梅毒螺旋体特异性抗体检验
梅毒螺旋体特异抗体测定-凝集、印迹法
梅毒是一种由梅毒螺旋体引起的性传播疾病，通过性行为传播，也可以通过母婴传播。
梅毒螺旋体特异抗体测定是一种常见的临床检测方法，用于诊断患者是否感染了梅毒螺旋体。
主要有凝集法和印迹法两种。
1.凝集法凝集法是一种常规的梅毒螺旋体特异抗体测定方法。
它利用患者血清中的梅毒螺旋体特异抗体与抗原结合形成可见凝集的原理，进行梅毒的诊断。
这种方法简单、快速，但需要有经验的医务人员进行操作和解读结果，凝集法在一些医疗机构仍然被广泛应用。
2.印迹法印迹法是一种新兴的梅毒螺旋体特异抗体测定方法。
它利用患者血清中的抗原与梅毒螺旋体特异抗体之间的特异性反应，通过免疫印迹技术进行定量化测定。
印迹法具有灵敏度高、准确度好的特点，能够有效地检测梅毒感染，有望成为未来梅毒诊断的主流方法之一。
3.比较凝集法和印迹法在梅毒螺旋体特异抗体测定中各有优劣。
凝集法操作简单，成本低，适用于部分基层医疗机构。
但凝集法的灵敏度和特异性相对较低，容易受到操作人员的经验水平和环境条件的影响。
相比之下，印迹法的准确度更高，可以减少假阳性和假阴性结果的发生，同时还可以进行定量分析，有助于监测患者的治疗效果。
但印迹法的成本较高，需要更为专业的设备和技术支持。
结论随着医学技术的不断进步，梅毒螺旋体特异抗体测定方法也在不断优化和更新。
凝集法和印迹法各有优劣，可以根据不同的临床需求和实际情况进行选择。
未来，随着印迹法技术的进步和成本的降低，相信印迹法将会成为梅毒螺旋体特异抗体测定的主流方法，为临床诊断和治疗提供更为准确、快速的支持。
梅毒是一种性传播疾病，由梅毒螺旋体引起，主要通过性行为传播，也可以通过母婴传播。
梅毒在临床上通常分为早期梅毒、中期梅毒和晚期梅毒三个阶段。
早期梅毒症状不明显或类似于其他疾病，因此诊断较为困难。
但在患者感染梅毒后，身体会产生梅毒螺旋体特异抗体，因此梅毒螺旋体特异抗体测定成为了一种常见的临床检测方法，用于诊断患者是否感染了梅毒螺旋体。
凝集法和印迹法是目前常用的梅毒螺旋体特异抗体测定方法。
3种方法在梅毒螺旋体特异性抗体检测中的意义
3种方法在梅毒螺旋体特异性抗体检测中的意义赵晓慧【摘要】目的：探讨化学发光法（CLIA）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、明胶颗粒凝聚集试验（TPPA）3种方法在梅毒螺旋体特异性抗体检测中的意义。
方法随机选取该院2012年5月至2015年5月采集的血清样本360例，分别运用CLIA、ELISA与TPPA 3种方法对梅毒螺旋体特异性抗体进行检测，并统计分析3种方法敏感性和特异性。
结果 CLIA、ELISA、TPPA经重组免疫印迹法确诊前、后阳性率差异无统计学意义（P＞0．05）；CLIA敏感性、特异性（99．4％、100．0％）均显著高于ELISA（97．8％、95．7％）和 TPPA（97．2％、97．5％），假阳性率、假阴性率均显著低于ELISA和TPPA ，差异均有统计学意义（P＜0．05）；ELISA、TPPA敏感性、特异性、假阳性率、假阴性率之间差异无统计学意义（P＞0．05）。
结论 CLIA较ELISA、TPPA对梅毒螺旋体特异性抗体检测敏感性和特异性更高，值得临床推广。
【期刊名称】《检验医学与临床》【年(卷),期】2016(013)009【总页数】2页(P1260-1261)【关键词】CLIA;ELISA;TPPA;梅毒螺旋体特异性抗体;检测;意义【作者】赵晓慧【作者单位】北京市顺义区中医医院检验科 101300【正文语种】中文梅毒属于1种慢性、系统性性传播疾病，诱发因素为梅毒螺旋体。
世界卫生组织统计[1]，世界范围内每年感染梅毒患者已达到1 200万。
国内多家医院规定，梅毒螺旋体检验在创伤性检查及手术输血过程中必不可少，以有效控制梅毒的传染。
酶联免疫吸附试验(ELISA)、明胶颗粒凝聚集试验(TPPA)是临床常用梅毒螺旋体检验方法[2]。
近年来，免疫学技术及分子生物学不断发展，梅毒螺旋体临床研究受到极大推动，梅毒诊断方法不断完善，具有较高敏感性和特异性，且简便、快捷[3]。
化学发光法(CLIA)属于1种新诊断方法。
梅毒螺旋体抗体TP检测
梅毒螺旋体抗体TP检测一、检验原理:梅毒螺旋体抗体检测试剂（乳胶法）采用高度特异性的抗体抗原反应及免疫层析分析技术，试剂含有被预先固定于膜上测试区（T）的梅毒重组抗原和包被在聚酯膜上的梅毒重组抗原乳胶颗粒。
测试时，样本滴入试剂加样处与预包被的乳胶颗粒结合的梅毒重组抗原反应。
然后，混合物随之在毛细效应下向上层析，如果是阳性，乳胶-梅毒重组抗原在层析过程中先与标本中的梅毒抗体结合，随后结合物会被固定在膜上的梅毒重组抗原结合，在测试区内（T）会出现一条红色条带。
这条带是梅毒重组抗原-梅毒抗体-梅毒重组抗原乳胶颗粒的复合物在膜上结合形成的。
如是阴性，则测试区内（T）将没有红色条带。
无论梅毒抗体是否存在于标本血样中，乳胶-生物素在层析过程中都会被固定在膜质控区内上的链霉亲和素结合，在质控区内（C）会出现一条红色条带。
质控区内（C）所显现的红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。
二、样本要求:1、梅毒螺旋体抗体检测试剂（乳胶法）可用于检测全血、血清和血浆样本。
2、检测用的全血、血清和血浆标本必须收集在一个干净、干燥的容器中。
3、为保证样本组分定，可以采用素、EDTA-，柠酸三销作为抗凝剂。
4、干扰物质为抗坏血酸、血色素、胆红素、草酸、人血清白蛋白、甘油三脂。
5、检测时只能使用未溶血的标本，严重溶血的标本重新采集血样。
6、样本收集后应尽可能马上使用，不能在室温下长时间有放。
指尖、耳垂末梢或静脉标本采集后应尽可能立即使用，抗凝血应在24小时内使用以避免溶血；血清或血浆标本可在2-8℃冷藏存放3天，长期保存需冷冻于冻于-20℃。
冷藏或冷冻样本应在检测前恢复到室温升充分混匀，样本切忌反复冻融。
全血标本不能冷冻保存。
三、检验方法:标本收集全血标本的采集：指尖、耳垂末梢或静脉标本采集后应尽可能立即使用，抗凝血应在24小时内使用以避免溶血。
血清/血浆标本的收集：血清-血浆标本优静脉采血后离心获得，标本再2-8℃可保存3天。
三种梅毒血清学检验方法在梅毒检测中的应用
三种梅毒血清学检验方法在梅毒检测中的应用梅毒是一种由梅毒螺旋体细菌引起的性传播疾病，其主要途径是性接触。
梅毒的早期症状可能很轻微，甚至不易察觉，但如果不及时治疗，梅毒会逐渐发展为严重的并发症，影响患者的生活质量甚至生命健康。
及早检测和治疗梅毒至关重要。
而血清学检验方法是目前梅毒检测的主要手段之一，三种常用的梅毒血清学检验方法包括血浆螺旋体抗体试验（RPR）、螺旋体特异性抗体试验（FTA-ABS）和改良螺旋体暗视野试验（MHA-TP）。
本文将对三种梅毒血清学检验方法在梅毒检测中的应用进行介绍和分析。
一、血浆螺旋体抗体试验（RPR）血浆螺旋体抗体试验（RPR）是目前常用的梅毒血清学检验方法之一，它可以快速检测出患者体内的非特异性抗体反应。
RPR检测的原理是利用碳颗粒结合胶体金技术测定患者血清或血浆中的非特异性抗体反应，通过观察血清样品和RPR抗原之间的物质交互作用来判断患者是否感染了梅毒螺旋体。
RPR检测方法具有操作简单、敏感度高和结果快速的特点，因此在临床检测中得到了广泛的应用。
在梅毒的初期感染阶段，患者体内可能已经产生了非特异性抗体反应，因此RPR检测方法对于早期患者的检测具有较高的准确性。
RPR检测结果还可以用于监测患者的治疗效果和疾病的进展情况。
但需要注意的是，RPR检测方法可能会出现假阳性反应，因此在诊断过程中需要结合临床症状和其他检测结果来综合判断。
血浆螺旋体抗体试验（RPR）在梅毒检测中具有重要的临床应用价值。
二、螺旋体特异性抗体试验（FTA-ABS）虽然FTA-ABS检测方法比RPR检测方法更为特异和敏感，但其检测过程相对复杂，需要使用荧光染色和免疫分析等高级技术，因此成本较高。
由于FTA-ABS检测方法只能检测出患者体内的特异性抗体反应，不能用于监测治疗效果和疾病进展情况。
尽管如此，螺旋体特异性抗体试验（FTA-ABS）在梅毒检测中仍然具有重要的临床应用价值。
三、改良螺旋体暗视野试验（MHA-TP）与FTA-ABS检测方法相比，MHA-TP检测方法的操作相对简单，成本较低，因此在一些医疗资源相对匮乏的地区仍然是一种常用的检测方法。
探讨梅毒特异性抗体检测方法
探讨梅毒特异性抗体检测方法摘要】目的比较两种血清梅毒抗体检测方法的性能。
方法采用酶联免疫吸附试验（ELISA）和梅毒螺旋体特异性抗体明胶凝集试验（TPPA）对110份梅毒患者血清和890份健康人血清进行检测比较。
结果 TP-ELISA共检出梅毒螺旋体抗体阳性109份、TPPA共检出108份阳性，两法的阳性检出率分别为99.1%和98.2%。
TP-ELISA从890份健康体检者中检出2份阳性，TPPA未检出阳性，后经确认2例为假阳性，TP-ELISA的假阳性率为0.22%。
结论 ELISA和TPPA都具有较高的敏感性和特异性，两法结果差异无统计学方法（P>0.05）。
【关键词】ELISA TPPA 梅毒抗体苍白密螺旋体引起的性传播疾病，不但引起人类全身性疾病危害人们的健康，同时还传播给下一代。
近年来发病率有上升趋势。
因此梅毒的早期诊断和及时治疗已成为当前重要问题。
机体感染梅毒螺旋体后可产生非特异性抗类脂质抗体和特异性抗螺旋体抗体，实验室检测梅毒抗体阳性是诊断梅毒的重要依据之一。
目前用于梅毒血清学检验方法较多，主要包括非梅毒螺旋体抗体血清试验和梅毒螺旋体抗体血清试验。
不同的检测方法都有其特殊的临床诊断价值，实验室如何更合理地选用检测方法，避免漏诊、漏诊而产生的医患纠纷等问题是非常重要的。
为此，我们就如何更合理地利用梅毒酶联免疫吸附试验（TP-ELISA）、梅毒螺旋体血球凝集试验（TPPA）两种最常用的不同检测方法对梅毒辅助诊断符合率进行比较分析。
1 资料与方法1.1标本来源 1000份血清标本来自献血者和临床患者，男618例、女382例，其中包括110份梅毒患者血清、890份健康献血者血清。
1.2 试剂 ELISA检测试剂为上海科华公司产品，TPPA试剂由日本富士瑞必欧株式社提供，所用试剂均在有效期内。
1.3 方法所有标本均采用ELISA和TPPA进行血清梅毒螺旋体抗体平行检测，具体操作和结果判定均按试剂盒说明书进行。
梅毒标准操作程序
梅毒螺旋体特异性抗体检测1. 实验原理梅毒的病原体是梅毒螺旋体（Trp-ponema palidum)，其表面有特异性抗原，能刺激机体产生特异性抗体。
本试剂采用胶体金免疫检测技术，定性检测人全血、血清、血浆样本中的梅毒螺旋体特异性抗体，用于梅毒感染的辅助诊断。
2. 标本采集标本采集前病人准备：空腹采血标本种类：血清或EDTA抗凝血浆标本要求：检测标本可以是血清，对于大范围筛选实验，也可用含EDTA的血浆。
如果出现可疑结果，用血清标本来确证。
用含抗凝剂（EDTA）的试管收集血液，离心收集血浆，在24小时内检测。
3. 标本储存：血清于2-8℃可存放48小时，在-20℃可存放4周；血浆则用含抗凝剂（EDTA）的试管收集血液，离心收集血浆，在24小时内检测。
4. 标本运输：室温运输。
5. 标本拒收标准：溶血、脂血或污染标本。
6. 试剂试剂名称：梅毒螺旋体抗体诊断试剂试剂生产厂家：艾博生物医药（杭州）有限公司包装规格：50人份试剂盒组成：梅毒螺旋体抗体检测试剂50人份，一次性塑料吸管50支、缓冲液2瓶、记录表5张、使用说明书。
试剂储存条件及有效期存放于4-30℃，有效期为24个月，禁止冷冻和过期后使用。
7. 操作步骤定性检测检测前将试剂、样本、和缓冲液恢复至室温从原包装箔袋中取出试剂条将试剂放置在干净平坦的台面上，垂直滴加2滴（约50ml）样本置于加样区，再加一滴缓冲液，同时开始计时。
等待红色条带的出现，检测结果应在10-30分钟内判读。
8、结果判定阳性（+）：两条红色条带出现。
一条位于检测区（T）内，另一条位于质控区（C）。
表明梅毒抗体阳性。
阴性（—）：仅质控区（C）出现红色条带，在检测区（T）内无红色条带出现。
表明梅毒抗体阴性。
无效：质控区（C）未出现红色条带，表明不正确的操作过程或试剂已变质损坏。
8. 临床意义：如结果为阳性，说明有梅毒抗体，曾经受到梅毒的感染；如果结果为阴性说明不含梅毒抗体；如果出现临界结果，说明梅毒抗体水平低，处于梅毒早期阶段，或者是预后残留有抗体，并应进一步检查。
梅毒螺旋体特异性抗体检验
窗口期问题
梅毒螺旋体特异性抗体在感染后一段时间内才可检测到，因此存在窗 口期，可能导致漏诊。
抗体检测无法区分既往感染与现症感染
抗体检测只能证明曾经感染过梅毒，无法确定是否为现症感染。
检验方法的局限性
目前使用的检验方法可能无法检测到所有类型的梅毒螺旋体抗体，影 响检测的准确性。
在疗效观察和复发监测中的应用
疗效观察
在治疗过程中定期进行梅毒螺旋 体特异性抗体检验，可观察治疗
效果和病情变化。
复发监测
抗体阳性转阴后再次出现阳性， 提示梅毒复发，需及时采取治疗
措施。
评估预防效果
通过比较预防干预前后抗体阳性 率的变化，可评估预防措施的效
果。
04
检验的限制与展望
检验的限制
假阳性结果
05
结论
对梅毒螺旋体特异性抗体检验的认识
梅毒螺旋体特异性抗体检验是诊断梅毒的重要手段，通过检测人体内是否存在梅毒 螺旋体抗体来判断是否感染梅毒。
该检验具有较高的敏感性和特异性，能够准确反映人体内梅毒螺旋体的存在情况， 为临床诊断和治疗提供依据。
梅毒螺旋体特异性抗体检验在梅毒的早期诊断、治疗效果评估和预后判断等方面具 有重要意义。
抗体滴度与疾病分期
根据抗体滴度可以将梅毒分为早期和 晚期，有助于评估疾病进程和治疗方 案。
03
梅毒螺旋体特异性抗体检验的 应用
在临床诊断中的应用
诊断早期感染
梅毒螺旋体特异性抗体检 验在感染后数周内即可呈 阳性，有助于早期诊断梅 毒感染。
鉴别诊断
对于临床表现不典型或与 其他性传播疾病相似的病 例，梅毒螺旋体特异性抗 体检验有助于鉴别诊断。
梅毒螺旋体特异性抗体检验
步骤
包括样本采集、加胶体金标记的抗原、温育、洗 涤、观察结果等。
缺点
灵敏度相对较低，需要使用大量的样本，且不能 用于定量检测。
04
检验结果分析和解读
定性检测结果解读
阳性
如果定性检测结果为阳性，表示患者可能感染了梅毒螺旋体。
阴性
如果定性检测结果为阴性，表示患者没有感染梅毒螺旋体。
定量检测结果解读
低浓度
如果定量检测结果为低浓度，表示患者可能处于梅毒感染的早期或者病情已经缓解。
高浓度
如果定量检测结果为高浓度，表示患者可能处于梅毒感染的活动期。
检测结果误差分析和处理
误差来源
检测结果的误差可能来源于实验操作、试剂质量、仪器误差等。
误差处理
为了减少误差，需要进行质量控制，包括定期校准仪器、检查试剂有效期等。如果发现误差较大，需 要重新进行检测。
器材
准备好实验所需的器材，如酶标仪、洗板机、加样器、离心机等。
实验室环境要求
实验室清洁
保持实验室清洁，避免灰 尘、污染物等污染样品和 试剂。
实验室温度和湿度
控制实验室温度和湿度在 适宜的范围内，以保证实 验结果的准确性。
实验室安全
使用实验室器材时要注意 安全，避免受伤或感染。
03
检验步骤和方法
免疫吸附法
检验方法概述
检验方法
采用酶联免疫吸附法（ELISA） 或化学发光法（CLIA）等免疫
学方法进行检测。
原理
基于抗原-抗体反应的特异性， 将梅毒螺旋体特异性抗原固定 在固相载体上，与样本中的抗 体结合，通过显色或发光反应
判断抗体是否存在。
优缺点
免疫学方法具有灵敏度高、特 异性强、操作简便等优点，但 也存在假阳性或交叉反应的风
梅毒螺旋体特异性抗体检测灰区范围分析
假阳性率为0.020%,三组比较差异有统计学意义(P＜0.05)o结论化学发光法检测梅毒螺旋体特异性抗体，在
拟定灰区范围内，假阳性率随S/CO值升高呈现降低趋势。灰区范围宜设定为S/CO值1~70 ［关键词］化学发光法;梅毒螺旋体抗体;灰区；假阳性率
冲图分类号］R514
［文献标识码］A
［文章编号］1673-7210(2019)06(3)-0151-04
区患者462例(1.83%)。其中S/CO值1-3患者234例，假阳性率为0.74%；S/CO值＞3~6患者109例，假阳性率 0.27%；S/C0值＞6~9患者119例，假阳性率0.12%,三组比较差异有统计学意义(P＜ 0.05)。选取假阳性率较低的
S/CO值＞6~9组患者比较,S/CO值＞6~7时假阳性率为0.072%,S/CO值＞7~8时假阳性率为0.024%,S/CO值＞8~9时
方法收集解放军总医院第五医学中心2016年2月-2018年5月采用化学发光法检测梅毒螺旋体特异性抗体，
样品吸光度与临界值的比值(S/CO)为1~9(拟定灰区)的患者，以梅毒实验室逆向检测流程及免疫印迹法结果为 金标准，评价化学发光法检测灰区的假阳性率。结果采用化学发光法检测梅毒螺旋体抗体患者25 190例，灰
Analysis of grey area of Treponema pallidum specific antibody detection
ZHA 0 Jing BIAN Chengrong LI Boon WANG Han Clinical Laboratory Medical Center, the Fifth Medical Center, General Hospital of PLA, Military Clinical Laboratory Diagnostic Center for Infectious Diseases, Beijing 100039, China ［Abstract］ Objective To investigate the grey area of Treponema pallidum specific antibody detected by chemilumines cent immunoassay, and improve the validity and accuracy of syphilis laboratory diagnosis. Methods The patients with cut-off (S/CO) value 1 to 9 (assumed grey area) of Treponema pallidum specific antibody detected by chemiluminescent immunoassay from February 2016 to May 2018 were collected from the Fifth Medical Center in General Hospital of PLA. The false positive rate of chemiluminescent immunoassay in grey area was evaluated by using the methods of re verse detection process of syphilis laboratory and the results of immunoblotting as gold standard. Results A total of 25 190 cases were detected by chemiluminescent immunoassay, and 462 cases (1.83%) were observed within grey area. The false positive rate was 0.74% in 234 cases with S/CO values ranging from 1 to 3, 0.27% in 109 patients with S/CO values ranging from greater than 3 to 6, and 0.12% in 119 patients with S/CO values ranging from greater than 6 to 9. There was a significant difference among three groups (P ＜ 0.05). Comparison of S/CO values in greater than 6 to 9 pa tients with lower false positive rate, the false positive rate of S/CO value greater than 6 to 7 was 0.072%, the false posi tive rate of S/CO value greater than 7 to 8 was 0.024%, the false positive rate of S/CO value greater than 8 to 9 was 0.020%, and the difference between three groups was statistically significant (P ＜ 0.05). Conclusion In the assumed grey area, when the specific antibody of Treponema pallidum is detected by chemiluminescent immunoassay, the false positive rate showes a decreasing trend with the increase of S/CO value. The gray area should be set to S/CO value of 1 to 7. ［Key words］ Chemiluminescent immunoassay; Treponema pallidum specific antibody; Grey area; False positive rate
梅毒螺旋体特异性抗体试验方法探讨及临床应用价值评估
梅毒螺旋体特异性抗体试验方法探讨及临床应用价值评估金㊀晶,潘㊀玥,边春红,聂秀娟(北京市海淀医院,北京１０００９０)D O I :１０．１１７４８/b j m y ．i s s n ．１００６－１７０３．２０２１．０１．００７收稿日期:２０２０Ｇ１０Ｇ１１;修回日期:２０２０Ｇ１０Ｇ２１摘要:目的㊀分析化学发光微粒子免疫法(C M I A )检测梅毒螺旋体特异性抗体的性能价值,探讨其在临床应用的意义.方法㊀回顾性分析北京市海淀医院２０１９年３月至２０２０年７月所有采用C M I A 法进行梅毒螺旋体特异性抗体检测的标本６１０５１例,阳性标本采用梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(T P P A )进行确证,分析其相关性.结果㊀６１０５１例患者中C M I A 法阳性标本８５２例,阳性率为１．４０％,T P P A 法阳性确认６６３例,阳性符合率为７７．８２％,假阳性率为０．３１％.梅毒特异性抗体阳性符合率男性高于女性,差异有统计学意义(χ２＝９．４２,P ＝０．００２).＞６０岁老年组C M I A 法阳性预测值最低,与其他年龄组比较,差异有统计学意义(χ２＝７．２７,P ＝０．００７),容易引起梅毒误诊.科室以皮肤科患者C M I A 法阳性预测值最高.T P P A 结果阳性符合率随着S /C O 升高而升高,当S /C Oȡ１０时,符合率达到１００％.以T P P A 法作为确证试验,对C M I A 法检测梅毒特异性抗体的S /C O 值进行R O C 曲线分析得到最佳诊断截断值为３．６１.结论㊀C M I A 法简便易行,适用于大批量标本的梅毒筛查,T P P A 法则更客观反映真实的梅毒阳性情况.对于C M I A 法检测梅毒特异性抗体阳性的标本,尤其是S /C O＜３．６１的标本,有必要进行T P P A 复检,联合检测以提高检测结果的准确性,排除假阳性,避免误诊漏诊.关键词:梅毒螺旋体特异性抗体;㊀化学发光微粒子免疫分析法;㊀梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验中图分类号:R ３７７＋．１㊀㊀文献标识码:AA nE v a l u a t i o no fT r e p o n e m aP a l l i d u mS p e c i f i cA n t i b o d y Te s tM e t h o d a n d I t sC l i n i c a lA p pl i c a t i o nV a l u e J I NJ i n g ,P A N Y u e ,B I A N C h u n h o n g ,N I E X i u ju a n (B e i j i n g H a i d i a nH o s p i t a l ,B e i j i n g １０００９０,C h i n a )A b s t r a c t :O b j e c t i v e T oa n a l y z e t h e p e r f o r m a n c e v a l u e o f c h e m i l u m i n e s c e n tm i c r o p a r t i c l e i m m u n o a s s a y(C M I A )i nt h e d e t e c t i o n o f T r e p o n e m a p a l l i d u m s p e c i f i ca n t i b o d y ,a n dt o e x pl o r ei t sc l i n i c a l s i g n i f i c a n c e ．M e t h o d s F r o m M a r c h ,２０１９t oJ u l y ,２０２０,６１０５１c a s e so fT r e p o n e m a p a l l i d u ms p e c i f i c a n t i b o d y w e r e c o l l e c t e df r o m H a i d i a n H o s p i t a l o fB e i j i n g ．T h e p o s i t i v es a m p l e sw e r ec o n f i r m e db y T P P A ,a n d t h e c o r r e l a t i o nw a s a n a l y z e d ．R e s u l t s A m o n g ６１０５１p a t i e n t s ,８５２c a s e sw e r e p o s i t i v eb yC M I A m e t h o d ,w i t ht h e p o s i t i v er a t eo f １．４０％,a n d ６６３c a s e sw e r ec o n f i r m e db y T P P A m e t h o d ,w i t h t h e p o s i t i v e c o i n c i d e n c e r a t eo f ７７．８２％,w h i l e t h e f a l s e p o s i t i v er a t ew a s ０．３１％．T h e p o s i t i v e c o i n c i d e n c e r a t e o f s y p h i l i s s p e c i f i c a n t i b o d y i nm a l e p a t i e n t sw a s h i g h e r t h a n t h a t i n f e m a l e p a t i e n t s (χ２＝９．４２,P ＝０．００２)．C o m p a r e dw i t ho t h e r a g e g r o u p s ,t h e p o s i t i v e p r e d i c t i v ev a l u eo f t h ee l d e r l yg r o u p w a s t h e l o w e s t ,a n dt h ed i f f e r e n c e w a ss t a t i s t i c a l l y s i gn i f i c a n t (χ２＝７．２７,P ＝０．００７)．T h e p o s i t i v e p r e d i c t i v ev a l u eo fd e r m a t o l o g yp a t i e n t sw a s t h eh i gh e s t ．T h e p o s i t i v ec o i n c i d e n c er a t eo f T P P Ar e s u l t s i n c r e a s e dw i t ht h e i n c r e a s eo fS /C O．W h e nS /C O ȡ１０,t h ec o i n c i d e n c er a t er e a c h e d１００％．U s i n g T P P A m e t h o da s c o n f i r m a t o r y t e s t ,R O Cc u r v ea n a l y s i sw a s c o n d u c t e do nS /C Ov a l u e o f s y p h i l i s s p e c i f i ca n t i b o d y d e t e c t e db y C M I A m e t h o d ,a n dt h eb e s td i a gn o s t i cc u t Ｇo f fv a l u e w a s ３．６１．C o n c l u s i o n C M I A m e t h o d i s s i m p l e a n d e a s y t o o p e r a t e ,a n d i s s u i t a b l e f o r s y p h i l i s s c r e e n i n gi n a ７２标记免疫分析与临床㊀２０２１年１月第２８卷第１期l a r g en u m b e r o f s a m p l e s,w h i l eT P P A m e t h o d i sm o r eo b j e c t i v e t or e f l e c t t h er e a l s y p h i l i s p o s i t i v e s i t u a t i o n．C o m b i n e dd e t e c t i o no ft h e s et w o m e t h o d sc a ni m p r o v et h ea c c u r a c y o ft h et e s tr e s u l t s, e l i m i n a t e f a l s e p o s i t i v ea n da v o i dm i s d i a g n o s i s,e s p e c i a l l y f o r S/C O＜３．６１p o s i t i v e s a m p l e s．K e y w o r d s:T r e p o n e m a p a l l i d u m s p e c i f i ca n t i b o d y;㊀C h e m i l u m i n e s c e n t p a r t i c l ei m m u n o a s s a y;㊀T r e p o n e m a p a l l i d u m g e l a t i n p a r t i c l e a g g l u t i n a t i o n t e s t㊀㊀梅毒(s y p h i l i s)是由苍白螺旋体所引起的一种慢性传播疾病.它有高度传染性,主要通过性接触和血液传播,少数可通过间接接触传染,也可以通过胎盘传给下一代而发生胎传梅毒,在我国属于乙类传染病.梅毒的临床表现极为复杂,几乎可侵犯全身各器官,并产生多种多样的症状和体征,因此危害性极大.随着梅毒发病率逐年上升,其防控工作也面临着严峻的考验,及时准确的检测结果对于患者的诊断治疗和预后尤为重要[１Ｇ２].㊀㊀梅毒的实验室检查还是以血清学实验为主,是梅毒诊断的重要依据.其分为两大类:一类为非特异性类脂质抗原试验,如T R U S T㊁R P R㊁V D R L等,主要检测血清中梅毒非特异性抗体;另一类为梅毒螺旋体实验,如C M I A,E L I S A㊁T P P A㊁T P H A等[３].我院目前采用化学发光微粒子免疫法(C M I A)和梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(T P P A)进行梅毒特异性抗体检测.非特异性抗体检测易出现生物学假阳性,因此特异性抗体检测在梅毒诊断中更具优势;T P P A法是国内外各实验室普遍采用的梅毒确诊方法[４],但操作复杂㊁试验时间长,不适于大批标本的筛查;C M I A法全自动操作,简便快速㊁灵敏度高㊁特异性好,但存在一定的假阳性率,因此,选择合适的方法有助于梅毒的早期诊断和治疗.本研究以T P P A法作为确证试验,回顾性分析北京市海淀医院２０１９年３月至２０２０年７月所有采用C M I A法进行梅毒螺旋体特异性抗体检测的标本６１０５１例,阳性标本采用T P P A法进行确证,探讨其相关性及在临床应用价值的评估.材料和方法㊀㊀１㊀材料来源㊀㊀收集北京市海淀医院２０１９年３月至２０２０年７月所有采用C M I A法进行梅毒螺旋体特异性抗体检测的标本６１０５１例,其中男性２７３５８例,女性３３６９３例,年龄０~９９岁.经患者及家属同意,收集患者梅毒血清学检测结果㊁病史等临床资料.㊀㊀２㊀仪器与试剂㊀㊀梅毒特异性抗体C M I A法使用美国雅培I２０００全自动免疫分析仪及其配套试剂,质控品㊁校准品均为配套试剂且在有效期内,仪器工作状态良好,且每批质控均在控;T P P A试剂盒来自日本富士瑞必欧株式会社,均在有效期内.所有操作严格按照试剂盒说明书进行.㊀㊀３㊀研究方法㊀㊀实验室根据自身需要对C M I A法检测的梅毒抗体阳性样本进行复检确证.本研究收集２０１９年３月至２０２０年７月所有采用C M I A法进行梅毒螺旋体特异性抗体检测的标本６１０５１例,对阳性标本进一步使用T P P A法进行复检.对比分析性别㊁年龄㊁科室分布对梅毒螺旋体抗体结果的影响,以及不同S/C O值区间与T P P A法结果的符合率,确定其最佳截断值,探讨其在临床的应用价值.㊀㊀３．１㊀C M I A检测㊀梅毒抗体试剂盒采用包被了T P N１５㊁T P N１７和T P N４７重组抗原的微粒子作为固相载体,对血清中梅毒螺旋体特异性抗体进行检测.利用标本与包被有重组抗原的磁微粒及稀释液混合后,标本中抗体与磁微粒上的抗原结合,清洗后加入标记抗人I g M或I g G,孵育并洗涤后,加入预激发液和激发液.通过测定反应液相对光强度来反映标本中梅毒螺旋体抗体浓度.S/C Oȡ１．０判为阳性.㊀㊀３．２㊀T P P A检测㊀将梅毒(N i c h o l s株)的精制菌体成分包被在人载体明胶粒子上.这种致敏粒子和样品中的梅毒螺旋体(T P)抗体反应,发生凝集,产生粒子凝集反应抗体,且可用来测定抗体效价.采用的抗原是超声裂解梅毒螺旋体,用样品稀释液将血清进行５㊁１０㊁２０㊁４０倍的稀释,依次向２０倍孔和４０倍孔滴加未致敏明胶粒子和致敏明胶粒子各２５μL,将反应板置于湿盒中２h后观察反应结果.如果致敏粒子形成不规则的杂乱聚集则为阳性,相反致敏粒子形成圆形且光滑的聚集则为阴性.㊀㊀４㊀实验依据及质量控制㊀㊀所有检测均严格按照实验室S O P程序文件执行,其性能验证符合实验室I S O１５１８９要求.室内质控均在受控范围内,达到实验室质量水平要求.８２L a b e l e d I mm u n o a s s a y s&C l i n M e d,J a n．２０２１,V o l．２８,N o．１㊀㊀５㊀统计学处理㊀㊀采用S P S S１６．０系统软件进行数据分析,绘制受试者操作特性(R O C)曲线,计算曲线下面积,确定诊断效能最大时的S/C O截断值.计数资料以例数或百分率(％)表示,组间比较采用χ２检验,P＜０．０５为差异具有统计学意义.结㊀㊀果㊀㊀１㊀C M I A法和T P P A法检测梅毒特异性抗体结果分析㊀㊀收集我院检验科２０１９年３月至２０２０年７月检测梅毒特异性抗体的血清６１０５１份,其中男性２７３５８例,女性３３６９３例,年龄０~９９岁.以T P P A法为确证试验,对C M I A法阳性结果的标本进行复测,C M I A法阳性例数为８５２例,阳性率为１．４０％(８５２/６１０５１), T P P A法阳性例数为６６３例,结合病史及其他实验室检查均被确诊为梅毒螺旋体感染,C M I A法与T P P A法的阳性符合率为７７．８２％(６６３/８５２),假阳性率为０．３１％(１８９/６１０５１).两种方法比较,差异有统计学意义(χ２＝２１２．５,P＜０．００１).㊀㊀１．１㊀不同性别组梅毒特异性抗体阳性率比较C M I A法阳性病例中男性占５７．８６％(４９３/８５２),女性占４２．１４％(３５９/８５２);T P P A法阳性病例中男性占６０．６３％(４０２/６６３),女性占３９．３７％(２６１/６６３),男性检出率为８１．５４％(４０２/４９３),女性检出率７２．７０％(２６１/３５９).男性的阳性符合率高于女性,差异有统计学意义(χ２＝９．４２,P＝０．００２).见表１.表１㊀不同性别组梅毒特异性抗体检测结果性别例数C M I A阳性数(例)阳性率(％)T P P A阳性数(例)阳性符合率(％)男２７３５８４９３１．８０４０２８１．５４女３３６９３３５９１．０７２６１７２．７０合计６１０５１８５２１．４０６６３７７．８２㊀㊀１．２㊀不同年龄段梅毒特异性抗体阳性率比较㊀＞６０岁老年组C M I A法检测梅毒特异性抗体的阳性预测值最低,与其他年龄组比较,差异有统计学意义(χ２＝７．２７,P＝０．００７),容易引起梅毒误诊.见表２.表２㊀不同年龄组梅毒特异性抗体检测结果年龄(岁)例数C M I A法阳性数(例)阳性率(％)占阳性总比例(％)T P P A阳性数(例)C M I A法阳性预测值(％)＜１８１２７２１１０．８６１．２９８７２．７３１８~６０４１０７０５８８１．４３６９．０１４７９８１．４６＞６０１８７０９２５３１．３５２９．６９１７６６９．５７合计６１０５１８５２１．４０６６３７７．８２㊀㊀１．３㊀梅毒特异性抗体阳性患者科室分布情况６６３例T P P A梅毒抗体阳性患者按T P P A法阳性例数多少排列,排在前五位的科室依次为皮肤科㊁普外科㊁消化内科㊁泌尿外科㊁妇产科.其中皮肤科患者C M I A法检测梅毒特异性抗体的阳性预测值最高,其次为泌尿外科㊁普外科㊁妇产科㊁消化内科.见表３,图１.表３㊀不同科室梅毒血清学检测结果科别C M I A法阳性数(例)T P P A阳性数(例)阳性预测值(％)皮肤科３００２６１８７．００普外７２４７６５．２８消化内科５４３１５７．４１泌尿外科４６３６７８．２６妇产科６７４１６１．１９图１㊀６６３例T P P A法阳性患者科室分布情况㊀㊀２㊀不同S/C O值C M I A法与T P P A法的阳性符合率㊀㊀以T P P A法作为确证试验,C M I A法阳性结果按S/C O值分组,T P P A法阳性符合率随着S/C O 升高而升高,S/C O值小于３的阳性符合率仅为３１．３９％;该组与其他S/C O值组比较,采用χ２检验,９２标记免疫分析与临床㊀２０２１年１月第２８卷第１期差异有统计学意义(χ２＝３３．９１,P ＜０．００１);比较各S /C O 值组T P P A 法阳性符合率的差异有统计学意义(χ２＝１７５．６,P ＜０．００１).当S /C Oȡ１０时,符合率达到１００％.见表４.表４㊀C M I A 法S /C O 值与T P P A 法结果一致性S /C O 值C M I A 法阳性数(例)T P P A 法阳性数(例)T P P A 法阴性数(例)符合率(％)１ɤS /C O＜３２２３７０１５３３１．３９３ɤS /C O＜５８０５５２５６８．７５５ɤS /C O＜７３７３２５８６．４９７ɤS /C O＜９５１４６５９０．２０９ɤS /C O＜１０２０１９１９５．００S /C Oȡ１０４４１４４１０１００．００合计８５２６６３１８９７７．８２㊀㊀３㊀R O C 曲线分析㊀㊀以T P P A 法作为确证试验,对C M I A 法检测梅毒特异性抗体的S /C O 值进行R O C 曲线,评价其诊断性能,结果发现,当C M I A S /C O 截断值为３．６１时,灵敏度为８８．２％,特异性为９３．７％,此时曲线下面积最大为０．９７０,即C M I A 法的最佳诊断截断值是３．６１.见图２.图２㊀C M I A 法检测梅毒特异性抗体R O C 曲线图讨㊀㊀论㊀㊀近年来人群中梅毒螺旋体感染率逐年增长[２,５],故梅毒螺旋体的检测尤为重要.在众多的检测方法中,实验室血清学试验较为常用,选择灵敏度和特异性较高的方法就更是关键.㊀㊀化学发光微粒子免疫法(C M I A )可作为大规模梅毒特异性抗体检测首选筛选试验[６],本研究也证实了这一结论.虽然C M I A 法操作方便,自动化程度高,适宜大批量标本检测,但本研究中C M I A 法阳性率为１．４０％,C M I A 法与T P P A 法的阳性符合率为７７．８２％,假阳性率为０．３１％,可见有假阳性结果存在.因此为了避免医疗纠纷,有必要用特异性更高的方法对C M I A 法阳性标本进行验证.而T P P A法检测梅毒特异性抗体具有高度灵敏度和特异性,是目前国内外广泛应用的梅毒确证试验[４,７].但它操作复杂,很难实现自动化,反应时间长,肉眼判读结果主观性强,结果不易保存,导致其不适合大样本检测,因此更适用于对C M I A 阳性标本进行验证.㊀㊀本研究显示男性的阳性符合率高于女性,与其他作者的报道相同[８].＞６０岁老年组C M I A 法检测梅毒特异性抗体的阳性预测值最低,也就是假阳性率较高,这与段雯等[９Ｇ１０]的研究结果一致.可能因为老年患者随着年龄增长,免疫功能逐渐异常,本身存在某些基础疾病或患有自身免疫性疾病㊁恶性肿瘤㊁感染性疾病等,或血清中存在一些干扰物质,如类风湿因子㊁免疫球蛋白㊁异嗜性抗体㊁补体等,易产生假阳性结果[１１Ｇ１４];或者老年患者体内可能存在有其他螺旋体共生,可能检测到的是体内的其他螺旋体抗体,不是梅毒特异性抗体,这又增加了假阳性结果出现的概率[１５].这应该引起全社会的重视,在非高危人群的老年人中梅毒抗体阳性也不能作为感染梅毒的绝对依据,应该结合临床症状和体征进行综合分析,以免误诊为梅毒,给患者带来不必要的痛苦.㊀㊀另外本研究还发现,在＜１８岁年龄组中C M I A 法检测梅毒螺旋体特异性抗体阳性预测值也不高,这与张薇等[６]的观点相同.可能是因为这部分患者年龄较小,通过性传播感染的机会不大,因此这部结果报告发出时需更加慎重.㊀㊀本研究指出T P P A 法阳性患者的科室分布并不均衡,皮肤科患者阳性例数最高,其次为泌尿外科㊁普外科㊁妇产科㊁消化内科.皮肤科承担性疾病的诊０３L a b e l e d I mm u n o a s s a ys&C l i n M e d ,J a n ．２０２１,V o l ．２８,N o ．１治以及国家哨点免费人群的检测,所以阳性例数最高;泌尿外科㊁普外科㊁妇产科为手术科室,消化内科需进行内窥镜的检查,这些操作前都需进行梅毒螺旋体抗体的检测,故本身检测量就大.㊀㊀假阳性问题现在越来越受到临床医生的关注.本研究发现假阳性情况多出现在C M I A法检测的低值标本中,如S/C O值小于３的阳性符合率仅为３１．３９％.T P P A法阳性符合率随着S/C O升高而升高,当S/C Oȡ１０时,符合率达到１００％.而当S/C O＜１０时,C M I A法和T P P A验的结果存在不一致的情况,且S/C O值越小,二者的阳性符合率就越低,这与文献[１６]的研究结果一致.这也证明了T P P A确证试验能有效排除C M I A法的假阳性结果.这些假阳性结果可能与恶性肿瘤㊁心血管疾病㊁自身免疫性疾病㊁妊娠等有关,因为这些疾病患者体内含有某些物质会与试剂中的抗原成分非特异结合,从而发生假阳性.㊀㊀为了指导临床医生准确判断患者梅毒感染的真实情况,实验室需根据自身情况制订C M I A法检测梅毒特异性抗体的最佳截断值.本研究中经R O C 曲线分析发现,C M I A法的最佳诊断截断值是３．６１,此时灵敏度和特异性均较高,故具有较高准确度.这与杜静等[１７]３．１２５的报道接近.因此C M I A法S/C O值在１~１０,尤其是S/C O＜３．６１时,需加做T P P A确证试验,如与复检结果一致,可在报告单中备注.这样不仅优化了检测流程,提高了工作效率,也减少了相关医疗纠纷.㊀㊀由于本研究收集标本多㊁来源广,所以研究结果对本地梅毒感染率的研究有参考价值.梅毒螺旋体抗体的血清学检测对梅毒诊断和治疗起着重要的作用,因此选择检测方法就尤为重要.虽然实验室检测梅毒螺旋体抗体的方法很多,但其各有优缺点: C M I A法适用于大量人群的筛查及辅助诊断;T P P A 法适用于对C M I A阳性人群的确证,两种方法联合使用,可提高诊断的准确率.在日常工作中,对于C I MA法阳性,尤其是S/C O值小于３．６１的标本要用T P P A法检测进行确证,再结合患者病史综合分析,提高检出率,避免漏诊误诊.参考文献[１]T U C K E R J D,C O H E N M S．C h i n a＇ss y p h i l i se p i d e m i c:e p i d e m i o l o g y,p r o x i m a t ed e t e r m i n a n t so fs p r e a d,a n dc o n t r o lr e s p o n s e s[J]．C u r rO p i n I n f e c tD i s,２０１１,２４(１):５０Ｇ５５．[２]G l o b a l B u r d e no fD i s e a s eS t u d y２０１３C o l l a b o r a t o r s．G l o b a l,r e g i o n a l,a n d n a t i o n a l i n c i d e n c e,p r e v a l e n c e,a n d y e a r s l i v e dw i t hd i s ab i l i t y f o r３０１a c u t ea n dc h r o n i cd i s e a s e sa n di n j u r i e s i n１８８c o u n t r i e s,１９９０Ｇ２０１３:a s y s t e m a t i c a n a l y s i sf o rt h e G l o b a l B u r d e n o fD i s e a s eS t u d y２０１３[J]．L a n c e t,２０１５,３８６(９９９５):７４３Ｇ８００．[３]杨平．梅毒不同血清学检测方法结果分析[J]．中西医结合心血管病电子杂志,２０１９,７(４):１９０．[４]赵娜,刘瑞霞,李鲁平,等．捕获法E L I S A检测T PＧI g 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传播方式
接触性传染、垂直传染。
防治原则
加强教育，无疫苗预防
TPPA检测技术
结果判读
血清或血浆1ml，标本应无溶血，无 脂血，无微生物污染。不满足上述要
求的标本拒收，标本的采集应使用清 洁，无菌的一次性的干燥管。
标本用量最少50ul，七天内检测的标 本应在2-8℃保存，贮存在-20℃可保 存4W，同时避免反复冻融血清
梅毒抗体检测是采用抗原抗体凝集反 应中的凝集反应。其原理如下：将梅 毒 (Nichols 株)的精制菌体成分包被 在人载体明胶粒子上。这种致敏粒子 和样品中的梅毒螺旋体（TP）抗体进 行反应发生凝集，产生粒子凝集反应 （PA），并且可用来测定抗体效价
检测原理
标本采集
实验步骤
实验步骤
2、加入测试样品
本期小结
标本采集注意事项 操作过程注意事项
结果判定注意事项
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梅毒血清试验假阳性因素：
➢技术性：
➢ 标本的污染 ➢ 溶血 ➢ 操作失误
生物学假阳性
➢ 某些疾病：结核、疟疾、肝病、 红斑狼疮、流感、肺炎、类风湿 性关节炎、风湿性心脏病、风疹、 系统性硬化症等，疾病发展过程 中释放心磷脂到血液中假阳性。
➢ 生理机能发生变化：少数孕妇也 可发生生物学假阳性。
➢ 服用免球蛋白类药物
梅毒螺旋体抗体明胶颗粒凝 集试验(TPPA)及其在梅毒检 测中的应用
目录
CONTENTS
PART 01
梅毒简介
PART 02
TPPA检测技术
PART 03
临床结果分析
PART 04
内容小结
1 梅毒简介
致病因子
梅毒螺旋体。
免疫性
细胞免疫为主，体液免疫为辅。侵入机体后可产生2 种抗体，即抗心磷脂抗体及抗密螺旋体抗体
感谢聆听，批评指导
25µl
1、加入样品稀释液 100µl 25µl 25µl 25µl
1
3、样品的倍比稀释
孔号 1
23 4
孔号 1
234
2
25µl 25µl 25µl 25µl
弃去
3
孔号 1
234
最终稀释倍数 1:20 1:40
4、加入明胶颗粒
4
未致敏颗粒
致敏颗粒
。
25µl 25µl
孔号 1
234
最终稀释倍数 1:40 1:80
4+：颗粒光滑覆盖整个孔底，有时边缘有折叠。 3+： 颗粒光滑覆盖大部分孔底。 2+：颗粒光滑集聚覆盖孔底，周围有一颗粒环。 1+： 颗粒光滑集聚覆盖孔底，周围有一明显颗粒环。 ±：颗粒沉集孔底，中央形成一小点。 一：颗粒紧密沉积孔底中央。
结果判读
对照孔结果无论是阴性还是阳性，只要致敏粒子是阴性，就出阴性结果
RPR结果（前带现象） 易出现在二期梅毒
临床结果讨论
我们实验室TRUST+TPPA常出现以下4种情况： 1、TRUST-,TPPA- 可基本排除梅毒。极早期梅毒（无 任何抗梅毒抗体产生）。极晚期梅毒。艾滋病病人 合并梅毒感染。 2、TRUST+,TPPA+ 现正梅毒，应考虑治疗。 3、TRUST-,TPPA+ 极早期梅毒、晚期梅毒、治愈的早 期梅毒（应询问病人是否有既往的梅毒感染和治疗 史;若病人否认有既往史）。解释漏检 4、TRUST+,TPPA- TRUST 假阳性
5
5、混匀，加盖，孵育2个小时，判读结果
实验操作中的注意事项
1 试剂批号不同不可混用，试剂不可冷冻 2 最好在白色湿布上加样，防止静电，易于观察 3 致敏粒子与未致敏粒子使用前必须混匀，加完样后要充分震荡，注意不要
溢出 4 结果观察完毕前不要移动加样板
结果判读条件
1.观察加未致敏颗粒的第3孔，不出现凝集为有效试验。 2. 观察凝集反应强度：分级如下。