流感嗜血杆菌

染色
符合肠杆菌特点，多为周毛菌，有菌毛
伤寒杆菌的周身鞭毛
培养特性
EMB、SS上呈无色透明乳糖不发酵菌落
麦康凯培养基上的伤寒杆菌菌落
EMB培养基，上为E.coli，下为伤寒杆菌

生化反应
乳糖（-），葡萄糖（+），多数H2S+，动力+ ，尿素（-）

抗原结构
O抗原——特异性低、稳定、分群（组） H抗原——特异性高，不稳定，分型 Vi抗原（毒力抗原）——不稳定，可阻止 “O”凝集
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志贺菌（Shigella)
人类细菌性痢疾的病原菌，俗称痢疾杆菌 一、生物学性状 形态与染色：G–、短小杆菌、无芽胞，无 鞭毛，无荚膜，有菌毛。 培养特性：营养要求低，SS平板上呈无色半 透明菌落 生化反应：葡萄糖+，乳糖H2S - ，动力24 可与沙门菌、大肠埃希菌区别。
培养——SS平板
枸橼酸盐利用试验原理
培养基 枸橼酸盐 铵盐
碳酸盐
氨
培养基pH下降 溴麝香草酚蓝 呈碱性变色
培养基变蓝
埃希菌属
埃希菌属（Escherichia）有6个种，只有大肠埃希 菌（E.coli）是临床最常见、最重要的一个菌种。 ①大肠埃希菌是肠道中重要的正常菌群； ②在宿主免疫力下降或细菌侵入肠外组织器官后即 可成为机会致病菌，引起肠道外感染； ③一些血清型的大肠埃希菌具有致病性，能导致人 类胃肠炎； ④在环境卫生和食品卫生学中常被用作粪便污染的 卫生学检测指标。
流感嗜血杆菌
生化反应：
◆ 对糖发酵不稳定。一般分解葡萄糖只产酸， 不分解乳糖或甘露醇，对麦芽糖、蔗糖或糊精的 发酵不稳定。 ◆ 还原硝酸盐。有荚膜菌株产生吲哚。典型 菌株不溶血。产生自溶酶，可被胆汁溶解。
致病性
◆ 致病物质为内毒素、荚膜、菌毛和酶类。 ◆ 通过呼吸道感染，引起原发性或继发性感染。 ◆ 原发性感染多由b型荚膜强毒株引起，为急性化脓 感染，如脑膜炎、鼻咽炎、咽喉会厌炎、化脓性关 节炎、心包炎及败血症等。 ◆ 继发感染主要在流感、麻疹、百日咳、肺结核等后 发生，多为无荚膜菌株引起。如慢性支气管炎、中 耳炎、鼻窦炎等
流感嗜血杆菌
名称由来
→于1892年由费佛博士在流行 性感冒的瘟疫中发现。 →曾误认为它是1889年流感大 流行的原因。 →直至1933年，发现流行性感 冒的病毒性病原后，才消除了 这种误解。
与流感的关系
嗜血杆菌属（Haemophilus）
根据《Bergy’s鉴定细菌学手册》第九版（1994）记载，嗜 血杆菌属列为群5中的亚群3，其中和临床有关的有9个种即： • 流感嗜血杆菌（H.influenzae） • 副流感嗜血杆菌（H .parainfluenzae） • 溶血嗜血杆菌（H .haemolyticus） • 副溶血嗜血杆菌（H .parahemolyticus） • 杜克嗜血杆菌（H .ducreyi） • 埃及嗜血杆菌（H .aegyptius） • 嗜沫嗜血杆菌（H .aphrophilus） • 副嗜沫嗜血杆菌（H .paraphrophilus） • 迟缓嗜血杆菌（H .segnis） 代表菌：流感嗜血杆菌（H .influenzae）
（巧克力色培养基） X因子 —— 血红素 V因子 —— 辅酶Ⅰ或辅酶Ⅱ 5%～10%CO2
培养特性
巧克力色平板上培养：经35℃，18～24h培养形成 微小（0.5～0.8mm）无色透明，不溶血，呈露滴 样小菌落。 48h后形成灰白色较大的菌落。
当流感嗜血杆菌与金黄色葡萄球菌在同一血平板上培 养时，由于金黄色葡萄球菌能合成较多的V因子，并弥 散到培养基里，可促进流感嗜血杆菌生长，故在金黄 色葡萄球菌菌落周围菌落较大，而离金黄葡萄球菌越 远者则流感嗜血杆菌的菌落越小。
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生物学性状


中等大小的G-杆菌、无芽胞、有周鞭毛、菌毛 营养要求不高。肠道鉴别培养基形成有色菌落 ，SS平板上呈红色大菌落 发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖和甘露醇产酸产气 ，分解蔗糖因菌株而异，尿素酶试验阴性。 吲哚、甲基红、V-P、枸橼酸盐试验（IMViC试 验）为+ + - -。 克氏双糖铁琼脂（KIA）：斜面和底层均产酸产 气，H2S（-）。 动力-吲哚-尿素（MIU）培养基为+ + -。
血平板上有“卫星现象”
X、V因子需求试验
流感嗜血杆菌（H.influenzae）
1. 初次分离为G—短小杆菌； 2.陈旧培养基或恢复其病灶中，具有多形性 （球杆、长杆或丝状）; 3.无芽胞，无鞭毛，不能运动; 4.毒力株（粘液型菌株）在营养丰富的培养 基上，6～8h有明显荚膜，在陈旧培养物中 荚膜消失。
培养特性
需养菌。培养较难。
培养基中需加入血液，以提供X因子和V因子

尿素酶试验原理
尿素 尿素酶 氨+CO2
培养基pH升高
酚红呈碱性变色
枸橼酸盐利用试验




原理：某些细菌能力利用培养基中的枸橼酸盐作为唯 一的碳源，也能利用其中的铵盐 作为唯一碳源，细菌 生长过程中分解枸橼酸盐产生碳酸盐和分解铵盐生成 的氨，使培养基变碱，是指示剂呈碱性反应。 培养基：枸盐酸盐培养基 试剂：溴麝香草酚蓝（pH6.0以下呈黄色，pH7.6以上 呈蓝色） 结果：培养基变蓝：+ 培养基不变色：－ 应用：肠杆菌科属间鉴别
有色菌落
无色菌落
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抗原构造及分类： O抗原（分类依据）：包括群和型特异性抗 原 A群:痢疾志贺氏菌 B群:福氏志贺氏菌 C群:鲍氏志贺氏菌 D群:宋内氏志贺氏菌 K抗原无分类意义 抵抗力：比其它肠道杆菌弱，粪便标本立即 送检；易形成抗药性。

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沙门菌属
是肠杆菌科中最复杂的菌属，有2000种以 上血清型 对人类有致病性 肠热症——伤寒沙门菌，甲型副伤寒沙门菌 、肖氏沙门菌、希氏沙门菌 食物中毒——鼠伤寒沙门菌、猪霍乱沙门菌 、肠炎沙门菌 败血症——猪霍乱沙门菌最常见
肠道杆菌(enteric bacilli)
※ 一大群居住在人和动物肠道中生物学性状近似
的Ｇ－杆菌, 广泛分布于水、土壤或腐物中。
※ 分类学上的地位:《伯杰氏系统细菌学手册 》
(第９版)的第Ⅰ大类的兼性厌氧Ｇ－杆菌。 ※ 多数是肠道的正常菌群,少数为致病菌 ※ 至少有30个菌属，120多个菌种
肠道杆菌共同特点
EMB（伊红——美兰培养基），乳糖、伊红、美兰
大肠埃希菌 （非致病菌） 乳糖 产酸
发酵
伊红 结合 美兰 形成紫黑色金属光 泽化合物
选择作用 （弱选） 有色的乳糖发酵菌落
伤寒沙门菌等 （致病菌）
乳糖
不发酵
伊红美兰不能结合
无色的乳糖不发酵菌落
EMB平板上的E.coli
SS培养基（沙门志贺培养基） 乳糖、中性红指示剂、胆盐、煌绿等抑制剂

形态结构

G—中小杆菌，无芽孢，多数有周鞭毛（除志 贺菌属、克雷伯菌属、鼠疫耶尔森菌和EIEC ），无芽胞，少数菌属细菌可形成荚膜。 及菌毛

培养特性

需氧或兼性厌氧 营养要求不高，普通培养基可生长，菌落相似， 形成灰白色中等大小S型菌落。

生化反应
发酵葡萄糖产酸、或产酸产气； 乳糖发酵试验：非致病菌 +，致病菌 -（除外变形 杆菌）。触酶阳性；氧化酶阴性；硝酸盐还原为 亚硝酸盐。
甲基红试验
原理：细菌分解糖，产生丙酮酸，进一步 生成大量混合酸，使培养基pH维持在4.4 以下，加入甲基红后，使甲基红呈现红色 反应。此为甲基红试验阳性。 培养基：葡萄糖蛋白胨水 试剂：甲基红试剂 结果：加入试剂后，培养基呈现红色：+ 培养基不变色： － 应用：是肠道杆菌常用的生化反应试验， 主要用于区别大肠肝菌和产气肠杆菌
微生物学检查方法
微生物学检查方法
抗原检测：
检测体液或脓汁中的b型多糖抗原，用包被兔抗体
的乳胶微粒凝集反应 免疫荧光、荚膜肿胀试验亦可获得较高阳性结果
分子生物学技术：
PCR技术鉴定临床标本中的流感嗜血杆菌，并作
为确定分离株的一种试验
鉴定依据
革兰阴性小杆菌、多形性 培养采用巧克力色培养基，CO2培养

靛基质试验原理
色氨酸
色氨酸酶
靛基质 （吲哚） 对二甲基氨基苯甲醛 玫瑰靛基质 （玫瑰吲哚）
靛基质试验
尿素酶试验
原理：产生脲酶的细菌，能水解尿素生 成氨和CO2，氨使培养基呈碱性变色。 培养基：尿素培养基 试剂：酚红指示剂 结果：培养基变红：+ 培养基不变色： 应用：肠杆菌科属间鉴定

葡萄糖
V－P试验
丙酮酸
脱酸
乙酰甲基甲醇
V-P试剂
二乙酰 培养基变红
葡萄糖
丙酮酸 脱酸 大量混合酸 乙酰甲基甲醇 V-P试剂 pH降至4.4以下 甲基红试剂 培养基变红 培养基变红 二乙酰
葡萄糖发酵形成丙酮酸后的不同代谢途径
靛基质试验
原理：细菌产生色氨酸酶，可分解蛋白胨中的 色氨酸，生成靛基质（吲哚），靛基质与试剂 对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰靛基质。 培养基：蛋白胨水 试剂：靛基质试剂（含对二甲基氨基苯甲醛） 结果：加入试剂后，培养基出现红色液面：+ 培养基液面为黄色： － 应用：用于肠道杆菌的鉴定

葡萄糖
甲基红试验
丙酮酸 大量混合酸
pH降至4.4以下
甲基红试剂
培养基变红
甲基红试验
V-P试验
原理：细菌发酵葡萄糖，产生丙酮酸，丙酮 酸脱羧生成乙酰甲基甲醇，在碱性环境中乙 酰甲基甲醇被氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白 胨中的精氨酸所含的胍基结合，生成红色化 合物。 培养基：葡萄糖蛋白胨水 结果：加入试剂后，培养基呈现红色：+ 培养基不变色： － 应用：是肠道杆菌常用的生化反应试验，主 要用于区别大肠肝菌和产气肠杆菌