微生物细胞大小与数量的测定
微生物量微生物大小及数量的测定
微生物大小及数量的测定一、实验目的1.学习并掌握用测微尺测定微生物细胞大小的方法。
2.了解血细胞计数板的构造及计数原理。
3.掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。
二、实验原理1.微生物大小测定原理微生物细胞的大小是微生物的形态特征之一，也是分类鉴定的依据之一。
其测量工具有目镜测微尺和镜台测微尺。
镜台测微尺是中央部分刻标准刻尺的载玻片，其尺度总长为1mm，精确分为10个大格，每个大格又分为10个小格，共100小格，每一小格长度为0.01mm，即10μm。
如图1。
图1镜台测微尺中央部分及镜台测微尺校正目镜测微尺目镜测微尺，如图2，是一块可放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，一般有等分为50小格和100小格两种。
测量时，需将其放在接目镜中的隔板上，用以测量经显微放大后的细胞物象。
由于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大倍数不同，目镜测微尺每小格在不同条件下所代表的实际长度也不一样。
图2目镜测微尺2.血球计数板测定微生物数量的原理血细胞计数板是一块特制的载玻片，其上由4条槽构成3个平台。
中间较宽的平台又被一段横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分9个大方格，中间的大方格即为计数室。
计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16小方格（图5-2）；另一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格，但无论是哪一种规格的计数板，每一个大方格中的小方格都是2400个。
每一个大方格边长为1mm，则每一个大方格的面积为1mm，盖上盖玻片后，盖玻片3与载玻片之间的高度为0.1mm，所以计数室的容积为0.1mm（10-4mL）。
以25个中方格的计数板为例，设5个中方格中的总菌数为A，菌液稀释倍数为B，则：1mL菌液中的总菌数=A/5×25×10×B图3血球计数板侧面及两种类型的计数室三、实验1.菌种枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)斜面培养物；酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)液体培养基培养物。
6细胞大小测定及数量测定
微生物： 实验目的： 掌握细胞大小的测定方法和计数板测定细胞数量的方法 实验材料： 二、实验材料： 1、菌种：酿酒酵母 、菌种： 2、器材：显微镜、血球计数板、镜台测微尺、目镜测微尺 、器材：显微镜、血球计数板、镜台测微尺、 实验内容： 三、实验内容： 1、测定微生物细胞的大小 、 2、微生物细胞的显微直接计数法 、 实验步骤： 四、实验步骤： （一）微生物细胞大小测定 1、目镜测微尺的校正 、 镜台测微尺有刻度的一面朝上，置显微镜载物台上（ 镜台测微尺有刻度的一面朝上，置显微镜载物台上（目镜测微尺已在显微镜筒 ），先 下目镜测微尺的校正值。 中），先10x，后40x，计算 ， ，计算40x下目镜测微尺的校正值。镜台测微尺放入盒中。 下目镜测微尺的校正值 镜台测微尺放入盒中。 2、细胞大小的测量 、 于载玻片滴加酵母菌悬液1滴 加盖玻片，用目镜测微尺测量细胞大小（宽和长） 于载玻片滴加酵母菌悬液 滴，加盖玻片，用目镜测微尺测量细胞大小（宽和长） （二）细胞数量测定 先将大盖玻片盖在血球计数板上，再从盖玻片边缘将酵母菌悬液滴入计数室（或者， 先将大盖玻片盖在血球计数板上，再从盖玻片边缘将酵母菌悬液滴入计数室（或者， 在计数区滴加菌悬液后再盖上盖玻片）。于10X找到计数区，再调至40X，适当减弱 在计数区滴加菌悬液后再盖上盖玻片）。于 找到计数区，再调至 ， ）。 找到计数区 光强，计数（统计5个大格中的酵母菌数量 个大格中的酵母菌数量）。 光强，计数（统计 个大格中的酵母菌数量）。
五、作 业 （一）微生物细胞大小测定 1、在40x下，目镜测微尺 相当， 、 下 目镜测微尺____格与镜台测微尺 ____相当，故目镜测微尺 格＝ ____ 格与镜台测微尺 相当 故目镜测微尺1格 2、酵母菌大小 、
1 长（格） 宽（格） 2 3 4 5 6 7 8 9 10 平均格数 平均长度 微米） （微米）
微生物大小测定及计数
2、在不改变目镜和目镜测微尺，而改用不同放大倍数的物镜来测定同一菌体大小时，其测定结果是否相同，为什么？
答：测定结果不相同。因为在不同倍数的目镜下，细菌大小发生变化，而目镜测微尺每格大小不变，所以测定结果不同。
四、仪器和其他用品：载玻片、盖玻片、显微镜、镊子、接种环、血球计数板、显微测微尺、滴管、酒精灯
五、操作步骤：
1、微生物大小的测定
（1）取下显微镜右目镜，将目镜测微尺放在目镜镜筒内的隔板上，然后放上目镜透镜，将目镜装回镜筒。
（2）校正目镜测微尺：在低倍镜下调节焦距，当清晰看到镜台测微尺的刻度后，用推进器移动镜台测微尺，使两尺在某一区域内两线完全重合，然后分别输出两重合线之间镜台测微尺和目镜测微尺所占的格数。
（2）将血球计数板盖上盖玻片，用无菌毛细管吸取少量摇匀的酿酒酵母菌液，滴在盖玻片的一个顶点，待菌液从盖玻片另一对角流出为满。
（3）先在低倍镜下找到计数室，再用高倍镜计数。每小格内的菌数不能超过8个为宜。当每小格内的菌数过多时，适当稀释。
（4）任选5个中格计数（5个中格不可以挨着；酵母菌出芽计1个菌体；计数时，位于边线上的细胞，记上不记下，计左不计右）
（3）用同样的方法在高倍镜下和油镜下进行校正。并计算目镜测微尺每小格所代表的实际长度。
（4）制酵母菌玻片：用接种环取菌在蒸馏水中涂抹，加热干燥，用美兰染色1’30”，流水脱色，自然干燥。
（5）先在低倍镜和高倍镜下找到菌株，再在油镜下测出酵母菌的长度和宽度。重复3次并记下平均值。
2、酵母菌的显微计数
（1）将血球计数板洗净，再用95%乙醇棉球擦洗，自然干燥。
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微生物大小及数量测定
一、实验目的：
微生物实验微生物数量和大小测定
目镜测微尺 镜台测微尺
1.利用镜台测微尺 测定目镜测微尺旳 每格绝对值
2.目镜测微尺每格 长度（um）＝两 重叠线间镜台测微 尺格数×10/两重 叠线间目镜测微尺 格数
测定细胞数量旳常用措施 ➢稀释平板计数法 对样品稀释培养，据形成旳菌落数计数。 优点：活菌计数措施，对设备要求不高。 缺陷：操作复杂。
➢显微镜直接计数法 使用血球计数板在显微镜下直接计数。 优点：操作简便，计数直观。 缺陷：计数成果为活细菌和死菌体旳总和。
➢光电比浊法
光电比浊法是利用在一定旳范围内，微生物细 胞浓度与透光度成反比旳原理。当细菌细胞在 溶液中数量越多，浊度越大，在光电比色计中 测定时所吸收旳光线越多。
2、细胞大小旳测量
酵母菌悬液滴在载玻片上，盖上盖玻片，置显微镜 载物台上。用目镜测微尺测量细胞宽和长。
三、试验成果
1.计算出目镜测微尺校正成果（物10×和40×） 2.酵母菌大小测定酵母菌大小测定,选择5-8个 酵母菌，测定其40×大小范围。
四、思索题 p51 2(2)
试验(二) 微生物数量旳测定
微生物实验微生物数 量和大小测定
试验(一) 微生物大小旳测定
一、目旳要求
学习使用镜台测微尺和目镜测微尺；在显微镜下测定微生 物大小。
二、试验原理
镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线旳载玻 片，一般是l mm等分为100格，每格长0.01 mm(即10 um) ，用于校正目镜测微尺每格旳相 对长度。
一、目旳要求
1、明确血细胞计数板计数旳原理。 2、掌握使用血细胞计数板进行微 生物计数旳措施。
微生物大小的测定报告
微生物大小的测定报告微生物大小的测定报告微生物是生物界中一类非宏观、非个体、非生物和非细胞的微小生物的总称。
它们具有体积小、数量大、分布广、种类多、生命力旺盛等特点，与人类的生产、生活密切相关。
微生物大小的测定是微生物学研究中的一项基本技术，对于了解微生物的种类、生长和繁殖等方面具有重要意义。
本文将详细介绍微生物大小的测定方法、测定步骤以及结果分析等方面的内容。
一、测定方法微生物大小的测定方法有很多，如显微测量法、压滤法、离心法等。
其中，显微测量法是最常用的一种方法，其原理是利用显微镜对微生物的大小进行直接测量。
具体步骤如下：1.准备显微镜、血球计数板、盖玻片、吸管等实验器材。
2.用吸管吸取一定量的微生物培养液，轻轻滴在血球计数板上，然后盖上盖玻片。
3.在显微镜下观察并计数，记录每个视野中的微生物数量和大小。
4.重复以上步骤多次，求平均值，即可得到微生物的平均大小。
二、测定步骤1.准备试剂和器材（1）试剂：无菌水、生理盐水、无菌玻璃珠、无菌平皿等。
（2）器材：移液器、无菌吸管、无菌涂布器、无菌镊子、电子天平等。
2.制备菌悬液（1）用电子天平称取适量的细菌干粉，加入无菌生理盐水，摇匀。
（2）用移液器吸取上述菌悬液，加入无菌平皿中，加入无菌玻璃珠，摇匀。
（3）用无菌涂布器将上述菌悬液涂布到平皿表面，静置片刻，让细菌贴壁生长。
3.测定菌落大小（1）在上述平皿中加入无菌水，让水面覆盖平皿表面。
（2）用无菌镊子将平皿翻转，让细菌接种到无菌水表面，涂布均匀。
（3）静置约30分钟，让细菌形成单个菌落。
（4）用游标卡尺测量每个菌落的大小，记录数据。
4.数据处理和分析（1）对每个平皿中的菌落数量和大小进行统计，求出平均值。
（2）将平均值与对照组进行比较，判断细菌的生长情况。
三、结果分析通过上述测定步骤，我们得到了微生物的大小数据。
根据数据可以得出以下结论：1.同一时间内，不同微生物的大小有差异。
例如，细菌和原生动物的大小相差很大，这与它们的生物学特性有关。
微生物大小的测定及数量的测定
微生物的大小测定与数量的测定一、实验目的1．学习了解测微尺的结构，掌握测定微生物大小的方法。
2．观察酵母菌的形态，掌握鉴别死活酵母菌的方法。
3．学习了解血球计数板的结构，掌握微生物数量测定的方法。
二、实验内容1．在低倍镜和高倍镜下求出目镜测微尺的校正值。
（1）目镜测微尺和镜台测微尺目镜测微尺是一块圆形玻片，在玻片的中央刻有一小尺，它是在 5 毫米内作50 等分刻制的，每一等份为0.1 毫米。
另一规格是 5 毫米作100 等分，每等分为0.05毫米。
镜台测微尺是刻在载玻片中央的小尺，它是在1 毫米内作100 等分刻成的，每等分10 微米。
（2）目镜测微尺校正的方法将镜台测微尺上面的透镜片取下，把目镜测微尺放在光阑上，刻度朝下。
把镜台测微尺置于载物台上，用低倍物镜检视，使测微尺位于视野中央。
注意区分视野内两把尺哪个是目镜测微尺，哪个是镜台测微尺。
利用推进器或转动目镜使两尺的第一条线（0 线）互相重合，然后找出另一条重合线。
如重合线较多选取距0 线最远的重合线。
记下两条重合线之间两尺的刻度，依公式算出目镜测微尺的校正值。
目镜测微尺校正值（每刻度微米数）= 两重叠刻度间镜台测微尺格数×10两重叠刻度间目镜测微尺格数2．用美兰水浸片法观察酿酒酵母（saccharomyces cerevisiac）的形态，注意出芽繁殖和死活酵母菌的染色形态，并测量大小。
3．用血球板计算黑曲霉孢子的数量。
（1）血球计数板3．用血球板计算黑曲霉孢子的数量。
（1）血球计数板利用血球计数板在显微镜下直接计数是一种常见的微生物计总数的方法。
因为计数板载片和盖片间的容积一定，所以可以根据显微镜下观察到的微生物数目来计算单位体积内微生物总数。
血球计数板是一只特制载玻片。
载片上有两个方格网，每一方格网共分九个大方格，其中间的一个大方格用来做微生物计数，所以又称为计数室。
计数室的刻度一般有两种，一种是每个大方格分成16 个中方格，每中方格又分成25个小方格。
微生物学实验5 酵母菌细胞总数和大小的测定
2022/9/12
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三．实验原理
➢ 利用血球计数板进行微生物计数的原理？ 总菌数（个/ml）＝5×104 A·B A：5个中方格中的总菌数，B：稀释倍数（＝1） ；
➢ 利用接目测微尺测定微生物大小的原理？
接目测微尺每格长度（mm）=10n/m n：两重合线间镜台测微尺格数 m：两重合线间接目测微尺格数
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四．实验内容
1. 利用血球计数板对所给酵母培养液进行计数：上下两 个计数室各计数一次
2. 微生物大小测定 ➢ 40 ×10放大系统下对接目测微尺进行标定； ➢ 在同样放大系统下测定所给酵母细胞大小：要求测定
10个细胞长和宽
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五. 实验结果报告与思考题
1. 计数：将2个计数室结果分别填入P14的表中，并按公式 计算菌体细胞浓度：
2. 大小测定
➢ 接目测微尺标定结果：高倍镜下两重合线间镜台测微
尺 格、目镜测微尺
格；
目镜测微尺每小格实际长度为
μm。
➢ 10个细胞测定结果填入 P17的表中，计算酵母细胞大小 的范围及平均值（宽×长）
3. 思考题：讲义P14 2，3； P17 3
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实验五 酵母菌细胞总数和大小的数板进行微生物计数的方法。 2. 学习并掌握接目测微尺的标定方法及微生物大小的测
定方法，增强微生物细胞大小的感性认识。
二．实验材料
1. 菌种：啤酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）菌悬液 2. 其他：血球计数板，接目测微尺，镜台测微尺，显微
微生物大小与数量的测定实验报告
微生物大小与数量的测定实验报告一、实验目的本次实验旨在掌握使用显微镜测量微生物大小的方法，以及学会运用血球计数板对微生物数量进行测定。
通过实验操作和数据处理，深入了解微生物的形态特征和种群密度，为后续的微生物学研究打下基础。
二、实验原理（一）微生物大小的测定微生物细胞的大小是微生物的基本特征之一。
使用显微镜测微尺可以较为准确地测量微生物细胞的长度、宽度和直径等参数。
显微镜测微尺包括目镜测微尺和镜台测微尺。
目镜测微尺是一块可放在目镜内的圆形小玻片，上面刻有刻度；镜台测微尺是一块特制的载玻片，中央有精确的刻度，用于校正目镜测微尺。
（二）微生物数量的测定血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物数量的工具。
它由一块特制的厚玻璃片制成，玻片上有四个槽构成三个平台。
中间的平台又被一短横槽隔成两半，每半边上面各刻有一个方格网。
方格网上刻有 9 个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室。
计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成 16 个中方格，而每个中方格又分成 25 个小方格；另一种是一个大方格分成 25 个中方格，而每个中方格又分成 16 个小方格。
但无论哪种规格，每个大方格的边长均为 1 毫米，盖上盖玻片后，计数室的容积是一定的。
因此，在一定体积的菌液中，通过计算微生物在计数室中的数量，就可以换算出菌液中微生物的数量。
三、实验材料与仪器（一）材料枯草芽孢杆菌、酿酒酵母的菌悬液。
（二）仪器显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、血球计数板、盖玻片、滴管、擦镜纸、吸水纸等。
四、实验步骤（一）微生物大小的测定1、安装目镜测微尺将目镜测微尺装入目镜的隔板上，注意有刻度的一面朝下。
2、校正目镜测微尺（1）将镜台测微尺置于载物台上，先用低倍镜观察，找到镜台测微尺的刻度线。
（2）移动镜台测微尺，使镜台测微尺与目镜测微尺的刻度线平行，并使两者的“0”刻度线重合。
（3）换用高倍镜观察，找出两尺再次重合的刻度线。
分别记录目镜测微尺和镜台测微尺在重合线段内各自的格数。
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微生物细胞大小与数量的测定一、实验目的1.了解显微镜测定微生物大小与血球计数板测定微生物数量的原理。
2.学习并掌握显微镜下测定微生物细胞大小的技术，包括目镜测微尺、镜台测微尺的校正技术与测定细胞大小的技术。
3.了解血球计数板的结构，学习并掌握血球计数板计数微生物数量的技术，包括样品的点样、菌数计数的方法与计算。
二、实验原理1.微生物大小测定原理微生物细胞的大小，是微生物重要的形态特征之一，也是分类鉴定的依据之一。
由于菌体很小、只能在显微镜下来测量。
用于测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。
（1）目镜测微尺目镜测微尺是一块圆形玻片，在玻片中央把5mm长度刻成50等分，或把10 mm长度刻成100等分。
测量时，将其放在接目镜中的隔板上(此处正好与物镜放大的中间像重叠)来测量经显微镜放大后的细胞物象。
由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。
图 1 目镜测微尺（2）镜台测微尺镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般将lmm等分为100格，每格长l0μm（即0.0lmm），是专门用来校正目镜测微尺的。
校正时，将镜台测微尺放在载物台上，由于镜台测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要经过物镜和目镜的两次放大成象进入视野，即镜台测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大，因此从镜台测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小，所以用镜台测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表的长度，然后移去镜台测微尺，换上待测标本片，用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物大小。
图2 镜台测微尺2.显微镜计数法测定微生物的原理显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上(又称计菌器)，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。
目前国内外常用的计菌器有：血细胞计数板、Peteroff-Hauser计菌器以及Hawksley计菌器等，它们都可用于酵母、细菌、霉菌孢子等悬液的计数，基本原理相同。
后两种计菌器由于盖上盖玻片后，总容积为0.02立方毫米，而且盖玻片和载波片之间的距离只有0.02mm，因此可用油浸物镜对细菌等较小的细胞进行观察和计数。
除了用这些计菌器外，还有在显微镜下直接观察涂片面积与视野面积之比的估算法，此法一般用于牛乳的细菌学检查。
显微镜直接计数法的优点是直观、快速、操作简单。
但此法的缺点是所测得的结果通常是死菌体和活菌体的总和。
目前已有一些方法可以克服这一缺点，如结合活菌染色微室培养（短时间）以及加细胞分裂抑制剂等方法来达到只计数活菌体的目的。
本实验以血球计数板为例进行显微镜直接计数。
另外两种计菌器的使用方法可参看各厂商的说明书。
用血细胞计数板在显微镜下直接计数是一种常用的微生物计数方法。
该计数板是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台；中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各列有一个方格网，每个方格网共分为九个大方格，中间的大方格即为计数室。
计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格；另一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格，但无论是哪一种规格的计数板，每一个大方格中的小方格都是400个。
每一个大方格边长为lmm，则每一个大方格的面积为l平方毫米，盖上盖玻片后，盖玻片与载玻片之间的高度为0.lmm，所以计数室的容积为0.l立方毫米(万分之一毫升)。
计数时，通常数五个中方格的总菌数，然后求得每个中方格的平均值，再乘上25或16，就得出一个大方格中的总菌数，然后再换算成lmL菌液中的总菌数。
设五个中方格中的总菌数为A，菌液稀释倍数为B，如果是25个中方格的计数板，则1mL菌液中的总菌数=A/5×25×10000×B=50000A•B（个）同理，如果是16个中方格的计数板，1mL菌液中的总菌数=A/5×16×10000×B=32000A•B（个）a.平面图(中间平台分为两半，各半边有一个方格网)b.侧面图(中间平台与盖玻片之间有高度为0.1毫米的间隙)图3 血球计数板计数网的分区和分格图4 血球计数扳的构造三、实验材料1.仪器显微镜，目镜测微尺，镜台测微尺，血球计数板、盖玻片（22mm×22mm）、吸水纸、计数器、滴管、擦镜纸，酒精灯2.材料酵母菌液3．试剂蒸馏水等四、实验步骤流程：（1）置目测微计→置台测微计→标定目测微计→测菌体大小→记录结果→用毕擦拭干净（2）稀释样品→检查计数板→加样→计数→计算→清洗1．目镜测微尺的校正把目镜的上透镜旋下，将目镜测微尺的刻度朝下轻轻地装入目镜的隔板上，把镜台测微尺置于载物台上，刻度朝上。
先用低倍镜观察，对准焦距，视野中看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行，移动推动器，使两尺重叠，再使两尺的“0”刻度完全重合，定位后，仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度，计数两重合刻度之间目镜测微尺的格数和镜台测微尺的格数。
因为镜台测微尺的刻度每格长l0μm，所以由下列公式可以算出目镜测微尺每格所代表的长度。
用同法分别校正在高倍镜下和油镜下目镜测微尺每小格所代表的长度。
（注意：由于不同显微镜及附件的放大倍数不同，因此校正目镜测微尺必须针对特定的显微镜和附件（特定的物镜、目镜、镜筒长度）进行，而且只能在特定的情况下重复使用，当更换不同放大倍数的目镜或物镜时，必须重新校正目镜测微尺每一格所代表的长度；观察时光线不宜过强，否则难以找到镜台测微尺的刻度：换高倍镜和油镜校正时，务必十分小心，防止接物镜压坏镜台测微尺和损坏镜头。
）2．菌体大小的测定(1)将酵母菌斜面制成一定浓度的菌悬液。
(2)取一滴酵母菌菌悬液制成水浸片。
(3)移去镜台测微尺，换上酵母菌水浸片，先在低倍镜下找到目的物，然后在高倍镜下用目镜测微尺来测量酵母菌菌体的直径占几格（不足一格的部分估计到小数点后一位数）。
测出的格数乘上目镜测微尺每格的校正值，即等于该菌的直径。
（注意：一般测量菌体的大小要在同一个标本片上测定10—20个菌体，求出平均值，才能代表该菌的大小。
而且一般是用对数生长期的菌体进行测定。
）3. 细菌数量的测定(1)菌悬液制备以无菌生理盐水将酿酒酵母制成浓度适当的菌悬液，取六只试管10-1为梯度进行稀释，形成六个浓度的菌悬液并标号。
(2)镜检计数室在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。
若有污物，则需清洗，吹干后才能进行计数。
(3) 加样品将清洁干燥的血细胞计数板盖上盖玻片，再用无菌的毛细滴管将摇匀的酿酒酵母菌悬液（10-2）由盖玻片边缘滴一小滴，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室，一般计数室均能充满菌液。
（注意：取样时先要摇匀菌液；加样时计数室不可有气泡产生。
）（4）显微镜计数加样后静止5min，然后将血细胞计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数室所在位置，然后换成高倍镜进行计数。
在计数前若发现菌液太浓或太稀，需重新调节稀释度后再计数。
一般样品稀释度要求每小格内约有5~10个菌体为宜。
每个计数室选5个中格(可选4个角和中央的一个中格)中的菌体进行计数。
位于格线上的菌体一般只数上方和右边线上的。
如遇酵母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时，即作为两个菌体计数。
计数一个样品要从两个计数室中计得的平均数值来计算样品的含菌量。
（5）清洗血细胞计数板使用完毕后，将血细胞计数板在水龙头用水冲洗干净，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用吹风机吹干。
镜检，观察每小格内是否有残留菌体或其他沉淀物。
若不干净，则必须重复洗涤至干净为止。
五、实验结果酵母大小（直径）值＝4.39μm——10.25μm六、思考题1、什么更换不同放大倍数的目镜和物镜时，必须用镜台测微尺重新对目镜测微尺进行校正？答：由于不同显微镜及附件的放大倍数不同，因此校正目镜测微尺必须针对特定的显微镜和附件（特定的接物镜、接目镜、镜筒长度等）进行，而且只能在这特定的情况下重复使用，故当更换不同放大倍数的目镜或物镜时，必须重新校正目镜测微尺每一格所代表的长度。
2、在不改变目镜和物镜测微尺，而改变不同放大倍数的物镜来测定同一细菌的大小时，其测定结果是否相同？为什么？答：理论上是相同的。
因为测量出来的值是它的实际大小，是不变的，而物境倍数的改变的同时，测微尺的目测间隔也改变，但读数不变。
但是不同倍数下校正结果可能会有误差，因此结果也会有误差。
3结合你的实验体会，总结哪些因素会造成血细胞计数板的计数误差，应如何避免？答：（1）造成误差的因素：技术误差（器材处理、使用不当，稀释不准确，细胞识别错误等）；固有误差（计数板、盖片、吸管等仪器不够准确与精密，细胞分布不均匀等）。
（2）应如何避免：①所用器材均应清洁干燥，计数板、血盖片、微量吸管及刻度吸管的规格应符合要求或经过校正。
②细胞稀释液应新鲜、无杂质微粒。
③严格操作，稀释与计数时的取样要在充分混匀后进行。
④尽量扩大细胞计数范围和计数数目，一般先进行误差估计，然后决定所需计数的数目和计数范围，只要能将误差控制在允许范围内即可。
（4）某单位希望检测一种干酵母粉中的活菌存活率，请设计1-2种可行的检测方法。
答：方法一：用待测样品与标准样品进行对比发酵试验。
可以根据发酵成熟时间或者发酵产物的生成量，或者产物生成速度对比，来求得样品中的活菌的成活率。
方法二：将该酵母粉进行梯度稀释与美兰染色，取样在血球计数板下进行活菌与死菌的计数，求算存活率。