流式细胞分析技术
流式细胞术——原理,操作及应用(一)
流式细胞术——原理,操作及应用(一)流式细胞术——原理,操作及应用1. 原理•流式细胞术（Flow Cytometry）是一种用于分析和计数悬浮在溶液中的个体细胞的技术。
•通过利用激光器激发细胞或微粒上荧光探针或吸光染料产生的荧光信号或散射光信号进行检测和分析。
2. 操作步骤样本制备•通过细胞培养、组织消化等方法获得需要检测的细胞样品。
•样本可能需要进行染色或标记以便于特定细胞或分子的检测。
流式细胞仪设置•调整激光器和探测器以适应所用标记物的激发和发射波长。
•设置仪器参数，如流速、放大倍数等。
数据采集和分析•将样本注入流式细胞仪，使其以单个细胞的方式流过激光束。
•通过荧光或散射光信号来检测和记录每个细胞的特征。
•利用专业软件对采集到的数据进行分析和解读。
3. 应用免疫表型分析•流式细胞术可以用于检测和分析细胞表面标记物的表达情况。
•可以用于分离和鉴定各种免疫细胞亚群，如T细胞、B细胞和NK 细胞等。
细胞周期分析•通过染色剂标记DNA，流式细胞术可以区分细胞的不同周期阶段。
•可以用于评估细胞增殖能力和细胞周期的营养、药物等因素影响。
细胞凋亡检测•利用荧光探针标记凋亡标记物，流式细胞术可以检测和计数凋亡细胞比例。
•可以用于评估药物对细胞凋亡的影响以及疾病状态的分析。
粒子分析•可以用于分析和鉴定不同大小、不同形状的微粒，如细胞、细胞器、胞外囊泡等。
•可以用于研究细胞的分泌和吞噬过程等。
其他应用•流式细胞术还可用于检测和分析细胞内钙离子浓度、细胞内蛋白、RNA和DNA含量等。
•可以应用于疾病诊断、药物筛选、生命科学研究等领域。
以上是流式细胞术的原理、操作步骤及一些常见应用的介绍。
流式细胞术的广泛应用使其成为现代生命科学研究和临床实践中必不可少的技术之一。
流式细胞术的基本原理
流式细胞术的基本原理流式细胞术是一种广泛使用的细胞分析技术，可以用于分离、鉴定和计数单个细胞，同时可以对细胞的形态、大小、表面分子、细胞器和细胞活性等方面进行分析。
这项技术已经成为生物医学研究和临床诊断的重要工具之一。
流式细胞术的基本原理是将细胞悬浮液通过一根细长的玻璃管，使细胞单个地通过一束激光束，利用光学和电子学技术分析细胞的特性。
这个过程可以分为样本制备、细胞计数和细胞分析三个步骤。
样本制备在进行流式细胞术之前，需要对样品进行一系列的处理，以便得到单个、均匀分布的细胞悬浮液。
样品处理的方法包括细胞分离、细胞培养和细胞染色等。
通常使用的染色剂有荧光素、荧光素同工异构体、荧光素酯和荧光素类核酸探针等。
这些染色剂能够与细胞特定的分子结合，从而标记细胞并使其在流式细胞术中被检测到。
细胞计数细胞计数是流式细胞术的重要步骤之一。
在流式细胞术中，使用一种称为细胞计数器的设备，可以精确地计算细胞的数量。
细胞计数器通常由一个光源、一个流式细胞术仪和一个计算机组成。
在进行细胞计数时，将细胞悬浮液置于流式细胞术仪中，通过一束激光束照射细胞，从而产生荧光信号。
计算机会根据荧光信号的数量和强度来确定细胞的数量。
细胞分析在细胞计数后，可以对细胞进行分析。
流式细胞术中常用的分析方法包括细胞分类、细胞分选和细胞表面分析等。
细胞分类是将细胞根据其形态、大小和荧光特性分为不同的亚群。
细胞分选是将目标细胞从混合的细胞群中分离出来。
细胞表面分析是通过标记细胞表面分子，然后利用流式细胞术检测这些标记物，以确定细胞的特殊表面分子。
总结流式细胞术作为一种高效的细胞分析技术，已经广泛应用于生物医学研究和临床诊断。
其基本原理是利用激光束对单个细胞进行分析，以确定细胞的特殊特性。
在进行流式细胞术前需要进行样品制备和细胞计数，然后可以对细胞进行分类、分选和表面分析等分析方法。
流式细胞术的应用范围广泛，可以用于癌症诊断、药物筛选和免疫学研究等领域。
FCM技术
流式细胞分析（FCM）技术概述一、概述流式细胞分析（FCM）技术是诊断病理学的一项重要辅助诊断技术，一般用于组织病理学初步诊断后的进一步分析，应用日益广泛。
1．流式细胞分析技术主要用于肿瘤细胞的①免疫表型分析；②DNA含量分析；③非二倍体细胞定量分析；④细胞增殖活性分析等。
2．制备合格的检测样本是流式细胞分析技术的关键。
3．对样本进行荧光染色或免疫荧光染色流式细胞分析技术检测时，必须同时设立同型抗体对照、阳性对照和自发荧光对照。
4．流式细胞分析技术在淋巴造血组织肿瘤等的病理学诊断中正在成为评估预后和指导治疗的指标，有时可作为独立的病理学诊断报告项目。
5．流式细胞分析报告的内容为由流式细胞仪打印的原始检测结果。
作为病理学诊断报告书组成部分的流式细胞分析报告须经有关病理医师审核后签发，必要时可由病理医师对检测结果作出评论。
二、单细胞悬液的制备（一）新鲜实体瘤单细胞悬液的制备1．酶消化法（1）选取的组织立即放入预冷的组织培养液或生理盐水中，清洗血迹及其他污染物。
（2）解剖显微镜下弃除组织块中的坏死成分、纤维、脂肪以及血管等。
（3）用弯剪将组织块剪成约1.0mm3左右的小块，放在冷组织培养液或生理盐水中。
（4）用冷培养液或生理盐水漂洗剪碎的组织块，洗去被剪碎的细胞碎片。
（5）取约1.0g组织加入适宜的酶消化液。
（6）在37℃的恒温水浴中消化20～30min，消化期间要间断振荡或吹打。
（7）用冷培养液或生理盐水终止消化，收集单细胞悬液。
（8）先后用200目的筛网和350目的尼龙网过滤除去凝聚的细胞团块，收集细胞并计数，总量不少于106个。
根据检测目的作进一步测试。
如做DNA含量分析，须将细胞悬液用70%冰冷乙醇固定，置4℃冰箱保存；如做免疫荧光分析，则不必用乙醇固定。
2．机械法（1）剪碎法①将组织块放入平皿中，加入少量生理盐水或0.01mol/L（pH7.4）的PBS液；②用剪刀将组织剪至匀浆状；③加入0.01mol/LPBS10ml；④用吸管吸取组织匀浆，先以200目的筛网过滤至试管内；⑤离心沉淀（1500r/min，3～5min），再用PBS洗3次，每次离心（500～800r/min）5～8min，除去细胞碎片；⑥以350目的尼龙网过滤，除去凝聚的细胞团块。
流式细胞技术原理
流式细胞技术原理
流式细胞技术是一种高效的细胞分析方法，它可以对单个细胞进行快速、准确的分析。
该技术主要基于细胞在流动状态下通过激光束时所
产生的散射和荧光信号，通过对这些信号的测量和分析，可以获得有
关细胞形态、大小、表面标记物、内部结构和功能等方面的信息。
流式细胞技术基本原理如下：
1. 细胞样品制备：将待检测的细胞样品进行处理，如离心、洗涤等操作，使其达到单个细胞状态，并加入荧光染料或抗体等标记物，以便
在流式仪中进行检测。
2. 细胞在流式仪中流动：将制备好的样品注入到流式仪中，在高速液
体流动中被逐个单独地通过激光束。
3. 激光束照射：当细胞通过激光束时，会发生散射和荧光现象。
散射
现象包括前向散射（FSC）和侧向散射（SSC），前者与细胞大小相关，后者与细胞复杂程度和内部结构相关。
荧光现象则是标记物受激发后
发出的荧光信号，可以用于检测细胞表面标记物或内部结构。
4. 信号检测：流式仪会收集细胞产生的散射和荧光信号，并将其转化
为电信号，通过光电倍增管等装置进行放大和转换。
同时，流式仪还
会记录细胞通过激光束的时间和位置信息。
5. 数据分析：通过对上述收集到的信息进行分析，可以得到有关样品
中细胞数量、大小、形态、表面标记物、内部结构和功能等方面的信息。
这些数据可以用于研究细胞生理学、病理学、药理学等领域。
总之，流式细胞技术利用了细胞在流动状态下产生的散射和荧光信号，通过对这些信号的测量和分析，实现了对单个细胞的快速、准确分析。
该技术在生命科学研究中有着广泛应用，在临床诊断、药物筛选等方
面也有着重要作用。
简述流式细胞术的原理与应用
简述流式细胞术的原理与应用一、流式细胞术的原理介绍流式细胞术（Flow cytometry）是一种利用流式细胞术仪（Flow cytometer）对单个活细胞进行多参数分析的技术。
它基于细胞的光学性质和生物化学特性，通过探针标记、荧光染料和细胞表面抗原的相互作用，对细胞进行高速连续检测和分离。
流式细胞术的原理如下：1.细胞悬浮和样本处理：将细胞样品作为悬浮液，通过离心等方法将细胞分散在液体中，去除细胞的团块和碎片，保证单个细胞的流式检测。
2.细胞标记：采用流式细胞术特定的探针和染料对细胞进行标记，以便后续检测和分析。
常用的标记方法包括荧光染料标记、抗体标记和细胞分子探针标记。
3.细胞分离和传送：将标记的细胞悬浮液通过流式细胞术仪，以流速每秒数千个细胞的速度单个分子传送到探测点。
4.光散射与荧光探测：细胞经过流式细胞术仪后，以激光束照射细胞，通过散射光和荧光信号的检测，对细胞进行空间分布和化学信息的获得。
5.数据采集与分析：通过计算机系统采集和记录细胞经过流式细胞术仪后所产生的光散射和荧光信号，在分析软件中对数据进行处理和解读，获得有关细胞的信息。
二、流式细胞术的应用流式细胞术是一种广泛应用于生物医学研究和临床诊断的技术，它在细胞学、免疫学、血液学、肿瘤学等领域有着重要的应用价值。
下面列举几个流式细胞术的应用示例：1.血液学研究：流式细胞术结合细胞表面标记和荧光染料标记，可以对血液中的不同细胞类型进行快速的鉴定和数量分析。
例如，通过流式细胞术可对血液中的淋巴细胞、单核细胞和粒细胞等进行分类和计数，从而判断患者的免疫状态和疾病进展。
2.癌症诊断与治疗：流式细胞术对肿瘤细胞的检测和分析有着重要的作用。
通过流式细胞术，可以检测和定量肿瘤细胞的表面抗原和细胞内信号分子，进一步了解肿瘤细胞的类型、分化程度和增殖状态，为癌症的诊断和治疗提供指导。
3.免疫学研究：流式细胞术能够对免疫系统中的各种细胞类型进行鉴定、计数和功能分析。
流式细胞术基本原理与实用技术
流式细胞术基本原理与实用技术流式细胞术（Flow Cytometry）是一种常用的细胞分析技术，它基于光学、电子和计算机技术，能够对单个细胞进行快速、准确的多参数分析。
本文将介绍流式细胞术的基本原理和实用技术。
一、基本原理流式细胞术的基本原理是利用细胞在液体中悬浮的特性，在流动状态下通过一个细胞计数器，同时对细胞进行多参数的检测和分析。
其主要包括以下几个步骤：1. 细胞样品的制备：将待检测的细胞样品进行预处理，如离心、洗涤等，以获得单细胞悬浮液。
2. 细胞的进样：将细胞悬浮液通过微细管道进入流式细胞仪的流动系统中，形成单细胞的液体流。
3. 细胞的定位和聚焦：利用激光束对细胞进行定位和聚焦，使其逐个通过探测区域。
4. 细胞的激发和发射：通过激光束的照射，激发细胞中的荧光染料或标记物，使其发射特定波长的荧光信号。
5. 光信号的收集和处理：收集细胞发射的荧光信号，并经过光学系统进行分光、分束、分光和聚焦，最后通过光电倍增管或光电二极管转换为电信号。
6. 数据的获取和分析：将电信号转化为数字信号，并通过计算机系统进行数据采集、存储和分析，得到细胞的各项参数及相关统计学分析。
二、实用技术1. 细胞标记技术：为了能够准确地检测和分析细胞的特定性质，常常需要对细胞进行特异性的染色或标记。
常用的标记方法包括荧光染料、抗体标记和基因表达标记等。
2. 多参数分析技术：流式细胞术可以同时检测多个参数，如细胞大小、形态、表面标记物的表达、细胞周期等。
通过合理选择和配置荧光染料和滤光片组合，可以实现多重标记和多参数分析。
3. 数据分析软件：流式细胞术产生的数据量庞大，需要借助计算机软件进行数据的分析和解读。
常用的数据分析软件有FlowJo、CellQuest、ModFit等，它们可以对细胞的分布、比例、相关性等进行统计学分析和图形展示。
4. 高通量流式技术：随着科学研究的深入和技术的发展，高通量流式技术逐渐兴起。
它通过提高仪器的样品处理速度和自动化程度，实现对大量样品的快速检测和分析，广泛应用于生物医学研究和临床诊断。
流式细胞仪分析技术及应用
流式细胞仪分析技术及应用流式细胞术（FCM）是以流式细胞仪为检测手段的一项能快速、精确的对单个细胞理化特性进行多参数定量分析和分选的新技术。
流式细胞仪的发展综合了激光技术、计算机技术、显微荧光光度测定技术、流体喷射技术、分子生物学和免疫学等多门学科的知识。
概述流式细胞仪由液流系统、光学与信号转换测试系统和信号处理及放大的计算机系统三大基本结构组成，可对细胞悬液中的单个细胞或特定细胞或其超微结构进行多参数快速分析。
一、工作原理（了解）基本组成结构1.液流系统由样本和鞘液组成。
待测细胞被制备成单个细胞的悬液，经荧光染料标记的单克隆抗体染色后置入样品管中，在清洁气体压力下进入流动室形成样本流；鞘液是辅助样本流被正常检测的基质液，其主要的作用是包裹在样本流的周围，使其保持处于喷嘴中心位置以保证检测的精确性，同时又防止样本流中细胞靠近喷孔壁而堵塞喷孔。
2.光学系统由激光光源、分光镜、光束成形器、透镜组和光电倍增管组成。
（1）激光光源：现代流式细胞仪采用的多为气冷式氢离子激光器，常用激光束波长为488nm，15mW。
（2）分光镜：作用是反射较长波长的光，通过较短波长的光。
（3）光束成形器：由两个十字交叉放置的圆柱形透镜组成。
（4）透镜组：有3个透镜，作用是将激光和荧光变成平行光，同时除去离散的室内光。
（5）滤片：长通滤片，允许长于设定波长的光通过；短通滤片，允许短于设定波长的光通过；带通滤片，允许一定带宽的波长通过，其他波长的光不能通过。
（6）光电倍增管（PMT）：主要作用是检测散射光和荧光，同时将光学信号转换成电脉冲（数字数据）信号。
3.数据处理系统主要由计算机及其软件组成，进行实验数据的分析、存储、显示，是流式细胞仪组成部件中的重要环节。
二、散射光的测定散射光信号的产生是细胞在液柱中与激光束相交时向周围360°立体角方向散射的光线信号，散射光的强弱与细胞的大小、形状、光学同性、胞内颗粒折射有关，与接收散射光的方向也有关。
流式细胞分析技术
ü 光电倍增管（PMT）：
检测散射光和荧光；同时将光学信号转换成 电脉 冲信号。
14
滤光片
分色反光镜
15
PMT 滤光片
荧光和散射光检 测系统
分色反光镜
激发光
激光聚光系统
16
数据处理系统
• 计算机及其软件组成 • 进行实验数据的分析、存储、显示
Photons/Detector (V)
光信号转化为电脉冲信号
特点：单细胞、快速、高通量、多参数、准确、灵敏
经典流式细胞仪（分析型和分选型） 量化成像分析流式细胞仪 质谱流式细胞仪
单激发光；4个 荧光检测通道
经典流式细胞仪
双激发光；6个 荧光检测通道
Coulter EPICS XL
6
量化成像分析流式细胞仪
美国merck millipore公司
质谱流式细胞仪
11
经典流式细胞仪
液流系统-液流聚焦原理
喷 嘴
鞘液(Sheath）
喷嘴
荧光信号或 侧向散射光
样本流
前向散射光 单个细胞流
12
液流系统形成单 个细胞流示意图
13
光路系统
ü 激发光：
常用的是空冷式的氩离子激光光源（488nm）；氦氖 激光光源（633nm)；紫外光源
ü 各种光学镜片：
分色反光镜 光束成形器；透镜 滤光片：长通滤片；短通滤片；带通滤片
(一）标本采集、运输、保存和操作 l标本来源
l几乎所有组织细胞均可用于FCM检测 l免疫标本主要来源于外周血、骨髓、 淋巴器官或组织等
l抗凝剂选择
l肝素钠(首选) lEDTA-Na2
l标本保存
标本制备
ü 外周血或骨髓样本
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流式细胞发展史
1930年，Caspersson 和Thorell开始致力于细胞的计数。 1934年，Moldaven 是世界上最早设想使细胞检测自动化的人， 他试图用光电仪 记录流过一根毛细管的细胞。 （从固定式细胞 分析-流动式） 1953年，Croslannd-Taylor 应用分层鞘流原理，成功的设计红 细胞光学自动计数器。 同年，Parker 和Horst 描述一种全血细胞计数器装置，成为流 式细胞仪的雏形。 1965年，Kamemtsky等提出两个设想，一是用分光光度计定量细 胞成分；二是结合测量值对细胞分类。 1967年，Kamentsky 和Melamed 在Moldaven的方法的基础上提出 细胞分选的方法。
Laser
FSC
荧光
SSC
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细胞散色光信号
Forward Angle Light Scatter (FSC)
Laser
FALS Sensor
细胞对光的散色现象与细胞样品制备无关.
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90 Degree Light Scatter (SSC)
Laser
FALS Sensor
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流动室（Flow Chamber）
流动室由样品管、鞘液管 和喷嘴等组成，常用光学 玻璃、石英等透明、稳定 的材料制作，是液流系统 的心脏。 样品管贮放样品，单个细 胞悬液在液流压力作用下 从样品管射出；
鞘液由鞘液管从四周流向 喷孔，包围在样品外周后 从喷嘴射出。
Injector Tip
Laser
FALS Sensor
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流式细胞仪特点
单细胞悬液 或生物颗粒 分析速度高 多参数 精度高 当代最先进的细胞 定量分析技术
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FCM还可在对样品细胞多参数分析测定的基础上，结 合多种细胞生物学特性，将样品中特定的细胞亚群高 纯度地分选（sorting）出来（活细胞点对点分选）， 单独收集以供进一步深入研究 如：形态学检查、细胞功能研究、细胞培养、分子生 物学研究
流速与压力的关系服从Bernoulli方程，即 P=(1/2)V2 (忽略高度的变化)。改变气压,就可获得不同的流速。 上海交通大学医学院
BD FACSCanto II 液流系统
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（2）激发光源与光束成形系统
激光（Laser, light amplification by stimulated emission of radiation)是一种相干光源。 单波长，高强度，高稳定性 FCM 的激发光源大多采用氩离子气体激光器（488nm），一些FCM也 配有其他各种激光器，如氪离子激光器、氦镉激光器、氦氖激光器、染 料激光器和半导体激光器等。 一般选配2-4根激光，488nm 、633nm和355nm、407nmUV激光
90LS Sensor
细胞对光的散色现象与细胞样品制备无关 . 上海交通大学医学院
Байду номын сангаас
FSC
FSC信号的强弱与细胞的大小和活力相关
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SSC
SSC信号的强弱与细胞内颗粒多少相关
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细胞散色光信号
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（2）细胞荧光信号
主要包括两部分： ①自发荧光，即不经荧光染色细胞内部的荧光分子经光 照射后所发出的荧光； ②特征荧光，即由细胞经染色结合上的荧光染料受光照 而发出的荧光，其荧光强度较弱，波长也与照射激光不同。 自发荧光信号为噪声信号，在多数情况下会干扰对特异荧 光信号的分辨和测量。
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层流是液体稳定流动的必要条件,管道中层 流的形成要满足雷诺数 dρV Re = < 2300， η 式中ρ、η分别为液体的密度和粘滞系数，d 和V分别为管道的直径和液体的平均流速。 FCM利用层流技术,使细胞流动稳定,并具有自 聚焦作用,为细胞分析分选提供技术保证.
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样品细胞流经仪器检测区时受到激发光的照射， 同时产生细胞的散射光信号和细胞的荧光信号。 这些信号以被检细胞为中心向空间360度立体 角发射
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细胞的荧光信号取决于细胞荧光染色方法和所 使用的荧光素种类 近年来荧光素化学技术发展很快，现已可做到 用一束激光（488nm）激发三种染料（甚至四 种或更多染料）而得到各自波长不同的荧光。 这已能满足目前大多数研究和临床检验工作的 需要
细胞荧光信号
荧光信号的测量：
经过 PMT 将光学信号转变为电脉冲信号，并增加 PMT的电压及增益，可将脉冲信号进行放大。放大方式 有两种： 线性放大(Lin):
AMP
对数放大(Log):
AMP
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细胞荧光信号
荧光检测器检测特定荧光的特定发射波长 线性测量 对数测量
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流式细胞发展史
1969年，Van Dilla，Fulwyler及其同事们在Los Alamos，NM （即现在的National Flow Cytometry Resource Labs）发明 第一台荧光检测细胞计。 1972年，Herzenberg 研制出一个细胞分选器的改进型，能够 检测出经过荧光标记抗体染色的细胞的较弱的荧光信号。 1973年，BD公司与美国斯坦福大学合作，研制开发并生产了 世界第一台商用流式细胞仪FACS I。 从此，大量的厂家不断研制生产出自己的流式细胞仪，流式 细胞术进入了一个空前飞速发展的时代。 1979年， SSMU: FCM 推广 1980年， BJNU: 国内第一台 FCM (FACS III) 进入九十年代，流式细胞术作为一门生物检测技术已经日臻 完善，而随之而来的就是应用领域的日趋广泛。而今，流式 细胞仪已经深入到生物学、医学、药物学等的各个分支领域， 并将在未来为我们的科学研究发挥更大的作用。
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从定量的角度研究
- 细胞的形态学参数
- 生物学特征 - 细胞化学成分及含量 - 细胞的功能
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概念
流式细胞仪（Flow Cytometer) 集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、电子计算 机技术、细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的 一种新型高科技仪器。 流式细胞术（Flow Cytometry，FCM） 利用流式细胞仪对处在快速、直线、流动状态中的单 细胞或生物颗粒进行多参数、快速定量分析，同时对特 定群体加以分选的现代细胞分析技术。
上海交通大学医学院 光电倍增管的增益从103到108可连续调节，因此对弱光测量十分有利。
信号转换系统:光
电
数字信号
PMT可将散色光及荧光信号转换成电脉冲信号,电脉 冲信号通过模数转换器(ADC)量化为数字信号.
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（二）细胞信号的检测与分析
制备好的单细胞悬液经仪器检测区时受到
激发光的照射.激光与细胞相互作用后可产生
鞘液
荧光信号
激光束
通过流动室后细 胞一个一个排列 成单行,依次通过 检测区.把流动室
称为单细胞流
发生器 . 上海交通大学医学院
液流中心由单列匀速运动颗粒组成的液柱
为了保证液流是稳液，一般限制液流速度 υ <10m/s。由于鞘液的作用，被检测细胞被 限制在液流的轴线上。
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液流驱动系统（示意图）
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BD FACSCanto II
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讲课内容
1 2 3
基础理论
细胞样品制备技术
在医学生物学中的应用
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基础理论 （一）FCM仪器的一般结构
Y
细胞流动室及其液流驱 动系统（Z） 激发光源及其光束成形 系统（X） 细胞信号检测（Y）分析、 显示、记录系统
FCM检测分析的细胞荧光信号主要指经过特异荧光染色后细胞受 照发射的荧光信号
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自发荧光信号与特异染色的荧光信号分析图 自 发 荧 光 信 号
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特 异 染 色 的 荧 光 信 号
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荧光信号的线性测量 对数测量 荧光光谱重叠及其校正方法
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光收集系统：光电倍增管（PMT）
细胞散色光的波长是与激发光波长一致的. 前向散色光信号:检测器采用光电二极管 侧向及荧光信号用光电倍增管（PMT）
流动细胞 双色滤镜
PMT
2
PMT 4
PMT
3
Bandpass Filters
PMT
1
光电管
激光
荧光染色的细胞受合适的光激发后所产生的荧光一般由光电倍增管 （PMT）检测。 PMT的响应时间短，仅为ns数量级；光谱响应特性好，在200～900nm的 光谱区，光量子产额都比较高。
球透镜和柱面透镜 ： 20×200m 椭圆形光斑，短轴和细胞流平 行，长轴与细胞流垂直。
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光 束 成 形 与 细 胞 受 照 方 式
这种椭圆形光斑的
检测区保证每个细
胞分别受到光照 且受检时受到一致
激发光焦斑
的光照
FCM的
单细胞照明技术.
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（3）细胞信号检测与分析处理系统
光源的谱线愈接近被激发物质的激发光谱的峰值，所产生的荧光信号愈强。 若激发光波长都是488nm，而发射光波长又不是极其接近的话，即可同时检 测两种以上的荧光。如FITC和PE双染就符合这种条件。 对于有较高水平自发荧光类型的细胞，如长期组织培养的细胞，应使用较高发 射波长的荧光染料（APC、APC-Cy7等）标记抗体，通常他们会有一个较好 信噪比的结果。 对于那些不是有较多自发荧光类型的细胞，如新鲜的细胞，可以使用FITC 标 记的抗体了。