水中微生物的检测
水体微生物检测方法
水体微生物检测方法1 水体微生物检测方法水是生命存在的必要条件，水体中的微生物是水质健康状况的重要指示物，所以检测水体微生物是监测污染质量、污染程度以及保证水生态环境健康、生物多样性等的重要技术手段之一。
检测水体中的微生物，常用的方法有活性测定法、培养分离法、PCR以及荧光探针法等。
1.1 活性测定法活性测定是水体微生物检测中应用最为广泛的方法之一。
在活性测定法中，样品会添加选定的培养基，配合观察和测定时间、温度、湿度以及添加凝结剂等来选择培养条件，通过特殊的检测仪器可以观测到微生物的活动，得出结论。
优点是流程简单、方法全面、检测灵敏，适应性强；但方法不适用于菌类多样性检测。
1.2 培养分离法培养分离法是最常用的一种微生物检测方法，在样品中添加特殊培养基，用于培养水体中的微生物。
采集不同条件下培养出的细菌株进行形态学分析、生理与生化特性分析和分子生物学分析等操作，从而获取对应的菌类信息。
优点是检测单元多、可检测菌类多样性；缺点是方法较复杂，时间较长。
1.3 PCR聚合酶链反应法（PCR）是水质检测的一种快速、灵敏的检测方法，它能够实现对特定微生物核酸序列片段的快速，灵敏的检测。
PCR采用不同条件，以几个温度周期反复扩增，以此形成检测抗原特异性的DNA 片段，最终得出该片段的扩增结果，通过特殊的检测仪器，得出检测结论。
优点是抗原检测的特异性更高、检测灵敏度高，时间短；缺点是不能检测到活体细菌，技术成本较高。
1.4 荧光探针法荧光探针法是运用荧光或发射荧光的探针分子，通过其与特定抗原发生特异性结合，以检测活态微生物的一种分子方法。
从而检测水体中活态微生物类型及数量，快速精准地检测水样中的微生物活性。
与传统活性测定法相比，优点是检测时间短、灵敏度高、减少误报率，方法进行简单；缺点是设备成本较高。
以上就是四种常用的水体微生物检测方法，每种方法都有优缺点，检测人员根据实际情况来选择恰当的检测方法。
除此之外，正确使用相关设备、操作标准的熟悉度对水体微生物的检测也是非常重要的。
(2023)微生物实验报告水中细菌总数和大肠菌群的检测(一)
(2023)微生物实验报告水中细菌总数和大肠菌群的检测(一)水中微生物实验报告实验概述•实验名称：水中微生物总数和大肠菌群的检测•实验时间：2023年•实验地点：实验室实验目的•检测水中微生物总数和大肠菌群的存在情况•评估水质卫生状况，指导水资源管理和人群健康实验方法1.采集不同来源的水样。
2.将水样制成不同浓度的稀释液。
3.取一定量的水样稀释液注入培养皿中。
4.加入适当培养基，进行菌落计数和形态特征观察。
5.通过酶促法检测大肠杆菌。
实验结果•来源于自来水厂的水样中，微生物总数为100CFU/mL，大肠菌群未检测到。
•来源于河流的水样中，微生物总数为1000CFU/mL，大肠菌群为20CFU/100mL。
•来源于地下水的水样中，微生物总数为10CFU/mL，大肠菌群未检测到。
结论•来源于自来水厂的水样水质较好，不存在大肠菌群的污染。
•来源于河流的水样水质较差，大肠菌群的检出说明存在污染，需进行水质治理。
•来源于地下水的水样水质较好，不存在大肠菌群的污染。
实验意义•检测水中微生物总数和大肠菌群的存在情况，有利于保障人类健康和水资源的可持续利用。
•提供科学依据和技术支持，指导水资源管理和水质卫生监测。
实验注意事项•实验过程需严格遵守无菌操作规范，防止样本污染。
•实验前需对实验设备、培养基等进行消毒处理，确保实验环境洁净。
•实验结束后，需妥善处理实验产生的废液、废料等。
实验展望•未来可进一步开展对水中其他微生物种类的检测，深入了解水生态系统的生物多样性。
•结合近年来人类活动和气候变化的影响，对水质卫生进行长期监测，及时掌握水质变化趋势。
•根据实验结果，制定针对性的水资源管理和水质卫生治理措施。
结语该实验通过检测水中微生物总数和大肠菌群，评估了水质的卫生状况。
实验结果表明，水质卫生状况与水源的来源密切相关。
希望通过类似的实验，加强对水质卫生状况的监测和管理，确保水资源的可持续利用，保障人们的用水安全和健康。
平板菌落计数法水中微生物的检测
2、由于细菌易吸附玻璃器皿表面，菌液加入后应 尽快倒培养基，立即摇匀；
3、倾注平板时的培养基温度冷却至45℃左右。 4、计数时，30―300个菌落的稀释度计算每毫升
的菌数最为合适 5、同一稀释度的三个重复的菌数不能相差很悬殊
菌落计数方法及原则：
1）若只有一个稀释度的平均菌落数在30-300范围 时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告之。
2）若有两个稀释度，其生长的菌落数均在 30~300之间，则视二者之比值来决定，若 其比值小于2应报告两者的平均数。若大于 或等于2则报告其中较小的菌落总数。
3）若所有稀释度的平均菌落数均大于300， 则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释 倍数报告之
水中细菌总数的测定
——平板菌落计数法
一、细菌总数测定的意义
水中细菌总数往往同水中有机物污染的程度呈 正相关，它是评价水质污染程度重要指标之一
细菌总数：指水样在一定条件下培养后，1mL水样 所含菌落的总数。
我国生活饮用水标准（GB5749-85）规定，细 菌总数不得超过100个/ml
含细菌10-100个/ml的水体为极清洁
代表性：多采几个部位，液体样品需经过震摇，以 获得均匀稀释液。
2 水样的10倍稀释
第一步 稀释 水样 第二步： 接种平板
注意：稀释 度的选择
平板混合分离法： 将菌液分离样品摇匀，用无菌移液管取1 ml的
菌液移至无菌培养皿中，然后将融化，凉至45℃ 左右的培养基，在每个培养皿内各倒入约15 ml， 摇匀，凝固，制成平板。
4）若所有稀释度的平均菌落数均小于30， 则应以按稀释度最低的平均菌落数乘以稀 释倍数报告之
水中微生物的测定-国标法(水质检测)
水中微生物的测定-国标法(水质检测)
摘要
本文介绍了水中微生物的测定方法，以国家标准法为基础。
水中微生物的测定是水质检测的重要环节，可以评估水的卫生状况，以及相关的环境健康风险。
引言
水是人类生活中必不可少的资源，保证水质安全对于人类健康至关重要。
水中微生物作为一种主要的水质指标，可以反映水中存在的微生物污染程度。
因此，精确测定水中微生物的数量是进行水质检测的基本要求之一。
国标法测定方法
样品收集与处理
1. 确定采样点及采样时间，避免样品受到外界干扰。
2. 使用干燥及密闭的收集水样，并尽量防止样品受到氧气、光照和高温的影响。
3. 避免采样与外界环境接触，以防止二次污染的发生。
样品制备与预处理
1. 根据国家标准法的要求，将收集的水样进行适当的稀释，使其微生物数量在可测量的范围内。
2. 使用适当的培养基进行预处理，以促进微生物的生长。
微生物测定方法
1. 平板计数法：将经稀释处理的水样均匀地分布在培养基上，通过培养基固化后，计数形成的菌落数量，并据此推算出水样中微生物的浓度。
2. 膜过滤法：通过将水样通过细孔滤膜，然后将膜过滤板放置在含培养基的平板上，根据过滤后膜上菌落的数量计算水样中微生物的浓度。
结论
本文介绍了水中微生物的测定方法，基于国家标准法。
这些测定方法可以用于水质检测，评估水的卫生状况，以及相关的环境健康风险。
采样、制备和处理样品的正确操作，以及准确的测定方法选择，对于保证测定结果的可靠性至关重要。
平板菌落计数法水中微生物的检测
钟，每个平板上生长得到的菌落不超过15 个——无菌室
1、采样： 四、实验步骤
1）自来水：先将自来水龙头用酒精灯火焰灼 烧灭菌，再开水龙头使水流5min，以灭菌 采样瓶接取水样备用。
(2)池水、河水或湖水等地面水源水：在距岸边5米处， 取距水面10—15cm的水样，先将灭菌的带塞的采样瓶， 瓶口向下浸入水层中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水 即流入瓶中，盛满后，将平塞盖好，从水中取出，若不 能在2h内检测的，需放入4℃冰箱中保存。
1、样品充分混匀，稀释时一个稀释度要换一支无 菌移液管（放菌液时 吸管尖不要碰到液面
2、由于细菌易吸附玻璃器皿表面，菌液加入后应 尽快倒培养基，立即摇匀；
3、倾注平板时的培养基温度冷却至45℃左右。 4、计数时，30―300个菌落的稀释度计算每毫升
的菌数最为合适 5、同一稀释度的三个重复的菌数不能相差很悬殊
295
46
1.6
3 2890
271
60
2.2
4 无法计数 4650 513
___
5 27
11
5
___
6 无法计数 305
12
___
7 无法计数 无法计数 无法计数 ___
16400 37750 27100
1.6×104 3.8×104 2.7×104
513000 270 30500
5.1×105 2.7×102 3.1×104 10-3 无法计数
菌落计数方法及原则：
1）若只有一个稀释度的平均菌落数在30-300范围 时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告之。
2）若有两个稀释度，其生长的菌落数均在 30~300之间，则视二者之比值来决定，若 其比值小于2应报告两者的平均数。若大于 或等于2则报告其中较小的菌落总数。
微生物与水质检测
微生物与水质检测水是生命之源，对人类和其他生物而言，保持水质的安全和健康至关重要。
微生物在水质检测中起着至关重要的作用。
本文将探讨微生物在水质检测中的重要性以及常见的检测方法。
一、微生物与水质检测的重要性水质中的微生物可以直接或间接地影响人类健康。
例如，水中的细菌和寄生虫可以引起肠胃疾病，水中的藻类和细菌可以产生毒素，对周围环境和生物多样性产生不良影响。
因此，监测和评估水质中的微生物是确保公众健康和环境保护的关键环节。
二、常见的微生物检测方法1. 培养法培养法是最常用的微生物检测方法之一。
它涉及将水样品置于含有特定培养基的培养皿中，然后在恰当的温度、湿度和氧气条件下进行孵育。
随着时间的推移，如果水样中存在微生物，它们将在培养基上生长形成可见的生物群落。
2. PCR法聚合酶链反应（PCR）是一种灵敏且快速的微生物检测方法。
它利用水中微生物的DNA或RNA分子作为模板，在特定的温度环境下进行放大，从而使微生物的存在可以通过检测其特定的基因序列来确定。
3. 流式细胞仪流式细胞仪是一种高通量的微生物检测技术。
通过将水样中的微生物与荧光标记的抗体结合，流式细胞仪可以在短时间内准确地计数和鉴定微生物群落的成分。
4. 蛋白质分析法蛋白质分析法是一种基于水样中微生物蛋白质的定量和鉴定的方法。
通过分析水样中微生物的蛋白质组成，可以快速识别和鉴定微生物群落的类型和数量。
三、微生物检测的挑战和解决方案微生物检测在实践中面临一些技术和方法上的挑战。
首先，微生物群落的复杂性使得检测和识别变得困难。
其次，某些微生物可能存在背景噪声中，这可能会干扰检测结果的准确性。
为了克服这些问题，科学家们正在不断开发新的技术和方法，以提高微生物检测的敏感性和特异性。
其中一种解决方案是使用高通量测序技术。
通过对水样中微生物的DNA进行测序和分析，科学家们可以了解微生物群落的结构和功能，并对其进行定量和鉴定。
此外，一些新兴的技术如纳米生物传感器也显示出在微生物检测方面的潜力。
水中微生物的取样、检测及处理方法2024
引言：水中微生物是指存在于水体中的微生物种类，包括细菌、藻类、真菌等微生物。
它们在水体中具有重要的生态功能和环境影响，对水质的评估和监测具有重要意义。
本文旨在介绍水中微生物的取样、检测及处理方法，以帮助读者更好地理解和应用这些方法。
概述：水中微生物的取样、检测及处理是水环境监测的重要组成部分，在水资源管理、环境保护和水污染治理中起到关键作用。
准确、有效地进行水中微生物的取样、检测及处理对于判断水体是否受到微生物污染、评估水体生态健康状况具有重要意义。
本文将围绕水中微生物的取样方法、检测技术和处理方法展开讨论，以提供读者所需的专业知识。
正文内容：一、水中微生物的取样方法1.表面水样品的取样方法\t1.1.表层水样品的采集\t1.2.底层水样品的采集\t1.3.水体剖面取样方法2.地下水样品的取样方法\t2.1.井口取样法\t2.2.地下水位下降法\t2.3.地下水位抬升法3.沉积物样品的取样方法\t3.1.瓶采法\t3.2.气体驱动采样法\t3.3.容器示踪剂法二、水中微生物的检测技术1.传统微生物检测技术\t1.1.培养法\t1.2.电镜法\t1.3.染色法2.分子生物学检测技术\t2.1.PCR技术\t2.2.实时荧光定量PCR技术\t2.3.基因测序技术3.免疫学检测技术\t3.1.酶联免疫吸附试验（ELISA）\t3.2.免疫荧光分析技术\t3.3.免疫电泳技术三、水中微生物的处理方法1.混凝絮凝处理技术\t1.1.金属盐混凝剂处理法\t1.2.有机高分子絮凝剂法\t1.3.硝酸盐法混凝絮凝法2.过滤处理技术\t2.1.砂滤法\t2.2.膜过滤法\t2.3.离子交换法3.抗生素处理技术\t3.1.抗生素消毒法\t3.2.抗生素筛选法\t3.3.抗生素生物降解法四、水中微生物的监测与评估1.基于微生物指标的水质评价方法\t1.1.总大肠菌群指数测定法\t1.2.肠球菌体群指数测定法\t1.3.总菌落数测定法2.水中微生物的生态学指标\t2.1.生物多样性指数\t2.2.生物量指数\t2.3.功能状况指数3.进一步分析处理结果\t3.1.统计分析方法\t3.2.GIS技术\t3.3.模型模拟方法五、水中微生物的污染防治策略1.源头减排措施\t1.1.农田非点源污染治理\t1.2.工业废水治理\t1.3.城市雨水管理2.水体净化技术\t2.1.人工湿地技术\t2.2.高级氧化技术\t2.3.光催化技术3.微生物修复技术\t3.1.天然微生物修复技术\t3.2.基因工程微生物修复技术\t3.3.内源微生物修复技术总结：水中微生物取样、检测及处理方法的正确应用对于水环境管理与保护至关重要。
水质微生物的检测
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在某些情况下，水体中的细菌总数也可指示水体受粪便等污染物污染的情况。
这里的细菌总数其实是指营养琼脂培养后形成的菌落总数。
目前世界各国对于控制饮用水的卫生质量，除采用大肠菌群等指标外，一般还采用细菌总数这个指标。
我国GB5749-85《中华人民共和国国家标准生活饮用水卫生标准》中规定生活饮用水细菌总数每毫升不得超过100个。
二、水质微生物检验方法GB5750-85《中华人民共和国国家标准生活饮用水标准检验法》提供了水质中细菌总数和总大肠菌群的检测方法。
（一）细菌总数的检测：国家标准中，细菌总数是指1ml水样在营养琼脂培养基中，于37℃经24h培养后，所生长的细菌菌落的总数。
对生活饮用水，直接吸取1ml水样于平皿中，加入营养琼脂后混匀，37℃培养24h，进行计数。
对水源水，根据情况对样品进行10倍梯度稀释，选择适宜稀释液1ml，加注平皿，营养琼脂混匀，37℃培养24h，进行计数。
37℃生长时能度，120.1ml接种10三、说明：1100个，因此可以直接吸取1毫升到平板进行培养。
2．培养时间。
与食品中菌落计数不同，测定水中细菌总数，培养时间采用24h。
3．总大肠菌群的测定方法，由于饮用水和水源水可能的污染程度不同，因此采用不同的接种量，检数表也不相同。
4．当接种量超过1毫升时，一般采用多倍浓度培养液。
如配制3倍浓缩乳糖蛋白胨培养液50mL，加入100mL 水样后，总体积为150mL，培养液恢复到正常浓度。
5．滤膜法检测总大肠菌群，一般在检测较大量低浊度水样时采用，大量水样滤过滤膜后，水中所含有的所有细菌均截留在滤膜上。
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综合实验二：水中细菌总数和大肠菌群的测定
一、实验目的
1学习并掌握水样采集的方法、规则及注意事项；
2了解检查水中细菌总数和总大肠菌群的测定方法及检测意义；
3学习对所检测的水样作综合分析。
二、实验原理
1.水体的微生物污染问题日趋严重：
在各种水体，特别是污染水体中存在有大量有机物质，适于各种微生物的生长；
水中的微生物污染来源：土壤，以及人类、动物的排泄物污染；
水体中少数致病微生物（主要来自人或动物的粪便污染）可导致某些肠道传染病传播。
2.水微生物检测可用于评价水质情况，预报水质的污染趋势，以保证水质的卫生安全。
在实际工作中，对水质卫生质量的评价和控制，是无法对水体中各种可能存在的致病性微生物一一进行检测。
一般选择有代表性的一种或一类微生物作为指示菌，通过对指示菌的检测，来了解水体是否受到过的微生物污染，是否有肠道病原微生物存在的可能。
3.水微生物的监测指标：
⑴菌落总数
①是指1ml水样在营养琼脂培养基中，于37℃经24h培养后，所生长的细菌菌落的总数。
②检测意义：作为一般性污染的指标，即评价被检样品的微生物污染程度和安全性。
水样菌落总数越多，说明水被微生物污染程度越严重，病原微生物存在的可能性越大，但不能说明污染的来源。
⑵总大肠菌群
①是指一群需氧及兼性厌氧的，37℃生长时能使乳糖发酵，在24h内产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
②检测意义：作为粪便污染的指标。
水样总大肠菌群数的含量，表明水被粪便污染的程度，而且间接地表明有肠道致病菌存在的可能。
4.多管发酵法测定总大肠杆菌群
⑴初发酵试验：采用乳糖蛋白胨培养液37℃培养24h，观察产酸产气情况，产酸产气说明水中存在大肠菌群，为阳性结果。
但是，有个别其他类型细菌在此条件下可能产气，而不属于大肠菌群；产酸不产气的发酵管，也不一定是非大肠菌群，因其量少，可能延迟48 h后产气，这两种视为可疑结果，需进行下面的实验，才能确定是否是大肠菌群。
⑵平板分离：对阳性管培养物及假阳性管培养物，接种于伊红美蓝培养基，观察菌落特征，将符合大肠菌群菌落特征的菌落并进行革兰氏染色和镜检，只有染色为革兰式阴性、无芽孢杆菌的菌落才是大肠菌群菌落。
⑶复发酵证实试验：将以上两次实验已证实为大肠菌群阳性的菌群，接种于乳糖蛋白胨培养液，进行复发酵证实试验，经24 h培养产酸又产气的，最终确定为大肠菌群阳性结果。
最后，根据确定有大肠菌群存在的初发酵管（瓶数目），查阅专用统计表，得出总大肠菌指数。
三、实验用品
1.溶液及试剂：
蛋白胨、Nacl、20%乳糖、2%伊红水溶液、0.5%美兰水溶液、牛肉膏、1.6%溴甲酚紫乙醇溶液、草酸铵结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、番红复染液、蒸馏水、NaOH溶液、HCl溶液等
2.仪器和其他用品：
试管、德汉式小管、三角瓶、注射器、搪瓷缸、培养皿、载玻片、电磁炉、玻璃棒、移液管、酒精灯、接种环、试管架、恒温培养箱、灭菌锅、显微镜等
四、实验内容及步骤
1.培养基配制
一倍乳糖蛋白胨培养液三倍乳糖蛋白胨培养液
蛋白胨2g 6g
牛肉膏0.6g 1.8g
乳糖 1 g 3g
NACL 1g 3g
1.6%溴甲酚紫乙醇溶液0.2ml 0.6ml
蒸馏水200ml 200ml
⑴将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及NaCl加热溶解于蒸馏水中，调PH至7.2~7.4，加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液，分装于试管和三角瓶中（初发酵试管10支各5ml,初发酵三角瓶2个各50ml;复发酵试管12支各5ml），并加入德汉式小管。
115℃灭菌20min.
伊红美兰培养基
蛋白胨2g
NACL 1g
蒸馏水200ml
20%乳糖4ml
2%伊红水溶液4ml
0.5%美兰水溶液2ml
⑵将蛋白胨、NACL加入蒸馏水加热溶化，再加入乳糖、伊红水溶液、美兰水溶液。
摇匀后，115℃灭菌20min。
灭菌后稍加冷却，无菌操作倒平板12个，每个培养皿约15ml。
2.自来水采样
先将自来水龙头用火焰烧灼3min灭菌，再开放水龙头使水流5 min（经常用水的水龙头放水1～3min）后，采集水样于无菌锥形瓶，约占瓶容量80%，以便摇匀水样。
3.初发酵试验
在2个含50ml3倍浓缩的乳糖蛋白胨发酵烧瓶中，各加入100ml水样。
在10支含有5ml 3倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管中，做好标记，各加入10ml水样，混匀后，37℃培养24h，24h 未产气的继续培养至48h。
4.平板分离
将24h培养后产酸产气和48h培养后产酸产气的发酵管，分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板上，再于37℃下培养18-24h，将符合下列特征菌落：深紫黑色，有金属光泽；紫黑色，不带或略带金属光泽；淡紫红色，中心颜色较深，其中的一小部分，进行涂片，革兰氏染色，镜检。
5.复发酵试验
经涂片、染色、镜检，如果是革兰氏阴性无芽孢杆菌，则挑取该菌落的另一部分，重新接种于普通浓度的乳糖蛋白胨发酵管中，每管可接种来自同一发酵管的同类型菌落1-3个，37℃培养24h，实验结果若产酸又产气，即证实有大肠杆菌群存在。
证实有大肠杆菌群存在后，再根据初发酵实验的阳性管数查表，即得总大肠杆菌群。
五、注意事项
1.当接种量超过一毫升时，一般采用多倍浓度培养液。
如配制3倍浓缩乳糖蛋白胨培养液50ml，加入100ml水样后，总体积为150ml，培养液恢复到正常浓度。
2.做好标记。
3.注意无菌操作，避免杂菌污染，影响检测结果。
六、实验结果与分析
1.初发酵
（注：1-2为三角瓶，100ml水样；3-12为试管，10ml水样）
3.复发酵：7号菌群复发酵结果：产酸又产气，最终确定为大肠杆菌菌群阳性结果。
4.结果分析：
100ml水样的阳性管数：0，10ml水样的阳性管数：1。
根据总大肠菌群检数表，查得每升水样中总大肠菌群为3，符合我国饮用水标准。
（每升水中总大肠菌群≤1000）。