生活饮用水微生物指标检验.

（二）水源水
• [器材与试剂]
– 无菌1ml吸管6支/组，无菌10ml吸管1支/组。 – 无菌平皿9个/组，营养琼脂。 – 90ml灭菌盐水1瓶（内置适量玻璃珠），9ml
灭菌盐水管3支。
• [方法]
– 稀释水样： • 无菌吸10ml混匀水样注入90ml灭菌水瓶中, 混匀成1:10水样。 • 取1:10水样1ml注入9ml灭菌试管中混匀成 1:100水样。同法稀释成1:1000, 1:10000 水样。
• 在实际工作中，对水质卫生质量的评价和控制，是无法对 水体中各种可能存在的致病微生物一一进行检测。
• 一般选择有代表性的一种或一类微生物作为指示菌，通过 对指示菌的检测，来了解水体是否受到过的微生物污染， 是否有肠道病原微生物存在的可能。
水微生物的检测指标
• 菌落总数(aerobic bacterial count) – 是指1ml水样在营养琼脂培养基中，于37℃经48h 培养后，所生长的细菌菌落的总数。 – 检测意义：作为一般性污染的指标，即评价被检 样品的微生物污染程度和安全性。水样菌落总数 越多，说明水被微生物污染程度越严重，病原微 生物存在的可能性越大，但不能说明污染的来源。
微生物指标常规检验流程
水样
总大肠菌群
菌落总数
报告
报告
耐热大肠菌群 或大肠埃希氏菌
报告
一、水样采集
• 采样原
– 采样容器：选择无菌硼硅玻璃瓶和聚乙烯塑料瓶。
• 不能是新的污染源；不吸收或吸附某些待测组分； 不与待测组分发生反应。保证从采样到分析期间， 样品各组分的浓度不发生改变。
距水面下10～15cm采样。采样后，将瓶塞盖好，再从水中 取出。
水样采集
• 注意事项
– 严格无菌操作。 – 做好标记：采得水样后应立即记录水样名称、
地点、时间等内容。 – 从速送检。水样从采集到检验不应超过2h，在
4℃下保存不应超过24h。
实验前准备
1、灭菌吸管 10mL、1mL刻度吸管分别包好，160℃干烤2h灭 菌
• [方法]
– 倾注培养： • 用1ml无菌吸管吸取2~3个适当浓度的稀释液 1ml,分别注入无菌平皿中，每个稀释度应同时 做2个平皿，另取一平皿作空白对照。再做倾 注培养(方法同饮用水)。
– 菌落计数：方法同饮用水。
菌落总数测定
菌落总数平板计数法
• [结果分析与报告]
– 计算不同稀释度的平均菌落数： – 稀释度的选择和菌落总数报告方式：
– 微生物样品必须按一般无菌操作的基本要求采集，并保 证在运送、贮存过程中不受污染。
水样采集
• 自来水水样：先将自来水龙头用火焰烧灼3min灭菌，
再开放水龙头使水流5 min（经常用水的水龙头放水1～ 3min）后，采集水样于无菌玻璃瓶，约占瓶容量80%，以便 摇匀水样。
• 水源水水样：选有代表性的地点及可疑地方，一般
耐热大肠菌群
耐热大肠菌群（thermotoletant Coliform Organisms）：
在44～44.5℃下具有与大肠菌群相同发酵 及生物化学性能的菌群。
注意：我国习惯上把耐热大肠菌群称为 “粪大肠菌群”。
实验内容
– 水样采集； – 菌落总数的测定； – 总大肠菌群的测定; – 耐热大肠菌群的测定。
平行样 空白样
平皿
1mL水 源 水 水 样
10倍 系列稀释
50℃ 营养琼脂
36±1℃ 培 养 48h
计数
菌落总数平板计数法
– [方法]
• 水样摇匀20次左右，使细菌分散。
• 倾注培养：无菌吸取1ml水样分别置于2个空 平皿，另一个作空白对照。再倾注15ml琼脂 （约45℃）于平皿中旋转，混匀待琼脂凝固 后倒置37℃48h。
水微生物检测的意义
• 水体的微生物污染问题日趋严重。 – 在各种水体，特别是污染水体中存在有大量的有机物质， 适于各种微生物的生长。 – 水体中微生物污染的来源：土壤，以及人类、动物的排 泄物污染。 – 水体中少数致病微生物（主要来自人或动物的粪便污染） 可导致某些肠道传染病传播。
• 水微生物检测可用于评价水质情况，预报水质的污染趋势， 以保证水质的卫生安全。
水质微生物的检测指标
• 总大肠菌群(coliform bacteria) – 是指一群需氧及兼性厌氧的，37℃生长时能使 乳糖发酵，在24h内产酸产气的革兰氏阴性无芽 胞杆菌。 – 检测意义：作为粪便污染的指标。水样总大肠 菌群数的含量，表明水被粪便污染的程度，而 且间接地表明有肠道致病菌存在的可能。
• 菌落计数：用肉眼或放大镜检查，计数平皿 内菌落数目。
菌落总数平板计数法
• [结果分析与报告]
– 计算平均菌落数： – 报告方式：菌落总数(cfu/ml)。 cfu：colony forming units
• 当检样的菌落数为l~100时，按实有数报告；大于100 时，采用二位有效数字报告。
– 国家标准（GB5749-2006）规定生活饮用水菌 落总数每毫升不得超过100个。
• 首先选择平均菌落在30～300之间者进行计 算。
2、9mL灭菌生理盐水 3、相应的灭菌培养基 4、检验前 ，无菌室及超净台用紫外线灯照射
30min
菌落总数
• 定义：
•
是指水样在营养琼脂上有氧条件下37℃培养
48h后，所得1mL水样所含细菌菌落的总数 。
• 培养基： • 营养琼脂
• 设备： • 放大镜/菌落计数器
菌落总数平板计数法
1mL饮 用 水 水 样
菌落总数 贾第鞭毛虫
隐孢子虫
单位
MPN/100mL或 CFU/100mL
MPN/100mL或 CFU/100mL
MPN/100mL或 CFU/100mL
CFU/mL
个/10 L
个/10 L
限值 不得检出 不得检出 不得检出
100 <1 <1
说明 一般性污染 指示粪便污染 指示粪便污染 一般性污染
肠道原虫 肠道原虫
生活饮用水 微生物指标检验
• 检测依据：GB 5750-2006 《生活饮用水卫生检验规范》
实验目的与要求
– 掌握水样采集规则及注意事项。 – 熟悉常用水卫生细菌学指标。 – 熟悉菌落总数、大肠菌群、耐热大肠菌
群的测定方法及检测意义。 – 学会对所检测的水样作综合分析。
生活饮用水中微生物指标
项目 总大肠菌群 耐热大肠菌群 大肠埃希氏菌