丙氨酸氨基转移酶检测方法
血清丙氨酸氨基转移酶IFCC推荐方法测定
血清丙氨酸氨基转移酶IFCC推荐方法测定1.实验原理国际临床化学学会(IFCC)推荐的紫外连续监测法。
ALTL-丙氨酸+ -酮戊二酸丙酮酸+ L-谷氨酸LDH（乳酸脱氢酶）丙酮酸+ NADH + H+L-乳酸+ NAD+ + H2O加入磷酸吡哆醛（P-5-P）是为了稳定ALT活性，避免样品中因内源性磷酸吡哆醛不足造成测定结果假性偏低。
(如心肌梗死、肝病和特别监护病人的结果)[1]2. 标本：2.1 病人准备：12小时禁食。
2.2 类型：血清，肝素或EDTA血浆。
3. 标本存放：3天内的活性损失：2～8℃保存：<10%；15～25℃保存：<17%；标本稳定性：-20℃保存至少可稳定4周。
4. 标本运输：常温条件下保存运输。
5. 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。
6. 实验材料6.1 试剂申能ALT测定试剂盒（货号：141 27017170 1 试剂 1 6×64ml 试剂2 6×16ml）6.1.1 试剂组成试剂1（R1）：Tris缓冲液pH 7.5 100mmol/LL-丙氨酸500mmol/LLDH（乳酸脱氢酶）≥1200U/L试剂2（R2）：a-酮戊二酸15mmol/LNADH 0.18mmol/L磷酸吡哆醛试剂：Good’s 缓冲液pH9.6 0.7mmol/L磷酸吡哆醛0.09mmol/L6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
6.1.5 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。
不可入口！避免接触皮肤及粘膜。
应采取必要的预防措施使用试剂。
6.2 校准品：使用DiaSys公司提供的TruCal U校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
ALTAST测定方法
ALTAST测定方法ALT和AST是两种常用的肝功能指标，用于评估肝脏疾病和损伤程度。
本文将介绍ALT和AST的测定方法。
一、ALT（丙氨酸氨基转移酶）的测定方法：ALT是一种肝细胞特异性酶，主要存在于肝细胞的胞浆中。
当肝细胞受损或破坏时，ALT会释放入血液中，因此血液中ALT水平的升高通常与肝脏疾病相关。
ALT的测定方法一般采用酶动力学法或颜色反应法。
1.酶动力学法：这种方法是通过衡量ALT催化丙酮酸和谷氨酸互相转化的速率来测定ALT的活性。
这种方法的原理是ALT催化丙酮酸和谷氨酸生成谷草转氨酶和谷氧化酶，同时反应中NADH的消耗会导致光学密度的变化。
通过测量这种变化可以确定ALT的活性水平。
2.颜色反应法：颜色反应法是用于测定ALT浓度的常用方法，它基于谷氨酸和丙酮酸在特定条件下与ALT催化生成谷草转氨酶和谷氧化酶的反应。
这种方法通常使用的试剂盒包含了特定的底物和酶，当ALT存在时，底物与其催化生成产物，产物的浓度可以通过光度计测量。
二、AST（天冬氨酸氨基转移酶）的测定方法：AST也是一种肝脏酶，但它不仅存在于肝细胞中，还存在于心肌、肌肉、肾脏和红细胞等组织中。
因此AST的升高并不一定代表肝脏疾病，也可能与其他组织的损伤有关。
AST的测定方法与ALT类似，也有酶动力学法和颜色反应法两种常见方法。
1.酶动力学法：该方法是通过测量AST催化天冬氨酸和α-酮戊二酸互相转化的速率来测定AST的活性。
反应中，NADH或NADPH的消耗导致光学密度的变化，可以用于测量AST的活性水平。
2.颜色反应法：AST的颜色反应法原理与ALT的相似，使用特定的底物和酶，当AST存在时，底物与其催化生成产物，产物的浓度可以通过光度计测量。
这些方法虽然有一定的差异，但一般都基于底物与酶的反应原理，通过测量底物与产物的光学密度变化或者测量酶活性来确定血液中ALT和AST的水平。
综上所述，ALT和AST的测定方法主要有酶动力学法和颜色反应法两种。
丙氨酸氨基转移酶检测操作程序
丙氨酸氨基转移酶检测操作程序丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase ，ALT ）属于转氨酶类，主要存在于肝细胞内，参与肝细胞内的新陈代谢，在血液中不发挥催化作用。
采用速率法测定，能有效地降低内源性物质的干扰，使测定结果较为准确。
主要用于肝脏等疾病的诊断。
实验原理L-丙氨酸和a-酮戊二酸在ALT 作用下，生成丙酮酸和L-谷氨酸。
丙酮酸被试剂中的LDH 还原为L-乳酸，同时NADH 被氧化为NAD +，通过监测340nm 处吸光度值下降的速率，可以测定ALT 活力。
样本中内源性丙酮酸的干扰可由试剂中LDH 在初始孵育期内快速、完全地消除，不会干扰测定。
反应如下：L-丙氨酸 + a-酮戊二酸丙酮酸 + L-谷氨酸丙酮酸 + NADH L-乳酸 + NAD+样本中丙酮酸 + NADH L-乳酸 + NAD+试剂与仪器1. 试剂1.1.丙氨酸氨基转移酶试剂盒（由上海复兴长征医学科学有限公司提供）化学组成：R1: L-丙氨酸600mmol/L 乳酸脱氢酶 ＞1820U/L NADH 0.26mmol/L Tris 缓冲液 80mmol/L R2: Tris 缓冲液 80mmol/L a-酮戊二酸 36mmol/LEDTA5.0mmol/L在开展项目之前或更换试剂品牌时，将以上工作参数输入到仪器内，并按要求进行调整后，方可进行实验。
技术性能指标:试剂空白起始吸光度（340nm37℃）≤1.60A 。
线性范围：450U/L ±10%。
准确度：相对偏差(RE%)≤±10%。
精密度：批内精密度变异系数(CV%)≤5%；批间精密度相对极差(%)≤5%。
储存条件、有效期：储存于2～8℃，避光可稳定12个月。
启用后可稳定30天。
混浊或以蒸馏水为空白在340nm 处光吸收值高于1.0A 时，则不能使用。
ALTLDH LDH计算公式： ALT(U/L )= K= ——————————式中 TV=总反应体积(mL )SV=样本体积(mL )6.3=NADH 在340nm 处的毫摩尔吸光系数P=比色杯光径(cm )K 为工作参数表中的【K Factor 】以上是依据化学实验计算测试结果的公式，全自动分析时将工作参数（K 值）输入仪器即可。
丙氨酸氨基转移酶测定标准操作规程
丙氨酸氨基转移酶测定标准操作规程.检验原理：（酶偶联速率法）L-丙氨酸和α-酮戊二酸在丙氨酸氨基转移酶的作用下生成丙酮酸和L-谷氨酸。
丙酮酸在乳酸脱氢酶（LDH）作用下生成L-乳酸，同时还原型辅酶I（NADH）被氧化为氧化型辅酶I（NAD、在340nm处测得吸光度呈下降趋势与ALT活性成正比。
根据NADH吸光度下降程度计算丙氨酸氨基转移酶的活力单位。
试剂内不含磷酸弼哆醛。
1.-丙氨酸+Q-酮戊二酸一生→丙酮酸+L-谷氨酸丙酮酸+NADH+H，侬->L一乳酸+MUT3.2225828°C48-20°C保存7天，样本不可反复冻融！4.检验方法；仪器法（详见DF-603/DI-600标准操作规程）5.参考范围：6 .检验结果的解释：6.1 样本含量超出线性范围时，建议用0.9%（W∕V）的氯化钠溶液稀释样本。
6 .2.单位换算：ukat∕L=U∕L×16.67×10^37 .检验方法的局限性7.1 结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。
7. 2若试剂浑浊，或以水空白在34Onnl处吸光度小于LOOO时不能使用。
8.试剂性能指标8.1 试剂外观：无色或淡黄色透明液体，无悬浮物及沉淀。
8. 2装量：不低于标识值。
8. 3试剂空白吸光度：在34Onnl处，光径ICnI时，空白吸光度A21.0008 .4试剂空白吸光度变化率：在34Onm处，光径ICm时，Z∖A∕minW0.0049 .5线性区间：试剂的线性区间为[10-500]U∕L,在此线性区间内：a)线性相关系数r应不小于0.9900；b)[10-50]U/L区间内，线性绝对偏差不超过±5U/L；(50-500)U/L 区间内,线性相对偏差不超过±10%。
8. 6准确度：相对偏差应不大于±15机8. 7分析灵敏度：在34Onrn处，光径ICnl时，测量已知浓度的样品后换算成W/L的丙氨酸氨基转移酶时，吸光度变化AAU∕L∕min22XIO-48. 8批内精密度：CV≤5%8. 9批间精密度:R≤10%8. 10稳定性：(2-8)C下，原包装存放的试剂有效期为12个月.取到期后一个月的试剂进行测试，应满足1-8的要求。
丙氨酸氨基转移酶测定方法操作规程
丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定方法操作规程【产品名称】通用名称：丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定试剂盒（IFCC法）【预期用途】该试剂盒采用IFCC法，用于体外定量测定人血清或肝素血浆中丙氨酸氨基转移酶的活力。
【检验原理】在ALT催化下，从丙氨酸转移到2个氨基到α-酮戊二酸上，生成产物谷氨酸和丙酮酸。
后者通过乳酸脱氢酶催化下转变成乳酸，在340nm波长条件下检测到NADH吸光度下降速率，与ALT的活力成比例。
L-ALT丙酮酸+ L-谷氨酸+LDH L-乳酸+NAD++H2O【主要组成成份】R1：Tris缓冲液150mmol/LL-丙氨酸750 mmol/L乳酸脱氢酶（LDH） 1200U/LNADH 0.4mmol/LR2：α-酮戊二酸90mmol/LNADH 0.9mmol/L*不同批号试剂盒各组分请勿混用。
【储存条件与有效期】未开启的试剂盒在2℃~8℃保存有效期为一年。
试剂开瓶后应避光保存，在2℃~8℃可稳定28天。
试剂不可冰冻。
【适用仪器】迈瑞BS系列全自动生化分析仪、日立7180型全自动生化分析仪、日立7060型全自动生化分析仪、日立7600P自动生化分析仪、奥林巴斯AU400型全自动生化分析仪、奥林巴斯AU2700型全自动生化分析仪、贝克曼库尔特AU680型全自动生化分析仪。
若需自动生化分析仪应用参数，请随时和公司联系。
建议用户在不同仪器上使用本产品时，根据实验室情况进行验证。
【样本要求】新鲜血清或肝素血浆样本，采集后及时测定，应避免污染。
【检验方法】试剂准备R1：即用液体试剂R2：即用液体试剂测定条件波长340nm温度37℃分析类型动力学法反应方向下降反应操作步骤* ΔA/min=ΔA/min样本管—ΔA/min空白管* 试剂和样本量可根据不同生化分析仪要求按比例适当增减。
校准校准品类型S1：生理盐水S2：迈瑞配套校准品推荐进行2点线性校准校准周期和要求（包括但不限于以下情况）更换试剂批号时仪器关键零部件更换时室内质控失效时质控每批样品检测时，建议使用迈瑞公司提供的配套质控品进行内部质量控制。
丙氨酸氨基转移酶检测
丙氨酸氨基转移酶检测1 检验目的规范丙氨酸氨基转移酶（ALT）检测试验，确保检测结果准确性和重复性。
2 测定方法酶动力学法3 检测原理在ALT的催化下，丙氨酸的氨基转移到a-酮戊二酸，生成丙酮酸及谷氨酸。
丙酮酸与NADH在LDH的催化下反应生成乳酸和NAD＋。
NADH在波长340nm有特异吸收峰，其氧化的速率与样品中ALT的活力成正比，在340nm处测定NADH 下降的速率，即可计算出ALT活性。
ALTL-丙氨酸+α-酮戊二酸丙酮酸+ L-谷氨酸LDH丙酮酸+NADH+H+ L- L-乳酸 + NAD+4 样本血清、肝素或EDTA抗凝血浆，处理方法见生化标本采集程序。
稳定性：20～25℃稳定1天4～8℃稳定7天-20℃稳定1周5 仪器和试剂5.1 仪器：美国贝克曼-库尔特DXC800、AU5811全自动生化仪、迈瑞BS800M生化分析仪。
5.2 试剂：由武汉元景商贸公司提供原装贝克曼-库尔特试剂及迈瑞公司提供的生化试剂（详见试剂说明书），超过失效期的试剂不能使用。
5.3 校准物：Rodan混合校准品，符合WHO标准，贮存、准备严格遵照其说明书。
5.4 质控物：Rodan正常值及病理值质控品，符合WHO 标准，贮存、准备严格遵照说明书。
6 校准6.1 仪器校准：每年由该仪器维修工程师参照厂方的技术规范对仪器进行一次校准。
6.2 项目校准：试剂盒在仪器上放置稳定期后；试剂批号更换后；由质控结果随时决定。
7 操作步骤上机操作，操作程序、质量控制程序见相应生化仪操作程序。
8 参考范围≤41U/L9 患者结果可报告区间4～800U/L。
10 警告/危急值未规定。
11 性能指标11.1 线形上限：△A/min为0.40，800U/L。
11.2 精密度：批内、批间CV分别为7.3%、9.2%.11.3 准确度:不准确度≤15%.11.4 总胆红素达到180umol/L时不会有明显干扰；中、重度脂血明显干扰。
12 干扰因素及变异的潜在来源12.1 血清中含有酮酸能消耗NADH，使结果偏高；血清中谷氨酸脱氢酶增高时，在有氨存在的条件下，亦消耗NADH，使结果偏高。
丙氨酸氨基转移酶测定
丙氨酸氨基转移酶测定1.原理：ALTL-丙氨酸+a-酮戊二酸丙酮酸+L-谷氨酸LOH丙酮酸+NADH+H+ L-乳酸+NAD+2.标本采集与处理：2.1受检者准备：病人必须空腹12小时，不饮酒24小时后采集血样。
2.2静脉采血：除非是卧床的病人，一般采血取坐位，从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带；2.3标本处理:2.3.1血清要迅速与血细胞分离，因红细胞中AL T比血清中AL T的浓度高。
2.3.2血清中的AL T能在室温（20—25℃）下保存24小时或者在4℃下保存1周。
2.4采血管要求:采血时要求使用一次性无菌注射器，一人一管，用后毁形，用500mg/L有效氯浸泡消毒３０分钟，回收、焚烧、做好登记。
2. 5标本拒收；接收标本应检查是否符合要求（有无溶血）试管是否填写完整，对不合格标本应重新采集。
3.试剂：3.1试剂盒组成：（柏定生物工程（北京）有限公司）a-酮戊二酸15mmol/LNADH 0.18 mmol/L乳酸脱氢酶（LDH）>5000U/LTris缓冲液100 mmol/L可接受的范围内，并且结果必须在１／４ｐＴ范围内。
3.2.1质控品批号及范围:批号022431，范围*±2st和*±3s。
3.2.2保存环境:在2—8℃保存，有效期内稳定。
3.3试剂贮存及稳定性：试剂在2—8℃保存可稳定至瓶签所示失效日期；工作液2—8℃可稳定30天。
4.仪器：上海迅达公司的半自动生化分析仪XD811。
5.操作程序：5.1试剂准备：在室温中按瓶签标定的体积，定量加入新鲜去离子水，轻轻混匀至试剂完全溶解。
5.2分析参数：方法：速率法；波长340nm温度：37℃比色杯光径: 1cm 延迟时间60秒5.3操作步骤：5.4计算方法:样品中AL T活动；AL T（U/L）=A/分*FV1F= *1000=1746Vs*消光系数V1=反应总体积Vs=样品体积NADH在340㎜的毫克分子消光系数=6.36.操作性能:线性范围：0—1000U/L（37℃）如果血清中ALT活力超出范围，则用生理盐水稀释血清重做，结果乘以稀释倍数。
检验科生化丙氨酸氨基转移酶ALT测定的标准操作规程
丙氨酸氨基转移酶测定的标准操作规程【目的】体外检测血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT ）的含量。
【职责】1.实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。
2.本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字:室负责人、科主任。
【标本类型及实验前准备】1.受检者的准备病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。
注意有无应用影响测试项目的药物。
此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。
应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.静脉采血除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
【仪器设备】东芝TBA-FX8全自动生化分析仪，低速离心机一、原理谷丙转氨酶催化L-丙氨酸的氨基转移，生成丙酮酸。
丙酮酸与NADH在LDH的催化下反应生成乳酸和NAD+。
NADH在340nm处有特异吸收峰，其被氧化的速率与血清中ALT的活性成正比，在340nm处测定NADH下降速率，即可测出ALT活性。
ALTL-丙氨酸+ a-酮戊二酸丙酮酸+ L-谷氨酸LDHNADH + 丙酮酸+ H+L-乳酸+ NAD+一、试剂1.试剂本科使用上海科华生物工程股份有限公司ALT试剂盒，为液体双试剂，各组分如下:2.校准血清使用上海科华生物工程股份有限公司提供的多项校准血清或采用因数法。
按照说明书提供的样本和试剂比例计算理论因数。
校准频次：空白定标：每日需做试剂空白定标。
全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的2SD范围，需要全点定标。
三、操作样品为血清或肝素/EDTA抗凝血浆。
本法为IFCC法。
参数见后附，附录A。
试剂参数设置、定标操作以及样本检测常规操作，见仪器操作规程。
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丙氨酸氨基转移酶检测方法
丙氨酸氨基转移酶(ALT)是一种重要的肝脏酶,也是一种常见的生
化指标。
检测方法通常用于判断肝脏功能的健康程度和疾病的演变趋势。
下面，我们将对丙氨酸氨基转移酶检测方法进行详细的阐述。
一、常规检测方法
常规检测方法是指采用血清学方法检测ALT水平。
具体步骤如下：
1.患者空腹4～8小时。
2.采集3～5ml静脉血标本，禁止吸烟和饮酒。
3.将血样放于离心管中，进行离心处理，得到血清样本。
4.通过检测仪器检测血清ALT酶的含量。
二、生物传感器检测方法
生物传感器检测方法可以检测非常低的ALT水平，可以提供更加精确
的测试结果。
具体步骤如下：
1.准备含有具有高选择性的生物传感器的电极。
2.采集患者的静脉血标本。
3.将血样与生物传感器电极接触并依据特定的工艺条件进行分析。
4.通过仪器获得ALT的浓度明确的结果。
三、免疫学方法
免疫学方法采用免疫学技术分析ALT特定抗体的含量。
具体步骤如下：
1.准备特定的抗ALT抗体试剂。
2.采集患者的静脉血标本。
3.加入抗ALT抗体图谱，进行特异性反应，每个抗原对应一个抗体。
4.使用适当的试剂盒，对空白对照样品和样品进行ELISA测定。
5.通过光学振荡仪读取ALT特定抗体的含量并获得浓度明确的结果。
综上所述，以上列出的三种方法都是常用的丙氨酸氨基转移酶检
测方法。
针对不同的病情和检测需求选择不同的检测方法非常重要。
总之，如果您的ALT测试结果不正常，医生会建议您进一步进行了解。
您可以向医生咨询，了解其他可能涉及的测试方法和预防方法。