血清丙氨酸氨基转移酶测定-标准操作程序
血清丙氨酸氨基转移酶测定
血清丙氨酸氨基转移酶测定1 检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。
2 实验原理本试剂以国际临床化学会(IFCC)推荐方法为基础，所采用的反应原理与反应式如下。
⑴样本中的丙氨酸氨基转移酶（ALT）催化丙氨酸的氨基转换至α-氧代戊二酸，生成丙酮酸和L谷氨酸。
⑵丙酮酸被试剂中的乳酸脱氢酶（LDH）还原为L-乳酸的同时还原型辅酶I（NADH+ H+）被氧化为辅酶I（NAD+），而使波长340nm处的吸光度值下降。
通过对波长340nm处吸光度值的下降速率进行监测，即可测得样本中丙氨酸氨基转移酶（ALT）的活性。
(3)样本中内源性丙酮酸的干扰，可由试剂中的乳酸脱氢酶（LDH）在测定的延迟时间内快速、完全地消除，不会对测定产生干扰。
ALTL-丙氨酸 + -酮戊二酸丙酮酸 + L-谷LDH（乳酸脱氢酶）氨酸丙酮酸+ NADH + H+L-乳酸 + NAD+ + H2O3 标本3.1病人准备：12小时禁食。
3.2 类型：血清。
3.3. 标本存放：3天内的活性损失：2～8℃保存：<10%；15～25℃保存：<17%；标本稳定性：-20℃保存至少可稳定4周。
3.4 标本运输：常温条件下保存运输。
3.5 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。
4 实验材料4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司ALT试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成试剂1 L丙氨酸 600mmol/L 乳酸脱氢酶＞1820U/L（R1）：NADH 0.26mmol/LTris缓冲液 80mmol/L试剂2（R2）：Tris缓冲液80mmol/L α氧代戊二酸36mmol/LEDTA 5.0mmol/4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
4.1.3 试剂稳定性与贮存：在2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂盒自生产之日起有效期为12个月。
4.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
丙氨酸氨基转移酶(ALT)实验操作规程
1.目的和适用范围：1.1.为保证血液检测的结果正确性，规范实验操作，特制定本操作规程。
1.2.适用于本实验室，全体工作人员都必须严格按照本操作规程进行操作。
2.术语：无。
3.职责：3.1.实验室工作人员都必须严格按照本操作规程进行操作。
3.2.实验室负责人负责最终实验室报告的签发。
4.操作说明4.1.实验原理：血清中谷－丙转氨酶作用于由丙氨酸及α酮戊二酸组成的基质产生丙酮酸，丙酮酸与2,4－二硝基苯肼作用，形成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液中呈红棕色。
反应过程如下：α酮戊二酸 + L丙氨酸→ L-谷氨酸 + 丙酮酸L-丙酮酸 + 2,4二硝基苯肼→ 2，4-二硝基苯腙 + 水4.2.实验所需设备和材料：ALT测定试剂盒、100μl加样器、一次性吸头、37℃水浴箱、DNM-9602酶标仪。
4.3.实验操作步骤：4.3.1.将基质液37℃保温5min。
4.3.2.微孔板上设定1个空白对照，3个标准孔，其余为样品孔。
4.3.3.各孔加缓冲液、基质液、丙酮酸与样品量如下：4.3.3.1.空白孔：10ul磷酸缓冲液后，再加50ul基质液。
4.3.3.2.标准孔：10ul磷酸缓冲液，加5ul丙酮酸标准液，再加45ul基质液。
4.3.3.3.样品孔：分别加样本10ul，加50ul基质液。
4.3.4.适当震荡混匀，置37℃温育30min。
4.3.5.每孔加2,4二硝基苯肼50ul,混匀后置37℃温育20min。
4.3.6.每孔加NaOH溶液150ul, 混匀后，置37℃温育5min。
4.4.结果判读：4.4.1.双波长（492nm,参考波长630nm）,以空白孔为零点，测定标准液与样品的OD值。
4.4.2.CUT OFF值为3个标准孔的平均值。
4.4.3.若样品OD值大于或等于CUT OFF值，为阳性。
4.4.4.若样品OD值小于CUT OFF值为阴性。
4.5.注意事项4.5.1.严重脂血，溶血或黄胆血清可使吸光度明显增加，因此检测此类标本应作血清对照管。
血清丙氨酸氨基转移酶测定
血清丙氨酸氨基转移酶测定1.实验原理国际临床化学学会(IFCC)推荐的紫外连续监测法。
ALTL-丙氨酸+ -酮戊二酸丙酮LDH（乳酸脱氢酶）酸+ L-谷氨酸丙酮酸+ NADH + H+L-乳酸+ NAD++ H2O 上述偶联反应中，NADH的氧化速率与`样品中ALT的活力成正比,在340nm处NADH呈现特性吸收峰，而NAD+则没有。
因此，可在340nm监测吸光度的下降速率（-△A/min）,计算出ALT的活性单位。
2. 标本：2.1 病人准备：12小时禁食。
2.2 类型：血清，肝素或EDTA血浆。
3. 标本存放：3天内的活性损失：2～8℃保存：<10%；15～25℃保存：<17%；标本稳定性：-20℃保存至少可稳定4周。
4. 标本运输：常温条件下保存运输。
5. 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。
6. 实验材料6.1 试剂欧泰克ALT测定试剂盒6.1.1 试剂组成Tris缓冲液pH 7.4 80mmol/LL-丙氨酸800mmol/LLDH（乳酸脱氢酶）≥1200U/La-酮戊二酸18mmol/LNADH 0.18mmol/L6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
6.1.5 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。
不可入口！避免接触皮肤及粘膜。
应采取必要的预防措施使用试剂。
6.2 校准品：使用罗氏公司提供的校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。
6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。
7. 仪器：日立7060生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见生化检验日立7060生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2 仪器操作步骤：参见生化检验日立7060生化分析仪操作规程.SOP文件9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性测定(改良赖氏法)
实验操作
取干净试管12支，按下表所示标号，要求各S 管和U管进行双管平行操作。先做对照管和测 定管，在30min保温期间再做空白管和标准管
1.标准曲线绘制：取试管5支，按下表操作
混匀，室温放置10分钟后，以蒸馏水调零，用 520nm波长比色，读取各管光密度。各管光密 度减去0管光密度，然后以光密度的差值为纵 坐标，各管相应的转氨酶活性单位为横坐标， 绘制标准曲线。为了方便，可将光密度相当于 转氨酶的卡门氏单位列于其后
2.酶活性的测定：取试管2支，注明测定管及对照管，
在测定前将底物液在37摄氏度水浴中预温5分钟，再按下表操作
混匀，室温放置10分钟后，以蒸馏水调零，用 520nm波长比色，读取光密度，用测定管的光 密度减去对照管的光密度查标准曲线，即得到 待测血清中所含ALT的酶的活性。 参考值：5~25卡门氏单位
临床意义
ALT（GPT)广泛存在于机体各种组织中，但 在肝细胞中含量最多，当肝脏有病变，特别是 急性肝炎及肝细胞坏死是，血清中ALT活性显 著升高。在肝癌、肝硬变以及胆道疾病时，此 酶活性也可或轻度增高。另外，其他脏器或组 织的疾病，该酶活性也升高。
注意事项
1.不同血清对照管光密度基本相同，因此，同一批标本制作2~3个血清 对照管求其平均值即可，亦可用空白管代替对照管。对超过正常的标本 进行复查时，每份标本均应作对照管。 2.严重脂血症、黄疸或溶血的血清都能引起测定管OD值增加，因此，检 查此类标本时，应做血清对照管。 3.赖氏法标准曲线只到97卡门氏单位，其线性关系良好。超过此活力的 标本，应将血清稀释后再测定，结果乘以稀释倍数。 4.ALT底物液与2，4-二硝基苯肼液配置要准确，每次测定时空白管的 OD值上下波动不应超过0.015.如超出此范围应检查试剂及仪器等方面的 问题。 5.除了丙酮酸与2，4-二硝基苯肼再碱性溶液中能成腙外，α -酮戊酸亦 能与2，4-二硝基苯肼产生苯腙，两种苯腙的吸光度在520nm处有较大 差异，因此超过一定范围时，该方法所绘制的标准曲线呈抛物线。
丙氨酸氨基转移酶检测操作程序
丙氨酸氨基转移酶检测操作程序丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase ，ALT ）属于转氨酶类，主要存在于肝细胞内，参与肝细胞内的新陈代谢，在血液中不发挥催化作用。
采用速率法测定，能有效地降低内源性物质的干扰，使测定结果较为准确。
主要用于肝脏等疾病的诊断。
实验原理L-丙氨酸和a-酮戊二酸在ALT 作用下，生成丙酮酸和L-谷氨酸。
丙酮酸被试剂中的LDH 还原为L-乳酸，同时NADH 被氧化为NAD +，通过监测340nm 处吸光度值下降的速率，可以测定ALT 活力。
样本中内源性丙酮酸的干扰可由试剂中LDH 在初始孵育期内快速、完全地消除，不会干扰测定。
反应如下：L-丙氨酸 + a-酮戊二酸丙酮酸 + L-谷氨酸丙酮酸 + NADH L-乳酸 + NAD+样本中丙酮酸 + NADH L-乳酸 + NAD+试剂与仪器1. 试剂1.1.丙氨酸氨基转移酶试剂盒（由上海复兴长征医学科学有限公司提供）化学组成：R1: L-丙氨酸600mmol/L 乳酸脱氢酶 ＞1820U/L NADH 0.26mmol/L Tris 缓冲液 80mmol/L R2: Tris 缓冲液 80mmol/L a-酮戊二酸 36mmol/LEDTA5.0mmol/L在开展项目之前或更换试剂品牌时，将以上工作参数输入到仪器内，并按要求进行调整后，方可进行实验。
技术性能指标:试剂空白起始吸光度（340nm37℃）≤1.60A 。
线性范围：450U/L ±10%。
准确度：相对偏差(RE%)≤±10%。
精密度：批内精密度变异系数(CV%)≤5%；批间精密度相对极差(%)≤5%。
储存条件、有效期：储存于2～8℃，避光可稳定12个月。
启用后可稳定30天。
混浊或以蒸馏水为空白在340nm 处光吸收值高于1.0A 时，则不能使用。
ALTLDH LDH计算公式： ALT(U/L )= K= ——————————式中 TV=总反应体积(mL )SV=样本体积(mL )6.3=NADH 在340nm 处的毫摩尔吸光系数P=比色杯光径(cm )K 为工作参数表中的【K Factor 】以上是依据化学实验计算测试结果的公式，全自动分析时将工作参数（K 值）输入仪器即可。
丙氨酸氨基转移酶测定方法操作规程
丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定方法操作规程【产品名称】通用名称：丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定试剂盒（IFCC法）【预期用途】该试剂盒采用IFCC法，用于体外定量测定人血清或肝素血浆中丙氨酸氨基转移酶的活力。
【检验原理】在ALT催化下，从丙氨酸转移到2个氨基到α-酮戊二酸上，生成产物谷氨酸和丙酮酸。
后者通过乳酸脱氢酶催化下转变成乳酸，在340nm波长条件下检测到NADH吸光度下降速率，与ALT的活力成比例。
L-ALT丙酮酸+ L-谷氨酸+LDH L-乳酸+NAD++H2O【主要组成成份】R1：Tris缓冲液150mmol/LL-丙氨酸750 mmol/L乳酸脱氢酶（LDH） 1200U/LNADH 0.4mmol/LR2：α-酮戊二酸90mmol/LNADH 0.9mmol/L*不同批号试剂盒各组分请勿混用。
【储存条件与有效期】未开启的试剂盒在2℃~8℃保存有效期为一年。
试剂开瓶后应避光保存，在2℃~8℃可稳定28天。
试剂不可冰冻。
【适用仪器】迈瑞BS系列全自动生化分析仪、日立7180型全自动生化分析仪、日立7060型全自动生化分析仪、日立7600P自动生化分析仪、奥林巴斯AU400型全自动生化分析仪、奥林巴斯AU2700型全自动生化分析仪、贝克曼库尔特AU680型全自动生化分析仪。
若需自动生化分析仪应用参数，请随时和公司联系。
建议用户在不同仪器上使用本产品时，根据实验室情况进行验证。
【样本要求】新鲜血清或肝素血浆样本，采集后及时测定，应避免污染。
【检验方法】试剂准备R1：即用液体试剂R2：即用液体试剂测定条件波长340nm温度37℃分析类型动力学法反应方向下降反应操作步骤* ΔA/min=ΔA/min样本管—ΔA/min空白管* 试剂和样本量可根据不同生化分析仪要求按比例适当增减。
校准校准品类型S1：生理盐水S2：迈瑞配套校准品推荐进行2点线性校准校准周期和要求（包括但不限于以下情况）更换试剂批号时仪器关键零部件更换时室内质控失效时质控每批样品检测时，建议使用迈瑞公司提供的配套质控品进行内部质量控制。
检验科生化丙氨酸氨基转移酶ALT测定的标准操作规程
丙氨酸氨基转移酶测定的标准操作规程【目的】体外检测血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT ）的含量。
【职责】1.实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。
2.本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字:室负责人、科主任。
【标本类型及实验前准备】1.受检者的准备病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。
注意有无应用影响测试项目的药物。
此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。
应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.静脉采血除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
【仪器设备】东芝TBA-FX8全自动生化分析仪，低速离心机一、原理谷丙转氨酶催化L-丙氨酸的氨基转移，生成丙酮酸。
丙酮酸与NADH在LDH的催化下反应生成乳酸和NAD+。
NADH在340nm处有特异吸收峰，其被氧化的速率与血清中ALT的活性成正比，在340nm处测定NADH下降速率，即可测出ALT活性。
ALTL-丙氨酸+ a-酮戊二酸丙酮酸+ L-谷氨酸LDHNADH + 丙酮酸+ H+L-乳酸+ NAD+一、试剂1.试剂本科使用上海科华生物工程股份有限公司ALT试剂盒，为液体双试剂，各组分如下:2.校准血清使用上海科华生物工程股份有限公司提供的多项校准血清或采用因数法。
按照说明书提供的样本和试剂比例计算理论因数。
校准频次：空白定标：每日需做试剂空白定标。
全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的2SD范围，需要全点定标。
三、操作样品为血清或肝素/EDTA抗凝血浆。
本法为IFCC法。
参数见后附，附录A。
试剂参数设置、定标操作以及样本检测常规操作，见仪器操作规程。
生物化学实验2.血清丙氨酸氨基转移酶测定.专科
一、实验目的
1.掌握血清丙氨酸氨基转移酶测定的原理和 方法
2.熟悉722G型可见光分光光度计的使用
二、实验原理
血清中的丙氨酸氨基转移酶（ALT），在37℃、pH7.4 的条件下，可催化基质（底物）液中的丙氨酸与α-酮戊 二酸生成谷氨酸和丙酮酸。
在足量底物作用下，生成产物越多表明酶活力越大， 酶浓度越高。一般以在一定时间内丙酮酸的生成量代 表血清ALT活力的大小
三、试剂和仪器
(一）试剂 1、 小牛血清 2、ALT底物液、2,4-二硝基苯肼溶液 0.4mol/L NaOH
(二）仪器 722G型可见光分光光度计、恒温水浴箱
四、操作步骤
1.标准曲线的绘制（不做）。 2.血清ALT活力测定 取两支试管按下表操作：
试剂（ml）
测定管
对照管
血清
0.1
0.1
ALT底物液
实验二
血清丙氨酸氨基转移酶测定
血清丙氨酸氨基转移酶测定
丙氨酸氨基转移酶（ALT）是体内最重要的转 氨酶之一，正常情况下，丙氨酸氨基转移酶主要存 在于各组织细胞中（以肝细胞中含量最多，心肌细 胞中次之），只有极少量释放入血，所以血清中此 酶活力很低。当这些组织病变、细胞坏死或通透性 增加时，细胞内的此类酶即可大量释放入血液中， 使血清中该酶活力显著增高。因此在患各种肝炎急 性病、药物中毒性干细胞坏死等疾病时，血清丙氨 酸氨基转移酶活力明显增高。
•从标准曲线上查出酶活力单位。
本法正常值：0~30单位。
注意事项
• 加完试剂需要将试管内溶液混匀 • 注意水浴的温度及时间 • 分光光度计的正确使用
• 【临床意义】
• 肝细胞中含ALT最丰富，因此当肝脏疾病致肝细 胞受损伤时，ALT即大量释放入血液，致使血清 中ALT活性增高。测定ALT是检查肝功能的重要 指标之一。ALT显著增高见于各种急性肝炎及药 物中毒性肝细胞坏死，中等程度增高见于肝癌、 肝硬化、慢性肝炎及心肌梗塞，轻度增高则见于 阻塞性黄疸及胆道炎等疾病。骨骼肌损伤、多发 性肌炎亦可引起转氨酶活性升高。
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血清丙氨酸氨基转移酶试剂盒在2-8℃下避光保存可稳定一年；试剂R-1、R-2开启后在2-8℃避光保存可稳定一个月。
3.4样本稳定性与贮存
3.4.1分析用人基质质控血清：该血清自生产之日起，在2-8℃下保持可稳定4年；该血清一旦复融，在25℃下可稳定24小时，在2-8℃下可稳定7天，在-20℃
三级文件
血清丙氨酸氨基转移酶测定标准操作程序
文件编号：Leabharlann 版本/状态：A/1第2页共3页
生效日期：
目的：建立血清丙氨酸氨基转移酶测定标准操作规程。
范围：适用于血清丙氨酸氨基转移酶测定的标准操作。
职责：生化部检验人员对本规程的实施负责。
规程：
1测定方法：采用连续监测法测定人血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT/GPT）的活力。
2仪器设备
GS200全自动生化分析仪
3试剂
3.1血清丙氨酸氨基转移酶试剂盒，包括试剂1（R-1）、试剂2(R-2)。
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试剂成份含量
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R-1乳酸脱氢酶（LDH）≥4000U/L
4.2检验方法
分析方法：速率A；主波长：340 nm；副波长：405nm；样品量：15.0ul；R-1：400ul，R-2：100ul；校准方式：K因子；反应方向：下降；测定温度：37℃。
样品与R-1混匀后反应5分钟，加入R-2混合后延迟60秒，测定240秒。
样品15ul主波长340nm
R-1 400ulR-2 100ul副波长405nm
三级文件
血清丙氨酸氨基转移酶测定标准操作程序
文件编号：
版本/状态：A/1
第3页共3页
生效日期：
可稳定1个月。
3.4.2待测血清：2-8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定3个月。样本不可反复冻融。不可使用已被污染的样本。
4操作步骤
4.1打开全自动生化仪，按照GS200全自动生化分析仪操作维护保养程序，完成普通测试流程。
丙氨酸氨基转移酶催化L-丙氨酸的氨基转移到α-酮戊二酸生成丙酮酸和L-谷氨酸。乳酸脱氢酶（LDH）在催化丙酮酸还原的同时将NADH氧化成NAD+。通过测定NADH在340nm处吸光度下降的速度可求得丙氨酸氨基转移酶的活力。
ALT
L-丙氨酸+α-酮戊二酸────→丙酮酸+ L-谷氨酸
LDH
丙酮酸+ NADH + H+─────→乳酸+ NAD+
5检验结果的解释
抗坏血酸≤40mg/dl、游离胆红素≤684umol/L（40mg/dl）、结合胆红素≤684umol/L（40mg/dl）、血红蛋白≤500mg/dl、乳糜微粒≤3000浊度单位对测定无影响。
6注意事项
6.1高度溶血可导致正的误差。
L-丙氨酸≥025g/L
Tris≥7g/L
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R-2α-酮戊二酸二钠≥12.5g/L
辅酶I二钠盐（NADH·Na2）≥0.6g/L
Tris≥4g/L
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3.2分析用人基质质控血清（RANDOX）、血清
测光测光
K =4448
0 5610min
4.3计算
△A/min×Vt×1000
ALT（U/L）=─────────────
6.22×Vs×d
△A/min =每分钟吸光度变化率Vt =反应液总体积（ml）
1000 =U/ml到U/L的转换系数6.22 = NADH的毫摩尔吸光系数
Vs =样品体积（ml）d =比色杯光径（cm）