过滤式微流控芯片上的循环肿瘤细胞分选
细胞分选和分离技术的发展和应用论文素材
细胞分选和分离技术的发展和应用论文素材细胞分选和分离技术的发展和应用随着生物技术的迅速发展，细胞分选和分离技术在生命科学研究和医学诊断中扮演着重要角色。
细胞分选和分离技术是指将混合细胞群中的目标细胞从其他细胞中分离出来的方法。
在过去几十年里，这一技术取得了重大突破，为科学家提供了强大的工具来研究细胞的生理功能和疾病发展机制。
一、背景介绍细胞是构成生物体的基本结构和功能单位，研究细胞的功能和特性对于理解生命的本质和人类生理疾病的发生机制至关重要。
然而，由于细胞数量庞大且复杂性高，科学家们迫切需要一种快速、准确、高效的分选和分离技术来满足研究需求。
二、细胞分选技术的发展1. 流式细胞术流式细胞术是一种基于细胞表面标记物的分选技术，通过将细胞与荧光标记的抗体结合，利用流式细胞仪对荧光信号进行检测和分析，从而实现对特定细胞的分选。
流式细胞术具有高通量、高精度和多参数分析的优势，广泛应用于免疫学研究、肿瘤细胞分离等领域。
2. 磁性活体细胞分选法磁性活体细胞分选法是一种利用磁珠标记的抗体与目标细胞结合，再通过磁力场将目标细胞从混合细胞中分离出来的方法。
该技术具有操作简便、高效率和非损伤性的特点，被广泛应用于单细胞基因组学、液切技术等领域。
3. 微流控芯片技术微流控芯片技术将细胞处理与聚集、分离、定位等操作通过微型通道和微型结构实现。
该技术有助于实现对细胞的高通量、高效率分选和定位，可以广泛应用于细胞学研究、干细胞分离等领域。
三、细胞分选技术的应用1. 单细胞转录组学单细胞转录组学是一种对单个细胞进行转录组测序分析的技术，被广泛应用于分析不同细胞亚型的表达谱、细胞发育过程、肿瘤异质性等研究领域。
细胞分选技术能够实现对单个细胞的快速、高通量分选，为单细胞转录组学研究提供了重要支持。
2. 微流控细胞分选微流控细胞分选技术利用微型通道和微型结构对细胞进行精确的分选和定位，可有效地实现对罕见细胞亚型或损伤细胞亚型的快速检测和分离。
循环肿瘤细胞的检测方法
循环肿瘤细胞的检测方法一、C TCs 的体外检测方法CTCs 的富集方法是基于物理或生物特性的。
前者取决于肿瘤细胞的尺寸、电性能等其他物理特性，而后者主要依赖于抗原抗体结合。
近年来，联合物理和生物特性检测的新型微流控芯片技术具有自动化、微型化、高通量、可集成下游分析等优点，在CTCs 检测分析中显示了巨大优势。
1. 基于物理特性的富集方法研究表明，CTCs 比造血细胞更大、更硬。
基于这些物理特性的差异，已经开发了许多技术来提高CTCs 富集率，其中膜过滤分离肿瘤细胞技术（isolation by size of epithelial tumor cells，ISET）系统是最早基于尺寸过滤的CTCs 分离的技术之一。
在该系统中，血液被稀释，然后用8 μm 孔径过滤器过滤。
CTCs 由于体积较大而被过滤器保留，红细胞和白细胞由于体积小于孔径而可以通过随机分布的孔。
但由于CTCs 和白细胞的大小重叠，依赖大小的过滤系统捕获目标细胞的效率有限。
因此，Sun 等提出了一种增加细胞大小的策略，即在细胞过滤前利用修饰过的微珠来特异性结合CTCs，以提高捕获效率。
使用该微流体捕捉系统以1 ml/min 的流速可以从全血样本中分离出高达91%的靶细胞。
与ISET 系统类似，Screen Cell 系统通过使用微孔膜过滤器，通过筛孔大小分离CTCs。
该系统基于微过滤技术的过滤膜，可以使有核细胞通过，而CTCs 被拦截。
Screen Cell 系统具有高通量持续处理大量血液的潜力，并且具有相关的细胞和分子生物学技术，以及与CTCs 及其潜在基因异常的图形和鉴定相关的技术，可以方便地分析提取到过滤器上的肿瘤细胞。
此外，从血液中分离出来的细胞能最大程度地保存其活性和完整性，为CTCs 的体外培养奠定了基础。
流体辅助分离技术（fluid-assisted separation technique，FAST）是一种新型的离心微流控系统。
微流控细胞芯片实现肿瘤细胞捕获及药物筛选的实验研究
重庆大学硕士学位论文
英文摘要
the Hep-G2 cells was higher than 90% with staining of trypan-blue. The Hep-G2 cells were exposed to the Ber solutions at different concentrations for 12h, 24h and 48h, respectively. The effect of the drug on cell proliferation was measured by CFSE labeled cell viability measurements using a microplate-reader. Results showed that Ber could inhibit the activity of Hep-G2 cells, which depended on the dose of Ber and action time. Compared with the blank control group (0μmol•L -1), the cell density turned to be smaller and the intercellular space turned to be larger along with the increasing of Ber concentration in the experimental groups. Results resvcratrol inhibited the proliferation of HepG2 cells with IC50 value of 47.5 µmol/L at 48h. The unique advantages of microfluidic array were increasingly being developed and employed as a simple drug screening tool. Keywords： microfluidic cell chip, HepG2 cells, bergamot, integrated magnetic
循环肿瘤细胞的分离和检测技术研究
循环肿瘤细胞的分离和检测技术研究循环肿瘤细胞（CTC）是癌症患者体内的罕见细胞，这些细胞脱离了原始肿瘤并进入血液循环系统中。
由于这些细胞具有非常特殊的生理和遗传学特征，它们被视为癌症治疗和诊断的非常重要的指标。
近年来，随着医学技术的不断发展，专家们已经开发出了一系列方法来检测和分离CTC，以支持癌症的早期诊断和更有效的治疗。
分离和检测技术的研究一种比较成熟的循环肿瘤细胞检测方法是通过研究CTC表达的肿瘤细胞标志物（如EpCAM）来进行检测。
这种方法被称为表面增强拉曼散射光谱分析，能够检测到单一和唯一的CTC，并且因为具有非常高的特异性，这是一个非常有效的技术。
除了表面增强拉曼散射光谱分析之外，还有其他一些新的方法正在被研究和开发，以分离和检测CTC。
比如利用磁性纳米粒子标记CTC，这种方法被认为是一种新型和有前途的CTC分离技术。
还可以利用微流控芯片分离CTC，这种方法可以实现对CTC的多个因素分析。
目前，许多公司和实验室都在开发各种类型的CTC检测设备。
其中一些设备已经获得FDA批准，并已经在clinic中使用。
意义和应用循环肿瘤细胞的检测和分离可以在多个方面具有重要的实际应用意义，一些主要的应用包括以下几个方面。
1.癌症的早期诊断循环肿瘤细胞的检测和分离技术对于癌症早期诊断非常重要，这种技术可以在早期发现肿瘤并提供更有效的治疗方案。
2.监测治疗效果CTC检测可以帮助医生监测癌症患者的治疗效果，在治疗过程中及时调整治疗方案，以获得更好的治疗效果。
3.协助新药研发循环肿瘤细胞对于新药的研发也有着非常重要的作用。
因为CTC是可以从体内直接获得的肿瘤细胞，通过研究CTC，科学家们可以更加深入了解肿瘤的微观结构和生理学情况，进而优化研发的药物。
结论总之，循环肿瘤细胞的检测和分离技术具有巨大的潜力，可以帮助医生实现更加精准，个体化的癌症治疗，并且可以帮助研究人员更好地理解肿瘤的生理学和遗传学特征。
尽管目前循环肿瘤细胞的分离和检测技术还面临着一些挑战，但相信随着技术的不断进步，这种技术将会变得更加精准和普及，以达到更好的指导和支持癌症的治疗。
一种用于循环肿瘤细胞分离的微流控芯片,一种循环肿瘤细胞分离方
专利名称：一种用于循环肿瘤细胞分离的微流控芯片，一种循环肿瘤细胞分离方法以及计数方法
专利类型：发明专利
发明人：程鑫,姜有为,余振铭,黄兴隆,陈日飞
申请号：CN201710378545.X
申请日：20170525
公开号：CN107099450A
公开日：
20170829
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提供一种用于循环肿瘤细胞分离的微流控芯片，其特征在于，所述微流控芯片包括第一壳层和第二壳层，以及设置于所述第一壳层和第二壳层之间的滤膜，所述滤膜和第一壳层之间形成第一通道，所述滤膜和第二壳层之间形成第二通道，所述第一壳层上设置有m个输入接口和n个输出接口，其中m≥1，n≥1，所述第二壳层上设置有x个输入接口和y个输出接口，其中x≥1，y≥1。
利用所述芯片进行循环肿瘤细胞分离的通量高，效率高，方法简单，便于推广。
申请人：南方科技大学
地址：518000 广东省深圳市南山区西丽学苑大道1088号
国籍：CN
代理机构：北京品源专利代理有限公司
代理人：巩克栋
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基于微流控技术的循环肿瘤细胞分选研究
基于微流控技术的循环肿瘤细胞分选研究一、本文概述随着生物医学和纳米技术的飞速发展，微流控技术以其独特的优势在生物分析、药物筛选和疾病诊断等领域中发挥着越来越重要的作用。
特别是在循环肿瘤细胞（Circulating Tumor Cells, CTCs）的分选研究中，微流控技术以其高效的分离效率、良好的生物相容性和精确的控制能力，成为了当前研究的热点。
本文旨在深入探讨基于微流控技术的循环肿瘤细胞分选方法，分析其在癌症早期诊断、疗效评估和预后监测等方面的应用前景，以期为临床诊断和治疗提供新的思路和方法。
本文将首先介绍循环肿瘤细胞的基本概念和研究意义，阐述其在癌症诊断和治疗中的重要性。
接着，将详细介绍微流控技术的基本原理和分类，以及在循环肿瘤细胞分选中的应用原理和方法。
在此基础上，我们将综述近年来基于微流控技术的循环肿瘤细胞分选研究的进展，包括不同分选技术的优缺点、分选效率的提升方法以及在实际应用中的挑战和解决方案。
我们将展望基于微流控技术的循环肿瘤细胞分选在癌症诊断和治疗领域的发展趋势，以期为未来癌症的早期诊断、疗效评估和预后监测提供新的思路和方法。
二、微流控技术概述微流控技术，又称微全分析系统（TAS）或芯片实验室（LabonaChip），是一种在微米尺度空间对流体进行操控的技术。
它集成了生物学、化学、医学、流体力学、微电子学等多学科的理论与技术，将生物和化学实验室的基本功能微缩到一块几平方厘米的芯片上，从而实现对生物和化学样本的快速、高效、低耗的分析和处理。
微流控技术的核心在于微通道和微结构的制造与应用。
微通道的尺寸通常在微米级别，这使得在微流控芯片上可以实现对微小体积流体的精确操控，包括流体的混合、分离、反应、检测等。
微流控技术还可以与各种传感器和执行器集成，实现自动化、智能化的实验操作。
在循环肿瘤细胞分选研究中，微流控技术具有显著的优势。
微流控芯片可以实现高通量的细胞处理，大大提高了分选的效率。
用于循环肿瘤细胞分选富集的双螺旋微流控芯片研究
生物医学工程研究ＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｍｅｄｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＲｅｓｅａｒｃｈ２０２０，３９（３）：２８２～２８７ＤＯＩ １０．１９５２９／ｊ．ｃｎｋｉ．１６７２－６２７８．２０２０．０３．１１上海市科委科技支撑计划资助项目（１９４４１９０４５００）。
△通信作者 Ｅｍａｉｌ：ｘｘｌｉｎ１００＠１６３．ｃｏｍ用于循环肿瘤细胞分选富集的双螺旋微流控芯片研究邸元帅，徐秀林△，纪春阳（上海理工大学医疗器械与食品学院，上海 ２０００９３）摘要：本研究开发了一种双螺旋结构的微流控芯片，采用Ａｎｓｙｓｆｌｕｅｎｔ软件进行仿真模拟，用Ｓｏｌｉｄｗｏｒｋｓ软件绘图设计，用ＳＵ－８光刻胶模具制作芯片，并使用含有循环肿瘤细胞的红细胞裂解后的血液样品，探究芯片的分选效率。
试验结果表明，样品的不同流速影响芯片对循环肿瘤细胞的分选效果，在３０ｍＬ／ｈ的流速下，微流控芯片的分选率最高，达到７７％。
本研究结果对临床肿瘤的诊断具有重要意义。
关键词：双螺旋；微流控芯片；循环肿瘤细胞；Ａｎｓｙｓｆｌｕｅｎｔ；仿真模拟；流速；分选中图分类号：Ｒ３１８ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７２ ６２７８（２０２０）０３ ０２８２ ０６ＳｔｕｄｙｏｎｄｏｕｂｌｅｓｐｉｒａｌｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｃｈｉｐｆｏｒｓｏｒｔｉｎｇａｎｄｅｎｒｉｃｈｉｎｇｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓＤＩＹｕａｎｓｈｕａｉ，ＸＵＸｉｕｌｉｎ，ＪＩＣｈｕｎｙａｎｇ（ＳｃｈｏｏｌｏｆＭｅｄｉｃａｌＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｎｄＦｏｏｄＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｈａｎｇｈａｉｆｏｒＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２０００９３，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｗｅｄｅｖｅｌｏｐｅｄａｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｃｈｉｐｗｉｔｈｄｏｕｂｌｅｓｐｉｒａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅ．ＴｈｅｓｏｆｔｗａｒｅＡｎｓｙｓｆｌｕｅｎｔｗａｓｕｓｅｄｆｏｒｓｉｍｕｌａｔｉｏｎ，Ｓｏｌｉｄ Ｗｏｒｋｓｗａｓｕｓｅｄｆｏｒｇｒａｐｈｉｃｄｅｓｉｇｎ，ｔｈｅｃｈｉｐｗａｓｍａｄｅｗｉｔｈＳＵ－８ｐｈｏｔｏｒｅｓｉｓｔｍｏｌｄ，ａｎｄｔｈｅｂｌｏｏｄｓａｍｐｌｅｓｏｆｒｅｄｂｌｏｏｄｃｅｌｌｓｃｏｎｔａｉ ｎｉｎｇｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｓｏｒｔｉｎｇｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｏｆｔｈｅｃｈｉｐ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔｆｌｏｗｒａｔｅｓｏｆｓａｍｐｌｅｓａｆｆｅｃｔｅｄｔｈｅｓｏｒｔｉｎｇｅｆｆｅｃｔｏｆｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｃｈｉｐｏｎｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓ．Ａｔｔｈｅｆｌｏｗｒａｔｅｏｆ３０ｍＬ／ｈ，ｔｈｅｓｏｒｔｉｎｇｒａｔｅｏｆｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｃｈｉｐｗａｓｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔ，ｒｅａｃｈｅｄ７７％．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓａｒｅｏｆｇｒｅａｔｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｆｏｒｔｈｅｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆｃｌｉｎｉｃａｌｔｕｍｏｒｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｄｏｕｂｌｅｓｐｉｒａｌ；Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｃｈｉｐ；Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓ；Ａｎｓｙｓｆｌｕｅｎｔ；Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎ；Ｆｌｏｗｒａｔｅ；Ｓｏｒｔｉｎｇ１ 引 言循环肿瘤细胞（ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓ，ＣＴＣｓ）存在于人类外周血中，但数量极少，１ｍＬ血液中血细胞的含量约１０９个，而ＣＴＣｓ只有１～１００个［１－２］，对ＣＴＣｓ进行精确检测，可对肿瘤进行早期预防和精准治疗并判断预后［３－５］。
用于循环肿瘤细胞分选的双螺旋惯性微流控芯片设计与仿真
用于循环肿瘤细胞分选的双螺旋惯性微流控芯片设计与仿真魏亚菲;祖向阳;宋克纳;胡志刚
【期刊名称】《制造业自动化》
【年(卷),期】2024(46)3
【摘要】在弯曲流道中流体的惯性效应明显时,微流道中的微球受到惯性升力和Dean曳力发生侧向运动,从而实现微球分离。
使用SolidWorks软件构建双螺旋微流控芯片模型,然后用Meshing软件进行网格划分,采用AnsysFluent软件对微流体中微球的运动状态进行仿真模拟。
结果显示:在较宽的雷诺数(25-375)下,双螺旋微流控芯片在惯性分选不同大小的微球时,S型结直经(2.25mm、2.7mm、
3.15mm)、通道高度(100μm、125μm、150μm)对微球分选均有影响,微球的聚焦情况与微通道结构有关,通道结构改变,导致惯性升力和Dean曳力的变化,从而影响微球在微通道中的聚焦情况。
在S型结直径为2.7mm、通道高度为100μm,雷诺数为200时,各微球之间距离最大,分选效果最佳。
本研究为设计用于分选循环肿瘤细胞的微流控芯片设计提供理论依据和参考。
【总页数】4页(P50-53)
【作者】魏亚菲;祖向阳;宋克纳;胡志刚
【作者单位】河南科技大学医学技术与工程学院
【正文语种】中文
【中图分类】TN402
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过滤式微流控芯片上的循环肿瘤细胞分选刘大渔1,2★ 严伟1 张琼1 马薇2 梁广铁1 Yi-Kuen Lee 2[摘 要] 目的 本研究加工了一种封接有多孔聚碳酸酯薄膜的过滤式微流控芯片用于循环肿瘤细胞分选。
方法 依据肿瘤细胞与血细胞在粒径和变形能力方面的差别，这种微过滤式芯片可以选择性截留肿瘤细胞。
循环肿瘤细胞分析整个过程，包括细胞过滤、固定、标记和计数，均在芯片上完成。
使用8 μm 孔径滤膜，可以选择性截留Hela 细胞。
以Hela 细胞为模型，实验优化了肿瘤细胞的分选条件并考查了分选效果。
结果 在500 µL/min 流速下，Hela 细胞的回收率可以达到85%, 而血细胞残留可以控制在3000个以下。
截留细胞使用微小染色体维持蛋白7 抗体标记，可以有效辨别肿瘤细胞与血细胞。
结论 基于过滤式微流控芯片上的循环肿瘤细胞分选方法简单、快速、廉价，有望成为一种实用的循环肿瘤细胞检测技术。
[关键词] 循环肿瘤细胞；微流控芯片；多孔薄膜；过滤A microfilter device for circulating tumor cell enrichment from bloodLIU Dayu 1,2★, YAN Wei 1, ZHANG Qiong 1, MA Wei 2, LIANG Guangtie 1, Yi-Kuen LEE 2(boratory of Clinical Chemical Technology, Guangzhou First Municipal People's Hospital Affiliated to Guangzhou Medical College, Guangdong, Guangzhou 510180, China; 2.Department of Mechanical Engineering, the HongKong University of Science & Technology, Clear Water Bay, Kowloon, HongKong.)[ABSTRACT] Objecti v e We fabricated a micro fluidic device with embedded porous film for circulating tumor cell (CTC) enrichment from blood. Methods The micro filter can separate tumor cells from whole blood on the basis of differences in the size and deformability between tumor and hematologic cells. All the steps related to CTC analysis, including cell filtration, fixation, labeling and enumeration, were integrated on the same device. Our results demonstrated that Hela cells can speci fically trapped on the porous film with 8 μm pore-size. Using Hela cell as a model, operation conditions of the micro filter assay were optimized. Results At 500 µL/min flow rate, the capturing ef ficiency of Hela cell was 85% and the number of unspeci fic trapped hematologic cells can be limited to ~3000 per test. Conclusions Using minichromosome maintenance protein 7 as the CTC characterization marker, the trapped Hela cells can be distinguished from the background blood cells. The micro filter-based CTC detection assay proposed here is simple, fast and low-cost, thus hold the potential to be developed into a practical CTC detection tool.[KEY WORDS] Circulating tumor cell, Micro fluidic chip, Porous film, Filtration基金项目：国家自然科学基金（No.81171418）；国家国际科技合作项目（No.2010DFB33880）；广州市医药 卫生科技项目（Nos.201102A213046，20121A021002）作者单位：1. 广州医学院附属市一人民医院检验科研究室，广东，广州510180 2.香港科技大学机械工程系，香港，九龙清水湾★通讯作者：刘大渔，E-mail: ruark@循环肿瘤细胞（circulating tumor cell, CTC ）是指脱离原发位置进入循环血中的肿瘤细胞[1]。
近期大量研究证实，CTC 可以在肿瘤发生早期出现，是造成肿瘤转移的原因。
CTC 的检测不仅有助于病情监测和预后转归判定，还有可能成为肿瘤早期诊断的手段。
由于CTC 数量稀少且混杂在大量血细胞中，其检测极具难度[2]。
对于CTC 分析，需要考虑到多个因素，如：回收效率、分选细胞纯度、分析时间、细胞活•论 著•性的维持以及测试成本等。
目前已有的商品化CTC 检测装置，如CellSearch[3]，不仅分析时间长，操作繁琐且运行成本高，这些问题限制了其推广。
与这种大型设备相比，基于微流控装置CTC分选装置具有分析速度快、分选效率高以及功能集成的优势[4~6]。
前期报导的微流控CTC分析装置大多使用免疫亲和分选方法[5, 7, 8]，即用抗体识别肿瘤细胞表面特异性标志（如EpCAM）实现肿瘤细胞的分选。
这类方法的不足之处包括：1.由于抗体价格昂贵导致分析成本高；2.适用对象有限，比如对于非上皮来源或者发生上皮间质转化的EpCAM（-）肿瘤细胞无效；3.分选时为保证抗原-抗体的有效结合，需要使用较低流速，因而限制了分析通量。
由于肿瘤细胞在粒径和变形能力方面与血细胞存在差别，可以使用过滤方法将二者加以分离。
例如，目前已经商品化的ISET[9]和ScreenCell[10]方法，就是采用这种分离技术，其优势是无需使用抗体，分选时可以使用较高流速因而分析速度较快。
目前，过滤式CTC分选方法的不足之处在于其分析包含多个离线操作步骤，不仅繁琐而且会造成细胞的损失。
例如，Tao M等[11]报导使用ISET方法分选乳腺癌细胞，获得的回收效率只有13%。
针对上述问题，本工作报导了一种基于过滤式微流控芯片的循环肿瘤细胞分选方法。
实验加工了一种封接有8 µm孔径滤膜的多层复合式微流控芯片，用于选择性截留肿瘤细胞。
利用这种微过滤方法，CTC分析整个过程，包括细胞富集、标记、检测和计数，均在芯片上完成。
实验结果显示，这种微流控芯片对于肿瘤细胞具有较好的分选效果。
该芯片制作简单、成本低廉，并具有操作简便和分析快速的优势，因而有望走向实际应用。
1 实验部分1.1 仪器与试剂细胞呈像使用倒置荧光显微镜（IX71, Olympus）。
微量注射泵（TS-2A）购自保定兰格。
聚二甲基硅氧烷（Polydimethylsiloxane, PDMS）前体及引发剂购自美国Dow Corning公司。
3-氨丙基三乙氧基硅烷（3-aminopropyl triethoxysilane, APTES）、多聚甲醛和Triton X100购自美国Sigma公司。
聚碳酸酯（Polycarbonate，PC）薄膜购自英国Whatman公司。
吖啶橙（Acridine orange, AO）和溴化乙锭（Ethidium bromide, EB）购自美国Amresco公司。
荧光染料DAPI, CellTracker Green和CellTracker Red购自Life Technologies。
微小染色体维持蛋白抗体anti-MCM7和Cy3标记二抗购自Abcam。
1.2 芯片加工微流控芯片包含3层结构：顶层和底层为PDMS 层，中层为PC滤膜（孔径8 µm）。
芯片具有12个辐射排列状的过滤单元，包含进样通道、引流通道以及过滤池（6 mm×4 mm）。
PDMS层使用标准软刻蚀方法加工，剥离后在入口和出口处打孔。
按照文献[12]报导方法，将PDMS层等离子处理后与APTES处理的多孔PC膜封接，得到完整结构芯片。
1.3 样品实验选用子宫颈癌（Hela）细胞进行芯片测试。
Hela细胞收获后配置成细胞悬液并计数。
取不同数量细胞（50, 100, 200和400），加入2.5 mL PBS溶液或健康人血液稀释液（PBS 1:1稀释）中混匀后用于实验。
实验中，Hela细胞使用CellTracker Green荧光染料标记，血细胞使用CellTracker Red标记。
1.4 细胞过滤与标记芯片入口和出口端插入聚四氟乙烯毛细管，入口端毛细管插入含有样品的试管，出口端毛细管则与微量注射泵连接。
设定微量注射泵参数，将含有Hela细胞的溶液以不同流速引入芯片，样品耗尽后再用2 mL PBS冲洗。
截留细胞标记，方法是首先使用含4%多聚甲醛的PBS在100 µL/min流速下冲洗滤膜2 min，完成细胞固定，继而用含0.1% Triton X100图1 过滤式CTC分选芯片Figure 1 The microfilter device for circulating tumor cell enrichment a.芯片实物图。
芯片包含辐射状分布的12个过滤单元，外缘是入口，中央为出口，分别与过滤池连接。
图中标尺长度1 cm；b.过滤单元结构示意图，芯片顶层和底层为包含流路结构的PDMS层，中间层为多孔PC滤膜。
微通道高度为100 µm,宽度 250 µm 。
1.入口；2.过滤池；3.出口。