大肠杆菌周质蛋白提取工艺的研究
利用渗透休克法提取大肠杆菌周质蛋白的机制
利用渗透休克法提取大肠杆菌周质蛋白的机制一、引言大肠杆菌是常见的肠道细菌，其周质蛋白在生物学研究中具有重要作用。
然而，提取大肠杆菌周质蛋白是一项困难而复杂的任务。
渗透休克法是一种有效的提取大肠杆菌周质蛋白的方法，本文将详细介绍该方法的机制。
二、渗透休克法概述1. 渗透休克法简介渗透休克法是一种用于提取细胞外蛋白质的方法。
该方法通过改变环境渗透压和离子浓度来破坏细胞壁和膜，使蛋白质从细胞内部释放出来。
2. 渗透休克法原理渗透休克法主要基于以下两个原理：（1）离子浓度变化原理：当外部离子浓度高于内部时，会导致水分子从内向外扩散，使细胞壁和膜破裂。
（2）渗透压变化原理：当外部溶液浓度高于内部时，会导致水分子从内向外扩散，使细胞壁和膜破裂。
3. 渗透休克法步骤渗透休克法主要分为以下几个步骤：（1）培养大肠杆菌至对数生长期。
（2）离心收集细胞，去除培养基。
（3）用低盐缓冲液洗涤细胞，去除表面上的杂质。
（4）将细胞悬浮于高盐缓冲液中，在室温下静置一段时间，使蛋白质从细胞内部释放出来。
（5）离心收集上清液，即为提取的周质蛋白。
三、利用渗透休克法提取大肠杆菌周质蛋白的机制1. 大肠杆菌周质蛋白结构大肠杆菌周质蛋白是一种位于外膜和细胞壁之间的结构蛋白。
其主要成分是β-折叠结构和α-螺旋结构。
由于其结构复杂，因此难以直接提取。
2. 渗透休克法提取机制渗透休克法可以通过以下几个方面来提取大肠杆菌周质蛋白：（1）高盐浓度：高盐缓冲液中的离子浓度高于细胞内部，会导致水分子从细胞内向外扩散，使细胞壁和膜破裂，从而释放出周质蛋白。
（2）渗透压变化：高盐缓冲液中的渗透压高于细胞内部，也会导致水分子从细胞内向外扩散，使细胞壁和膜破裂。
（3）蛋白质结构：大肠杆菌周质蛋白的β-折叠结构和α-螺旋结构在高盐缓冲液中容易发生变性，从而释放出来。
3. 渗透休克法提取大肠杆菌周质蛋白的优点渗透休克法具有以下几个优点：（1）简单易行：该方法操作简单、快速、易行。
细菌蛋白提取实验报告
一、实验目的1. 掌握细菌蛋白提取的基本原理和操作方法。
2. 熟悉不同细菌蛋白提取方法的适用范围。
3. 学习细菌蛋白的纯化和鉴定方法。
二、实验原理细菌蛋白提取是指从细菌细胞中分离出蛋白质的过程。
细菌细胞壁主要由肽聚糖构成，细胞膜则由磷脂和蛋白质组成。
在提取细菌蛋白时，需要破坏细胞壁和细胞膜，使蛋白质释放到溶液中。
根据蛋白质的性质和来源，可以采用不同的提取方法。
三、实验材料1. 细菌菌株：大肠杆菌（Escherichia coli）。
2. 实验试剂：Tris-HCl缓冲液、SDS-PAGE凝胶、电泳缓冲液、考马斯亮蓝R-250染色液、脱色液等。
3. 实验仪器：离心机、电泳仪、凝胶成像系统、移液器、PCR仪等。
四、实验方法1. 细菌培养：将大肠杆菌接种于LB培养基中，37℃恒温培养至对数生长期。
2. 细菌蛋白提取：（1）收集对数生长期的细菌，离心收集菌体。
（2）用预冷的Tris-HCl缓冲液（pH 7.4）重悬菌体，加入适量的SDS-PAGE凝胶制备缓冲液。
（3）将菌悬液转移至匀浆管中，加入适量的超声波破碎试剂，进行超声波破碎。
（4）将破碎后的菌体置于冰浴中，离心收集上清液，即为提取的细菌蛋白。
3. 细菌蛋白纯化：（1）将提取的细菌蛋白上清液转移至柱层析柱中。
（2）根据蛋白质的特性和性质，选择合适的层析柱和洗脱缓冲液。
（3）通过层析柱分离纯化蛋白质。
4. 细菌蛋白鉴定：（1）将纯化的细菌蛋白进行SDS-PAGE电泳。
（2）将电泳后的凝胶进行考马斯亮蓝R-250染色。
（3）观察蛋白质条带，并进行凝胶成像。
五、实验结果与分析1. 细菌蛋白提取结果：通过超声波破碎和离心，成功提取出细菌蛋白。
2. 细菌蛋白纯化结果：通过层析柱纯化，成功获得较纯的细菌蛋白。
3. 细菌蛋白鉴定结果：通过SDS-PAGE电泳，观察到目的蛋白条带，证实了细菌蛋白的提取和纯化。
六、实验讨论1. 细菌蛋白提取过程中，超声波破碎是关键步骤，可以破坏细胞壁和细胞膜，使蛋白质释放到溶液中。
渗透压冲击法提取大肠杆菌周质蛋白
渗透压冲击法提取大肠杆菌周质蛋白许多生物产物特别是蛋白质、基因重组产品、胞内产品如：青霉素酰化酶，碱性磷酸酶等胞内酶，干扰素、胰岛素、生长激素等基因工程产物以及部分植物细胞产物等都是胞内物质，这类生物产物需要分离纯化的第一步是收集细胞及细胞破碎，使目标产物释放出来，然后进行分离纯化。
破碎细胞主要采用的方法有机械法和非机械法两大类。
机械破碎处理量大，破碎速度较快，时间短，效率较高，是工业规模细胞破碎的重要手段，细胞受到挤压，剪切和撞击作用，易被破碎在许多情况下，细胞内含物全部释放出来，由于机械搅拌产生热量，破碎要采用冷却措施，机械破碎主要的方法有珠磨法、高压匀浆法、撞击破碎法和超声波等方法。
其中，超声波法是一种很强烈的破碎方法，细胞破碎是利用声频高于15－20KHz的超声波在高强度声能输入下进行的，普遍认为其破碎机理是与空化现象引起的冲击波和剪切力有关，即空穴作用产生的空穴泡由于又受到超声波的冲击而闭合，从而产生一个极为强烈的冲击力压力，由此而引起悬浮细胞上产生了剪切应使细胞内液体产生流动而使细胞破碎。
机械破碎虽已广泛应用于工业大规模生产，但它仍有许多不足之处，如大量细胞碎片的产生，胞内所有可溶性杂质蛋白的释放，发酵液粘度增加等。
这给后处理工艺带来了很大难度，而非机械破碎方法，其条件比较温和，有利于存在细胞膜附近目标产物的高活力释放回收，适用于所有微生物细胞的破碎，包括物理法、化学法和酶溶法。
细胞物理破碎方法比如渗透压冲击法（Osmotic Shock）。
渗透压冲击法是各种细胞破碎方法中最为温和的一种。
将细胞放在高渗透压的介质中（如一定浓度的甘油或蔗糖溶液），达到平衡后，介质被突然稀释，或者将细胞转入缓冲液中，由于渗透压的突然变化，水迅速通过细胞壁和细胞膜进入细胞，引起细胞壁和膜膨胀破裂，从而使细胞通透性增大。
大肠杆菌是大多科学研究及应用中实现蛋白表达的首选宿主。
周质空间是由大肠杆菌内膜和外膜组成的双层膜结构，能提供一个适合外源蛋白正确折叠的环境。
大肠杆菌周质蛋白提取工艺的研究
doi颐10.3969/j.issn.2095-1736.2011.06.095大肠杆菌（Escherichia coli）是大多数科学研究及应用中实现蛋白表达的首选宿主。
周质空间是由大肠杆菌内膜和外膜组成的双层膜结构，能提供一个适合外源蛋白正确折叠的环境[1]。
在大肠杆菌周质空间表达重组蛋白有着众多的优点，由于周质空间的蛋白含量低，蛋白酶活性要比胞质中低，使所表达的目的蛋白能避免胞内降解从而稳定地存在，有利于目的蛋白的浓缩。
但是周质蛋白提取需要定向释放的技术，该技术的关键在于只破坏大肠杆菌外膜而不损害内膜，否则大肠杆菌胞内蛋白和核酸的释放将给目的蛋白的分离纯化带来困难。
目前，人们针对周质蛋白的提取方法进行了很多研究，包括渗透压休克法[2-4]、溶菌酶提取法[5-6]、乙胺丁醇处理法[7]、盐酸胍-EDTA处理法、Triton X-100处理法、甘氨酸法等，这些方法在周质蛋白提取率以及规模化应用方面并不能让人满意，本文提出用精氨酸缓冲液作为周质蛋白提取液一步提取周质蛋白，与传统的渗透压休克法、溶菌酶提取法相比，显著提高了周质蛋白提取率，缩短了提取时间，有望应用于工业化生产中。
1材料与仪器1.1菌种基因工程菌BL21由北京双鹭药业股份有限公司提供，其表达产物为22KD重组人生长激素（rhGH），大肠杆菌周质蛋白提取工艺的研究李振国1，徐明波2，牛罡2，姚文兵1（1.中国药科大学生命科学与技术学院，南京210009；2.北京双鹭药业股份有限公司，北京100041）摘要：研究了精氨酸缓冲液在不同浓度、pH值及提取时间下的周质蛋白提取率，并以溶菌酶法、渗透压休克法作为对比。
结果表明浓度0.4mol/L，pH值8.0，提取时间为45min时，周质目的蛋白达到0.89mg/g湿菌，相比其他方法，周质蛋白提取率分别提高93%、187%。
实验得到一种高效、方便的大肠杆菌周质蛋白提取工艺，为周质表达的重组蛋白大规模生产奠定了基础。
一种大肠杆菌细胞周质蛋白的提取方法
一种大肠杆菌细胞周质蛋白的提取方法大肠杆菌是一种常见的细菌，它在生物学和生物工程领域中被广泛应用。
大肠杆菌细胞周质蛋白是一类重要的蛋白质，它在细菌的细胞结构和代谢过程中扮演着重要角色。
提取大肠杆菌细胞周质蛋白对于研究细菌生长、代谢和相关疾病具有重要意义。
本文将介绍一种用于提取大肠杆菌细胞周质蛋白的方法，并探讨其在研究和应用中的意义。
1. 方法介绍我们需要了解大肠杆菌细胞周质蛋白的特性和结构。
细胞周质蛋白通常位于细菌细胞壁周围，起到维护细胞形状和保护细胞内部免受外界环境的影响。
提取细胞周质蛋白需要一定的技术和方法支持。
在实际操作中，一种常用的提取方法是利用生物化学技术和分离纯化技术相结合。
细胞周质蛋白需要从大肠杆菌的细胞壁中分离出来，这需要利用酶解和化学方法来破坏细胞壁，释放出蛋白质。
随后，通过差速离心、过滤和层析等技术，可以将细胞周质蛋白从其他细胞组分中分离出来，得到纯净的蛋白质样品。
2. 意义和应用提取大肠杆菌细胞周质蛋白的方法在生物工程和医学研究中具有重要应用价值。
利用这些提取的蛋白质样品，可以对细菌的结构和功能进行深入研究，有助于揭示细菌生长和代谢的机制。
另细菌细胞周质蛋白还可以作为药物靶点或疫苗候选物，用于研究和开发抗菌药物或疫苗。
3. 个人观点和理解作为一种重要的蛋白质组分，大肠杆菌细胞周质蛋白的研究和应用具有重要意义。
通过掌握提取方法，可以更好地理解细菌的生物学特性和生理功能。
在未来的研究和应用中，提取方法的改进和创新将为深入探索细菌的奥秘和开发新型药物提供重要支持。
总结和回顾通过本文对一种提取大肠杆菌细胞周质蛋白的方法的介绍，我们对这一重要的生物学研究课题有了基本的了解。
提取方法的掌握对于研究和应用都具有重要的意义，希望未来能够有更多科研人员投入到这一领域，为生物学和医学研究做出更大的贡献。
在本文中，我们深入探讨了提取大肠杆菌细胞周质蛋白的方法及其意义，希望能够为读者提供有益的知识和启发。
利用渗透休克法提取大肠杆菌周质蛋白的机制
利用渗透休克法提取大肠杆菌周质蛋白的机制1. 引言大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的革兰氏阴性杆菌，存在于许多生物体的肠道中。
大肠杆菌周质蛋白是一类与菌体外环境密切相关的蛋白质，研究其机制对于深入了解大肠杆菌的生物学特性和与宿主的相互作用具有重要意义。
渗透休克法是一种常用的蛋白提取方法，通过利用渗透压的变化来破坏细胞膜，释放出细胞内蛋白质。
本文将探讨利用渗透休克法提取大肠杆菌周质蛋白的机制。
2. 渗透休克法的基本原理渗透休克法是一种通过改变细胞周围环境的渗透压来破坏细胞膜而释放细胞内物质的方法。
其基本原理如下：1.建立高渗透环境：通过向培养基中添加高浓度的溶质（如聚乙二醇），增加培养基的渗透压，使得培养基的渗透压高于细胞内的渗透压。
2.细胞膜破裂：高渗透环境下，细胞外溶质浓度高于细胞内溶质浓度，导致水分子从细胞内向细胞外流动，细胞内的渗透压降低。
由于渗透压差，细胞膜受到张力的作用，最终破裂，使得细胞内的物质释放出来。
3.蛋白提取：细胞膜破裂后，细胞内的蛋白质会释放到培养基中，可以通过离心等方式将其分离出来，从而实现蛋白质的提取。
3. 渗透休克法提取大肠杆菌周质蛋白的步骤利用渗透休克法提取大肠杆菌周质蛋白可以按照以下步骤进行：3.1 培养大肠杆菌在培养基中培养大肠杆菌，可以选择适合大肠杆菌生长的培养基（如Luria-Bertani（LB）培养基）。
确保菌体生长到适当的密度，一般为光密度值（OD600）在0.6左右。
3.2 采集菌体用无菌工具（如无菌吸管）或离心机采集大肠杆菌的菌体。
将菌体转移到无菌离心管中。
3.3 制备高渗透培养基准备含有高浓度溶质（如聚乙二醇）的培养基，增加培养基的渗透压。
确保高渗透培养基的渗透压高于大肠杆菌的细胞内渗透压。
3.4 渗透休克处理将采集到的大肠杆菌菌体转移到高渗透培养基中，使细胞受到高渗透环境的刺激。
可以通过搅拌、振荡等方式加强渗透作用。
处理时间一般为几分钟至数十分钟。
大肠杆菌周质蛋白提取工艺的研究
doi颐10.3969/j.issn.2095-1736.2011.06.095大肠杆菌（Escherichia coli）是大多数科学研究及应用中实现蛋白表达的首选宿主。
周质空间是由大肠杆菌内膜和外膜组成的双层膜结构，能提供一个适合外源蛋白正确折叠的环境[1]。
在大肠杆菌周质空间表达重组蛋白有着众多的优点，由于周质空间的蛋白含量低，蛋白酶活性要比胞质中低，使所表达的目的蛋白能避免胞内降解从而稳定地存在，有利于目的蛋白的浓缩。
但是周质蛋白提取需要定向释放的技术，该技术的关键在于只破坏大肠杆菌外膜而不损害内膜，否则大肠杆菌胞内蛋白和核酸的释放将给目的蛋白的分离纯化带来困难。
目前，人们针对周质蛋白的提取方法进行了很多研究，包括渗透压休克法[2-4]、溶菌酶提取法[5-6]、乙胺丁醇处理法[7]、盐酸胍-EDTA处理法、Triton X-100处理法、甘氨酸法等，这些方法在周质蛋白提取率以及规模化应用方面并不能让人满意，本文提出用精氨酸缓冲液作为周质蛋白提取液一步提取周质蛋白，与传统的渗透压休克法、溶菌酶提取法相比，显著提高了周质蛋白提取率，缩短了提取时间，有望应用于工业化生产中。
1材料与仪器1.1菌种基因工程菌BL21由北京双鹭药业股份有限公司提供，其表达产物为22KD重组人生长激素（rhGH），大肠杆菌周质蛋白提取工艺的研究李振国1，徐明波2，牛罡2，姚文兵1（1.中国药科大学生命科学与技术学院，南京210009；2.北京双鹭药业股份有限公司，北京100041）摘要：研究了精氨酸缓冲液在不同浓度、pH值及提取时间下的周质蛋白提取率，并以溶菌酶法、渗透压休克法作为对比。
结果表明浓度0.4mol/L，pH值8.0，提取时间为45min时，周质目的蛋白达到0.89mg/g湿菌，相比其他方法，周质蛋白提取率分别提高93%、187%。
实验得到一种高效、方便的大肠杆菌周质蛋白提取工艺，为周质表达的重组蛋白大规模生产奠定了基础。
大肠杆菌破碎提取蛋白的原理__概述说明
大肠杆菌破碎提取蛋白的原理概述说明引言部分的内容应该涵盖以下三个方面的概述说明：1. 概述：大肠杆菌是一种常见的细菌，广泛存在于自然界中，具有较好的生存能力和适应性。
其在生物学研究中被广泛用作模式生物和重要工具，特别是在蛋白质研究领域中有着重要的地位。
本文将围绕大肠杆菌破碎提取蛋白的原理展开论述。
2. 文章结构：本文主要分为引言、正文和结论三部分。
引言部分将对文章进行整体概述，并介绍文章的目的和结构。
正文部分将详细介绍大肠杆菌以及蛋白质提取原理和破碎方法与技术。
结论部分将总结提取蛋白的原理，并探讨其应用前景与挑战。
3. 目的：本文旨在系统阐述大肠杆菌破碎提取蛋白的原理，在深入理解大肠杆菌及蛋白质组成基础上，通过揭示蛋白质提取过程中的关键环节，探索有效高效的蛋白质提取方法与技术，并对其应用前景进行评估。
通过本文的阐述，旨在为相关研究者和科学工作者提供有关大肠杆菌蛋白质提取的理论支持与实践指导，促进该领域的研究与发展。
总之，本文将从多个方面分析和介绍大肠杆菌破碎提取蛋白的原理，为相关领域的研究者提供参考和启示，推动蛋白质研究进展。
1. 大肠杆菌简介大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的革兰阴性细菌，存在于人体肠道中。
它具有很高的繁殖速度和易于培养的特点，成为了生物学和生物工程领域中最重要的模式微生物之一。
大肠杆菌不仅被广泛应用于基础科学研究，还有很多在工业上的应用。
2. 蛋白质提取的原理蛋白质是生物体内最基本的分子机器，在维持细胞功能和发挥生物学作用中起着至关重要的作用。
为了进一步研究蛋白质的结构、功能以及相互作用等方面，需要从生物样本中提取蛋白质并进行纯化。
蛋白质提取的主要原理包括细胞破碎、裂解剂处理和沉淀技术。
其中，细胞破碎是获得蛋白质样品最关键和基础的步骤。
通过合适的方法使细胞壁断裂，释放出内部含有大量目标蛋白质的细胞液。
3. 破碎方法和技术常用的大肠杆菌蛋白质提取方法包括机械破碎、超声波破碎和酶解等。
渗透休克法从大肠杆菌中提取GST—α1—TP5融合蛋白
渗透休克法从大肠杆菌中提取GST—α1—TP5融合蛋白目的：从大肠杆菌中选择性抽提GST-Tal-TP5融合蛋白。
方法：采用渗透休克法从大肠杆菌中提取GST-Totl-TP5融合蛋白，优化操作条件，并与超声破碎法进行比较。
结果：优化后的渗透休克法从大肠杆菌提取GST-TotI-TP5融合蛋白可使杂蛋白量含量相对超声破碎法降低一个数量级。
结论：渗透休克法可高效提取大肠杆菌表达的GST-Tα1-TP5融合蛋白。
标签：渗透休克法；大肠杆菌；谷胱甘肽硫转移酶；重组胸腺肽Tα1-TP5胸腺素α1（Tα1）是胸腺组分5（thvmosin fraction 5）中分离出来的由28个氨基酸残基组成的多肽，胸腺五肽（TP5）是胸腺生成素Ⅱ第32—36位的氨基酸残基片段。
Tod和TP5均属免疫调节剂，临床上二者均被用于治疗免疫缺陷、肝炎、肿瘤和艾滋病等疾病。
为了进一步研究二者的联合作用，本实验构建了与GST基因融合表达的重组胸腺肽Tα1-TP5表达菌株，在乳糖的诱导下实现了高效可溶性表达。
渗透休克法可选择性提取大肠杆菌周质空间蛋白，对简化后期纯化工艺十分有利。
有文献报道采用渗透休克法提取重组大肠杆菌周质空间的青霉素G酰化酶，回收率92.4%，纯化倍数3.22。
目前，大肠杆菌表达的GST融合蛋白大多采用超声破碎法，该法得到的粗酶液比活较低。
本研究探讨用渗透休克法从大肠杆菌中提取GST-Tα1-TP5融合蛋白，并优化操作条件。
1材料与方法1.1材料与试剂大肠杆菌BL21（DE3）[PGEX-4T-1]，携带重组胸腺肽Tα1-TP5基因。
BCA蛋白质定量检测试剂盒购自上海生物工程公司；TB培养基：酵母粉2.4%，蛋白胨1.2%，甘油0.4%，磷酸二氢钾17 mmol/L，磷酸氢二钾72 mmol/L，高壓灭菌时磷酸盐与其他组分分开，待溶液冷却至60%以下后混合。
1.2实验方法1.2.1培养条件500ml三角瓶装TB培养基100ml，接种量0.5%，37℃，250 r/min，摇床培养，2.5 h后加终浓度1 dL乳糖诱导，继续培养6h后收集菌体。
大肠杆菌全蛋白提取
（一）大肠杆菌的培养及暴露( 1 )LB培养基的配制：胰化蛋白胨（Trypton）：10g/L酵母提取物（Yeast Extract）：5g/LNaCl：10g/LDI水：800L溶解（PH=7.4）定容至1L。
配三个固体培养基：150ml+2.5g琼脂粉（Agar）5g个液体培养基：100ml，灭菌1200Ｃ，15min。
（2）细菌的培养：370Ｃ，220rpm/min,培养9h。
（3）碳管暴露：方案一：分别取大肠杆菌对数期混悬液20ml,分装；离心（5000χg，15min）；对照组加9ml的新培养基+1ml的生理盐水；实验组加9ml新培养基+1ml灭菌的1000ppm 的S-MWNTS;370Ｃ，220rpm/min,培养2h。
方案二：（二）总蛋白的提取（1）分别取对照和暴露后的大肠杆菌对数期混悬液10ml,离心（5000χg，40Ｃ，15min）；用PBS(PH:7.4)清洗三边，取沉淀。
（2）按1/10加入裂解液对蛋白进行裂解裂解液：（-20 保存）8M尿素、4%CHAPS、2%Bio-Lyte、40mM DTT尿素 4.8gCHAPS 0.4gDTT 0.0617gBio-Lyte 1mL（20%的Bio-lyte）定容至10mL，分装，-20保存。
PMSF（100mM/L）:（-20 保存）PMSF 0.1742g异丙醇10ml分装，-20保存。
注：用含PMSF(1mM/L)的裂解液!(3) 超声冰浴：35%—40%，5s/10s,30min(4) 分装离心：14000Χg,40C，20min(5) 取上清，分装500uL （-80 保存）(6) 蛋白浓度的测定标准蛋白：BSA 1mg/mL溶剂：DI水分别取5、10、20、40、60、80、100、120uL加同等体积的裂解液，用DI水定容至1mL.样品：分别取对照组和暴露组蛋白上清液50uL用DI水定容至1mL.分别取50uL加入到96孔板内，加200uL的考马斯亮蓝（G-250）染色2min后测OD595值，绘制标准曲线，计算蛋白浓度。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
１ ７ ． ｒ ｓ ｅ ｔ ｅｙ ｔ ｉ ｄｃ ｔｄ ｔ ａ ｈ ｓ ｍｅ ｏ ｓ ｔ ｅ ｇ ｏ ｎ ｏ ｅ ｉ ｌｓ ｃ ｐ ｏｅｎ ｅ ｔ ｃ ｉｎ ｆ ｍ ｃ ｌ ％ ８ ｅ ｐ ｃ ｉ ｌ．Ｉ ｎ ｉａｅ ｔ ｔ ｉ ｖ ｈ ｔ ｄ ｉ ｈ ｏ ｄ ｏ ｅ ｆｒ ｐ ｒｐａ ｍｉ ｒ ｔｉ ｘｒ ｔ ｒ ｈ ａ ｏ ｏ Ｅ ｏｉ ． Ｋｅ ｗｏ ｄ ：Ｐ ｒｐａ ｍｉ ｒ ｔｉ ｓ Ｅ ｔ ｃｉ ｎ Ｅ ｃ ｅ ｉｈ ａ ｃ ｌ ｙ ｒｓ ｅ ｉ ｌｓ ｃ ｐ ｏ ｅｎ ； ｘｒ ｔ ； ｓ ｈ ｒ ｉ ｏｉ ａ ｏ ｃ
ＬＩ ｈ ｎ ｇ ｏ ， ＸＵ ｉ ｇ ｏ ， ＮＩ Ｚ ｅ ＇ ｕ Ｍ ｎ －ｂ Ｕ Ｇａ ｇ ， ＹＡＯ Ｗ ｅ － ｉ ｇ ｎ２ ｎ ｂｎ
（． ｃ ｏｌ ｆＬｆ Ｓ ｉ ｃ ｎ ｅｈ ｏ ｇ ，Ｃ ｉａＰ ａｍ ｃｕ ｃｌＵ ｉｅ ｉ ，Ｎ ｎ ｎ ０ ９ ２ Ｐ ｋ ｈ ａｇ １ Ｓ ｈｏ ｏ ｉ ｃ ｎｅ ａｄ Ｔ ｃｎ ｌ ｙ ｈｎ ｈ ｒ ａｅ ｔ ａ ｎｖｒ ｔ ｅ ｅ ｏ ｉ ｓｙ ａｊ ｇ ２０ ０ ；． ｅｉ Ｓ ｕｎ ｌ ｉ １ ｎ ｕ Ｐ ａｍ ｃ ｏ ｐｎ ，Ｂ ｉｎ ００ １ ｈｎ ） ｈｒ ａｙ Ｃ ｍ ａｙ ｅ ｉ １０４ ，Ｃ ｉａ ｊｇ
组 蛋 白大 规模 生 产 奠 定 了基 础 。 关 键 词 ：周 质 蛋 白 ；提 取 ；大肠 杆 菌
中图分类号 ： ８ Ｑ１
文献标识码 ： Ｂ
文章编号 ：０ ５ １３ （０ １０ — ０ ５ ０ ２ ９ — ７ ６ ２ １ ）６ ０ ９ — ３
Ｓ ｕ ｙ ｏ ｘ ｒ ｃ ｉ ｎ ｏ ｅ ｔｏ ｆ ｐ ｒｐ ａ ｍ ｃ ｐ ｏ ｅｎ ｎ Ｅ。ｃ ｌ ｏｉ
为对比。结果表 明浓度 ０４ ｍｏ Ｌ ｐ ． ｌ ，Ｈ值 ８０ 提取 时间为 ４ ｎ时， ／ ．， ５ ｍｉ 周质 目的蛋 白达到 ０８ ｇｇ湿茵， ． ｍ／ ９ 相比其他 方
法， 周质蛋 白提取 率分别提 高 ９ ％、 ８％。 实验得 到一种高效、 ３ １７ 方便 的大肠杆 菌周质蛋 白提 取工艺 ， 为周质表达 的重
大肠杆 菌周 质蛋 白提取工艺 的研究
李振 国 １ 明波 ，徐 ，牛 罡 ，姚 文兵
（ ．中国药科 大 学 生命 科 学与技 术 学院 ， １ 南京 ２０ ０ ；．北京 双鹭 药业 股份有 限公 司 ， 京 １０４ ） １０ ９２ 北 ００ １
摘 要 ：研 究 了精氨 酸缓 冲液在 不 同浓度 、Ｈ值及提取 时间下的周质蛋 白提取率 ， ｐ 并以溶菌酶法、 渗透压休 克法作
大肠 杆 菌（ ｓｈ ｒ ｈａ ｃｌ 是 大多数 科学 研究及 Ｅ ｃ ｅｉ ｉ ｏ ） ｃ ｉ 应用 中实现蛋 白表达的首选宿主。周 质空间是 由大肠 杆菌 内膜 和外膜组成 的双层膜 结构 ，能提供一个适合 外源蛋 白正确折叠 的环境 【 在大肠杆菌周质空 间表达 ｌ Ｊ 。 重组蛋 白有着众 多的优 点 ，由于周质 空间的蛋 白含量
ｏ ｅｉ ｌ ｓ ｃ ｒ ｔｉ ｓ ｃ ｍｐ ｅ ｗ ｔ ｔ ａ ｏ ｅ ｙ ｏ ｙ ｍｅ ｏ ａ ｄ ｓ ｔ ｓ ｏ ｋ ｆ ｐ ｒｐ ａ ｍｉ ｐ ｏｅｎ ， ｏ ａ ｄ ｉ ｒ ｈ ｈ ｔ ｆ ｔ ｌｓ ｚ ｍｅ ｈ ｈ ｔ ｄ ｎ ｏ ｍｏｉ ｈ ｃ ｍｅｈ ｄ， ｗｅ ｅ ｎ ｒ ａ ｅ ９ ％ ａ ｄ ｃ ｔｏ ｒ ｉｃ ｅ ｓ ｄ ３ ｎ
第２ ８卷第 ６期
２１年 １ ０１ ２月
生 物 学 杂 志
Ｊ ＲＮＡ Ｆ Ｂ Ｏ ＯＧ ＯＵ Ｌ Ｏ ＩＬ Ｙ
Ｖｏ． ８ Ｎｏ ６ １２ ． Ｄｅ ． ０ ｌ ｃ ２ １
ｄ ｉ ０ ３ ６ ／ ｉ ｎ２ ９ － ７ ６２ １． ６０ ５ ｏ： ．９ ９ｊ ｓ ．０ ５ １ ３ ． ０ ． １ ．ｓ ０１ ． ９