生化制品技术实验指导教学内容
生化实验指导
实验1 氨基酸纸层析一、实验目的通过对氨基酸的分离和鉴定，掌握纸层析的基本原理及操作方法。
二、实验原理层析法又称色谱法。
是一项重要的分离技术。
利用混合物中各组分理化性质的不同，使各组分以不同程度分配在两相中。
层析的种类： 根据原理分为： a 分配层(纸层析) b 吸附层析 c 亲和层析 d 离子交换层析 根据支持物分为： a 纸层析 b 柱层析 c 薄层层析 d 凝胶过滤层析 分配层析的原理：各种物质在两种互不溶解的溶剂中的分配系数不同，从而达到分离的目的。
分配层析用于分离在水和有机溶剂中都可溶的混合物。
一种物质在两相中达到平衡时，在两相中的浓度之比是一个常数。
物质在流动相里的浓度物质在固定相里的浓度 纸层析:分配的过程：一部分溶质随有机相移动离开原点进入无溶质区，并进行重新分配，不断向前移动。
随着有机相不断向前移动，溶质不断地在两相间进行可逆的分配。
由于各种物质的分配系数不同，随展层溶剂移动的速率也不同，从而达到分离的目的。
移动速度可用比移（Rf ）值表示：色斑中心至上样原点中心的距离K D =图1 氨基酸纸层析示意图R f =溶剂前缘至上样原点中心的距离载体：滤纸固定相：滤纸吸附的水流动相：水饱和酚极性：谷氨酸＞丙氨酸＞脯氨酸对于水－饱和酚的溶剂体系，氨基酸极性越小，KD 值越大，Ｒｆ值也越大，一定时间内随流动相迁移的距离远，反之迁移距离小。
三、实验材料仪器⑴层析缸；⑵层析滤纸；⑶电吹风机；⑸喷雾器；⑹毛细管。
试剂⑴氨基酸标准液（6mg/mL）；⑵氨基酸混合液（6mg/mL)⑶展层剂：水饱和苯酚溶液。
⑷显色剂：0.3%茚三酮丙酮溶液四、操作步骤1、层析滤纸的准备用铅笔在层析滤纸上距离一端2-3cm处划线并标记点样位置。
2、点样(少量多次)用毛细管平口端蘸取少量样品溶液，点样于滤纸的相应位置，要求样品斑点直径不超过0.5cm，干燥后再点样，重复3次。
3、展层将滤纸放入层析缸，使滤纸浸入液面以下，但不要使液面没过点样线。
生化实验方案
生物化学实验教学内容（本部）实验内容与方法实验背景资料1：《小鼠肝脏过氧化氢酶的制备与测定》实验背景资料过氧化氢酶(Catalase) 是一种广泛存在于生物体内的氧化还原酶，尤其在动物的肝脏、肾脏、红细胞中含量较多，其生物学功能是催化细胞内H2O2分解，防止过多H2O2 对细胞的危害。
人工制备的过氧化氢酶可广泛应用于食品与乳制品业，造纸与印染业，农业与环保业，以及医疗卫生业等多领域。
小鼠肝脏过氧化氢酶分子量约为238KD，结构上由4个具有相同多肽链的亚基组成，是以铁卟啉为辅基的结合酶，在407nm波长下有特征性的吸收。
溶于水,几乎不溶于乙醇、氯仿、乙醚等有机试剂，酸性环境下溶解度低易析出，最适温度为37℃，最适pH值约为7.8。
本实验以小鼠肝脏为原料，根据过氧化氢酶溶解性和大分子等特性，通过组织匀浆、盐析、透析、分子筛层析等步骤，提取纯化过氧化氢酶，并对制备的过氧化氢酶进行蛋白浓度、分子量、米氏常数等测定。
2、3. 实验目的熟悉并掌握生化四大技术—离心、层析、比色、电泳。
熟悉并掌握分离纯化小鼠过氧化氢酶和测定其含量的技术和方法。
4. 实验原理匀浆原理：分离纯化某一种蛋白质时，首先要把蛋白质从组织或细胞中释放出来并保持原来的天然状态，不丧失活性，所以要根据所提取蛋白质的性质采用适当的方法将组织和细胞破碎。
过氧化氢酶在乙醇、氯仿等有机溶剂中溶解度很小，而脂质在有机溶剂中溶解度较大,通过加入有机溶剂可实现过氧化氢酶与脂质的分离。
过氧化氢酶在乙醇、氯仿等有机溶剂中稳定性好，不易变性，而某些杂蛋白在有机溶剂中稳定性差，容易变性。
根据上述原理选择0.05mol/L，pH4.0醋酸-乙醇缓冲液以及氯仿作为匀浆缓冲液，通过匀浆法破碎肝组织细胞，匀浆液离心后脂质分配到有机相中，部分杂蛋白则沉淀下来，而过氧化氢酶主要存在于上清液中，分离出上清液即获得过氧化氢酶的粗提液。
盐析原理：蛋白质在高浓度盐溶液中由于水化膜被破坏而溶解度降低。
生化分离技术实践教学大纲
《生化分离技术》实验教学大纲一、实验教学内容与大体要求实验一用溶剂萃取法提取与精制红霉素（一）目的要求1．把握溶剂萃取法提取微生物药物的原理和方式。
2．把握溶剂萃取法提取微生物药物的步骤和操作要求。
（二）实验内容红霉素可在碱性条件下溶于乙酸乙酯有机溶剂中，在酸性条件下溶于水溶液中，在乙酸乙酯相中可成钾盐沉淀析出。
（三）所需实验设施设备1．材料 2g红霉素软膏。
2．器材量杯、烧杯、布氏漏斗及配套抽滤瓶、培育皿、分液漏斗、铁架及铁圈、玻璃棒、镊子、剪子、不锈钢扁匙、PH试纸、滤纸及纺绸布、真空烘箱。
3．试剂乙酸、乙酸乙酯（BA）、饱和食盐水、异丙醇、乙醇-醋酸钾溶液。
（四）教学形式及进程1.讲解实验进程及注意事项，20分钟。
人一组，分组实验。
实验二等电点沉析法分离牛乳中的酪蛋白（一）目的要求1．学习从牛乳中制备酪蛋白的原理和方式。
2．把握等电点沉析分离的大体操作技术。
（二）实验内容蛋白质、酶、氨基酸、核酸等都是两性电解质，当其溶液在某一pH值时，这些生物大分子的所带的正负电荷数量相等而呈电中性，现在溶液的pH值称为该物质的等电点。
生物大分子在其等电点的溶液中，溶解度最低，易发生沉淀，一样疏水性较强的蛋白质可用此法分离。
（三）所需实验设施设备1．材料鲜牛奶。
2．试剂醋酸钠、优级纯醋酸、95%乙醇、乙醚、蒸馏水、L pH 醋酸-醋酸钠缓冲液。
3．器具烧杯（100 mL、）、玻璃棒、滴管、量筒、离心机、水浴锅、布氏漏斗、周密pH 试纸或酸度计、表面皿、电子天平、抽滤瓶。
1.讲解实验进程及注意事项，30分钟。
人一组，分组实验。
实验三离子互换法分离氨基酸（一）目的要求学习用阳离子互换树脂柱分离氨基酸的操作方式和原理。
（二）实验内容本实验采纳磺酸型阳离子互换树脂分离酸性氨基酸天冬氨酸（Asp，pI=，分子量为）和碱性氨基酸赖氨酸（Lys，pI=，分子量为）的混合液。
在pH=条件下，因为pH值低于Lys的pI值，Lys可解离成阳离子结合在树脂上；Asp可解离成阴离子，不被树脂吸附而流出层析柱。
生化工程实验指导
新鲜菠萝皮 四、仪器设备
（一）全班共用：（ 1 ） 电力搅拌器1 台；（ 2 ）离心机 4000~1000rpm 4 台；（ 3 ） 754 紫外分光光度计（石英比色杯） 2-4 台；（ 4 ）水浴箱 2 台； （ 5 ）台式天平（离心平衡用） 2 台；（ 6 ）大漏斗1个，纱布1块；（ 8）蒸馏 水瓶（ 25L 或 50L ） 1 个。
（二）每组配置：洗瓶1个，离心管（10ml）2根。 五、玻璃器皿（以组为单位）
试管（ 6 根），100 ml 烧杯（ 1 个），吸管（ 2 个）、玻棒（ 1 个），移 液管或移液器 5ml(1) 、 1ml(2) 、 0.5ml （ 1 ），漏斗（ 3个），滤纸（ 3~6 张），
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试管架（1）
六、实验试剂
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肌 醇 衍 生 物 ， 在 酸 性 溶 液 中 ， 用 钒 钼 酸 铵 处 理 生 成 黄 色 的 （ NH4 ） 3PO4·NH4VO3·16MoO3 复合物，可在 415nm 波长下比色测定其含量。 三、实验材料 黑曲霉固体发酵培养基 四、仪器设备 （一）全班共用：（ 1 ）离心机 4000~1000rpm 4 台；（ 2 ）721分光光度计（玻 璃比色杯） 2-4 台；（ 3 ）水浴箱 2 台；（ 4 ）台式天平（离心平衡用） 2 台； （ 5 ）蒸馏水瓶（ 25L 或 50L ） 1 个。 （二）每组配置：洗瓶1个 五、玻璃器皿（以组为单位） 20ml 试管（4 根），移液管或移液器 5ml(3) 、 1ml(1) ，试管架（1） 六、试剂与药品： 乙酸缓冲液：称取 34.02g 三水乙酸钠于 1000ml 容量瓶中，加入 1ml 吐温 80，加 900ml 蒸馏水溶解，用 HCl 调至 pH5.5，蒸馏水定容至 1000ml(2 月内有效)。 植酸钠溶液：称取 0.3464g 植酸钠于 50ml 容量瓶中，用乙酸缓冲液溶解，并定容到 刻度（现配现用）。 硝酸溶液:浓硝酸与水以 1:2 的比例混匀。 25％钼酸铵溶液：称取 10g 钼酸铵于 100ml 容量瓶中，加 1.0ml 氨水，蒸馏水定容 至刻度。 0.235％矾酸铵溶液：称取 0.235g 矾酸铵于 100ml 棕色容量瓶中，加入 2ml 硝酸溶 液用蒸馏水定容至刻度（避光，一周内有效）。 反应终止液：钼酸铵溶液、矾酸铵溶液、稀硝酸溶液按 1：1：2 配成反应终止液。 植酸酶粗酶液：称取含酶的霉菌培养物 8g 于烧杯中，加 pH5.0 乙酸缓冲液 30ml， 在摇床 150r/min 振荡 1h，室温静置 10min，单层滤纸过滤，离心取上清液，即为粗 酶液。 磷酸二氢钾：做基准物。 七、实验步骤： 1、标准曲线的制作：
现代生化技术实验讲义(生工10)
实验一双缩脲法测定蛋白质含量一、实验目的了解双缩脲法测定蛋白质浓度的基本原理；熟悉双缩脲法测蛋白质浓度的实验操作方法。
二、实验原理双缩脲（NH3CONHCONH3）是两个分子脲经180℃左右加热，放出1个分子氨后得到的产物在强碱性溶液中，双缩脲与CuSO4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。
凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过1个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。
紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。
测定范围为1~10mg蛋白质。
干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨基酸等。
此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。
主要缺点是灵敏度差。
因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。
三、材料与试剂硫酸铜、酒石酸钾钠、NaOH、KI、酪蛋白双缩脲试剂：取0.75g硫酸铜和3.0g酒石酸钾钠溶于250ml蒸馏水，加入150ml 10%NaOH溶液（可另加0.5gKI以防止Cu2+自动还原成一价氧化亚铜沉淀），用水稀释至500ml。
此试剂可以长期保存。
10mg/ml标准蛋白溶液：取 1.0gNaOH加入500ml蒸馏水中，配成0.05mol/lNaOH溶液。
用0.05mol/lNaOH溶液溶解0.25g酪蛋白，定容至25ml。
待测样品液：可以用酪蛋白配制，也可用蛋清，牛血清蛋白。
实验器材：容量瓶，试管，移液管，量筒，烧杯，胶头滴管，吸耳球，洗瓶，分光光度计。
四、操作方法1、标准曲线的制作在6支刻度试管中，分别按下表所示量加入各种试剂，振荡均匀混匀。
室温下反应30min后，用0号管校零，测定各管在540nm波长下的吸光度，以吸光值作为纵坐标，蛋白质含量为横坐标绘制标准曲线。
2、样品蛋白质含量的测定在刻度试管中加入蛋白样品溶液1m，双缩脲试剂4ml，室温下振荡均匀，显色30min后，用分光光度计于540nm测定各管吸光度，从标准曲线查出样品蛋白质含量。
生化制备技术实验操作指导
生化制备技术实验操作指导温州大学生命与环境科学学院2012年2月实验须知1．实验室规则(1) 实验课须遵守实验室开放时间，应自觉遵守课堂纪律，严禁在实验室吃东西、大声喧哗等行为。
每组成员可按个人时间协作完成实验过程，但必须每位成员都参与到实验当中，并由组长预先提交实验分工安排书，交予指导教师作为签到依据。
(2) 使用仪器、药品、试剂和各种物品必须注意节约, 应特别注意保持药品和试剂的纯净, 严防混杂污染。
(3) 实验台、试剂药品架必须保持整洁, 仪器药品摆放井然有序。
实验完毕,需将药品、试剂排列整齐, 仪器洗净倒置放好, 实验台面抹拭干净, 经教师验收仪器后, 方可离开实验室。
实验仪器为配套使用，不可随意调换。
每组组长在实验进行之前及结束之后负责对仪器和耗材进行清点，及时反映问题。
(4) 使用和洗涤仪器时, 应小心谨慎, 防止损坏仪器。
使用精密仪器时, 应严格遵守操作规程, 发现故障应立即报告教师, 不要自己动手检修。
(5) 在实验过程中要听从教师的指导, 严肃认真地按操作规程进行实验, 并简要、准确地将实验结果和数据记录在实验记录本上。
课后写出实验报告, 实验课程完全结束后由学习委员收齐交给教师。
(6) 仪器损坏时, 应如实向教师报告, 认真填写损坏仪器登记表。
(7) 实验出现问题，不建议盲目重做，应及时总结原因，给出合理解释。
实验课不完全以最终实验结果为评分依据，更重要的是考察分析问题和解决问题的能力。
(8) 每次实验课安排同学轮流值日, 值日生要负责当天实验的卫生和安全检查。
2．实验记录实验课前应认真预习实验内容，将实验名称、实验原理、实验内容和步骤等简单扼要写在记录本上。
实验记录本要标明页码，不能随意撕掉任何一页。
实验中使用的试剂纯度和终浓度以及使用的仪器类型等都要记录清楚。
实验中观察到的现象、结果和得出的数据，应及时直接记在记录本上，绝对不可以随意记在单片纸上。
原始记录必须准确、简练、清楚。
生化实验技术与方法.
实验一糖的薄层层析一实验目的：(1) 熟悉硅胶H薄板的制备过程与方法；(2) 掌握薄层层析的原理以及利用薄层层析对糖类进行定性分析。
二实验原理：层析法是利用混合物中各组分物理化学性质的差异（如吸附力、分子形状及大小、分子亲和力、分配系数等），使各组分在两相（一相为固定的，称为固定相；另一相流过固定相，称为流动相）中的分布程度不同，从而使各组分以不同的速度移动而达到分离的目的。
按操作形式不同可将层析法分为3种类型：柱层析，将固定相装于柱内，使样品沿一个方向移动而达到分离；纸层析，用滤纸做液体的载体，点样后，用流动相展开，以达到分离鉴定的目的；薄层层析，将适当粒度的吸附剂铺成薄层，以纸层析类似的方法进行物质的分离和鉴定。
按机理不同，可分为：吸附层析、分配层析、离子交换层析、凝胶层析、亲和层析。
薄层层析是一种微量而快速的层析方法。
该法是把吸附剂或支持剂涂布在玻璃板上成为一薄层，将要分析的样品滴加到薄层上，然后用合适的溶剂进行展开，使样品各个成分分离，然后进行定性鉴定和定量测定。
根据原理的不同，薄层层析通常有4种类型：吸附薄层层析、分配薄层层析、离子交换薄层层析和薄层电泳。
薄层层析兼有柱层析和纸层析的优点，操作方便，设备简单，展开时间短，灵敏度高，还可在支持物中加入荧光染料有助于鉴别。
本次实验是以硅胶H为吸附剂的薄层层析。
三实验用品及器材：试剂：硅胶H、CMC溶液、鼠李糖、葡萄糖、两种糖混合液、展层溶剂（乙酸乙酯：甲醇：乙酸：水=12：3：3：2（体积比）、显色剂（苯胺-二苯胺-磷酸试剂）；仪器：薄板、烘箱、微量注射器、层析缸。
四实验步骤及结果：(1)硅胶H薄板的制备称取1.2g硅胶H放入事先准备好的研钵中，缓缓加入4.0ml0.5%CMC溶液并研磨，以赶出硅胶当中的气泡，研磨数分钟后，倒在预先准备好的玻璃板上，用手拿着玻板的一角轻轻震荡，使浆液均匀铺开（注意胶一定要均匀），放在水平台上，带水分蒸发后，置105℃烘箱30min。
生化制品技术实验指导
《生化制品技术》实验大纲一、实验目的本实验是《生化制品技术》课程的配套实验，目的是增加学生对生物药物及生物技术制药的感性认识及提高学生的实验操作能力。
要求学生熟悉并掌握生物药物的制备过程和生物技术制药的基本操作方法。
二、适用专业及层次适用于生物制药技术专业学生三、实验内容和学时分配实验一牛奶中酪蛋白和乳蛋白素粗品的制备一、实验目的1.掌握盐析法的原理和操作。
2.掌握等电点沉淀法的原理和基本操作。
二、实验原理乳蛋白素是一种广泛存在于乳品中，合成乳糖所需要的重要蛋白质。
牛奶中主要的蛋白质是酪蛋白（caseins），酪蛋白在pH4.8左右会沉淀析出，但乳蛋白素在pH3左右才会沉淀。
利用此一性质，可先将pH降至4.8，或是在加热至40℃的牛奶中加硫酸钠，将酪蛋白沉淀出来。
酪蛋白不溶于乙醇，这个性质被利用来从酪蛋白粗制剂中除去脂类杂质。
将去除掉酪蛋白的滤液的pH调至3左右，能使乳蛋白素沉淀析出，部分杂质即可随澄清液出去。
在经过一次pH沉淀后，即可得粗乳蛋白素。
三、实验器材烧杯（250ml和100ml）、玻璃试管（10mm×100mm）、离心管（50ml）、磁力搅拌器、pH计、离心机、水浴锅。
四、试剂和材料脱脂牛乳或低脂牛乳、无水硫酸钠、0.1mol/L HCL、0.1mol/L NaOH、滤纸、pH试纸、浓盐酸、乙酸缓冲溶液0.2mol/L （pH4.6）、乙醇。
五、操作步骤1.盐析或等电点沉淀制备酪蛋白（1）将50ml牛乳倒入250ml烧杯中，于40℃水浴中加热并搅拌。
（2）向上述烧杯中缓缓加入（约10min内分次加入）10g无水硫酸钠，再继续搅拌10min（或加热到40℃，再在搅拌下慢慢地加入50ml40℃左右的乙酸缓冲液，直到pH达到4.8左右，将悬浮液冷却至室温，放置5min）。
（3）将溶液用细布过滤，分别收集沉淀和滤液。
沉淀悬浮于30ml乙醇中，倾于布氏漏斗中，过滤出去乙醇溶液，抽干。
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生化制品技术实验指导《生化制品技术》实验大纲一、实验目的本实验是《生化制品技术》课程的配套实验，目的是增加学生对生物药物及生物技术制药的感性认识及提高学生的实验操作能力。
要求学生熟悉并掌握生物药物的制备过程和生物技术制药的基本操作方法。
二、适用专业及层次适用于生物制药技术专业学生三、实验内容和学时分配实验一牛奶中酪蛋白和乳蛋白素粗品的制备一、实验目的1.掌握盐析法的原理和操作。
2.掌握等电点沉淀法的原理和基本操作。
二、实验原理乳蛋白素是一种广泛存在于乳品中，合成乳糖所需要的重要蛋白质。
牛奶中主要的蛋白质是酪蛋白（caseins），酪蛋白在pH4.8左右会沉淀析出，但乳蛋白素在pH3左右才会沉淀。
利用此一性质，可先将pH降至4.8，或是在加热至40℃的牛奶中加硫酸钠，将酪蛋白沉淀出来。
酪蛋白不溶于乙醇，这个性质被利用来从酪蛋白粗制剂中除去脂类杂质。
将去除掉酪蛋白的滤液的pH 调至3左右，能使乳蛋白素沉淀析出，部分杂质即可随澄清液出去。
在经过一次pH沉淀后，即可得粗乳蛋白素。
三、实验器材烧杯（250ml和100ml）、玻璃试管（10mm×100mm）、离心管（50ml）、磁力搅拌器、pH计、离心机、水浴锅。
四、试剂和材料脱脂牛乳或低脂牛乳、无水硫酸钠、0.1mol/L HCL、0.1mol/L NaOH、滤纸、pH试纸、浓盐酸、乙酸缓冲溶液0.2mol/L （pH4.6）、乙醇。
五、操作步骤1.盐析或等电点沉淀制备酪蛋白（1）将50ml牛乳倒入250ml烧杯中，于40℃水浴中加热并搅拌。
（2）向上述烧杯中缓缓加入（约10min内分次加入）10g无水硫酸钠，再继续搅拌10min（或加热到40℃，再在搅拌下慢慢地加入50ml40℃左右的乙酸缓冲液，直到pH达到4.8左右，将悬浮液冷却至室温，放置5min）。
（3）将溶液用细布过滤，分别收集沉淀和滤液。
沉淀悬浮于30ml乙醇中，倾于布氏漏斗中，过滤出去乙醇溶液，抽干。
将沉淀从布氏漏斗中移出，在表面皿上摊开以除去乙醇，干燥后得到的是酪蛋白。
准确称重。
2.等电点沉淀法制备乳蛋白素（1）将制备酪蛋白操作步骤（3）所得滤液置于100ml烧杯中，一边搅拌，一边利用pH计以浓盐酸调整pH至3±0.1。
（2）将溶液倒入离心管中，6000r/min离心15min，倒掉上层液。
（3）在离心管内加入10ml去离子水，振荡，使管内下层物重新悬浮，并以0.1mol/L氢氧化钠溶液调整pH至8.5～9.0（以pH试纸或pH计判定），此时大部分蛋白质均会溶解。
（4）将上述溶液以6000r/min离心10min，上层液倒入50ml烧杯中。
（5）将烧杯置于磁搅拌加热板上，一边搅拌，一边利用pH计以0.1mlo/L盐酸调整pH至3±0.1。
（6）将上述溶液以6000r/min离心10min，倒掉上层液。
取出沉淀干燥，并称重。
六、结果与讨论1.计算出每100ml牛乳所制备出的酪蛋白数量，并与理论产量（3.5g）相比较。
求出实际获得率（%）。
2.计算出100ml牛乳所制备出的乳蛋白素数量。
实验二卵磷脂的制备及鉴定一、实验目的学习从蛋黄中制备卵磷脂的方法和基本操作。
二、实验原理利用卵磷脂可溶于乙醇的性质，将卵黄溶于乙醇，卵磷脂从卵黄中转移到乙醇溶液中，可分离提取出来，而蛋白质等某些杂质从沉淀物中除去。
但由于乙醇溶剂抽提时，其他物质也一起被抽提，如甘油三脂、甾醇等。
利用卵磷脂不溶于丙酮的性质，用丙酮从粗卵磷脂溶液中沉淀磷脂，能使卵磷脂与其他脂质和胆固醇分离开来。
无机盐和卵磷脂可生产络合物沉淀，因此可利用金属盐沉淀剂将卵磷脂从溶液中分离出来，由此除去蛋白质、脂肪等杂质，再用适当溶剂萃取出无机盐和其他磷脂杂质，这样可大大提高卵磷脂纯度。
三、实验器材离心机、旋转蒸发仪、布式漏斗、抽滤瓶、真空干燥箱、层析缸、紫外分光光度计。
四、试剂和材料95%乙醇、丙酮、10%ZnCl2、2%氯仿、碘、甲醇、0.1%乙醇、无水乙醇。
五、操作步骤1、粗提室温下，取适量的鸡蛋卵黄用2倍于卵黄体积的95%乙醇进行提取，混合搅拌，离心分离（3000r/min，5min），将沉淀物重复提取3次，回收上清夜；然后减压蒸馏（45℃）至近干，用少量石油醚洗下粘壁的黄色油状物质；加入丙酮，抽滤，分离出沉淀物，真空干燥（40℃，30min），得到淡黄色的粗卵磷脂，称重。
2、精制取一定量的卵磷脂粗品，用无水乙醇溶解，得到约10%的乙醇粗提液，加入相当于卵磷脂质量的10%的ZnCl2水溶液，室温搅拌0.5h；分离沉淀物，加入适量冰丙酮（4℃）洗涤，搅拌1h，再用丙酮反复研洗，直到丙酮洗液为近无色止，得到白色蜡状的精卵磷脂；干燥；称重。
3、鉴定（1）薄层色谱分析将卵磷脂样品与对照品分别配成2%氯仿溶液，用GF254硅胶板进行层析，展开剂为氯仿∶甲醇∶水（65∶25∶4），层析完毕后，取出薄板，干燥，碘蒸汽显色。
（2）紫外吸收光谱测定将一定量卵磷脂样品溶于无水乙醇，配成0.1%乙醇溶液，用紫外分光光度计扫描其在90～400nm的吸收光谱，可测得卵磷脂的紫外最大吸收峰。
卵磷脂紫外最大吸收峰在215nm波长。
六、结果与讨论1.计算卵磷脂得率，讨论影响卵磷脂得率的主要因素。
2.根据薄层色谱图谱、紫外吸收光谱分析所制备的卵磷脂的纯度。
实验三薄层板的制备及使用实验一薄层色谱板的制备和使用目的要求：通过实验进一步理解薄层色谱技术理论，熟悉掌握薄层色谱板的制备和使用方法。
一、薄层层析的基本原理把吸附剂（固定相）均匀地铺在一块玻璃板上，将待分离的样品溶液点加在一薄层板的一端，在密闭的容器中用适当的溶剂（流动相）展开，由于吸附剂对不同物质的吸附力大小不同及溶剂对不同物质溶解分配系数不同，当溶剂流过时，各物质在吸附剂和溶剂之间发生连续不断地吸附，解吸附，再吸附，再解吸附。
不易被吸附或易被溶剂溶解的物质相对移动得快一些。
经过一段时间的展开，不同的物质被彼此分开，最后形成相互分离的斑点。
将展开完毕的薄层板从密闭容器中取出后，应用特定的试药或方法将斑点显色，从而达到定性和定量的目的。
二、薄层板的制备1．玻璃板用一块玻璃板涂上很薄的吸附剂，如硅胶或氧化铝等，玻璃板要求薄厚一致，大小相同，表面光滑平整，一般玻璃只要合乎这些要求就可。
如果找不到平整均一的，将旧光学照像底片截成同样大小也可以。
用前先将玻璃用肥皂和水洗干净，必要时浸泡在清洗液中，然后水洗烤干，用纱布擦光。
玻璃板大小有各种规格，一般有20×20、20×10、20×5厘米，也有更小的，可根据需要自行设计。
宽度要求至少能点开两三个样品，每两点之间相隔至少1.5厘米，玻板长度一般要满足展开10厘米的距离。
点样的起点应距底边至少1.5厘米的距离。
2．吸附剂应用最广泛的为硅胶和氧化铝，市场上有专供薄层色谱用的吸附剂，规格分不含粘合剂的硅胶H，氧化铝H和含有粘合剂熟石膏的硅胶G，氧化铝G，如市售硅胶G含13％熟石膏，氧化铝分中性、酸性、碱性三种。
吸附剂的粒度范围最好在180－200目之间，太小了流速慢，太大则影响分离效果。
如不合要求，应过筛。
3．薄层板的涂布最简单的涂布方法是用两条比玻璃板厚0．25毫米的玻璃条或有机玻璃条（或在同样厚度的玻璃条下粘一层胶布），将玻璃板夹住，把调好的吸附剂浆液平铺在薄层板上，然后用一有机玻璃条或直尺，迅速均匀地向前推进，就象推血片一样，只要推进的速度均匀一致，即可得到薄厚均匀的薄层板，如在一块玻璃板末端再接一块相同的玻璃板，把剩余的装液接过去，可使涂层边缘整齐，厚度一致，吸附剂浆液的加水量和搅拌时间是涂布成败的关键，像12×8平方厘米的玻璃板需要2~3克硅胶G，加4~6毫升水即可，只要技术熟练即能涂成厚薄一致，光滑平整的一块薄层板。
不同性质不同批号的吸附剂，加水量和搅拌时间有时可有差异，应根据情况摸出规律。
为了达到涂布的各板厚度均匀一致，最好采用涂布器进行薄层的涂布。
为了增加薄层的牢固性及易于保存，可在涂布过程中加入某些粘合剂以增加薄层的硬度。
一般采用添加剂羧甲基纤维素钠（CMC—Na），应用方法是取CMC-Na 1克溶于100毫升水中，加热煮沸溶解，按比例与硅胶搅匀，铺板。
涂成之后先把玻板放在平面上，室内干固，再对光检查，看是不是均匀，有无气泡，平整光洁度如何，合格的上烤箱110℃加热30分钟进行活化，冷却后贮于干燥器内备用。
在进行实验时，应尽量可能采用同批号涂布活化的薄层板，以减少因活化不一致引起的Rf值发生差异，目前国内市场已有成品供应，如黄岩化学分析材料厂即有各种类型的薄层板出售。
三、薄层板的使用1．点样将样品溶于适当的溶剂中（应尽量避免有水），取微量注射器或玻璃毛细管截齐后，吸取一定量的检样，轻轻接触到薄层上，使样品自动吸到薄层上，点的直径不要超过0.3厘米，一次不能点完，待干后再点，稍有过分就会损伤板面，影响展开后的斑点形状。
每两个样点之间相距至少1.5厘米。
点样的起点距薄板底边至少1.5厘米，以免样点浸入展开溶剂中，同块薄板上各样点应保持在与底边平行的一条直线上，为控制好点样距离，应用薄层点样尺架。
2．展开根据薄层板大小，自行选用适当玻璃标本缸，长方形，如17×10×6厘米的标本缸可容纳下15×9厘米的玻璃板。
采用较大的玻璃缸和玻璃板时，在缸内沿周围缸壁衬一层预先浸有溶剂的滤纸，以便缸内展开溶剂易达到饱和，防止边缘效应（即两边缘的点走得快）和同一物质Rf值不一致现象。
一般将薄层板斜置展开容器内，密闭。
先不使溶剂浸湿薄层板，饱和10~15分钟后再进行展开，展开溶剂沿着薄层板向上移动。
对加粘合剂的涂板可以近于垂直的状态进行展开，而对未加粘合剂的薄层板则必须以倾斜状态（15度角）进行展开。
为了防止产生“边缘效应”和展开溶剂不饱和现象。
还可采用夹心式展开容器，其方法是将薄层板的左右两侧各刮去5~10毫米，垫上条状玻璃或塑料，盖一块与薄层板同样大小的玻璃，用夹子将两边夹好，插入展开溶剂中进行展开，并能取得良好效果。
3．显色薄层展开后，凉干。
如含粘合剂，即可直接喷显色剂，使之显色，有的还需经紫外线（254nm）照射后方能显色；对不含粘合剂的薄板，在喷显色剂时应尽量远离薄层板，否则会连吸附剂一起吹掉，应予以注意。
四、检样的定性定量分析1．比移值（Rf）的测定当样品的薄板一端被展开，经过毛细管作用流向另一端，样品是按一定的比例分配在固定相与流动相之间。
并沿着溶剂流动的方向移动，由于样品中各组分在两相中分配系数不同，各组分的移动速度也不同，经一定距离后使各组分彼此分离。
样品各组分移动的速率，亦即分离后在薄层板上的位置与溶剂展开前沿的距离的比值为比移植。