临床病原学检查

• 参考书： 《现代病原学检验与临床实践》 上海科学技术文献出版社 倪语星 主编
第一节 标本采集、运送和检查方法
一.标本采集和运送
• 采集标本注意点： 1.标本容器必须无菌或清洁容器 2.选择最佳时间采集标本，在抗菌药物使 用前 3.获取标本时，须严格无菌操作 4.标本采集后，应尽快送实验室
㈠血 液
• • • • • 发热初期和高峰期采集 抗菌药物治疗前 成人每次10-20ml，婴幼儿1-2ml 标本不用抗凝剂 24小时内，可在不同部位采血3次
临床病原学检查
[目的要求 目的要求] 目的要求
掌握： 掌握：感染性疾病的诊断和治疗原则 熟悉： 熟悉：感染性疾病病原学实验诊断及 抗生素治疗的主要实验室监测方法 了解：病原学诊断的重要性， 了解：病原学诊断的重要性，现代感 染的类型和病原微生物的变迁
病原体检查的作用
1.感染性疾病的明确诊断 感染性疾病的明确诊断 2.通过药敏试验指导临床合理用药 2.通过药敏试验指导临床合理用药 3.病原体监控和耐药性监控 病原体监控和耐药性监控
质控参考菌
金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 铜绿假单胞菌 ATCC ATCC ATCC 25923 25922 26853
二.耐药机制及耐药性监测试验
1.耐药菌株： 耐甲氧西林葡萄球菌（MRS） 耐青霉素肺炎链球菌（PRSP） 耐万古霉素肠球菌（VRE） 质粒介导的超广谱β-内酰胺酶（ESBL） 多重耐药的铜绿假单胞菌、嗜麦芽假单 胞菌和不动杆菌
2.病原体诊断的基本方法
examination） 直接显微镜检测（microscopic examination） 染色标本检查法： ⑴染色标本检查法：革兰染色和抗酸染色 不染色标本检查法： ⑵不染色标本检查法：悬滴法和压滴法
2.病原体诊断的基本方法
病原体分离培养(isolation and culture)和鉴定(identification) • 培养基选择 • 生长条件：一般大气条件 生长条件： 厌氧条件 微需氧条件
7. 医院感染常见病原菌监测 痰（咽拭子）培养 病原菌——肺炎链球菌，肺炎克雷 肺炎链球菌， 病原菌 肺炎链球菌 伯氏菌，大肠埃希菌，肠球菌， 伯氏菌，大肠埃希菌，肠球菌，金 黄色葡萄球菌， 黄色葡萄球菌，铜绿色假单胞菌等 半定量3+~4+为致病菌，1+~2+怀疑 为致病菌， 半定量 为致病菌 怀疑 为污染菌
抗微生物药物敏感性试验（AST） 一.抗微生物药物敏感性试验（AST）
2.常用敏感性试验方法 2.常用敏感性试验方法 手工试验: ⑴手工试验:①K-B纸片琼脂扩散法 结果表示:S :S结果表示:S-Susceptible I-Intermediate R-Resistant 稀释法（MIC） ②稀释法（MIC） ③Etest ④联合药敏试验
二.耐药机制及耐药性监测试验
⑵超广谱β-内酰胺酶检测（ESBL） 超广谱β 内酰胺酶检测（ESBL） 方法： 方法：纸片扩散法和稀释法 意义： 阳性预示对头孢泊肟、 意义：ESBL阳性预示对头孢泊肟、头孢他 阳性预示对头孢泊肟 头孢噻肟、 啶、头孢噻肟、头孢曲松和氨曲南等抗 菌药物无效。 菌药物无效。
医院感染检查
7. 医院感染常见病原菌监测 痰（咽拭子）培养
甲型溶血性链球菌是亚急性细菌性心 内膜炎的主要致病菌
医院感染检查
7. 医院感染常见病原菌监测 粪培养 病原菌——金黄色葡萄球菌，伤寒 病原菌 金黄色葡萄球菌， 金黄色葡萄球菌 及其他沙门氏菌，志贺氏菌属， 及其他沙门氏菌，志贺氏菌属，致 病性大肠埃希菌，霍乱弧菌， 病性大肠埃希菌，霍乱弧菌，副溶 血性弧菌，弯曲菌， 血性弧菌，弯曲菌，念珠菌等
2.病原体诊断的基本方法
• • • • 鉴定技术： 鉴定技术： 生化鉴定 血清学鉴定 数码鉴定 自动化鉴定
2.病原体诊断的基本方法
血清学诊断：查特异性抗体 血清学诊断：查特异性抗体——肥达氏 肥达氏 试验 病原体特异性抗原检测 病原体核酸检测： 病原体核酸检测：查特异基因片段 DNA/RNA——PCR、DNA探针杂交技术 PCR、 DNA/RNA PCR DNA探针杂交技术
医院感染检查
7.医院感染常见病原菌监测 尿液标本 病原菌——大肠埃希菌，变形杆菌， 病原菌 大肠埃希菌，变形杆菌， 大肠埃希菌 肺炎克雷伯氏菌，肠球菌， 肺炎克雷伯氏菌，肠球菌，金黄色 葡萄球菌， 葡萄球菌，铜绿色假单胞菌 菌落计数>104/ml以上 以上——尿路感染 菌落计数 以上 尿路感染
医院感染检查
㈥泌尿生殖道标本
• 性传播疾病取尿道口分泌物、阴道 宫颈口分泌物 • 生殖道疱疹常穿刺取疱疹液
㈦创伤、组织和脓肿标本
• 开放性脓肿：无菌棉拭采集脓液 • 封闭性脓肿：无菌注射器穿刺抽取
二.病原体检查的基本方法
1.临床标本细菌检验一般程序
一般程序
标本
直接涂片，染色镜检 需氧培养 分离培养 二氧化碳培养 观察菌落形态 单个菌落 血清学鉴定 生化鉴定 确定致病菌发出报告 涂片、染色镜检 药敏试验 增菌培养 厌氧培养
耐药性统计和分析
100
WHONET
80 60 40 20 0 东部 西部 北部
第一季度 第二季度 第三季度 第四季度
建立本院、 建立本院、本地区和本国的细菌耐药 性监测数据库和网络
第三节
医院感染检查（Nosocomial Infection）
医院感染检查
1.定义:病人入院时不存在, 1.定义:病人入院时不存在,也不处于潜伏 定义 期，而在医院内发生的感染，包括医院 而在医院内发生的感染， 内获得而在出院后发病的感染。 内获得而在出院后发病的感染。
二.耐药机制及耐药性监测试验
⑵超广谱β-内酰胺酶检测（ESBL） 超广谱β 内酰胺酶检测（ESBL） 定义：是水解青霉素，一代、 定义：是水解青霉素，一代、二代和三代 头孢菌及单酰胺类药物的酶，产生ESBL 头孢菌及单酰胺类药物的酶，产生ESBL 的细菌对上述抗生素耐药。 的细菌对上述抗生素耐药。 ESBL主要存在于大肠杆菌和肺炎克雷伯 ESBL主要存在于大肠杆菌和肺炎克雷伯 菌等革兰阴性菌中。 菌等革兰阴性菌中。
二.耐药机制及耐药性监测试验
2.耐药机制： ⑴药物渗入细菌减少 ⑵产生灭火酶和钝化酶(β-内酰胺酶) β ⑶细菌抗生素结合蛋白发生改变（PBP） ⑷代谢拮抗剂产生
二.耐药机制及耐药性监测试验
3.耐药性监测的特殊试验 3.耐药性监测的特殊试验 ⑴ β-内酰胺酶检测
方法:头孢百度文库噻吩滤纸片法(nitrocefin) 意义: β-内酰胺酶检测阳性,即对青霉素、 氨卞西林等抗生素耐药
医院感染检查
4.常见临床类型 4.常见临床类型
下呼吸道感染 尿路感染 手术切口感染 胃肠道感染 血液感染 皮肤和组织感染
医院感染检查
5.感染途径： 5.感染途径： 感染途径 • 接触传播 • 空气、飞沫传播 空气、 • 经注射或输液、输血传播 经注射或输液、 • 经口传播
医院感染检查
6.易感因素： 6.易感因素： 易感因素 • 年龄：老年和婴幼儿 年龄： • 慢性疾病患者 • 基础疾病或医源性 • 烧伤或创伤产生坏死性组织 • 大量使用抗生素 • 接受侵袭性治疗操作
小
复习思考题： 复习思考题：
结
名词解释：微生物直接检测、 名词解释：微生物直接检测、微生物 非培养检测、医院感染、药敏试验、 非培养检测、医院感染、药敏试验、 耐药性、 耐药性、联合用药
问答题： 问答题：
1.简述病原学诊断的基本原则 1.简述病原学诊断的基本原则 2.医院感染的定义 感染源、 医院感染的定义、 2.医院感染的定义、感染源、感染途径及 易感因素 3.抗生素敏感试验的结果解释以及它们与 3.抗生素敏感试验的结果解释以及它们与 临床抗生素剂量的关系 4. 各种临床标本中的主要致病菌及临床 意义 5.什么是药敏试验及基本检验方法 5.什么是药敏试验及基本检验方法
㈡尿 液
• 无菌采集清洁中段尿 • 导尿或膀胱穿刺获得
㈢粪 便
• 取含脓、血或粘液粪便置于清洁容 器内 • 排便困难者或婴幼儿可用直肠拭子 • 对传染性腹泻须三次送检
㈣呼吸道标本
1.痰：⑴自然咳痰法 ⑵气管镜采集法 2.鼻咽拭标本：同痰标本用清水漱口 后采集
㈤脑脊液与其他无菌体液
• 脑脊液标本应立即保温送检 • 胸腹水等体液标本应抽取2-5ml送检
一.抗微生物药物敏感性试验 AST） （AST）
Vitek， ⑵自动化仪器 Vitek，Microscan PCR直接检测mecA基因 直接检测mecA mecA基因 ⑶分子试验 Nitrocefin ⑷补充试验
抗微生物药物敏感性试验（AST） 一.抗微生物药物敏感性试验（AST）
3.药敏试验结果与临床抗生素剂量关系 . 敏感(S) (S)——一般剂量有效，推荐使用该抗生素用于 一般剂量有效， 敏感(S) 一般剂量有效 临床治疗 中介(I) (I)——大剂量有效，提示药物MIC接近体液或组 大剂量有效， MIC接近体液或组 中介(I) 大剂量有效 提示药物MIC 织可达到药物浓度 耐药(R) (R)——大剂量无效,即常规用药剂量不能达到 大剂量无效, 耐药(R) 大剂量无效 MIC
医院感染检查
7.医院感染常见病原菌监测 血培养： 病原菌：金黄色葡萄球菌、表皮葡萄 球菌等 单次血培养不易区分污染菌或感染菌。 两次培养均为同种皮肤正常菌群可认 为感染菌。
医院感染检查
8.医院环境监测和消毒灭菌监测 空气培养：沉降法采样 物体表面监测：压印法 医务人员手部细菌监测 消毒灭菌效果监测
抗微生物药物敏感性试验（AST） 一.抗微生物药物敏感性试验（AST）
4.K4.K-B纸片扩散试验的影响因素 琼脂厚度 与抑菌圈直径成反比 菌液浓度 与抑菌圈直径成反比 药敏试纸 含量–与抑菌圈直径成反比 含量 与抑菌圈直径成反比 保存温度–20℃ 20℃， 保存温度 20℃，使用前室温平衡 30min后开启 30min后开启 湿度-密封容器， 湿度-密封容器，硅胶防潮 NCCLS标准 培养种类(MH),厚度(4mm) (MH),厚度 NCCLS标准 培养种类(MH),厚度(4mm) 接种量(0.5MF) 接种量(0.5MF) 选药标准,判读标准, 选药标准,判读标准,质控标准
第二节 细菌耐药性检查
抗微生物药物敏感性试验（AST） 一.抗微生物药物敏感性试验（AST）
1.定义： 1.定义：对敏感性不能预测的临床分 定义 离菌株进行药敏试验， 离菌株进行药敏试验，以指导临床 选择治疗药物和了解区域或医院内 常见病原菌耐药性变迁， 常见病原菌耐药性变迁，有助于临 床经验性治疗选药。 床经验性治疗选药。
医院感染检查
2.医院感染常见病原体（细菌）：革 兰阴性杆菌、革兰阳性球菌 （MRSA）、厌氧菌和深部真菌等
医院感染检查
3.感染源: 3.感染源: 外源或内源性病原体 感染源
外源性：其他住院患者、医务人员、探望 外源性：其他住院患者、医务人员、 多为条件致病菌） 者（多为条件致病菌） 内源性：患者自身皮肤、口腔、 内源性：患者自身皮肤、口腔、咽部和胃 肠道固有的正常菌群等（ 肠道固有的正常菌群等（免疫力低下患 者）
二.耐药机制及耐药性监测试验
⑶琼脂筛选试验（agar screen test） 琼脂筛选试验（ ） 是以单一药物单一浓度检测细菌耐药性， 是以单一药物单一浓度检测细菌耐药性， 如耐甲氧西林葡萄球菌和耐万古霉素肠 球菌检测。 球菌检测。
二.耐药机制及耐药性监测试验
⑷耐药基因检测 如MRSA中mecA基因检测 中 基因检测