游离脂肪酸测定方法
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游离脂肪酸检测(Fatty Acids Content)
游离脂肪酸检测试剂盒(FFA Assay Kit.Kit content Cu Reagent,Color reagent and standard)
实验准备
1.抽提剂配制:自备氯仿、正庚烷、甲醇,按照体积(氯仿:正庚烷:甲醇=28:21:1)配制抽提剂200ml,
4℃储存。
2.标准品配制:精确称取82.06mg标准品(Palmitic acid,分子量=256.44),溶于抽提剂中,终体积50ml,
终浓度64mM,密封4℃保存。
测定方案
1.用抽提剂将64mM标准品新鲜稀释为6.4、3.2、1.6、0.8、0.4、0.2、0.1mM。现用现配。
2.取1.5mlAxygen进口离心管,加入50µl样品、标准品、空白对照。
3.向管中加1.2ml抽提剂,盖紧盖子,悬涡混合器振荡30秒。
4.加0.2ml铜试剂Cu Reagent,振荡30秒,各管混匀强度时间保持一致。
5.室温放置20min。
6.室温2000g离心5min。
7.取1ml上层相转移到新离心管。
8.向新管内加0.5ml显色试剂Color Reagent。混匀,室温孵育5min。
9.用1-cm光径玻璃比色杯读取550nmOD值。
10.做标准曲线,计算FFA浓度。