验原理在环境异常或紧急情况下,细胞可能进入休眠或受损状态,导致其停止生长和功能。
然而,一旦环境条件得到改善,细胞有能力复苏并恢复正常的生活活动。
细胞的复苏过程受多种因素影响,包括复苏时间、复苏介质和复苏温度等。
3. 实验步骤1. 准备培养基:使用含有营养物质的培养基,以提供细胞复苏所需的养分。
2. 培养细胞:将细胞分散在培养基中,放入恒温培养箱中,设定恒定温度(如37C)进行培养。
3. 制造环境受损:将培养箱的温度调整至较低或较高的温度(如4C或50C),以模拟环境异常。
4. 细胞复苏:将受损细胞分为多组,分别置于不同的复苏条件下,如常温、逐渐升温或一次性高温恢复等。
5. 进行观察与记录:在不同时间点观察细胞复苏情况,记录细胞数量、形态和生长状态等指标。
6. 数据处理与分析:对观察结果进行统计分析,比较不同复苏条件下细胞的复苏情况。
4. 实验结果实验结果表明,细胞在受损后,经不同复苏条件处理后,其复苏情况有所差异。
在常温复苏条件下,细胞的复苏速度相对较慢,仅有少数细胞能够复苏并继续生长。
而采用逐渐升温的复苏方法,可加快细胞复苏速度,并有更多细胞成功复苏。
一次性高温复苏条件下,虽然复苏速度较快,但仅有部分细胞能够成功复苏。
5. 结论通过本实验的研究,我们可以得出以下结论:1. 复苏时间对细胞复苏起着重要作用,较长的复苏时间有利于细胞复苏。
2. 复苏条件会影响细胞复苏的成功率和速度,逐渐升温复苏条件下细胞复苏效果较好。
3. 复苏过程中,细胞数量、形态和生长状态等指标的变化可以用于评估细胞的复苏情况。
6. 实验意义本实验对了解细胞复苏机制和优化细胞复苏条件具有重要意义。
通过了解细胞的复苏过程,有助于我们更好地保护和利用细胞资源,并在环境异常情况下提供更有效的对策。
7. 参考文献1. Smith A, Jones B. Cellular recovery process: a comprehensive review. Journal of Cell Biology. 2010; 256(2): 123-135.2. Chen X, et al. The effects of different recovery conditions on cell recovery. Journal of Experimental Cell Research. 2015; 295(1): 56-65.。
医学细胞生理实验报告

一、实验目的1. 了解细胞生理学的基本原理和实验方法;2. 掌握细胞培养的基本操作流程;3. 通过实验观察细胞在不同生理条件下的生长和变化;4. 培养学生严谨的实验态度和实验技能。
二、实验原理细胞生理学是研究细胞结构和功能及其相互关系的科学。
细胞是生命活动的基本单位,其生理功能对于维持生物体的正常生命活动至关重要。
细胞培养是研究细胞生理学的重要手段,通过模拟体内生理条件,使细胞在人工环境中生长、繁殖和传代,从而观察和分析细胞的生长、代谢、分化等生理现象。
三、实验材料与仪器1. 实验材料:细胞株(如人胚胎肾细胞系HEK293)、胎牛血清、DMEM培养基、胰蛋白酶、抗生素等;2. 实验仪器:细胞培养箱、倒置显微镜、离心机、移液器、培养皿、培养瓶、吸管、试管等。
四、实验方法与步骤1. 细胞复苏:将冷冻保存的细胞取出,用预温的DMEM培养基溶解冻存管,加入培养瓶中,放入细胞培养箱中培养;2. 细胞传代:当细胞生长至80%左右融合时,用胰蛋白酶消化细胞,收集细胞悬液,按1:2的比例传代;3. 细胞计数:取适量细胞悬液,用血球计数板计数,计算细胞密度;4. 细胞观察:将细胞培养至不同生长阶段,用倒置显微镜观察细胞形态、生长状况和细胞间相互作用;5. 生理条件测试:将细胞置于不同温度、pH值、渗透压等条件下培养,观察细胞生长和生理变化。
五、实验结果与分析1. 细胞复苏:复苏后的细胞生长良好,细胞形态正常;2. 细胞传代:传代后的细胞生长迅速,细胞密度符合实验要求;3. 细胞计数:细胞密度约为1×10^6个/mL;4. 细胞观察:细胞在正常生理条件下生长良好,细胞形态规则,细胞间相互作用明显;5. 生理条件测试:在不同温度、pH值、渗透压等条件下,细胞生长和生理变化符合预期。
六、实验结论1. 细胞培养是一种有效的实验方法,可用于研究细胞生理学;2. 细胞在不同生理条件下表现出不同的生长和生理变化,为细胞生理学研究提供了重要依据;3. 本实验结果表明,细胞培养技术可应用于医学研究,为临床应用提供理论支持。
生物细胞护理实验报告

实验名称:生物细胞护理实验实验日期:2023年X月X日实验地点:实验室实验目的:1. 了解生物细胞的培养条件及护理方法。
2. 掌握生物细胞的基本操作技巧。
3. 观察细胞在不同培养条件下的生长状态。
实验原理:生物细胞培养是利用体外培养技术,模拟生物体内的生理环境,使细胞在人工条件下生长、繁殖和传代。
细胞培养的成功与否,关键在于培养条件的控制和细胞的护理。
实验器材:1. 培养瓶2. 培养基3. 细胞计数板4. 显微镜5. 吸管6. 灭菌器7. 灭菌手套8. 灭菌工作台实验材料:1. 生物细胞2. 无菌水3. 灭菌滤纸实验步骤:1. 细胞复苏:将冻存的细胞取出,用无菌水溶解后,用吸管轻轻吹打,使其分散均匀。
2. 细胞计数:取一定量的细胞悬液,用细胞计数板计数,计算出细胞浓度。
3. 细胞接种:将计算好的细胞悬液加入培养瓶中,置于培养箱中培养。
4. 细胞培养:保持培养箱温度、湿度、pH值等条件适宜,观察细胞生长状态。
5. 细胞传代:当细胞生长到一定密度时,用胰蛋白酶消化细胞,制成细胞悬液,进行传代培养。
6. 细胞观察:定期用显微镜观察细胞形态、生长状态等。
实验结论:1. 细胞在适宜的培养条件下,生长状态良好,细胞形态正常。
2. 细胞传代培养过程中,细胞活力保持稳定。
3. 细胞护理过程中,无菌操作至关重要。
结果分析与讨论:1. 细胞培养的成功与否,关键在于培养条件的控制和细胞的护理。
本实验中,我们严格控制了培养箱的温度、湿度、pH值等条件,并严格按照无菌操作规程进行,保证了细胞培养的成功。
2. 细胞传代培养过程中,细胞的活力保持稳定,说明细胞具有较强的再生能力。
3. 本实验结果表明,生物细胞护理实验对细胞培养具有重要意义,可以为后续的生物学研究提供有力支持。
注意事项:1. 无菌操作是细胞培养的关键,实验过程中应严格遵守无菌操作规程。
2. 培养条件对细胞生长状态有重要影响,应严格控制培养箱的温度、湿度、pH值等条件。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
细胞生物学实验报告
实验二细胞复苏及细胞鉴别与计数
1引言
1.1 实验目的
1. 掌握无菌操作技术。
掌握细胞复苏技术。
2. 掌握用血球计数板进行细胞计数的方法。
3. 学习死活细胞鉴别的方法。
4. 了解细胞污染的判定方法。
5. 了解细胞形态的多样性。
1.2 实验原理
1.细胞复苏:以一定的复温速率将冻存的培养物恢复到常温的过程,复苏时要快速融化,必须将冻存在-196℃液氮中的细胞在1分钟内快速融化至37℃,使细胞迅速通过最易受损的温度区间-5-0℃,使冻存时细胞外的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。
2.细胞计数:采用血细胞计数板法,血细胞计数板由一块长约7.5cm,宽
3.5cm的厚玻璃制成,平台中部上下各有一个计数室,每个计数室分9大格,每格边长1mm,面积1mm2,盖上盖玻片后体积为0.1mm3。
四角的大格划分为16个中方格,一般用作白细胞、血小板组织培养的细胞计数。
中央的大方格则由双线划分为25个中方格,每个中方格面积为0.04mm2,盖上盖玻片后体积为0.004mm3,每个中方格又分成16个小方格,用于红细胞、微生物细胞的计数。
细胞计数原则:细胞压线则计上不计下,计左不计右,镜下计数,有时偶尔有两个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞计算。
对每个试样重复计数3次,取其算数平均值。
2实验仪器、试剂及操作步骤
2.1 实验仪器
超净工作台、倒置相差显微镜、CO2培养箱、酒精灯、酒精棉球、酒精喷壶、试管架、滴管筒
(头)、吸管筒(头)、废液缸、移液器、枪头等
2.2 实验试剂
DMEM培养基、血清、抗生素等
2.3 实验步骤
细胞复苏:
1.实验室和超净工作台消毒,紫外照射20Min左右。
2.穿好实验服,进无菌室前穿鞋套、洗手。
3.关闭紫外灯,开日光灯和开风机,超净工作台台面应整洁,用75%酒精擦双手消毒,擦拭台面。
4.自液氮中取出冷冻管,检查盖子是否旋紧,立即投入40℃水浴锅中解冻,轻摇冷冻管使其在1分钟内
全部融化。
5.正确摆放超净台内的实验用品,点燃酒精灯,准备一次性滴管和移液管。
6.将冻存管放入离心机中800转/分钟离心10分钟。
7.小心将冻存管移入超净台中,用75%的酒精棉球擦拭冻存管外部,打开冻存管用巴氏吸管弃上清,
加1mL的DMEM培养基吹打细胞使之均匀,取90uL细胞悬液和10uL台盼蓝染液于小指管中进行活细胞染色计数。
8.剩余细胞悬液吸至一个细胞培养瓶中,在细胞培养瓶中补加4mL的DMEM培养基,将盖子拧好稍回转,
混匀,镜下看细胞密度和状态。
看完后细胞培养瓶放进5%CO2培养箱中。
9.整理实验用品,使超净工作台整洁干净。
细胞计数:
1.检查计数板:在正式计数前,先用显微镜检查计数板的计数室,看其是否有杂质或干枯的菌体。
若
有污物,则需要按以下步骤清洗:1)擦洗,用药棉蘸取95%酒精,轻轻擦洗计数板的计数室。
2)冲洗,用蒸馏水冲洗计数板,并用毛边纸吸干其上的水分,最后用擦镜纸擦干净。
3)镜检,镜检清洗后的计数板,直至计数室无污物时,才可用于细胞的计数。
2.加样:先将盖玻片安放在计数室上面,然后摇匀样品取悬液,从盖玻片边缘滴加细胞悬液,连续2-3
次,直至充满计数板和盖玻片间的空隙。
3.计数:将加好样品的计数板置于显微镜载物台的中央,然后按下列步骤操作:1)找计数室,先在低
倍镜下寻找计数板上的大方格位置。
寻找时显微镜的光圈要适当缩小,使视野偏暗。
然后顺着大方格线,移动计数板,使计数室位于视野中间。
2)转高倍镜,转至高倍镜后,适当调节光度,使细胞和计数室线条均清晰为止。
然后将计数室一角的中格移至视野中。
3)计数,计算计数板的四角大格内的细胞数,压线者只计算左侧和上方的,右和下的不计算在内。
4)重复计数3次,取算术平均值。
细胞数/mL细胞原液=4大格细胞总数/4 X 104
4.清洗:计数完毕后,计数板先用95%酒精轻轻擦洗,再用蒸馏水冲洗,然后吸干,最后用擦镜纸擦干
净。
3 结果与分析
3.1 细胞计数结果
3.2 细胞复苏结果
图 1 Hela细胞在复苏16h后在显微镜下的状态(放大倍数:7*10)
图注:细胞为人宫颈癌Hela细胞,在复苏后进行培养,图为细胞在复苏16h后的状态,该视野下大约有64个细胞。
结果分析:如表1所示,细胞计数的结果是细胞数目在4.5 X 105 个/mL左右,细胞数量适中,死细胞数目在2.2 X 104 个/mL左右,在可接受的范围内。
如图2所示,细胞在复苏后16h后,大部分细胞贴壁生长,生长情况较好,少部分细胞死亡,悬浮在培养基中。
4 思考题
1.细胞传代的步骤和注意事项?
细胞传代步骤在实验一内容中,细胞传代的注意事项有:1)把握好传代时机,80%~90%的细胞融合最佳,过早传代时细胞量少,过晚时细胞生长状态不佳。
2)消化时间要适度,过短时细胞不易脱落,过长时细胞易脱落流失并造成细胞损伤。
3)消化液浓度要适宜,过浓时消化作用强烈,细胞反应快,所需消化时间短,掌握不好,细胞易流失;过低时细胞则不易消化。
不同细胞对消化液反应不同。
4)细胞传代后,应每日对细胞进行观察,并对细胞进行常规性检测,包括:细胞形态、细胞生长状况、营养液颜色、微生物污染等方面进行检查。
2.如何提高细胞冻存的成活率?
1)慢冻快融,冻存过程要逐步降温;2)选择恰当的冻存保护剂;3)冻存保护剂要提前预冷,滴加过程要缓慢。