用薄层色谱法鉴定咖啡因
咖啡中咖啡因的紫外线分光光度测定法
咖啡中咖啡因的紫外线分光光度测定法作者：李华峰赵士峰吕秀明来源：《品牌与标准化》2014年第12期咖啡因含量是咖啡的一项重要测试指标。
咖啡因的测定方法有薄层色谱法、紫外分光光度法、气相色谱法和高效液相色谱法。
为适应一般实验室的需要，本文用紫外分光光度法对速溶咖啡、普通咖啡及咖啡豆中咖啡因的测定方法进行了试验，结果较为满意。
本法操作简单、迅速、不需要特殊的试剂及仪器，方法添加回收率为95%~105%，精密度良好，变异系数为2.0%~2.8%，准曲线相关系数为0.999。
1 试验方法原理咖啡经加水煮沸，是咖啡因溶于水，用三氯甲烷提取后在276nm波长下测其吸光值与标准比较定量。
仪器与试剂755紫外分光光度计；氧化镁，A[⋅]R；三氯甲烷，A[⋅]R；无水硫酸钠，A[⋅]R；咖啡因，生化试剂；咖啡因标准溶液：咖啡因在80℃干燥4h，精确称取50mg溶于水成100ml。
取此液20ml移入分液漏斗中，加10%氢氧化钠溶液2ml，氯化钠2g溶解后用三氯甲烷提取三次，每次20ml，合并提取液，经无水硫酸钠脱水过滤于100ml容量瓶中，用三氯甲烷洗涤，合并，定容至刻度。
此溶液1ml=100μg咖啡因。
操作方法：样品处理及提取咖啡豆、普通咖啡，称取样品（咖啡豆研磨成粉状）1.0g~2.0g；速溶咖啡取0.5g，于250ml烧杯中，加150ml水，盖表面皿，在电炉上煮沸，保持微沸30min，加氧化镁2g，移入250ml容量瓶中，用水冲洗烧杯合并于容量瓶中，放冷后加水至刻度，混匀，过滤。
取滤液10ml于分液漏斗中，用三氯甲烷20ml、20ml、10ml提取，提取液经无水硫酸钠（约2g）脱水，并滤于50ml容量瓶中，加三氯甲烷至刻度。
同时做空白试验。
测定取上述样品的三氯甲烷提取液，用1cm石英杯，以试剂空白调节零点，于波长276nm处测其吸光值，查咖啡因标准曲线，计算其含量。
标准曲线取咖啡因标准溶液（1ml=100μg）0.4ml、0.8ml、1.2ml、1.6ml、2.0ml于10ml容量瓶中，加三氯甲烷至刻度。
中药执业药师中药学专业知识(一)-2
中药执业药师中药学专业知识(一)-2(总分：100.00，做题时间：90分钟)一、最佳选择题(总题数：45，分数：100.00)1.茶叶中咖啡因的提取方法是（分数：2.00）A.回流法B.渗漉法C.浸渍法D.升华法√E.连续回流法解析：[解析] 本题考查升华法的应用。
固体物质在受热时不经过熔融直接转化为蒸气，蒸气遇冷后又凝结成固体的现象称为升华。
中药中具有升华性的成分利用升华法直接从中药中提取出来，如樟木中的樟脑、茶叶中的咖啡因。
2.下列溶剂中极性最大的是（分数：2.00）A.三氯甲烷B.石油醚C.甲醇√D.乙醇E.丙酮解析：[解析] 本题考查溶剂极性强弱的判断。
常用于中药化学成分提取的溶剂按极性由强到弱的顺序：水＞甲醇＞乙醇＞乙酸乙酯＞三氯甲烷＞乙醚(无水)＞苯＞己烷。
3.不宜用煎煮法提取的中药化学成分是（分数：2.00）A.蒽醌苷B.挥发油√C.黄酮苷D.多糖E.皂苷解析：[解析] 本题考查煎煮法的适用范围。
煎煮法是中药材加入水浸泡后加热煮沸，将有效成分提取出来的方法。
含挥发性成分或有效成分遇热易分解的中药材不宜用此法。
4.硅胶作为吸附剂用于吸附色谱时是（分数：2.00）A.非极性吸附剂B.极性吸附剂√C.两性吸附剂D.化学吸附剂E.半化学吸附剂解析：[解析] 本题考查硅胶的特点。
硅胶、氧化铝属于物理吸附剂中的极性吸附剂，而活性炭属于非极性吸附剂。
5.最常用的超临界流体是（分数：2.00）A.二氧化碳√B.乙烷C.庚烷D.一氧化二氮E.六氟化硫解析：[解析] 本题考查超临界流体萃取法常用流体种类。
超临界流体萃取法是采用超临界流体为溶剂对中药材进行萃取的方法。
物质处于其临界温度和临界压力以上状态时，成为单一相态，将此单一相态下的物质称为超临界流体。
已知可作为超临界流体的物质很多，如二氧化碳、一氧化二氮、六氟化硫、乙烷、庚烷、氨、二氯二氟甲烷等，其中以二氧化碳最为常用。
6.水蒸气蒸馏法主要用于提取（分数：2.00）A.挥发油√B.黄酮苷C.强心苷D.糖类E.生物碱解析：[解析] 本题考查水蒸气蒸馏法的适用范围。
咖啡因药典标准2010版
咖啡因药典标准2010版1.1【品名】1.1.1 中文名咖啡因1.1.2 汉语拼音Kafeiyin1.1.3 英文名Caffeine1.2【结构式】1.3【分子式与分子量】C8H10N4O2·H2O 212.211.4【来源（名称）、含量（效价）】本品为1,3,7-三甲基-3,7-二氢-1H-嘌呤-2,6-二酮－水合物或其无水物。
按干燥品计算，含C8H10N4O2不得少于98.5%。
1.5 【性状】本品为白色或带极微黄绿色、有丝光的针状结晶；无臭，味苦；有风化性。
本品在热水或三氯甲烷中易溶，在水，乙醇或丙酮中略溶，在乙醚中极微溶解。
1.5.1 熔点本品的熔点（2010年版药典二部附录Ⅵ C）为235～238℃。
1.6【鉴别】（1）取本品约10mg，加盐酸1ml与氯酸钾0.1g，置水浴上蒸干，残渣遇氨气即显紫色；再加氢氧化钠试液数滴，紫色即消失。
（2）取本品的饱和水溶液5ml，加碘试液5滴，不生成沉淀；再加稀盐酸3滴，即生成红棕色的沉淀，并能在稍过量的氢氧化钠试液中溶解。
（3）本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（《药品红外光谱集》250图）一致。
1.7【检查】1.7.1 溶液的澄清度取本品1.0g，加水50ml，加热煮沸，放冷，溶液应澄清。
1.7.2 有关物质取本品，加三氯甲烷－甲醇（3：2）溶解制成每1ml中约含20mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，加上述溶剂定量稀释成每1ml中约含0.10mg的溶液，作为对照溶液。
照薄层色谱法（2010年版药典二部附录Ⅴ B）试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以正丁醇－丙酮－三氯甲烷－浓氨溶液（40：30：30：10）为展开剂，展开，晾干，在紫外光灯（254nm）下检视。
供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更深。
1.7.3 干燥失重取本品，在105℃干燥至恒重，减失重量不得过8.5%；如为无水咖啡因，减失重量不得过0.5%（2010年版药典二部附录Ⅷ L）。
绿茶的化学实验报告
实验名称：绿茶提取物的化学分析一、实验目的与摘要本实验旨在通过化学分析的方法，对绿茶提取物进行定性分析和定量测定，了解绿茶中的主要化学成分及其含量，探讨绿茶的保健作用。
实验过程中，我们将提取绿茶中的茶多酚、咖啡因等活性成分，并通过化学分析方法进行定性和定量分析。
二、实验器材1. 电子天平2. 烧杯3. 漏斗4. 玻璃棒5. 滤纸6. 水浴锅7. 紫外可见分光光度计8. pH计9. 精密移液管10. 茶叶样品三、实验原理绿茶中含有多种生物活性成分，如茶多酚、咖啡因、氨基酸等。
本实验主要采用以下方法进行提取和分析：1. 茶多酚的提取：采用乙醇提取法，利用茶多酚在乙醇中具有较高的溶解度，从绿茶中提取茶多酚。
2. 茶多酚的定性分析：采用紫外-可见分光光度法，通过测定茶多酚在特定波长下的吸光度，判断茶多酚的存在。
3. 茶多酚的定量分析：采用标准曲线法，以已知浓度的茶多酚溶液为标准，绘制标准曲线，根据样品的吸光度计算茶多酚的含量。
4. 咖啡因的提取：采用酸碱中和法，利用咖啡因在酸性条件下溶解度较高的特性，从绿茶中提取咖啡因。
5. 咖啡因的定性分析：采用薄层色谱法，通过比较样品与标准样品在薄层色谱板上的色斑，判断咖啡因的存在。
6. 咖啡因的定量分析：采用紫外-可见分光光度法，测定咖啡因在特定波长下的吸光度，根据标准曲线计算咖啡因的含量。
四、实验步骤1. 茶多酚的提取：称取5g绿茶样品，加入50mL 70%乙醇溶液，超声提取30分钟，过滤，滤液备用。
2. 茶多酚的定性分析：取适量滤液，在紫外-可见分光光度计上测定其在275nm处的吸光度，与标准曲线对照，判断茶多酚的存在。
3. 茶多酚的定量分析：取适量滤液，在紫外-可见分光光度计上测定其在275nm处的吸光度，根据标准曲线计算茶多酚的含量。
4. 咖啡因的提取：称取5g绿茶样品，加入50mL 1M盐酸溶液，煮沸10分钟，冷却，过滤，滤液备用。
5. 咖啡因的定性分析：取适量滤液，滴加苯酚-硫酸溶液，观察色斑变化，与标准样品对照，判断咖啡因的存在。
实验3 柱色谱分离染料和薄层色谱鉴定阿司匹林与咖啡因
实验三、柱色谱分离染料和薄层色谱鉴定阿司匹林与咖啡因自我实践实验：旋光度的测定一、目的1． 了解柱色谱和薄层色谱的原理2． 练习柱色谱和薄层色谱的操作二、原理 (略，见实验指导。
P72-74, P53-60)三、实验仪器色谱柱，50ml 烧杯（二只），10ml 量筒，短颈漏斗，长颈滴管(二支)，铁架台，烧瓶夹，双联球，高效薄层板（每组二块），层析缸，毛细管，镊子，紫外分析仪。
四、药品石英砂，氧化铝，95%乙醇，无水乙醇，混合染料(甲基橙、亚甲基蓝)，0.2mol/L 盐酸，咖啡因，阿斯匹林。
1,2-二氯乙烷/乙酸（12:1）展开剂。
五、实验操作步骤（一）甲基橙和亚甲基蓝两种染料的分离1.装柱固定色谱柱加约6克氧化铝 用双联球压实 加少量石英砂覆盖 打开活塞 2.加样加6滴混合染料 打开活塞 加少量乙醇 淋洗 （重复2-3次）（用长滴管） （短滴管约1管）3.洗脱用乙醇洗脱（速度慢可用双联球压出）直到蓝色物质全部洗出 小烧杯接收。
（约10mL ）待蓝色带完全洗脱后加少量0.2mol/L 盐酸 淋洗 （重复2-3次）用0.2mol/L 盐酸洗脱 （短滴管约1管） （约25mL ）小烧杯接收，直到红色物质全部洗出，速度慢用双联球压出。
4.注意事项：(1)柱要装的均匀，石英砂少量即可（约2-3毫米厚度）(2)缓慢加样，尽量不要碰在柱壁上。
(3)洗脱时，洗脱剂加入速度要慢，每次加入的量不要太多（二）薄层色谱1.点样距薄板一端约0.5cm处，用毛细管在一块薄层板上等距离分别点上乙酰水杨酸标样、咖啡因标样和阿加片提取液（乙酰水杨酸与咖啡因的混合样液）。
如图所示2.展开在层析缸中加入约5ml展开溶剂（1,2-二氯乙烷/乙酸（12:1））后，将薄板放入层析缸中，展开剂液面不得超过点样线。
当溶剂前缘距薄板顶端0.5cm时，取出薄板，作好标记，放在空气中自然晾干。
3.检出在紫外分析仪上，观察荧光的斑点，并描出斑点的位置，计算各样品的R f值。
薄层层析实验报告
薄层层析实验报告篇一：薄层色谱法实验报告有机化学第二课堂实验报告一，基本信息姓名：年级：XX级专业层次：队别：日期：XX年5月23日实验室：有机化学实验室二二、实验报告正文实验题目：薄层板的制作及薄层色谱的应用实验目的掌握薄层色谱的基本原理及其在有机物分离中的应用。
实验原理1.有机混合物中各组分对吸附剂的吸附能力不同，当展开剂流经吸附剂时，有机物各组分会发生无数次吸附和解吸过程，吸附力弱的组分随流动相迅速向前，而吸附力弱的组分则滞后，由于各组分不同的移动速度而使得她们得以分离。
物质被分离后在图谱上的位置，常用比移值Rf表示。
Rf?原点至层析斑点中心的距离原点至溶剂前沿的距离实验仪器与药品实验仪器：硅胶层析板两块，卧式层析槽一个，点样用毛细管，紫外荧光灯，铅笔暖风机、载玻片、钢勺、镊子等药品：碱性湖蓝与荧光黄混合样品、咖啡因与阿司匹林混合样品、阿司匹林纯样品二氯乙烷层析液、95%的乙醇溶液，硅胶粉、5%的羧甲基纤维素钠（CMC）的水溶液等仪器装置图“浸有层析板的层析槽”图1-层析缸（广口瓶），2-薄层板，4-层析液实验步骤（1）薄层板的制备：(本文来自： 小草范文网:薄层层析实验报告)取3g 硅胶G粉于研钵中，加相当于8ml左右的用5%的羧甲基纤维素钠（CMC）的水溶液，用力研磨1-2分钟，至成糊状后立即倒在准备好的薄层板中心线上，快速左右倾斜，使糊状物均匀地分布在整个板面上，厚度约为0.25mm,然后平放于平的桌面上干燥15分钟，再放入100℃的烘箱内活化2小时，取出放入干燥器内保存备用。
（2）点样。
在层析板下端1.0cm处，（用铅笔轻化一起始线，并在点样出用铅笔作一记号为原点。
）取拉好的毛细点样管，分别蘸取咖啡因与阿司匹林混合样品、阿司匹林纯样品，点于原点上（注意点样用的毛细管不能混用，毛细管不能将薄层板表面弄破，样品斑点直径在1到2mm为宜！斑点间距稍大一点。
点样次数5到7次）另取一块薄层板，点碱性湖蓝与荧光黄混合样品。
咖啡因实验报告
咖啡因的提取分离及鉴定一实验目的（1）学习天然物的提取技术和鉴定知识（2）掌握从茶叶中提取咖啡因的方法的原理和操作（3）掌握波层色谱和紫外光谱的操作方法（4）巩固回流、蒸馏、升华等基本操作（5）了解生物碱的应用及定性经验方法二基本原理咖啡因是一种黄嘌呤生物碱化合物，是一种中枢神经兴奋剂，能够暂时的驱走睡意并恢复精力。
有咖啡因成分的咖啡、茶、软饮料及能量饮料十分畅销，因此，咖啡因也是世界上最普遍被使用的精神药品。
茶叶中含有多种生物碱，其中咖啡因（也叫咖啡碱，caffeine）含量为1 % ~ 5 %，单宁酸含量为11 % ~ 12 %，色素、纤维素、蛋白质等含量为 %，咖啡因是弱碱性化合物，易溶于氯仿（ %）、水（2 %）及乙醇（2 %）、热苯（5 %）等。
单宁酸易溶于水和乙醇，不溶于苯。
咖啡因为嘌呤的衍生物，化学名为1,3,7- 三甲基-2,6-二氧嘌呤，其结构式如下：近年来从茶中提取药用咖啡因方法的研究进展，包括升华法、溶剂法、吸附法和超临界CO2气提法。
三实验所用试剂、仪器实验试剂：氯仿无水硫酸钠纯净水茶叶无水乙醇实验仪器：电磁炉锅烧杯蒸发皿玻璃棒分液漏斗球形冷凝器铁架台滤纸玻璃漏斗蒸馏头接收管锥形瓶四分离方法创新之处首先用水煎煮茶叶，然后再用氯仿将咖啡因从水中萃取出来，使用旋转蒸发仪将氯仿蒸出，可以得到咖啡因粗品，颜色为淡绿色。
然后将粗品溶于乙醇当中用蒸发皿蒸出乙醇可以得到交纯的咖啡因。
五自制或创造了那些实验条件条件在做咖啡因的纯化时，将咖啡因粗品溶于乙醇中，在用蒸发皿将乙醇蒸出此时给蒸发皿上面盖上一层滤纸可以回收一部分升华的咖啡因六实验流程及操作方法实验步骤1、称取300g市售茶叶，用纱布包起，加入到盛有 3L蒸馏水的烧杯中，加热煮沸3h把茶叶提出水面，并用玻璃棒把残留在其中水赶出来。
2、冷却至室温，转移至分液漏斗，用600mL氯仿分两次萃取，收集萃取液于一干燥的锥形瓶中，用无水硫酸钠干燥。
从茶叶中提取咖啡因实验报告
从茶叶中提取咖啡因及薄层色谱法对APC各组分的分离鉴定实验课程基础合成实验-有机化学实验实验项目从茶叶中提取咖啡因薄层色谱法对APC各组分的分离专业化学工程与工艺班级学号姓名指导教师开课学期至学年二学期实验时间一、实验目的1、学习索氏提取器的原理和方法，掌握从茶叶中提取咖啡因的原理和操作。
2、了解咖啡因的一般性质及掌握利用升华方法纯化固体产物的原理和基本操作3、巩固复习有机化合物熔点的测定方法。
4、了解并分离鉴定解热镇痛药复方阿司匹林的主要成分。
5、掌握薄层色谱法分离鉴定药物的原理和方法。
二、药品简介◆咖啡因分子结构式◆咖啡因的物理性质:纯的咖啡因是白色的，强烈苦味的白色粉末或六角棱柱状结晶。
化学式为C8H10N4O2 ，化学名称1，3，7-三甲基-2，6-二氧嘌呤，分子量194.19，相对密度：1.2g/cm*3，熔点：234.5℃，沸点：178℃，纯品熔点235～236℃,味苦，易溶于氯仿(12.5%),水及乙醇(2%)等。
含结晶水的咖啡因为无色针状晶体, 在100 ℃时失去结晶水, 并开始升华，120 ℃时显著升华，178℃时迅速升华◆来源食品工业中咖啡因的主要来源是咖啡豆、可可、茶叶，冬青等，但咖啡豆的咖啡因含量会因品种不同也有不同。
也存在于自然界中100种植物的叶子，根和果实中。
◆用途：①对中枢神经系统有较强的兴奋作用，对大脑皮层具有选择性兴奋作用。
②医药上可用作心脏和呼吸兴奋剂，也是一种重要的解热镇痛剂，是复方阿司匹林和氨非加的主要成分之一，还有一定的利尿作用。
③咖啡因作为兴奋剂、苦味剂、香料，主要供可乐饮料及含咖啡、饮料使用。
小剂量：振奋精神，减少疲劳。
大剂量：则有兴奋延脑生命中枢的作用，可使呼吸加深、加快，血压回升及血循环改善。
◆茶叶化学组成的一般含量：水分（75%）鲜茶叶无机化合物（3.5%--7%）干物质（25%）有机化合物（93%--96%）水溶性部分：2%--4%无机化合物（3.5%--7%）(茶叶高温灼烧、碳水不溶性部分：1.5%--3%化后剩下的灰烬）氨基酸：1--7%蛋白质：20--30%含N化合物生物碱：2--5%酶茶多酚：20--35%有机化合物（93%--96%）芳香物质：0.02%类脂：8%含C有机物糖类：20--30%有机酸：3%色素：1%维生素：0.6--1%◆茶叶中的主要成分及其作用：1、氨基酸：氨基酸是构建生物机体的众多生物活性大分子之一，是构建细胞、修复组织的基础材料对纺织早衰，促进生长和智力发育，增强造血功能，有着重要的作用。
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2、薄层色谱法对APC各组分的分离鉴定实验操作及现象
（1）点样：点样前，先用铅笔在薄层板上距末端0.6~1cm处轻轻画一横线，等距点上三点，再在薄板的另一端距末端约1cm处轻轻画上一横线，然后用毛细管依次分别吸取咖啡因、阿司匹林、乙酰水杨酸轻轻点样在已画好的点上，干燥后可进行色谱展开。
(2)展开：将事先选好的展开剂（苯：乙醚：冰醋酸：甲醇=120:60:18:1）放入干净小烧杯内展开剂的深度达0.5~1cm即可，再放入点好样品的薄层板，用表面皿盖好烧杯，使样品在杯内进行展开分离。
当展开剂上升到预定的位置时（上步中画好的横线），立即取出薄层板并尽快用铅笔在展开剂上升的前沿处画一横线作标记，在水平位置上风干，然后在红外灯下烘干冰醋酸。
（3）鉴定： a.显色：将烘干的薄层板放入254nm紫外分析仪中照射显色，可清晰地看到展开得到粉红色斑点。
b.定位：定出多点的相对位置，量出斑点中心到原始点的距离及展开剂前沿到原始点中心的距离，计算Rf值。
c.确定镇痛药APC的成分：通过Rf值的分析结果，课确定相应的组分。
展开剂液面要在点样线一下，不能超过；薄层板取出后要及时标记展开剂的前沿，否则展开剂挥发后难以确定；其中APC是三个点。
Rf=物质移动距离/溶剂移动距离。