生化制品技术实验指导
生化实验操作方法
生化实验操作方法生化实验操作方法是进行生化实验的步骤和操作流程的总称。
生化实验通常用于研究生物体内的生物大分子结构、组成、功能以及生物反应等方面的变化。
下面我将详细介绍生化实验的操作方法。
首先，实验前要做好准备工作。
包括准备实验所需的试剂和仪器设备，并检查仪器设备的工作情况。
同时，要进行实验场地的清洁和消毒，以确保实验的严密性和安全性。
接下来，进行实验前的样品处理。
样品可以是生物体的组织、细胞或者生物体内的某种物质。
样品处理的目的是提取和纯化所需的生物大分子或物质，使其达到实验所需的浓度和纯度要求。
常用的样品处理方法有离心、超声波破碎、酶解等。
然后，进行实验的具体操作。
根据实验的目的和要求，选择相应的实验方法和技术进行操作。
常见的生化实验方法包括蛋白质分离与纯化、核酸提取与分析、酶活性分析、分子克隆、酶联免疫吸附实验等。
在实验操作过程中，要严格按照实验方法和步骤进行操作，掌握好技术细节。
操作时要注意消毒、洗手、穿戴实验服和手套等个人防护措施，确保实验过程的安全。
实验中要保持实验器皿和工作台的清洁，并避免交叉污染。
实验后，要进行实验数据的记录和分析。
实验结果一般通过测定生物大分子的浓度、活性或者结构等指标来进行评价。
实验数据的记录可以通过手动记录、仪器记录或电脑记录等方式进行，同时要对实验数据进行统计和分析，以得到科学可靠的结论。
最后，进行实验材料和实验场地的清理工作。
彻底清洗和消毒实验器皿和设备，将废液和废弃物妥善处理。
同时对实验室进行清洁，保持环境整洁。
总结起来，生化实验操作方法包括实验准备、样品处理、实验操作、数据记录与分析以及实验清理等步骤。
准确掌握操作方法，合理选用适当的实验技术，严格遵循实验操作的规范和安全要求，才能获得可靠的实验结果，并为科研工作或医药领域的应用提供有力的支持。
生化工程实验指导
新鲜菠萝皮 四、仪器设备
（一）全班共用：（ 1 ） 电力搅拌器1 台；（ 2 ）离心机 4000~1000rpm 4 台；（ 3 ） 754 紫外分光光度计（石英比色杯） 2-4 台；（ 4 ）水浴箱 2 台； （ 5 ）台式天平（离心平衡用） 2 台；（ 6 ）大漏斗1个，纱布1块；（ 8）蒸馏 水瓶（ 25L 或 50L ） 1 个。
（二）每组配置：洗瓶1个，离心管（10ml）2根。 五、玻璃器皿（以组为单位）
试管（ 6 根），100 ml 烧杯（ 1 个），吸管（ 2 个）、玻棒（ 1 个），移 液管或移液器 5ml(1) 、 1ml(2) 、 0.5ml （ 1 ），漏斗（ 3个），滤纸（ 3~6 张），
6
试管架（1）
六、实验试剂
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肌 醇 衍 生 物 ， 在 酸 性 溶 液 中 ， 用 钒 钼 酸 铵 处 理 生 成 黄 色 的 （ NH4 ） 3PO4·NH4VO3·16MoO3 复合物，可在 415nm 波长下比色测定其含量。 三、实验材料 黑曲霉固体发酵培养基 四、仪器设备 （一）全班共用：（ 1 ）离心机 4000~1000rpm 4 台；（ 2 ）721分光光度计（玻 璃比色杯） 2-4 台；（ 3 ）水浴箱 2 台；（ 4 ）台式天平（离心平衡用） 2 台； （ 5 ）蒸馏水瓶（ 25L 或 50L ） 1 个。 （二）每组配置：洗瓶1个 五、玻璃器皿（以组为单位） 20ml 试管（4 根），移液管或移液器 5ml(3) 、 1ml(1) ，试管架（1） 六、试剂与药品： 乙酸缓冲液：称取 34.02g 三水乙酸钠于 1000ml 容量瓶中，加入 1ml 吐温 80，加 900ml 蒸馏水溶解，用 HCl 调至 pH5.5，蒸馏水定容至 1000ml(2 月内有效)。 植酸钠溶液：称取 0.3464g 植酸钠于 50ml 容量瓶中，用乙酸缓冲液溶解，并定容到 刻度（现配现用）。 硝酸溶液:浓硝酸与水以 1:2 的比例混匀。 25％钼酸铵溶液：称取 10g 钼酸铵于 100ml 容量瓶中，加 1.0ml 氨水，蒸馏水定容 至刻度。 0.235％矾酸铵溶液：称取 0.235g 矾酸铵于 100ml 棕色容量瓶中，加入 2ml 硝酸溶 液用蒸馏水定容至刻度（避光，一周内有效）。 反应终止液：钼酸铵溶液、矾酸铵溶液、稀硝酸溶液按 1：1：2 配成反应终止液。 植酸酶粗酶液：称取含酶的霉菌培养物 8g 于烧杯中，加 pH5.0 乙酸缓冲液 30ml， 在摇床 150r/min 振荡 1h，室温静置 10min，单层滤纸过滤，离心取上清液，即为粗 酶液。 磷酸二氢钾：做基准物。 七、实验步骤： 1、标准曲线的制作：
生化的操作规程
生化的操作规程生化操作规程一、安全注意事项1. 严格执行实验室安全规范，佩戴实验室服装、手套、口罩等个人防护用品。
2. 实施实验室操作前，必须熟悉实验操作规程，了解实验操作的化学品成分、危害等信息。
3. 在实验室工作期间，严禁食品进入实验室，避免发生食品与药品混淆的情况。
4. 注意实验室仪器设备的安全操作，避免仪器设备使用不当造成事故发生。
5. 实验操作结束后，及时清理实验台面和仪器设备，减少实验室污染和危险。
6. 严禁实验室离开时实验品遗留在台面上，必须及时清除并妥善处理。
二、生物实验操作规程1. 在进行细胞培养操作时，需提前准备好培养基、细胞母液等，保证实验的顺利进行。
2. 细胞培养操作前，必须进行培养器皿的消毒和清洗，避免细菌或其他微生物的污染。
3. 实验过程中，要注意细胞培养的温度、湿度和气体环境，保持适宜的生长条件。
4. 在进行基因操作实验时，必须佩戴手套，避免基因样品与身体接触。
5. 基因操作实验时，应严格按照实验操作规程操作，防止基因样品的泄露和交叉污染。
6. 在进行蛋白质提取实验时，注意保持样品的纯净度和避免反应酶的降解。
7. 实施实验室操作前，需准备好所需的试剂和仪器设备，并进行校正和消毒。
三、化学实验操作规程1. 严格按照化学实验操作规程进行实验，遵守实验室安全操作流程。
2. 化学品操作时要注意佩戴防护手套和眼睛防护装置，避免化学品与皮肤或眼部接触。
3. 化学实验室操作时，需保持环境清洁、通风良好，防止毒气积聚和氧气不足。
4. 在进行有毒化学品实验时，需掌握如何保存、分装和处理，防止对人体和环境造成危害。
5. 实验室操作结束后，必须妥善处理废弃物和有害物质，规范使用防护用品进行清理。
6. 所有化学实验室使用的试剂和化学品必须妥善标记和存放，避免发生误用等事故。
四、实验室管理规程1. 实验室操作人员必须经过相关培训和考核，了解实验室安全操作流程。
2. 实验室设备和仪器应定期维护和检测，确保其正常运行和安全使用。
生化制备技术实验操作指导
生化制备技术实验操作指导温州大学生命与环境科学学院2012年2月实验须知1．实验室规则(1) 实验课须遵守实验室开放时间，应自觉遵守课堂纪律，严禁在实验室吃东西、大声喧哗等行为。
每组成员可按个人时间协作完成实验过程，但必须每位成员都参与到实验当中，并由组长预先提交实验分工安排书，交予指导教师作为签到依据。
(2) 使用仪器、药品、试剂和各种物品必须注意节约, 应特别注意保持药品和试剂的纯净, 严防混杂污染。
(3) 实验台、试剂药品架必须保持整洁, 仪器药品摆放井然有序。
实验完毕,需将药品、试剂排列整齐, 仪器洗净倒置放好, 实验台面抹拭干净, 经教师验收仪器后, 方可离开实验室。
实验仪器为配套使用，不可随意调换。
每组组长在实验进行之前及结束之后负责对仪器和耗材进行清点，及时反映问题。
(4) 使用和洗涤仪器时, 应小心谨慎, 防止损坏仪器。
使用精密仪器时, 应严格遵守操作规程, 发现故障应立即报告教师, 不要自己动手检修。
(5) 在实验过程中要听从教师的指导, 严肃认真地按操作规程进行实验, 并简要、准确地将实验结果和数据记录在实验记录本上。
课后写出实验报告, 实验课程完全结束后由学习委员收齐交给教师。
(6) 仪器损坏时, 应如实向教师报告, 认真填写损坏仪器登记表。
(7) 实验出现问题，不建议盲目重做，应及时总结原因，给出合理解释。
实验课不完全以最终实验结果为评分依据，更重要的是考察分析问题和解决问题的能力。
(8) 每次实验课安排同学轮流值日, 值日生要负责当天实验的卫生和安全检查。
2．实验记录实验课前应认真预习实验内容，将实验名称、实验原理、实验内容和步骤等简单扼要写在记录本上。
实验记录本要标明页码，不能随意撕掉任何一页。
实验中使用的试剂纯度和终浓度以及使用的仪器类型等都要记录清楚。
实验中观察到的现象、结果和得出的数据，应及时直接记在记录本上，绝对不可以随意记在单片纸上。
原始记录必须准确、简练、清楚。
生化制品技术实验指导
《生化制品技术》实验大纲一、实验目的本实验是《生化制品技术》课程的配套实验，目的是增加学生对生物药物及生物技术制药的感性认识及提高学生的实验操作能力。
要求学生熟悉并掌握生物药物的制备过程和生物技术制药的基本操作方法。
二、适用专业及层次适用于生物制药技术专业学生三、实验内容和学时分配实验一牛奶中酪蛋白和乳蛋白素粗品的制备一、实验目的1.掌握盐析法的原理和操作。
2.掌握等电点沉淀法的原理和基本操作。
二、实验原理乳蛋白素是一种广泛存在于乳品中，合成乳糖所需要的重要蛋白质。
牛奶中主要的蛋白质是酪蛋白（caseins），酪蛋白在pH4.8左右会沉淀析出，但乳蛋白素在pH3左右才会沉淀。
利用此一性质，可先将pH降至4.8，或是在加热至40℃的牛奶中加硫酸钠，将酪蛋白沉淀出来。
酪蛋白不溶于乙醇，这个性质被利用来从酪蛋白粗制剂中除去脂类杂质。
将去除掉酪蛋白的滤液的pH调至3左右，能使乳蛋白素沉淀析出，部分杂质即可随澄清液出去。
在经过一次pH沉淀后，即可得粗乳蛋白素。
三、实验器材烧杯（250ml和100ml）、玻璃试管（10mm×100mm）、离心管（50ml）、磁力搅拌器、pH计、离心机、水浴锅。
四、试剂和材料脱脂牛乳或低脂牛乳、无水硫酸钠、0.1mol/L HCL、0.1mol/L NaOH、滤纸、pH试纸、浓盐酸、乙酸缓冲溶液0.2mol/L （pH4.6）、乙醇。
五、操作步骤1.盐析或等电点沉淀制备酪蛋白（1）将50ml牛乳倒入250ml烧杯中，于40℃水浴中加热并搅拌。
（2）向上述烧杯中缓缓加入（约10min内分次加入）10g无水硫酸钠，再继续搅拌10min（或加热到40℃，再在搅拌下慢慢地加入50ml40℃左右的乙酸缓冲液，直到pH达到4.8左右，将悬浮液冷却至室温，放置5min）。
（3）将溶液用细布过滤，分别收集沉淀和滤液。
沉淀悬浮于30ml乙醇中，倾于布氏漏斗中，过滤出去乙醇溶液，抽干。
生化实验报告操作流程
一、实验目的1. 学习并掌握酶活性测定的基本原理和方法。
2. 掌握使用紫外分光光度计测定酶活性的技术。
3. 了解酶活性受底物浓度、pH值、温度等因素的影响。
二、实验原理酶活性是指酶催化一定化学反应的能力。
在一定条件下，酶催化反应的速率与酶的浓度成正比。
本实验通过测定在一定时间内酶催化底物反应产生的产物浓度，来计算酶的活性。
三、实验材料1. 酶制剂2. 底物溶液3. 紫外分光光度计4. pH计5. 恒温水浴6. 移液器7. 试管8. 离心机9. 试剂：缓冲液、标准品等四、实验步骤1. 准备实验器材和试剂：将酶制剂、底物溶液、缓冲液等试剂准备好，确保所有试剂均在有效期内。
2. 设置实验组：- 在试管中加入一定量的酶制剂和底物溶液。
- 调整pH值至适宜范围。
- 将试管放入恒温水浴中，设定反应温度。
3. 测定酶活性：- 使用移液器准确量取一定体积的底物溶液和酶制剂。
- 将试管放入紫外分光光度计中，设定波长和灵敏度。
- 记录反应前后的吸光度值。
- 重复上述步骤，设置不同底物浓度、pH值、温度等条件，进行对比实验。
4. 数据处理：- 根据吸光度值和标准曲线，计算产物浓度。
- 根据反应时间和产物浓度，计算酶活性。
- 分析不同条件对酶活性的影响。
5. 结果分析：- 对实验数据进行统计分析，得出结论。
- 对实验过程中出现的问题进行分析，提出改进措施。
五、注意事项1. 实验过程中应严格遵守操作规程，确保实验安全。
2. 使用移液器时，注意准确量取试剂，避免误差。
3. 调整pH值时，应使用精确的pH计，确保pH值稳定。
4. 实验过程中应保持实验环境清洁，避免污染。
5. 仔细观察实验现象，及时调整实验条件。
六、实验结果与分析（此处根据实际实验数据填写）七、结论（此处根据实验结果填写）八、讨论（此处对实验过程中出现的问题进行分析，并提出改进措施）九、参考文献（此处列出实验过程中参考的文献）十、附录（此处可附上实验数据表格、图片等）注意：以上实验报告仅为示例，具体实验步骤和结果分析需根据实际实验情况进行调整。
生化实验室作业指导书
生化实验室作业指导书
1. 实验目的，指导书会明确列出每个实验的目的，即该实验的重点是什么，学生需要通过实验达到什么样的学习目标。
2. 实验原理，指导书会详细介绍实验涉及的生化原理和相关背景知识，以便学生能够理解实验的理论基础。
3. 实验步骤，具体的操作步骤是指导书中非常重要的一部分，会详细描述每个实验的步骤和操作方法，以及所需的实验器材和试剂。
4. 安全注意事项，在进行生化实验时，安全是非常重要的，指导书会列出实验室的安全规定和注意事项，包括化学品的使用、实验器材的操作注意事项等。
5. 数据记录与分析，指导书通常会要求学生记录实验过程中的数据，以及进行数据分析和实验结果的总结与讨论。
6. 实验报告要求，最后，指导书通常会明确要求学生完成实验报告的格式和内容要求，包括实验目的、原理、步骤、结果分析等
内容。
生化实验室作业指导书的编写需要考虑到学生的实际水平和实
验条件，以及实验的教学目标和要求。
指导书的内容应该清晰明了，能够帮助学生顺利完成实验并达到预期的学习效果。
同时，指导书
也应该注重培养学生的实验操作能力、数据处理能力和实验报告撰
写能力。
希望这些内容能够帮助你更好地理解生化实验室作业指导
书的内容和要求。
《生化技术》课程实习实验指导书新格式(1)精品].doc
![《生化技术》课程实习实验指导书新格式(1)精品].doc](https://img.taocdn.com/s3/m/e4f57a066f1aff00bfd51ec1.png)
望的工程专地《生化技术》课程实习指导书张如新、任光云编著邵阳学院生物与化学工程系2012年10月实习项目一、超临界CO2萃取山茱萸中有效成分熊果酸 (1)实习项目二、加携带剂超临界CO2萃取山茱萸有效成分熊果酸 (5)实习项冃三、HPLC法测定萃取物中有效成分熊果酸的含量 (7)实习项目一、山茱萸有效成分熊果酸的超临界CO2萃舟一、实验目的与要求1、掌握超临界CO2萃取的原理2、掌握超临界CO2萃取的操作3、掌握材料的处理与准备二、原理超临界CO2萃取是利用欲分离物质与杂质在超临界CO2中溶解度不同而达到分离的一种萃取技术。
超临界流体兼有气、液两者的特点，密度接近于液体，粘度和扩散系数接近于气体，它不仅具冇与液体溶剂相当的溶解能力，而且具冇优良的传质性能。
超临界流体CO2萃取技术就是利用这种超临界流体的特殊性质，在高压条件卜•与待分离的固体或液体混合物接触，有效成分能溶解在超临界流体co2,通过调节系统的操作压力和温度，可萃取所需要的物质。
随后通过降压或升温的方法，降低超临界流体CO2的密度, 使萃取物溶解度降低，使目的物与超临界流体分离，萃取得到有效成分即目的物。
三、材料与仪器1、材料：山茱萸2、CO2气体3、仪器：超临界CO?萃取装置4、植物样木粉碎机四、操作步骤1、材料的准备选择优质的山茱萸材料，把其中的杂质去掉，称取1公斤山茱萸在70-100 C烤箱中烘烤3〜4小时至完全干燥为止。
用粉碎机粉碎（过40目筛），粗粉要再次粉碎，直到能过40目筛。
2、萃取称取100 g粉碎的山茱萸装入萃取缸并把萃取缸安装好，在压力为30MPa、温度为40"C下萃取3〜4小时。
并按CO?超临界萃取装置使用说明书（见附页）开机进行萃取操作：（注意：一定要在熟练掌握原理和操作规则情况卜•才止式开机操作。
）3、收集萃取物在收集萃取物之前，应准备4个洗干净并烘干的250ml锥形瓶。
毎萃取1个小时收集一次，具体操作按说明帖。
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《生化制品技术》实验大纲一、实验目的本实验是《生化制品技术》课程的配套实验，目的是增加学生对生物药物及生物技术制药的感性认识及提高学生的实验操作能力。
要求学生熟悉并掌握生物药物的制备过程和生物技术制药的基本操作方法。
二、适用专业及层次适用于生物制药技术专业学生三、实验内容和学时分配实验一牛奶中酪蛋白和乳蛋白素粗品的制备一、实验目的1.掌握盐析法的原理和操作。
2.掌握等电点沉淀法的原理和基本操作。
二、实验原理乳蛋白素是一种广泛存在于乳品中，合成乳糖所需要的重要蛋白质。
牛奶中主要的蛋白质是酪蛋白（caseins），酪蛋白在pH4.8左右会沉淀析出，但乳蛋白素在pH3左右才会沉淀。
利用此一性质，可先将pH降至4.8，或是在加热至40℃的牛奶中加硫酸钠，将酪蛋白沉淀出来。
酪蛋白不溶于乙醇，这个性质被利用来从酪蛋白粗制剂中除去脂类杂质。
将去除掉酪蛋白的滤液的pH调至3左右，能使乳蛋白素沉淀析出，部分杂质即可随澄清液出去。
在经过一次pH沉淀后，即可得粗乳蛋白素。
三、实验器材烧杯（250ml和100ml）、玻璃试管（10mm×100mm）、离心管（50ml）、磁力搅拌器、pH计、离心机、水浴锅。
四、试剂和材料脱脂牛乳或低脂牛乳、无水硫酸钠、0.1mol/L HCL、0.1mol/L NaOH、滤纸、pH试纸、浓盐酸、乙酸缓冲溶液0.2mol/L （pH4.6）、乙醇。
五、操作步骤1.盐析或等电点沉淀制备酪蛋白（1）将50ml牛乳倒入250ml烧杯中，于40℃水浴中加热并搅拌。
（2）向上述烧杯中缓缓加入（约10min内分次加入）10g无水硫酸钠，再继续搅拌10min（或加热到40℃，再在搅拌下慢慢地加入50ml40℃左右的乙酸缓冲液，直到pH达到4.8左右，将悬浮液冷却至室温，放置5min）。
（3）将溶液用细布过滤，分别收集沉淀和滤液。
沉淀悬浮于30ml乙醇中，倾于布氏漏斗中，过滤出去乙醇溶液，抽干。
将沉淀从布氏漏斗中移出，在表面皿上摊开以除去乙醇，干燥后得到的是酪蛋白。
准确称重。
2.等电点沉淀法制备乳蛋白素（1）将制备酪蛋白操作步骤（3）所得滤液置于100ml烧杯中，一边搅拌，一边利用pH计以浓盐酸调整pH至3±0.1。
（2）将溶液倒入离心管中，6000r/min离心15min，倒掉上层液。
（3）在离心管内加入10ml去离子水，振荡，使管内下层物重新悬浮，并以0.1mol/L氢氧化钠溶液调整pH至8.5～9.0（以pH试纸或pH计判定），此时大部分蛋白质均会溶解。
（4）将上述溶液以6000r/min离心10min，上层液倒入50ml烧杯中。
（5）将烧杯置于磁搅拌加热板上，一边搅拌，一边利用pH计以0.1mlo/L 盐酸调整pH至3±0.1。
（6）将上述溶液以6000r/min离心10min，倒掉上层液。
取出沉淀干燥，并称重。
六、结果与讨论1.计算出每100ml牛乳所制备出的酪蛋白数量，并与理论产量（3.5g）相比较。
求出实际获得率（%）。
2.计算出100ml牛乳所制备出的乳蛋白素数量。
实验二卵磷脂的制备及鉴定一、实验目的学习从蛋黄中制备卵磷脂的方法和基本操作。
二、实验原理利用卵磷脂可溶于乙醇的性质，将卵黄溶于乙醇，卵磷脂从卵黄中转移到乙醇溶液中，可分离提取出来，而蛋白质等某些杂质从沉淀物中除去。
但由于乙醇溶剂抽提时，其他物质也一起被抽提，如甘油三脂、甾醇等。
利用卵磷脂不溶于丙酮的性质，用丙酮从粗卵磷脂溶液中沉淀磷脂，能使卵磷脂与其他脂质和胆固醇分离开来。
无机盐和卵磷脂可生产络合物沉淀，因此可利用金属盐沉淀剂将卵磷脂从溶液中分离出来，由此除去蛋白质、脂肪等杂质，再用适当溶剂萃取出无机盐和其他磷脂杂质，这样可大大提高卵磷脂纯度。
三、实验器材离心机、旋转蒸发仪、布式漏斗、抽滤瓶、真空干燥箱、层析缸、紫外分光光度计。
四、试剂和材料95%乙醇、丙酮、10%ZnCl2、2%氯仿、碘、甲醇、0.1%乙醇、无水乙醇。
五、操作步骤1、粗提室温下，取适量的鸡蛋卵黄用2倍于卵黄体积的95%乙醇进行提取，混合搅拌，离心分离（3000r/min，5min），将沉淀物重复提取3次，回收上清夜；然后减压蒸馏（45℃）至近干，用少量石油醚洗下粘壁的黄色油状物质；加入丙酮，抽滤，分离出沉淀物，真空干燥（40℃，30min），得到淡黄色的粗卵磷脂，称重。
2、精制取一定量的卵磷脂粗品，用无水乙醇溶解，得到约10%的乙醇粗提液，加入相当于卵磷脂质量的10%的ZnCl2水溶液，室温搅拌0.5h；分离沉淀物，加入适量冰丙酮（4℃）洗涤，搅拌1h，再用丙酮反复研洗，直到丙酮洗液为近无色止，得到白色蜡状的精卵磷脂；干燥；称重。
3、鉴定（1）薄层色谱分析将卵磷脂样品与对照品分别配成2%氯仿溶液，用GF254硅胶板进行层析，展开剂为氯仿∶甲醇∶水（65∶25∶4），层析完毕后，取出薄板，干燥，碘蒸汽显色。
（2）紫外吸收光谱测定将一定量卵磷脂样品溶于无水乙醇，配成0.1%乙醇溶液，用紫外分光光度计扫描其在90～400nm的吸收光谱，可测得卵磷脂的紫外最大吸收峰。
卵磷脂紫外最大吸收峰在215nm波长。
六、结果与讨论1.计算卵磷脂得率，讨论影响卵磷脂得率的主要因素。
2.根据薄层色谱图谱、紫外吸收光谱分析所制备的卵磷脂的纯度。
实验三薄层板的制备及使用实验一薄层色谱板的制备和使用目的要求：通过实验进一步理解薄层色谱技术理论，熟悉掌握薄层色谱板的制备和使用方法。
一、薄层层析的基本原理把吸附剂（固定相）均匀地铺在一块玻璃板上，将待分离的样品溶液点加在一薄层板的一端，在密闭的容器中用适当的溶剂（流动相）展开，由于吸附剂对不同物质的吸附力大小不同及溶剂对不同物质溶解分配系数不同，当溶剂流过时，各物质在吸附剂和溶剂之间发生连续不断地吸附，解吸附，再吸附，再解吸附。
不易被吸附或易被溶剂溶解的物质相对移动得快一些。
经过一段时间的展开，不同的物质被彼此分开，最后形成相互分离的斑点。
将展开完毕的薄层板从密闭容器中取出后，应用特定的试药或方法将斑点显色，从而达到定性和定量的目的。
二、薄层板的制备1．玻璃板用一块玻璃板涂上很薄的吸附剂，如硅胶或氧化铝等，玻璃板要求薄厚一致，大小相同，表面光滑平整，一般玻璃只要合乎这些要求就可。
如果找不到平整均一的，将旧光学照像底片截成同样大小也可以。
用前先将玻璃用肥皂和水洗干净，必要时浸泡在清洗液中，然后水洗烤干，用纱布擦光。
玻璃板大小有各种规格，一般有20×20、20×10、20×5厘米，也有更小的，可根据需要自行设计。
宽度要求至少能点开两三个样品，每两点之间相隔至少1.5厘米，玻板长度一般要满足展开10厘米的距离。
点样的起点应距底边至少1.5厘米的距离。
2．吸附剂应用最广泛的为硅胶和氧化铝，市场上有专供薄层色谱用的吸附剂，规格分不含粘合剂的硅胶H，氧化铝H和含有粘合剂熟石膏的硅胶G，氧化铝G，如市售硅胶G含13％熟石膏，氧化铝分中性、酸性、碱性三种。
吸附剂的粒度范围最好在180－200目之间，太小了流速慢，太大则影响分离效果。
如不合要求，应过筛。
3．薄层板的涂布最简单的涂布方法是用两条比玻璃板厚0．25毫米的玻璃条或有机玻璃条（或在同样厚度的玻璃条下粘一层胶布），将玻璃板夹住，把调好的吸附剂浆液平铺在薄层板上，然后用一有机玻璃条或直尺，迅速均匀地向前推进，就象推血片一样，只要推进的速度均匀一致，即可得到薄厚均匀的薄层板，如在一块玻璃板末端再接一块相同的玻璃板，把剩余的装液接过去，可使涂层边缘整齐，厚度一致，吸附剂浆液的加水量和搅拌时间是涂布成败的关键，像12×8平方厘米的玻璃板需要2~3克硅胶G，加4~6毫升水即可，只要技术熟练即能涂成厚薄一致，光滑平整的一块薄层板。
不同性质不同批号的吸附剂，加水量和搅拌时间有时可有差异，应根据情况摸出规律。
为了达到涂布的各板厚度均匀一致，最好采用涂布器进行薄层的涂布。
为了增加薄层的牢固性及易于保存，可在涂布过程中加入某些粘合剂以增加薄层的硬度。
一般采用添加剂羧甲基纤维素钠（CMC—Na），应用方法是取CMC-Na 1克溶于100毫升水中，加热煮沸溶解，按比例与硅胶搅匀，铺板。
涂成之后先把玻板放在平面上，室内干固，再对光检查，看是不是均匀，有无气泡，平整光洁度如何，合格的上烤箱110℃加热30分钟进行活化，冷却后贮于干燥器内备用。
在进行实验时，应尽量可能采用同批号涂布活化的薄层板，以减少因活化不一致引起的Rf值发生差异，目前国内市场已有成品供应，如黄岩化学分析材料厂即有各种类型的薄层板出售。
三、薄层板的使用1．点样将样品溶于适当的溶剂中（应尽量避免有水），取微量注射器或玻璃毛细管截齐后，吸取一定量的检样，轻轻接触到薄层上，使样品自动吸到薄层上，点的直径不要超过0.3厘米，一次不能点完，待干后再点，稍有过分就会损伤板面，影响展开后的斑点形状。
每两个样点之间相距至少1.5厘米。
点样的起点距薄板底边至少1.5厘米，以免样点浸入展开溶剂中，同块薄板上各样点应保持在与底边平行的一条直线上，为控制好点样距离，应用薄层点样尺架。
2．展开根据薄层板大小，自行选用适当玻璃标本缸，长方形，如17×10×6厘米的标本缸可容纳下15×9厘米的玻璃板。
采用较大的玻璃缸和玻璃板时，在缸内沿周围缸壁衬一层预先浸有溶剂的滤纸，以便缸内展开溶剂易达到饱和，防止边缘效应（即两边缘的点走得快）和同一物质Rf值不一致现象。
一般将薄层板斜置展开容器内，密闭。
先不使溶剂浸湿薄层板，饱和10~15分钟后再进行展开，展开溶剂沿着薄层板向上移动。
对加粘合剂的涂板可以近于垂直的状态进行展开，而对未加粘合剂的薄层板则必须以倾斜状态（15度角）进行展开。
为了防止产生“边缘效应”和展开溶剂不饱和现象。
还可采用夹心式展开容器，其方法是将薄层板的左右两侧各刮去5~10毫米，垫上条状玻璃或塑料，盖一块与薄层板同样大小的玻璃，用夹子将两边夹好，插入展开溶剂中进行展开，并能取得良好效果。
3．显色薄层展开后，凉干。
如含粘合剂，即可直接喷显色剂，使之显色，有的还需经紫外线（254nm）照射后方能显色；对不含粘合剂的薄板，在喷显色剂时应尽量远离薄层板，否则会连吸附剂一起吹掉，应予以注意。
四、检样的定性定量分析1．比移值（Rf）的测定当样品的薄板一端被展开，经过毛细管作用流向另一端，样品是按一定的比例分配在固定相与流动相之间。
并沿着溶剂流动的方向移动，由于样品中各组分在两相中分配系数不同，各组分的移动速度也不同，经一定距离后使各组分彼此分离。
样品各组分移动的速率，亦即分离后在薄层板上的位置与溶剂展开前沿的距离的比值为比移植。
2．定性分析相同的物质Rf值应当是相同的，但因能影响Rf值的因素很多，要想得到与标准物质相同的Rf值，最好在鉴定时，将样品与标准物质点在同一张薄层板上一同展开，根据检样斑点的Rf值与标准样品的Rf值比较，即可确定二者是否相同，但要做到准确的定性，需要两种以上展开溶剂系统所得的Rf值比较判断。