2010版药典微生物与2015版对比
2015版中国药典微生物检验
• 注：方法选择原则：根据供试品理化特性和微生物限度 标准等因素选择。
培养基适用性检查
• 胰酪大豆胨琼脂：金黄色葡萄球菌、 枯草芽孢杆菌、铜 绿假单胞菌、白色 念珠菌、黑曲霉 • 胰酪大豆胨肉汤：金黄色葡萄球菌、 铜绿假单胞菌、枯草 芽孢杆菌 • 沙氏葡萄糖琼脂、玫瑰红钠琼脂 、白色念珠菌、黑曲霉。
中国药典2015年版相关培养基变化无菌检查法通则1101chp2010chp2015硫乙醇酸盐流体培养基硫乙醇酸盐流体培养基改良马丁培养基胰酪大豆胨液体培养基tsb营养肉汤培养基胰酪大豆胨琼脂培养基tsa营养琼脂培养基沙氏葡萄糖液体培养基sdb改良马丁琼脂培养基沙氏葡萄糖琼脂培养基sda培养基的适用性检查灵敏度检查无菌性检查中国药典2015年版相关培养基变化无菌检查法通则1101chp2010chp2015硫乙醇酸盐流体培养基硫乙醇酸盐流体培养基改良马丁培养基胰酪大豆胨液体培养基tsb营养肉汤培养基胰酪大豆胨琼脂培养基tsa营养琼脂培养基沙氏葡萄糖液体培养基sdb改良马丁琼脂培养基沙氏葡萄糖琼脂培养基sda培养基的适用性检查灵敏度检查无菌性检查非无菌产品微生物限度检查
菌数报告规则
• 2、薄膜过滤法：计数方法同平皿计数法，每 张滤膜上的菌落数应不超过100cfu。菌数报告 规则以相当于 1g、1ml或10cm供试品的菌落数 报告菌数；若滤膜上无菌落生长，以﹤1报告 菌数（每张滤膜过滤1g、1ml或10cm 供试品 ），或﹤1乘以最低稀释倍数的值报告菌数。 • 3、MPN法：记录每一稀释级微生物生长的管 数，从表3查对每1g或1ml供试品中需氧菌总数 的最可能数。
培养条件
• 描述方式：按计数方法适用性试验确认计 数方法进行供试品中需氧菌总数、霉菌和 酵母菌总数测定。 • 培养条件：胰酪大豆胨琼脂平板在30～ 35℃培养3-5天，沙氏葡萄糖琼脂平板在20 ～25℃培养5~7天；MPN法和供试品接种， 所有试验管在30～35℃培养3～5天。
2015版药典微生物修订内容
依科制药
新 依 科 兴 依 科
三、 制剂通则、品种项下要求【 无菌】 或 【 微生物限度】 检查的制剂（ 9类） ： 散剂、凝胶剂 、软膏剂、搽剂 、洗剂 、涂 膜剂 、鼻用制剂、气雾剂、喷雾剂 【 无菌 】 受热不稳定、制剂不能进行最终 灭菌的无菌工艺产品 用于手术、烧伤或严重创伤的局部给药制剂 应符合无菌检查法规定。 非无菌化学药品及生物制品制剂的微生物限度 标准（见表1 ） 按10个给药途径，以固体、液体性状分别给出 具体的限度标准要求。
依科制药
新 依 科 兴 依 科
修订后 耐胆盐的革兰氏阴性菌、大肠埃希菌、沙门菌、 铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、梭菌、白色 念珠菌 修订前 大肠菌群、大肠埃希菌、 沙门菌、 铜绿假单 胞菌、 金黄色葡萄球菌、梭菌、 白色念珠菌
依科制药
新 依 科 兴 依 科
增订内容 1 、除中药、化学药和生物制品的限度标准外， 增订了原敷料、中药提取物及饮片的微生物限 度标准。 修订内容 1 、菌数计数结果以10n表示； 2、 以需氧菌总数取代细菌数。以耐胆盐革 兰阴性菌取代大肠菌群。
新 依 科 兴 依 科
中药提取物
需氧微生物总 数 (CFU/g或ml)
控制菌
控制菌
10
3
10
2
#
中药饮片
#
#
不 得 检 出 沙 门 菌 （ 10g）耐胆盐革 兰 阴 性 菌 应 小 于 104（ 1g）
依科制药
计数结果
新 依 科 兴 依 科
2010版 供试品的细菌数、霉菌数和 酵母菌数其中任何一项不符 合该品种项下的规定，应从 同一批样品中随机抽样，独 立复试两次，以三次结果的 平均值报 告菌数。
依科制药
新 依 科 兴 依 科
《中国药典》2015年版通则编码与2010年版附录编码对照表
0500 色谱法 0501 纸色谱法
0502 薄层色谱法 0511 柱色谱法 0512 高效液相色谱法
一部 二部 三部 一部 二部 一部 二部 一部 二部
ⅥA ⅤA ⅢA ⅥB ⅤB ⅥC ⅤC ⅥD ⅤD
二部 Ⅷ R 制药用水中总有机碳测定法
一部 二部 一部 二部 二部 一部 二部 三部
一部
Ⅷ A 电位滴定法与永停滴定法 Ⅶ A 电位滴定法与永停滴定法 Ⅷ B 非水溶液滴定法 Ⅶ B 非水溶液滴定法 Ⅶ C 氧瓶燃烧法 Ⅸ L 氮测定法 Ⅶ D 氮测定法 Ⅵ A 氮测定法
Ⅸ M 乙醇量测定法
二部
二部 一部 二部 二部 二部 二部
《中国药典》2015 年版通则编码与 2010 年版附录编码对照表
编号
通则名称
0100 制剂通则
0101 片剂
0102 注射剂
0103 胶囊剂
0104 颗粒剂
0105 眼用制剂
0106 鼻用制剂
0107 栓剂
0108 丸剂
0109 软膏剂、乳膏剂 0110 糊剂 0111 吸入制剂
0112 喷雾剂
0113 气雾剂 0114 凝胶剂
0115 散剂
0116 糖浆剂
0117 搽剂
0118 涂剂
0119 涂膜剂
0120 酊剂
0121 贴剂 0122 贴膏剂
口服溶液剂 口服混悬剂 口服乳 0123 剂 0124 植入剂 0125 膜剂 0126 耳用制剂 0127 洗剂
0128 冲洗剂 0129 灌肠剂 0181 合剂 0182 锭剂 0183 煎膏剂(膏滋) 0184 胶剂 0185 酒剂 0186 膏药 0187 露剂 0188 茶剂 0189 流浸膏剂与浸膏剂
2015年版《中国药典》无菌检查法解读
2015年版《中国药典》无菌检查法解读杨晓莉;李辉;绳金房;钱维清;胡昌勤【摘要】目的解读2015年版《中国药典》无菌检查法的主要增修订情况.方法对比2015年版《中国药典》无菌检查法与2010年版《中国药典》无菌检查法的主要差异.结果 2015年版《中国药典》无菌检查法在检查内容、检查方法、培养体系及质量控制理念等方面都作了较大修订.结论 2015年版《中国药典》将无菌检查法完善成为更加科学并与国际接轨的检查方法.【期刊名称】《中国药业》【年(卷),期】2015(024)024【总页数】5页(P7-11)【关键词】无菌检查法;2015年版《中国药典》;无菌药品;培养体系;质量控制【作者】杨晓莉;李辉;绳金房;钱维清;胡昌勤【作者单位】陕西省食品药品检验所,陕西西安 710065;陕西省食品药品检验所,陕西西安 710065;陕西省食品药品检验所,陕西西安 710065;上海市食品药品检验所,上海 201203;中国食品药品检定研究院,北京 100050【正文语种】中文【中图分类】R954;R921.2无菌检查法是指用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的方法［1］，是药品微生物检查体系的重要组成部分，药品微生物是关系药品安全性的关键指标之一。
无菌药品的微生物污染是影响药品生产质量和引发临床不良事件的主要因素，近年来发生的“欣弗事件及刺五加事件”等严重药害事件都是无菌药品的微生物污染导致［2］。
目前，美国、欧盟、日本等国家或组织无菌检查法已协调一致［3］。
2010年版《中国药典》及之前版本收录的无菌检查法与国际通用的标准在检查理念、培养体系、方法要求等诸多方面有显著差异。
在国家药品安全规划与标准提高的目标下，2015年版《中国药典》借鉴国外药典先进技术经验，以新的控制理念为指导，结合我国国情对无菌检查法的检测范围及环境要求、培养体系、方法适用性、检查方法、偏差调查与过程控制等方面都做了较大修订，进一步完善了无菌检查法，修订后的无菌检查法正逐步与国际通用标准一致。
2015年版《中国药典》微生物限度检查法洁净环境及计数培养基修订分析探讨
2015年版《中国药典》微生物限度检查法洁净环境及计数培养基修订分析探讨2015年版《中国药典》将于2015年7月起开始实施：该版药典对微生物限度检查法检查时的洁净环境、培养基及检查方法进行了修订。
其中洁净环境要求由10000级背景下的100级单向流（2010年版）修订为受控背景下的不低于B 级环境（2015年版）；计数培养基由营养琼脂/玫瑰红钠琼脂培养基（2010年版）修订为胰酪大豆琼脂培养基/沙氏葡萄糖琼脂培养基（2015年版）。
该文旨在分析2015年版中国药典与2010年版中国药典在非无菌产品微生物限度检查时洁净环境与计数培养基的异同点，为更规范执行2015年版中国药典提供参考。
标签：中国药典；2015年版；2010年版；洁净环境；培养基[Abstract] The Chinese Pharmacopoeia （2015 edition）will be implemented in July，2015 which have revised in some part，including clean environment and medium in microbial limit test. The clean environment was rectified from 10000 background plus 100 degree to control background plus A or B environment. The counting medium was changed from nutrient medium and rose bengal agar to trypticase soy agar （TSA）medium and sabouraud dextrose agar medium. In this part，we analyzed the differences of the clean environment and counting medium between 2010 and 2015 edition Chinese Pharmacopoeia for normative enforcement.[Key words] Chinese Pharmacopoeia；2010 edition；2015 edition；Clean environment；Medium微生物限度检查是用于检查非无菌制剂及其原料、辅料等是否符合规定的方法[1-2]。
微生物检验之2015药典与2010药典区别
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三. 设备要求
微生物实验室应配备与检验能力和工作量相适应的仪器设备，其类 型、测量范围和准确度等级应满足检验所采用标准的要求。
设备的安装和布局：便于操作，易于维护、清洁和校准，并保持清
洁和良好的工作状态。
标识：每台仪器、设备应有唯一标识。 合格证书：仪器设备应有合格证书。 SOP：仪器设备完成相应的检定、校准、验证、确定其性能，并形
（删除2010药典“无菌检查法”对人员要求 “无菌检查人员必须具 备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训” ）
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二. 环境要求
应具有进行微生物检测所需的适宜、充分的设施条件， 实验环境应保证不影响检验结果的准确性。
工作区域与办公区域应分开。
微生物实验室应专用，并与其他领域 分开尤其是生产
对环境洁净度的确认，只做原则性规定，不涉及具体标准。（ 9205）
对在无菌检查法和微生物计数法等微生物检验中涉及的生物安全实验
室的环境要求，不在强制性附录中规定，在9203中予以规定（病原微 生物的分离鉴定应在二级生物安全实验室进行）。
GMP规范：“无菌检测室是否符合要求，并与生产的产品和生产能
力相适应”。
国食药监械[2011]54号:“关于实施《医疗器械生产质量管理规范
（试行）》及其配套文件有关问题的通知 ”中：“四、医疗器械生 产企业的无菌检测实验室原则上应设3间万级下的局部百级洁净室， 用作无菌室、阳性对照室和微生物限度室。无菌检测实验室原则上 应当和洁净生产区分开设臵，有独立的区域、单独的空调送风系统 和专用的人流物流通道及实验准备区等”。
2015版《中国药典》微生物检查法控制菌检查法修订解析
养18-24h。
• （4）结果判断：
• 若紫红胆盐葡萄糖琼脂平板上有菌落生长，则对应培养管为 阳性，否则为阴性。根据各培养管检查结果，查表判断1g或1ml 供试品中含耐胆盐革兰阴性菌的最大可能数。
五、供试品检查
• “未检出试验”与“定量试验”结论
• 耐胆盐革兰阴性菌的可能菌数
各供试品量的检查结果 每1g（或1ml）供试 品种可能的菌数（N）
• 4、结果判断方式：在各控制菌项下，生化 实验和“应进行分离、纯化及适宜的鉴定试 验。”改为较少的生化实验或“采用其它适用要求
控制菌检查法适用于在规定的试验条件下，检查供试品中是否存在特定的微生 物。
当本法用于检查非无菌制剂及原、辅料是否符合相应的微生物标准时，应按下 列规定进行检验，包括样品取样量和结果判断等。
三、培养基适用性
1、对照培养基
（5）尽量临用现配，培养基灭菌后，尽快取出，切忌在 高压锅内过夜存留，固体培养基灭菌或融化后，融化状 态放置不得超过8h；一般预制培养基可置洁净环境
2～25℃保存，但不应超过21d；固体琼脂培养基熔化再
使用应不超过1次。 （6）干粉培养基或培养基原料变质再用；预制培养基储存
（铜绿+/大肠选-）1择8-72性h 増菌培养基培养，可以使受伤的细菌得到修复，提 高检出率。
三、培养基适用性
4、适用性检查
控制菌检查
耐胆盐革兰阴性菌
大肠埃希菌
沙门菌
铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌
梭菌 白色念珠菌
培养基
肠道菌増菌肉汤
紫红胆盐葡萄糖琼脂 麦康凯肉汤
麦康凯琼脂 RVS増菌肉汤
木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂
三、培养基适用性
4、适用性检查
（3）根据每个控制菌检查的培养基逐个说明，控制菌检查用培养 基适用性检查的过程。
《中国药典》2010版与2015版微生物限度检查法对四种药物检测结果的比较
《中国药典》2010版与2015版微生物限度检查法对四种药物检测结果的比较李趣嫦;江艳芳【期刊名称】《中国药品标准》【年(卷),期】2015(0)2【摘要】Objective:To compare the two microbial limit test methods proposed by Chinese Pharmacopoeia 2010 Edition appendix and Chinese Pharmacopoeia 2015 Edition ( general rules in public draft ) for microbes determination in various pharmaceuticals .Methods:Two Chinese patent medicines: Spores of Ganoderma LucidumRhodiola Capsules and Herba Cirsii Carbonisatus Granules , and two chemical medicines:Montelukast Sodium Granules and Diclofenac Sodium Patch , were selected as the subjects for investigation .Their microbial limit test methods were established and validated according to Chinese Pharmacopoeia 2010 Edition and 2015 Edition, respec-tively.The established methods were then applied for determination of microbes presented in the investigated pharmaceutical samples . Results:Similar detection results were obtained by using the microbial limit test methods proposed by Chinese Pharmacopoeia 2010 E-dition and 2015 Edition, although their method establishment and validation processes were slightly different .In addition, the method proposed by Chinese Pharmacopoeia 2015 Edition ( general rules in public draft ) was more sensitive than that of 2010 Edition appen-dix.Conclusion:The microbial limit test method proposed by Chinese Pharmacopoeia 2015 Edition ( general rules in public draft ) is more reasonable and superior than that proposed by Chinese Pharmacopoeia 2010 Edition appendix.%目的：比较《中国药典》2015年版（通则公示稿）中的微生物限度检查法与《中国药典》2010年版对不同药物的检测结果。
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回顾分析结果的准确性。限度标准以指数 或者＜1乘以稀释倍数的值报告菌数 微生物计数标准 方式表示，最大可接受限制遵守2倍规则 方法适用性试验 计数用培养基适用性检查及计数方法适用性试验测试内容 培养基 营养琼脂(NA) TSA TSB 玫瑰红钠琼脂(RA) SDA SDA+抗生素 铜绿、金葡、枯草应不得生长 方法适用性检查试验菌株的加入方式 2010版 1ml供试液和100cfu试验菌，分别注入平皿 2015版 菌液加入供试液，所加菌液的体积 不超过供试液体积的1%，使每ml供 试液或每张滤膜所滤过的供试液 测试菌株 大肠、金葡、枯草 铜绿、金葡、枯草、黑曲、白念 铜绿、金葡、枯草 黑曲霉、白念 黑曲霉、白念 黑曲霉、白念
1105微生物计数法 药典 分类依据 项目1 胰酪大豆胨/肉汤（TSA/TSB） 项目2 霉菌及酵母菌总数，5-7天 沙氏葡萄糖琼脂（SDA） 不再规定复试要求，通过实验室调查 营养琼脂（NA） 霉菌及酵母菌数，5天 玫瑰红钠琼脂（RA） 若滤膜上无菌落生长，以＜1报告菌数 2015版 营养条件 需氧菌总数，3-5天 2010版 微生物类别 细菌数，3天
1106控制菌检查法 菌种编号 1 2 2010版 大肠菌群 大肠埃希菌 2015版 耐胆盐的革兰氏阴性菌 大肠埃希菌
沙门菌 沙门菌 3 铜绿 铜绿 4 金葡 金葡 5 梭菌 梭菌 6 白念 白念 7 6.7的检查没有变化，1-5使用无选择性增菌培养基（TSB）培养，可以使受损的细菌得到 修复，提高检出率 培养基适用性检查 2010版 计数培养基 细菌数：NA 霉菌及酵母菌:玫瑰红钠琼脂RA 酵母菌：酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂 培养基适用性检查 NA:大肠、金葡、枯草 玫瑰红钠琼脂(RA): 结果判定： 黑曲霉、白念 ≥70% 2015版 计数培养基 需氧菌总数：TSA 霉菌及酵母菌:SDA 或玫瑰红钠、含抗生素的SDA 培养基适用性检查 TSA:铜绿、金葡、枯草、黑曲、白念 SDA:黑曲霉、白念 0.5-2
酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂:白念
Hale Waihona Puke