氨基酸分析--应用与实践
酱油中氨基酸态氮含量的测定
酱油中氨基酸态氮含量的测定 目录—————————————————————1
PH=7.0 是溶液中游离氢离子与氢氧化钠标准溶液完全反应后的 PH 值，即 有效酸度 PH=8.2 是溶液中除有效酸度以外的物质与氢氧化钠标准溶液完全反应后的 PH 值，即总酸 PH=9.2 是溶液中氨基态氮中的羧基与氢氧化钠标准溶液完全反应后的 PH 值 本实验用的是 PH 为 8.2 和 9.2 数据。由于酱油还含有总酸度，即使不测定 总酸度，也有将总酸中和。用 PH=8.2 时氢氧化钠消耗的体积与 PH=9.2 时氢氧 化钠消耗的体积 的差计算出样品中氨基态氮含量。
5
PH 值
0.4647
4.1-4.4
空白测定 ？？？？
0.20
0.39
【工作任务阶段小结】
实验中哪些地方需要进一步改进，简述你改进实验的思路？ 空白问题 一般的酱油生产企业每天都要进行氨基酸态氮的检测，因此也没必要每天 都进行空白试验，但是，当蒸馏水或甲醛溶液换瓶后，就一定要对空白重新试 验，在实践中发现，每批的白数据，检测结果肯定会有很大的误差。
3
【仪器和试剂】
1.仪器 酸度计 PHS-3C 型、 磁力搅拌器 JB-1A、 碱式滴定管 （50ml） 、 容量瓶 （250ml） 2.试剂 0.04515mol/L 氢氧化钠标准溶液、 （1+1）甲醛溶液
【实验步骤】
氢氧化钠溶液的配制： 称取 0.5014g 氢氧化钠试剂溶解， 稀释后定容于 250ml
生物化学课内实践教学(3篇)
第1篇一、前言生物化学作为一门研究生物体内化学反应及其调控规律的学科，在生命科学领域具有极其重要的地位。
为了让学生更好地理解和掌握生物化学的理论知识，提高学生的实验技能和科学素养，我们开展了生物化学课内实践教学活动。
本文将对本次实践教学进行总结和分析。
二、实践内容1. 蛋白质鉴定实验（1）实验目的：掌握蛋白质的鉴定方法，了解蛋白质在生物体内的作用。
（2）实验原理：蛋白质具有特定的氨基酸序列，通过特定的化学反应，可以产生具有特定颜色的化合物，从而实现对蛋白质的鉴定。
（3）实验步骤：①制备蛋白质样品；②加入双缩脲试剂，观察颜色变化；③加入Folin-酚试剂，观察颜色变化；④计算蛋白质含量。
2. 酶活性测定实验（1）实验目的：掌握酶活性测定的方法，了解酶在生物体内的作用。
（2）实验原理：酶活性是指酶催化特定反应的能力，通过测定酶催化反应的速度，可以评估酶的活性。
（3）实验步骤：①制备酶反应体系；②测定酶催化反应的速度；③计算酶活性。
3. 核酸提取实验（1）实验目的：掌握核酸提取的方法，了解核酸在生物体内的作用。
（2）实验原理：核酸是生物体内的重要遗传物质，通过特定的方法可以将核酸从细胞中提取出来。
（3）实验步骤：①破碎细胞；②提取核酸；③检测核酸。
4. 脂质分离实验（1）实验目的：掌握脂质分离的方法，了解脂质在生物体内的作用。
（2）实验原理：脂质具有不同的极性，可以通过特定的方法将其分离。
（3）实验步骤：①制备脂质样品；②加入氯仿，观察分层现象；③分离脂质。
三、实践总结1. 通过本次实践教学，我们掌握了蛋白质、酶、核酸和脂质的鉴定、提取和分离方法，提高了我们的实验技能。
2. 在实验过程中，我们学会了如何设计实验方案、操作实验仪器和记录实验数据，为今后的科研工作打下了基础。
3. 通过实验，我们深入了解了生物体内化学反应及其调控规律，增强了我们对生物化学理论知识的理解。
四、实践反思1. 实验过程中，我们发现部分同学对实验原理掌握不牢固，导致实验结果不准确。
酸水解—氨基酸分析前处理方法的应用实践
酸水解—氨基酸分析前处理方法的应用实践作者：李梅等来源：《安徽农业科学》2014年第10期摘要酸水解是氨基酸分析中最常用的一种前处理方法。
对比国标中酸水解的方法，结合日常实践摸索的经验，提出样本、样本量、水解管、封管、蒸干溶剂、缓冲液稀释和前处理方法等具体过程中需注意的问题及改进和简化的步骤，使操作更方便实用，且测试结果并无明显差异，值得相关研究者在实践中具体运用。
关键词酸水解；氨基酸分析；前处理中图分类号S188文献标识码A文章编号0517-6611（2014）10-02846-02AbstractAcid hydrolysis is one of the most commonly used in amino acid analysis before treatment. In contrast with the method of acid hydrolysis （GB）， combinating with the daily practice procedure of the acid hydrolysis of protein， the problems that should pay attention to and the steps to improve and simplify were summed up during the sample selection， sample size，hydrolysis tubes determination， tube sealing， solvent evaporation and buffer solution， the method described in this paper makes the operation more convenient and practical and has no significant difference in the test result. This method is worth in the specific application of the amino acid analysis in practice.Key wordsAcid hydrolysis； Amino acid analysis； Petreatment氨基酸是蛋白质的基本结构单位和生物代谢过程中的重要物质，是构成动植物营养所需蛋白质的基本物质。
氨基酸增稠剂的用法
氨基酸增稠剂的用法一、引言氨基酸增稠剂是一种重要的食品添加剂，广泛应用于各种食品体系中。
它可以有效地提高食品的粘稠度，改善食品的口感和质地，同时还可以起到一定的防腐作用。
本文将重点介绍氨基酸增稠剂的用法，以便读者更好地了解和使用这种食品添加剂。
二、氨基酸增稠剂的特性氨基酸增稠剂具有以下特性：1.增稠效果好：氨基酸增稠剂可以显著提高食品的粘稠度，使其口感更加细腻滑润。
2.稳定性高：氨基酸增稠剂在高温、低温和酸性环境中均表现出良好的稳定性，不易发生变性或沉淀。
3.安全性高：氨基酸增稠剂是一种天然的食品添加剂，安全可靠，对人体无害。
4.适用范围广：氨基酸增稠剂可以应用于各种食品体系中，如调味品、饮料、乳制品等。
三、氨基酸增稠剂的种类目前市场上常见的氨基酸增稠剂有以下几种：1.谷氨酸钠：谷氨酸钠是一种天然的增稠剂，广泛用于调味品和罐头食品中。
它具有提高食品口感和防腐的作用。
2.丙氨酸：丙氨酸是一种天然的增稠剂，具有良好的稳定性和抗氧化性。
它广泛应用于饮料、果酱和糖果等食品中。
3.甘氨酸：甘氨酸是一种甜味氨基酸，同时也有很好的增稠效果。
它常用于烘焙食品、饮料和糖果中。
4.其他氨基酸：除了以上几种氨基酸外，还有其他一些氨基酸如丝氨酸、脯氨酸等也具有增稠作用，但应用较少。
四、氨基酸增稠剂的用法使用氨基酸增稠剂时，需要注意以下几点：1.选择合适的氨基酸增稠剂：根据食品的特性和要求选择合适的氨基酸增稠剂，以达到最佳的增稠效果。
2.控制添加量：氨基酸增稠剂的添加量需要根据生产工艺和配方进行调整，一般添加量在0.1%-0.5%之间。
添加过多会导致食品过于浓稠，影响口感和品质；添加过少则达不到理想的增稠效果。
3.注意与其他成分的配伍：氨基酸增稠剂与其他食品成分之间可能存在相互作用，因此需要关注配方的整体平衡，确保食品的安全性和稳定性。
4.加工工艺的影响：加工工艺对氨基酸增稠剂的效果也有影响。
例如，在高温处理过程中，氨基酸增稠剂可能会发生降解，导致粘度下降。
氨基酸分析仪的基本分析原理
氨基酸分析仪的基本分析原理
氨基酸分析仪是一种用于定量分析样品中各种氨基酸的仪器。
其基本分析原理是通过将样品中的氨基酸分离、检测和定量，从而确定样品中各种氨基酸的含量。
首先，样品中的氨基酸需要被分离出来。
一种常用的方法是利用离子交换色谱技术。
离子交换色谱是通过样品中氨基酸的酸性基团和碱性基团与固定在色谱柱上的阴、阳离子交换剂之间的离子交换作用进行分离的。
通过调整溶剂和柱温等条件，可以实现对氨基酸的选择性分离。
其次，分离出的氨基酸需要被检测。
最常用的检测方法是紫外吸收检测。
氨基酸在紫外区域有特定的吸收峰，对应着特定的波长。
通过测量样品在不同波长下的吸光度，可以得到吸收峰的强度。
根据吸光度和吸光度与浓度之间的关系，可以计算出样品中各种氨基酸的浓度。
最后，根据样品中氨基酸的浓度，通过一定的计算公式，可以定量地确定样品中各种氨基酸的含量。
通常，会利用标准曲线法，即利用已知浓度的氨基酸标准溶液制备一系列浓度不同的标准曲线。
将样品中各种氨基酸的吸光度值与标准曲线进行比较，就可以得到各种氨基酸的浓度。
综上所述，氨基酸分析仪通过分离、检测和定量的步骤，可以对样品中的氨基酸进行分析，从而确定样品中各种氨基酸的含量。
寡肽-3氨基酸序列-概述说明以及解释
寡肽-3氨基酸序列-概述说明以及解释1.引言1.1 概述寡肽-3氨基酸序列是近年来在生物化学和生物医学研究领域引起广泛关注的一种重要分子结构。
寡肽是由2-10个氨基酸经过共价键连接而成的短链肽段，而3氨基酸序列指的是在寡肽中恰好有3个氨基酸按特定顺序排列的序列。
这一特殊结构的寡肽-3氨基酸序列在生物体内扮演着重要的生理和功能角色。
从生物体内产生的角度来看，寡肽-3氨基酸序列通常由蛋白质通过特定的剪切或降解过程生成。
这些寡肽-3氨基酸序列具有较短的长度，因此能够更容易地进入细胞内，并参与细胞的信号传导、蛋白质合成调控等重要生命过程。
此外，寡肽-3氨基酸序列还能通过与特定的蛋白质结合，介导多种细胞信号通路的启动和抑制，从而对生物体内的生理和病理过程产生重要影响。
寡肽-3氨基酸序列的作用在许多生物学过程中得到了广泛的研究和应用。
例如，它们在免疫系统中的重要性备受关注。
研究发现，某些寡肽-3氨基酸序列能够诱导和调节免疫细胞的活性，从而对免疫反应和炎症反应起到调节的作用。
此外，寡肽-3氨基酸序列还可与特定的受体结合，激活细胞内信号转导途径，参与细胞增殖、分化和凋亡等关键生命过程的调控。
随着对寡肽-3氨基酸序列的研究不断深入，人们对其在疾病诊断、治疗和药物设计等领域的应用也越来越感兴趣。
通过分析不同疾病状态下寡肽-3氨基酸序列的变化，可以为疾病的早期诊断和治疗提供新的方法和靶点。
另外，将特定的寡肽-3氨基酸序列引入药物设计中，可以增强药物的特异性和效力，提高药物的治疗效果。
综上所述，寡肽-3氨基酸序列作为一种重要的生物分子结构，在生理、生化和医学研究中扮演着重要的角色。
未来的研究将继续深入探索寡肽-3氨基酸序列的结构与功能关系，进一步揭示其在生命活动中的精细调控机制，为疾病的治疗和预防提供新的思路和方法。
1.2文章结构文章结构部分的内容可以参考以下写法：1.2 文章结构本文将分为三个主要部分进行阐述。
首先，引言部分将概述本文的研究对象以及文章的目的。
氨基酸阿尔法位和贝塔位-解释说明
氨基酸阿尔法位和贝塔位-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述部分内容如下：氨基酸是构成蛋白质的基本单元，它们由一个中心碳原子连接着一个羧基、一个氨基和一个侧链组成。
在氨基酸的结构中，阿尔法位和贝塔位是两个重要的位置，它们对氨基酸的功能和性质具有重要影响。
本文将重点讨论阿尔法位和贝塔位的结构和作用，探讨它们在蛋白质结构和功能中的重要性。
通过对这些位置的深入了解，我们可以更好地理解蛋白质的构成和功能，为未来的生物化学研究提供有益的参考。
1.2 文章结构文章结构部分内容:本文将分为引言、正文和结论三个部分。
在引言部分，我们将概述氨基酸阿尔法位和贝塔位的重要性，介绍文章的结构和目的。
在正文部分，我们将着重介绍氨基酸的结构特点，并深入探讨阿尔法位和贝塔位在生物学中的功能和作用。
最后，在结论部分，我们将总结氨基酸阿尔法位和贝塔位的重要性，并探讨未来的研究方向，以及得出我们的结论。
通过这样的文章结构，我们将全面理解和掌握氨基酸阿尔法位和贝塔位在生物学中的重要性。
目的部分的内容如下：1.3 目的本文旨在深入探讨氨基酸中阿尔法位和贝塔位的结构特点、功能和作用。
通过对这两个位置的详细分析，可以更好地理解氨基酸在生物体内的作用机制，以及它们在蛋白质结构和功能中的重要性。
同时，本文也将探讨氨基酸阿尔法位和贝塔位的相关研究现状，为未来的研究方向提供参考。
通过本文的阐述，可以为读者提供更多关于氨基酸的深入了解，同时也为相关领域的科研人员提供有益的启发和思路。
2.正文2.1 氨基酸的结构特点氨基酸是构成生物体的重要化学物质，其分子结构包含一个氨基基团（NH2）、一个羧基（COOH）和一个侧链基团（R基团）。
氨基酸侧链基团的不同导致了不同种类的氨基酸，使它们在生物体内发挥不同的功能。
氨基酸的结构特点包括具有手性、螺旋结构以及电荷特性。
首先，氨基酸的侧链基团决定了其手性质，即分子的立体构型。
氨基酸中的碳原子都是手性的，因此氨基酸也呈现出手性。
香油渣提取氨基酸的方法
香油渣提取氨基酸的方法在食品和营养领域中，氨基酸具有重要的作用，因为它们是构成蛋白质的基本单元。
因此，研究氨基酸来源和开发提取氨基酸的新方法对于制造高质量蛋白质产品和增加人体营养有重要意义。
香油渣是油料刚性残留物，由于其富含氨基酸，可以成为一种廉价而可靠的氨基酸来源。
本文将重点介绍香油渣提取氨基酸的方法。
一、酸水解提取法酸水解提取法是最常用的提取香油渣中氨基酸的方法。
其原理是应用酸性试剂如盐酸或硫酸将蛋白质水解为肽和氨基酸。
该方法的步骤包括:1.先将香油渣粉末浸泡在酸性溶液中（盐酸或硫酸），并进行水解反应，通常在高温下（≥100C）进行。
2.将反应混合液过滤并用氢氧化钠将酸性反应中和。
这样可以避免提取液的酸性对后续分析的影响。
3.将反应产物的水溶液进行浓缩并使用离子交换柱进行纯化。
该方法的优点是提取过程简单，已经在实践中使用。
但是缺点是在酸性试剂的存在下，热水解容易导致氨基酸的损失和过度水解反应的发生。
因此，该方法并不是完美的。
二、酶解提取法除了酸性水解法外，酶解法也是一种用于提取香油渣中氨基酸的方法。
酶解是利用特定酶的作用来进行氨基酸的水解，其原理如下：1.将香油渣粉末悬浮在蛋白酶或蛋白水解酶中，通过酵素催化反应，在水解产物中释放氨基酸。
2.经过反应后，利用活性碳来进行净化，去除杂质和色素等。
3.最后利用溶剂从水解产物中提取氨基酸。
酶解提取方法的优点是可以精确地控制水解反应，避免氨基酸的流失。
此外，它还能提高氨基酸的提取量和纯度。
不过，缺点是用酶水解需要较长的时间，并且成本也相对较高。
三、离子交换柱分离法离子交换柱分离法是基于氨基酸与离子交换树脂的相互作用，以达到氨基酸的纯化和提取。
其过程如下：1.将香油渣粉末水解并纯化，将所得的水溶液经过浓缩。
2.将浓缩的水溶液通过离子交换柱，利用树脂的特殊构架与氨基酸的离子交换反应，从而分离和纯化出氨基酸。
与其他方法相比，离子交换分离法不需要水解反应，从而避免了氨基酸的损失和过度水解反应的发生。
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氨基酸分析技术的应用与实践中国农科院饲料研究所刘庆生2005年6月28日氨基酸测定方法的基本框架¬氨基酸总量的测定(十八种氨基酸)常规酸水解氨基酸氧化酸水解测含硫氨基酸碱解测色氨酸¬游离氨基酸的测定添加氨基酸测定生物材料中的游离氨基酸测定蛋白水解氨基酸总量的测定¬常规酸水解—测定除色氨酸、含硫氨基酸以外的蛋白水解氨基酸（15种）¬氧化酸解用HBr做终止剂—可测定除色氨酸、酪氨酸、组氨酸、苯丙氨酸以外的蛋白水解氨基酸（14种）用偏重亚硫酸钠做终止剂—可测定除色氨酸、酪氨酸以外的蛋白水解氨基酸（16种）¬碱解测定色氨酸常规酸水解¬原理: 蛋白质是氨基酸以α-氨基和α-羧基形成酰胺键，共价地结合形成的多聚物。
因此测定氨基酸必须先水解，将氨基酸间的肽键打开，然后才能分离、测定。
该法可测定15种氨基酸，但含硫氨基酸（主要是胱、半胱和蛋氨酸）水解中会被氧化，生成多级氧化产物，难以测准，色氨酸则全部分解为NH3和CO2，而无法测定。
¬基本程序¬过程控制基本程序混匀,离心或过滤取上清液, 测定过程控制（1）¬酸解法（常规酸解与氧化酸解-酸解）¬样品粒度与称样量样品均一性谷物氨基酸测定标准：60目筛，30mg饲料氨基酸测定标准：40目筛，100mg ¬氨基酸标准的0.3-2倍（预先测定粗蛋白含量）。
¬对于粗脂肪含量≥5%的样品需先脱脂。
过程控制（2）酸解剂(浓度，添加苯酚）酸样比（可在40倍范围内变化）欧洲：10mgN：20/500ml北美：10mg蛋白：2/40ml 水解方式：真空（充N）封管/回流水解水解温度与时间110℃-22h，135 ℃-4h，165 ℃-1h去酸方式氧化酸解¬原理:样品用过甲酸处理使蛋白质中的胱氨酸和蛋氨酸分别氧化为磺基丙氨酸和蛋氨酸砜, 然后酸解,打开肽键形成单一氨基酸的混合液, 用色谱分离、测定。
¬基本程序¬过程控制基本程序过程控制¬过甲酸用量10mg N：0.3-33ml；7.5-25mg N：2-10ml ¬冷氧化(0℃-16h)与热氧化(55℃-15min)¬不同终止剂HBr: Trp、Tyr、His 、Phe偏重亚硫酸钠：Trp、Tyr¬酸解方式¬蒸干与调pH¬根据需要选择方法¬高盐样品（NaCL含量≥3％，3mg/mL AgNO3）色氨酸的测定¬基本程序50～100mg 样品置聚四氟乙烯管中110±1℃水解20h＋1.5mL 4mol/L LiOH , 液N 2冷冻,抽真空至≤7Pa(或充N 2), 封管冷却开管转移至25mL调pH 至约4, 用水定容离心或过滤,上机过程控制¬碱解剂NaOH、LiOH、Ba(OH)2 KOH¬水解时间¬是否用内标¬不同测定方法比色法离子交换色谱HPLC—UV 、Fluro游离氨基酸的测定¬饲料、食品中添加的游离合成氨基酸的测定¬氨基酸肥料当中的游离氨基酸的测定¬生物材料中游离氨基酸的测定动、植物组织中的游离氨基酸的测定--提取与除去蛋白生理体液中游离氨基酸—沉淀蛋白尿中的游离氨基酸游离氨基酸的测定当中的问题¬这些样品无需水解，但必须从固体样品中完全提取出来¬除去干扰测定的其他物质（蛋白、金属离子）去除蛋白方法：化学沉淀法、高速离心法、超滤法和离子交换法去除金属离子方法：化学沉淀法（EDTA）蛋白沉淀剂的选择¬蛋白沉淀剂的选择：应用较多的有苦味酸、磺基水杨酸（SAA）、三氯乙酸、乙醇等，Ohara曾比较上述沉淀剂和丙酮、硫酸锌、氢氧化钡、钨酸钠等九种沉淀剂的测定效果，证明苦味酸、SAA和乙醇效果最好。
随着柱前衍生HPLC法的应用，甲、乙醇沉淀、高速离心和超滤法以及这些方法的结合日趋广泛：Davey等用PITC/HPLC测定生理体液，认为血浆、羊水用乙腈做沉淀剂最适宜，脑脊髓液用超滤法最佳。
农业研究中，植物的根、茎、籽实、浆液常用80%的乙醇沉淀蛋白。
游离氨基酸的提取¬用0.02mol/L浓度的酸反复提取，然后过滤或离心，汇集上清至预定体积；¬用0.1mol/L浓度的酸提取一次，而后用水反复提取，汇集上清至预定体积，并使最终盐酸浓度达到约0.02mol/L。
实验证明后者优于前者。
添加的游离合成氨基酸的测定一般食品饲料中添加的合成氨基酸赖氨酸蛋氨酸苏氨酸色氨酸1～2g样品＋0.1mol/LHCl 30mL, 搅拌提取15min,用水定容,过滤, 无需去蛋白,可直接上机测定。
蛋白、脂肪含量高的样品仍需脱脂和沉淀蛋白含氨基酸叶面肥料当中的游离氨基酸的测定¬称取试样1-5g，置于250mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，取上层清液2mL，加入5%磺基水杨酸溶液2mL，混匀，放置1h，使蛋白质沉淀。
再加入1%EDTA溶液1mL和0.06mol/L盐酸溶液1mL，用离心机离心15min。
生物材料与液态食品中游离氨基酸的测定¬固体组织¬生理体液固体组织中游离氨基酸测定动物组织：2g+5倍体积的3%磺基水杨酸-高速组织捣碎机中捣碎-10000rpm离心15min-取上清液上机（1g+5mL柠檬酸缓冲液pH2.2-匀浆-18000~78000g离心或0.5g+3ml5%三氯乙酸-离心除去蛋白）•植物组织：新鲜样品5g+70~75%乙醇-沸水浴中回流提取20min-过滤-残渣重复提取3次-过滤，合并滤液-沸水浴中蒸去乙醇-用乙醚萃取-水层蒸干-+0.02mol/LHCl生理体液与液态食品中游离氨基酸的测定血浆：新鲜血浆1mL+1mLpH1.5柠檬酸缓冲液-冰箱中放置30min-高速离心（18000g/30min 或78000g/20min）¬脑脊液、眼内液：新鲜样液+等体积8%磺基水杨酸（1mL+6mL5%三氯乙酸，或2mL+10倍体积的80%乙醇），10000rpm离心¬尿液：5mL+4mol/LNaOH-pH11.5~12-置于盛有浓硫酸的干燥器中-减压抽真空约6h使氨气充分挥发，调pH至2.2, 定容，上机。
¬酱油、果汁及含植物材料的液体食品：+9倍1%磺基水杨酸-7000~10000rpm离心影响分离的因素-1¬缓冲液的pH（更换缓冲液的时间）Cys对BufferA、BufferB缓冲液的pH及更换时间最敏感，BufferA pH偏高或BufferB缓冲液更换过早，Cys出峰提前与Ala（丙氨酸）粘连或重叠，相反，如果BufferA pH偏低或BufferB更换过晚，Cys则与Val（缬氨酸）粘连或重叠。
对于日立仪器来说：Cys对1#、2#缓冲液pH 及3#缓冲液的更换时间最敏感影响分离的因素-2¬修饰剂-醇BufferA未加或少加醇，Asp、Thr、Ser分离不良，但Gly、Ala分离变好，BufferA加醇过多，则对Asp、Thr、Ser分离有利，而对Gly、Ala分离不利，泵1的压力也会明显升高。
日立仪器用乙醇作修饰剂，SYKAM仪器采用甲醇作修饰剂。
影响分离的因素-3¬柱温温度影响出峰时间和峰宽，其中Asp和Glu对其最为敏感，Asp在30℃出峰在Thr后，45 ℃时则在Thr前。
温度过低峰变宽，影响分离，所以氨基酸分析柱温一般均取50~60 ℃。
柱温低利于Thr、Ser分离，但不利Tyr、Phe 分离。
日立仪器的分析在同一温度下进行，SYKAM仪器采用梯度升温。
影响分离的因素-4¬柱效使用后如发现氨基酸分离，特别是前面的Asp-Glu变差、泵压变高、Ileu-Phe段杂峰变多，氨台阶变高可能是树脂被污染。
污染源：样品中的蛋白、多肽、脂肪或重金属如铬淋洗液配置过程中的一些问题（1）试剂¬所有的化学试剂必须用分析级；¬被储存在塑料容器中的化学试剂决不能靠近氨盐或氨液；¬绝不要在处理氨的地方准备试剂；¬只使用小心清洗过的玻璃器具,绝不要碰到玻璃器具内部(因为皮肤上有大量游离态氨基酸)；¬要过滤试剂，只能使用0.45 μm 孔径的薄膜过滤器或仔细清理过的玻璃过滤器。
淋洗液配置过程中的一些问题（2）去离子水¬18.2MΩ/cm 去离子水¬新鲜¬自来水直接蒸馏后达不到需要的质量淋洗液配置过程中的一些问题（3）Buffer¬氨基酸分析的洗提液需要两种不同的缓冲液体系。
钠盐缓冲液用于蛋白质水解氨基酸的分析，锂盐缓冲液用于生理体液中的游离态氨基酸分析。
¬柠檬酸钠或柠檬酸锂缓冲液有两个作用:钠或锂离子同氨基酸在树脂上磺酸基--SO3-结合交换位置。
剩余的柠檬酸根作为“缓冲”，可以获得不同精确的pH值，使得氨基酸逐一与磺酸基--SO3解离。
谷氨酰胺和天冬酰胺的分离只能用锂盐缓冲液来分离，而不能用钠盐缓冲液。
淋洗液配置过程中的一些问题（4）Buffer的配制¬溶液的pH值受温度影响，因此，标准缓冲液须在不同温度中校正。
¬应尽量避免调整pH值时从不足调到超出，因为无论是NaOH或LiOH都会改变缓冲液的当量浓度¬在调整pH后，应继续等待10 到15 分钟待pH 稳定后再检查一遍。
淋洗液配置过程中的一些问题（5）¬茚三酮溶解茚三酮晶体的溶剂通常使用乙二醇甲醚（MCS）或二甲基亚砜(DMSO)都可，大部分都使用乙二醇甲醚，但一定要保证它不含任何的过氧化物。
以上两种茚三酮试剂的吸光值结果(灵敏度) 是相等的，精氨酸的检测使用MCS茚三酮试剂更好，此外DMSO茚三酮试剂极易被氧化，难以长期稳定。
淋洗液配置过程中的一些问题（6）¬乙二醇单甲醚过氧化物测试：将5ml 5%的碘化钠溶液加入到5 ml乙二醇单甲醚中，如果溶液保持清澈则说明此乙二醇单甲醚溶液不含过氧化物，可以放心使用；如果溶液变成黄色，则必须再对乙二醇甲醚进行清理。
¬乙二醇单甲醚中过氧化物的去除:将30 g FeSO4x 7 H2O和3 ml H2SO4加入到60 ml去离子水中制成溶液；将此溶液10 ml加到1 L乙二醇甲醚溶液中并蒸馏，注意应剩余约10 %的溶液不蒸馏以避免发生爆炸。
淋洗液配置过程中的一些问题（7）¬醋酸钠/醋酸锂缓冲茚三酮反应的最佳pH值必须在pH5.0。
醋酸钠/醋酸锂缓冲液是一种强烈的缓冲液，无论洗提液的pH值是多少，混合后的溶液pH值总是5.0。