转基因材料的检测

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食品中转基因成分的检测方法与限量标准研究

食品中转基因成分的检测方法与限量标准研究

食品中转基因成分的检测方法与限量标准研究引言:随着人们对食品安全的关注度不断提高,转基因食品备受争议。

为了保护消费者权益,监管部门一直致力于开发食品中转基因成分的检测方法,并制定相应的限量标准。

本文将对现有的检测方法及限量标准进行研究。

一、食品中转基因成分检测方法1. PCR检测方法PCR(聚合酶链式反应)是一种常用的检测转基因成分的方法。

通过匹配转基因重要基因的DNA序列,PCR可以检测到极低浓度的转基因成分。

然而,由于PCR方法对样品的处理过程较为繁琐,且存在较高的假阳性率,因此在实际应用中需要进一步改进。

2. 实时荧光PCR检测方法实时荧光PCR是基于PCR技术的一种改进方法。

它可以实时监测PCR过程中的荧光信号,准确判断转基因成分的存在与否。

相比传统PCR方法,实时荧光PCR具有高灵敏度和高特异性的优势,然而其设备和试剂的成本较高,限制了其在实际应用中的推广。

3. 基因测序方法基因测序方法是一种直接检测转基因成分的手段。

通过对食品中所有DNA序列的测序,可以准确判断是否存在转基因成分。

基因测序方法在理论上能够提供最准确的结果,但由于其高昂的费用和时间成本,目前在大规模应用中还存在一定的困难。

二、食品中转基因成分的限量标准1. 限量标准的制定依据食品中转基因成分的限量标准制定依据包括食品安全评估、转基因成分检测方法的可行性和社会公众意见等。

在制定限量标准时,应综合考虑科学研究和实际情况,确保转基因食品不会对人体健康产生不良影响。

2. 不同国家的限量标准差异不同国家对转基因成分的限量标准存在一定的差异。

例如,欧盟规定,食品中转基因成分的含量超过0.9%时,必须标示出来。

而美国则没有明确的限量标准,而是采取了一种“合理衡量”的方式,需要食品生产者自行决定是否标识转基因成分。

3. 限量标准的争议与改进转基因食品的限量标准一直备受争议。

一方面,部分人认为限量标准过于宽松,难以真正保护消费者权益;另一方面,也有人认为限量标准过于严苛,对农业发展造成不利影响。

转基因检测原理

转基因检测原理

转基因检测原理在当今的科技领域,转基因技术的应用日益广泛,而与之相伴的是对转基因产品进行准确检测的重要性。

转基因检测不仅关乎食品安全,还涉及到环境保护、贸易公平等诸多方面。

那么,转基因检测的原理究竟是什么呢?要理解转基因检测的原理,首先得明白转基因是什么。

转基因,简单来说,就是将一种生物的基因片段转移到另一种生物的基因组中,从而赋予后者新的特性或功能。

而转基因检测,就是要找出这些被引入的外来基因片段或者由其产生的特定蛋白质。

目前,转基因检测主要基于两种基本原理:核酸检测和蛋白质检测。

核酸检测就像是在一个庞大的基因图书馆中寻找特定的一本书。

我们知道,基因是由核酸组成的,包括脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)。

在转基因生物中,会存在特定的外来基因片段。

检测人员通过提取被检测样品中的核酸,然后利用各种分子生物学技术来检测这些外来基因片段是否存在。

其中,最常用的核酸检测方法之一是聚合酶链式反应(PCR)。

PCR 就像是一个基因的复制机器,它能将特定的基因片段大量扩增,从而使原本微量的基因变得容易检测到。

检测人员设计出与转基因序列互补的引物,如果样品中存在目标转基因序列,PCR 反应就能成功进行,产生大量的扩增产物。

通过检测这些扩增产物,就能判断样品是否为转基因。

另一种核酸检测方法是基因芯片技术。

这就好比是一个基因的大拼盘,将大量不同的基因片段固定在芯片上。

当被检测的核酸与芯片上的特定基因片段互补结合时,就能检测出转基因的存在。

除了核酸检测,蛋白质检测也是转基因检测的重要手段。

因为基因表达的最终产物往往是蛋白质,检测特定的蛋白质也能间接证明转基因的存在。

例如,酶联免疫吸附测定(ELISA)就是一种常用的蛋白质检测方法。

它利用抗体与抗原的特异性结合来检测目标蛋白质。

检测人员先制备针对转基因产生的特定蛋白质的抗体,然后将样品与抗体混合。

如果样品中存在目标蛋白质,抗体就会与之结合,通过一系列的显色反应,就能判断样品是否含有转基因成分。

实验3:农作物转基因成分检测

实验3:农作物转基因成分检测

实验三农作物转基因成份的检测---- PCR方法检测Bt玉米的外源基因实验目的:掌握CTAB法从转基因植物叶片提取DNA的原理和方法;掌握PCR扩增DNA的技术及原理,学习PCR的操作及PCR扩增仪的使用。

实验内容:1、采用CTAB法从植物叶片中提取基因组DNA,并进行琼脂糖凝胶电泳检测。

2、PCR检测转基因植物外源基因(启动子序列),扩增结果通过琼脂糖凝胶电泳检测。

实验仪器设备、试剂等用品仪器设备用品:恒温水浴锅,离心机,FastPrep细胞破碎仪,移液枪,离心管,吸头,电泳仪,电泳槽,PCR扩增仪试剂:CTAB,氯仿,异戊醇,无水乙醇,异丙醇,β-巯基乙醇,PCR试剂盒,引物(primer)第一部分植物基因组DNA的提取原理:CTAB法是一种快速简便的提取植物总DNA的方法:先将新鲜的叶片在液氮中研磨,破碎其细胞,然后加入CTAB分离缓冲液,将DNA溶解出来,再经氯仿-异戊醇抽提除去蛋白质,最后得到DNA。

核酸是生物有机体中的重要成分,在生物体中核酸常与蛋白质结合在一起,以核蛋白的形式存在。

核酸分为脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)两大类,在真核细胞中,前者主要存在于细胞核中,后者主要存在于细胞质及核仁里。

在制备核酸时,通过研磨破坏细胞壁和细胞膜,使核蛋白被释放出来。

分离得到核蛋白后,需进一步将蛋白等杂质除去,用含异戊醇的氯仿振荡核蛋白溶液,使其乳化,然后离心除去变性蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相和氯仿相中间,而DNA溶于上层水相。

用两倍体积95%乙醇溶液将DNA钠盐沉淀出来。

如果用酸性乙醇或冰乙酸来沉淀,得到的是游离的DNA。

反复使用上述方法多次处理DNA核蛋白溶液,就能将蛋白等杂质较彻底地除去,得到较纯的DNA 制品。

在DNA提取、制备的过程中,核酸极不稳定,许多因素可破坏其完整结构:①化学因素,核酸的结构在pH值4.0—11.0间较稳定,pH值在此范围外就会使核酸变性降解,故制备过程应避免过酸过碱。

转基因检测的主要技术方法及基本流程

转基因检测的主要技术方法及基本流程

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食品中的转基因成分检测技术

食品中的转基因成分检测技术

食品中的转基因成分检测技术随着科学技术的不断发展,转基因食品的出现引起了广泛关注。

作为一种新型食品,转基因食品是否安全成为了公众关注的焦点。

而食品中的转基因成分检测技术则成为了确保食品安全的重要手段。

本文将介绍食品中的转基因成分检测技术及其应用。

一、转基因食品的定义及特点转基因食品是通过人工手段将外源基因导入食品中的生物体,使其具有特定的性质。

转基因技术的出现给食品生产带来了许多优势,如提高产量、抗病虫害等。

然而,由于食品中的转基因成分可能对人体健康产生影响,因此转基因食品的检测成为了食品安全的重要环节。

二、食品中的转基因成分检测技术分类食品中的转基因成分检测技术主要分为两大类:基于DNA的检测技术和基于蛋白质的检测技术。

基于DNA的检测技术主要包括聚合酶链反应(PCR)技术、半定量PCR技术和实时定量PCR技术等。

这些技术可以通过扩增特定基因片段或序列来判断食品中是否存在转基因成分。

而基于蛋白质的检测技术主要包括酶联免疫吸附测定法(ELISA)等。

这些技术可以通过检测特定蛋白质来判断食品中是否存在转基因成分。

三、食品中的转基因成分检测技术的应用食品中的转基因成分检测技术主要应用于以下几个方面:1.食品安全监管转基因食品作为一种新型食品,其安全性备受关注。

食品安全监管部门可以利用转基因成分检测技术对市场上的食品进行抽检,确保食品中的转基因成分符合规定的标准。

2.产品溯源转基因成分检测技术可以帮助生产企业实现对产品的溯源。

通过对原料和成品中的转基因成分进行检测,可以掌握产品生产过程中是否存在转基因成分,并追溯其来源,为企业的产品质量管理提供参考依据。

3.行业竞争力提升一些国家和地区对转基因食品有着不同的标准和要求。

通过转基因成分检测技术,食品企业可以对产品进行筛选,确保其符合市场要求,提升企业的竞争力。

四、食品中的转基因成分检测技术的挑战与展望尽管食品中的转基因成分检测技术存在许多优势,但也面临着一些挑战。

食品中转基因成分的检测与评估

食品中转基因成分的检测与评估

食品中转基因成分的检测与评估随着科技的不断进步和人们对食品安全的关注不断增强,食品中转基因成分的检测与评估问题变得日益重要。

转基因技术是一种将外源基因导入食品作物中的技术,以改变其某些性状,提高产量、耐病虫害等。

然而,转基因食品的安全性和对人体健康的影响成为公众关注的焦点。

因此,食品中转基因成分的检测与评估是确保食品安全的重要环节。

食品中转基因成分的检测是为了了解食物中是否存在转基因成分以及其含量。

转基因成分的检测可以通过分子生物学技术和化学分析方法进行。

分子生物学技术可以检测转基因成分的特定DNA序列,常用的方法包括PCR和Southern blotting 等。

化学分析方法则可以检测转基因成分的特定蛋白质或其他化学物质。

这些方法的应用可以帮助监管部门和食品生产商确定食品中是否含有转基因成分,从而保障消费者的饮食安全。

食品中转基因成分的评估则是基于食品安全风险评估的原则进行的。

安全性评估是对转基因食品进行全面评估的过程,以确定其对人体健康的潜在风险。

评估包括转基因成分的遗传毒性、过敏原性和潜在生物活性等方面的研究。

通过动物试验和临床研究等方法,可以评估出转基因成分对人体健康的潜在危害。

此外,评估还需要考虑不同人群的敏感性和暴露程度等因素,以确定转基因食品的安全性。

食品中转基因成分的检测与评估在实践中面临着一些挑战。

首先,转基因成分的检测技术需要不断改进和完善,以提高准确性和敏感性。

其次,转基因食品的评估需要进行长期的临床研究,以获得更准确的结果。

还有,不同国家和地区对转基因食品的监管标准和方法存在差异,这给转基因食品的国际贸易带来了一定的困扰。

然而,尽管存在一些挑战,食品中转基因成分的检测与评估仍然是确保食品安全的必要步骤。

通过检测食品中的转基因成分,可以及时发现违规产品,并采取相应的措施来保护消费者的权益。

同时,通过评估转基因食品的安全性,可以为公众提供可靠的食品选择信息,促进消费者对食品安全的信心和保护人们的健康。

转基因_检测_实验报告

一、实验目的通过本实验,学习并掌握转基因检测的基本原理和方法,验证转基因植物或生物体内是否存在特定目标基因,为转基因生物的安全评估提供技术支持。

二、实验原理转基因检测主要基于分子生物学技术,通过PCR(聚合酶链反应)、Southern blotting、Western blotting等方法,检测转基因生物体内是否存在目标基因及其表达产物。

三、实验材料1. 转基因植物或生物样品2. 靶标基因DNA或cDNA3. DNA提取试剂盒4. PCR试剂5. Southern blotting试剂6. Western blotting试剂7. 仪器:PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统、离心机等四、实验方法1. DNA提取(1)取一定量转基因植物或生物样品,按照DNA提取试剂盒说明书进行操作,提取总DNA。

(2)对提取的DNA进行定量,确保其浓度和纯度符合实验要求。

2. PCR检测(1)根据靶标基因设计特异性引物,进行PCR扩增。

(2)将PCR产物进行电泳分析,观察扩增条带。

3. Southern blotting检测(1)将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳,转移至尼龙膜上。

(2)用靶标基因探针进行杂交,洗涤后进行化学显色。

4. Western blotting检测(1)将转基因植物或生物样品制备成蛋白质提取物。

(2)进行SDS-PAGE电泳,转移至NC膜上。

(3)用靶标蛋白抗体进行免疫检测,洗涤后进行化学显色。

五、实验结果与分析1. PCR检测通过PCR扩增,成功得到预期大小的靶标基因片段,说明转基因植物或生物体内存在目标基因。

2. Southern blotting检测通过Southern blotting检测,成功将PCR产物与靶标基因探针进行杂交,说明转基因植物或生物体内存在目标基因。

3. Western blotting检测通过Western blotting检测,成功检测到目标蛋白的表达,说明转基因植物或生物体内存在目标基因的表达产物。

食品中的转基因成分检测方法

食品中的转基因成分检测方法转基因技术是现代生物技术领域的一项重要技术,通过在食品作物中引入外源基因,可以提高作物的产量、抗病虫害能力以及改善其品质。

然而,随着转基因食品的广泛应用,人们对于食品中是否存在转基因成分的关注与日俱增。

因此,开发准确可靠的转基因成分检测方法成为食品安全监管和消费者权益保护的重要任务之一。

一、PCR方法PCR(聚合酶链式反应)是一种常用的转基因成分检测方法。

它通过扩增目标DNA片段,然后进行特定基因的检测,以确定食品样品中是否存在转基因成分。

PCR方法的原理是利用DNA聚合酶在模板DNA的引导下,不断扩增目标基因区段,最终可以从食品样品中获得足够数量的转基因 DNA 片段。

PCR方法具有高灵敏度、高特异性、操作简便等优点,因此被广泛应用于转基因食品的检测领域。

二、荧光定量PCR方法荧光定量PCR是PCR方法的一种改进形式。

通过引入特定的荧光探针,可以实现对转基因成分的快速、准确的定量检测。

该方法利用特定荧光探针与目标DNA结合,产生荧光信号,并通过荧光实时监测的方式,定量检测样品中的转基因成分含量。

荧光定量PCR方法具有灵敏度高、准确性强、操作简单快速等优点,被广泛应用于食品安全监管和质量控制。

三、基因芯片技术基因芯片技术是一种高通量、高灵敏度的转基因成分检测方法。

该技术通过将大量的特异性的探针固定在芯片上,可以同时检测多个基因。

食品样品的DNA与芯片上的探针发生特异性的杂交反应,然后通过荧光或其他信号检测出转基因成分的存在和含量。

基因芯片技术具有多重检测、高通量、高灵敏度等特点,能够更全面、准确地检测食品中的转基因成分。

四、下一代测序技术下一代测序技术是近年来快速发展的高通量测序技术。

它可以对DNA样本进行高效、全面的测序,并通过比对分析,检测出其中存在的转基因成分。

相较于传统的PCR方法,下一代测序技术具有高通量、高灵敏度、高分辨率等特点,能够准确检测出转基因成分的存在和含量,对于食品检测具有重要的应用前景。

转基因食品的测试原理是

转基因食品的测试原理是
转基因食品的测试原理是通过检测食品中是否含有转基因成分或转基因标记物来判断食品是否为转基因食品。

常见的转基因食品测试方法包括PCR(聚合酶链式反应)、ELISA(酶联免疫吸附测定法)和DNA芯片等。

PCR方法通过特定引物与转基因植物中的基因序列结合,利用聚合酶链式反应技术扩增目标基因的DNA片段,然后通过凝胶电泳分析扩增产物的大小来确定是否含有特定的转基因成分。

ELISA方法通过特异性抗体与转基因植物中的蛋白质结合,形成复合物,然后利用酶标记的二抗或底物产生颜色反应,通过测量颜色的强度来判断食品中是否存在转基因标记物。

DNA芯片方法使用特定组合的DNA探针固定在芯片上,食品中的DNA与探针特异性结合,形成杂交复合物,通过分析探针与DNA杂交的信号强度来确定是否含有特定的转基因成分。

这些测试方法可以检测食品中极其微量的转基因成分,从而保障食品安全和消费者权益。

简述转基因动植物的检测鉴定方法

简述转基因动植物的检测鉴定方法
一、转基因检测鉴定方法
1、理化检测法
(1)流式细胞术:利用流式细胞术技术,检测转基因植物DNA 核酸的含量,即采用荧光染料标记的 DNA 膜,以流速技术,测定和对比转基因动植物与其他植物的 DNA 含量。

(2)蛋白质印迹:利用蛋白质印迹法,它可以对植物蛋白质分子进行快速和准确的检测,包括转基因植物中特异性抗性蛋白。

2、分子生物学技术
(1)PCR 技术:通过荧光定量 PCR 技术,可实现对单个核酸分子的高灵敏度检测,其是转基因植物检测的常用技术。

(2) Southern 胺基酸印迹:利用 Southern 胺基酸印迹法,检测基因的等位基因进行检测和分析,如同位素标记 PCR,可以有效鉴定和分析转基因植物种群中不同基因的表达量及突变情况。

3、其他技术
(1)生物分子识别:通过生物分子识别,可以有效地检测出转基因植物特有的 DNA 序列,从而对转基因植物进行鉴定。

(2)生物免疫技术:利用生物免疫技术,可以以免疫试剂盒的形式,对转基因植物进行快速检测,从而达到鉴定的目的。

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转基因材料的检测—转病毒复制酶基因“华农1号”番木瓜的PCR检测XXXXX大学生命科学学院20XX级生物技术专业摘要本实验采用定性的一次PCR反应分析方法,根据提供的转基因植物材料中转入基因,启动子,终止子和基因本身的DNA序列,设计出一对特异的PCR扩增引物HN2F和HN2R,然后以野生型番木瓜和转基因番木瓜“华农1号”以及水稻金丝苗DNA的基因组DNA为模板进行PCR扩增,电泳结果显示引物组合HN2-F,HN2-R对野生型和转基因材料的基因组DNA 为模板进行PCR扩增的结果不太理想,无法对其是否为转基因材料下定论,而对水稻金丝苗DNA扩增的结果良好,确定实验室的水稻金丝苗为转基因水稻。

关键词转基因;PCR检测;华农1号引言转基因技术是现代生物技术的核心,是研究植物基因功能及对植物各种农艺性状进行改良的重要手段之一。

与传统育种相比较,运用该技术能够较快培育出优质、高产、高效、抗病虫、抗逆等新品种,进而有效减少肥料、农药投入,保护生态环境,保障人体营养健康。

目前全球转基因作物种植面积激增,累计推广已突破10 亿hm2。

迄今为止,抗病番木瓜、抗虫棉花等7 种转基因植物已在我国获得批准并发放了农业转基因生物安全证书[1]。

转基因技术能提高动植物驯化水平、获得人类所需要的产品, 然而,随着转基因技术的迅速发展与大规模应用,转基因作物的种类越来越多,含有的外源基因成分也日趋复杂。

所以其安全性也备受争论, 因此,对转基因生物的检测也颇受关注。

国内外对转基因作物的检测技术综合起来主要有两大类型:一是基于转入的外源基因核酸水平上的检测;二是基于转入外源基因表达产物蛋白质水平上的检测。

前者的检测,以采用聚合酶链式反应(polymerasechain reaction,PCR)定性检测为主[2-4]。

早在20世纪初科学家就发现了病毒具有交互保护作用,近年来,科研工作者也利用这一原理开展了大量的转病毒部分基因组的转基因工作,使得植物病毒病的防治有了新的发展。

抗病毒基因多数来自于病毒本身的基因,病毒的外壳蛋白基因、复制酶基因、运动蛋白基因等,并已经在番木瓜上获得成功转化[5]。

本实验采用定性的一次PCR反应分析方法,即根据提供的转基因植物材料中转入基因,启动子,终止子和基因本身的DNA序列,设计出一个适用于检测转基因材料的引物对,然后以野生型番木瓜和转基因番木瓜“华农1号”以及水稻基因组DNA为模板进行PCR扩增,鉴别是否为转基因材料。

1. 材料与方法1.1 材料非转基因番木瓜叶片转病毒复制酶基因的番木瓜叶片“华农1号”水稻基因组DNA溶液(水稻金丝苗)待检测样品1.2 方法1.2.1 DNA提取1.2.1.1 称取0.5 g的植物叶片,搁置于研钵中,加入液氮,捣碎叶片。

1.2.1.2 加入650 μl预热的DNA提取缓冲液,用力振荡1-2分钟,放入65℃水浴锅保温45分钟以上,其间,每隔15分钟用手轻微振荡3-4次。

1.2.1.3 从水浴锅中取出样品管,加入650 μl预冷的24:1的氯仿:异戊醇,盖好管盖后缓慢上下颠倒摇动5-10分钟。

1.2.1.4 10,000 rpm下离心10分钟。

1.2.1.5 用移液枪缓慢吸取上清液约500-700 μl至一个新的1.5 ml离心管中。

1.2.1.6 上清液中加入2/3体积的预冷异丙醇,约330-470 μl。

轻轻上下摇动离心管,注意观察DNA将从溶液中析出。

1.2.1.7 在8000 rpm条件下离心5分钟。

1.2.1.8 倒掉上清液,保留DNA沉淀于管底。

1.2.1.9 加入70%乙醇600 μl洗涤沉淀,5000 rpm条件下离心去上清液。

再重复洗涤沉淀一次。

1.2.1.10 室温下干燥DNA沉淀,在见到无色胶状物附在管壁时,加入80-100 μl无菌蒸馏水溶解沉淀的DNA。

1.2.1.11 用分光光度计检测所提取DNA的质量和浓度。

1.2.2 PCR反应1.2.2.1 按表1加入PCR各反应成分于0.2ml的PCR反应管中,然后混匀。

表1 PCR反应MASTER MIX成分1.2.2.2 混匀表1的反应液后,按1个反应的体积均匀分装至4只离心管中,再往这4只离心管中分别添加下面这四种DNA样品(华农大1号,水稻金丝苗,野生型木瓜,待检测样品)各1mL。

将反应管置于PCR仪反应盘中,按表2的反应程序进行PCR扩增。

表2 PCR反应的变温程序1.2.3 2%琼脂糖凝胶电泳1.2.3.1 制备2%的琼脂糖凝胶。

1.2.3.2 反应结束后,往离心管中加入2ul 6×上样缓冲液,用微量移液枪取7ul小心加入样品槽中。

每加完一个样品要在电泳液中清洗一下tip头,以防止相互污染,注意上样时要小心操作,避免损坏凝胶或将样品槽底部凝胶刺穿。

1.2.3.3 加完样后,合上电泳槽盖立即接通电源,以122V,100mA进行电泳30min。

1.2.4 成像观察分析1.2.4.1 将电泳后的琼脂快置于凝胶成像系统观察并拍照。

1.2.4.2 根据成像后扩增片段的有无及片段的大小,分析比较个材料基因片段大小差异,并分析得出供试材料是否是转基因材料。

2. 结果与分析2.1 结果(电泳图)第一组第二组第三组2.2 结果分析2.2.1 第三组Marker右边,即白色方框里的四个样品为本小组的结果,顺序分别是水稻金丝苗,华农1号,野生型木瓜,待检测样品所用引物组合为第七组引物对,即HN2F、HN2R。

2.2.2 图中各组样品所用引物对顺序如下:第一组:M(abcd) (cbad) (abcd) (0000) (cbad) (abcd)引物2 引物3 引物1 引物3 引物1第二组:M(cbda) (cbda) (acbd) (bcad) (cabd) (cabd)引物4 引物2 引物7 引物4 引物1 引物7第三组:M(acbd) (abcd) (abcd) (bcad) (abcd)引物7 引物4 引物7 引物4 引物22.2.3从第三组的结果来看,该凝胶上的样品条带明显都比第一、第二块组的差。

部分条带更是出现了拖尾现象,可能是因为酶量加多了或者ddHO量太少。

至于Marker基2本跑不出条带,则可能是因为上样的量不足。

2.2.4 从我们小组所跑出条带结果来看,水稻出现了与其他三组不同的特异性条带,而其他三条条带大体相同。

因此,可断定7号引物难以检测转基因番木瓜。

2.2.5由图可见,第三组的Marker并没有跑出,因此我们组的样品并无法估算出其条带大小。

于是我们选取了同样选取引物7的第12小组的条带进行分析,即第二个图中最右边的4条条带。

该小组的所跑出条带的顺序依次是:转、水稻、非、待测。

其中第一个样品(华农1号)出现三条条带,大小分别为100bp,200bp,500bp,但是100bp左右的条带偏淡。

所有条带均较淡的可能原因有三个:第一,凝胶的配制有问题;第二,模板量太少;第三,样品没点好,属于个人操作上的失误。

第二个样品(水稻)条带与其他明显不同,曾带状。

第三个样品(野生型木瓜)和第四个样品(华农大1号)出现的条带与第一条带类似,可见在该反应条件下,该引物并不可直接用于判断转基因番木瓜。

2.2.6 根据图中各引物产生条带进行综合分析,推断引物2号可特异性判断转基因番木瓜。

因为从第8小组的结果,即图中第二组的6-9条带,可见华农1号在100—200bp内有一特异性亮带,其他三条带中并无呈现,而这也刚好是2号引物所对应Nos基因所在位置,故推断2号引物可特异性判断转基因番木瓜。

且由图可推断,该待测材料为非转基因材料,因为它所呈现条带并无华农1号和水稻中的特异性条带。

3.讨论番木瓜环斑花叶病是由番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)是引致的番木瓜生产上的主要病害。

为防治PRSV,华南农业大学植物病毒研究室通过转番木瓜环斑病毒广东地区优势株系Ys复制酶(Rep)基因的方法,获得了高度抗PRSV的转基因番木瓜植株[6]。

从以上的各种结果及其分析,可以得知,不同的引物对所扩增的基因有所不同,因此,在检验转基因材料时,选对引物是一大关键。

本实验所选用的检测转基因材料的引物组合HN2F,HN2R对野生型和转基因材料的基因组DNA为模板进行PCR扩增的结果不太理想,无法对其是否为转基因材料下定论,而对水稻金丝苗DNA扩增的结果基本符合要求,出现较淡的目的基因扩增带,可以确定实验室的水稻金丝苗为转基因水稻。

但对华农大1号番木瓜DNA扩增不出相应条带,说明引物组合HN3F,HN3R 可能对番木瓜的特异性不强,而对水稻金丝苗检测具有很好的特异性。

参考文献[1]于文静.中国已为抗虫水稻等7 种转基因作物发放安全证书[J].农药市场信息,2011(18): 9.[2] 邵素琴,李建中.转基因食品的检测方法[J].农药科学与管理,2002,23(3):26—27.[3] 周萍萍,吴永宁,张建中等. 转基因食品检测方法的现况与进展 [J]. 中国食品卫生杂志, 2004, 16 (3):12—15.[4] 刘光明,宋思扬,龙敏南等. 植物性转基因食品的检测与验证方法 [J]. 厦门大学学报(自然科学版), 2003, 42 (3):23—27.[5] 魏祥东. 转番木瓜环斑病毒(PRSV)复制酶突变体(RP)基因番木瓜的选育、抗病机理及安全性分析 [D]. 2006.[6] 阮小蕾,马丽娟,李华平等. 转番木瓜环斑病毒复制酶基因番木瓜的多重定性检测 [J].湖南农业大学学报(自然科学版), 2010, 36 (6) :626—629。

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