食品中苯并[a]芘的测定
食用油中苯并（a）芘测定能力验证结果分析
分析检测食用油中苯并（a）芘测定能力验证结果分析杨 跃，李丽丽，付锦华（营口市食品药品检验检测中心，辽宁营口 115003）摘 要：依据《食品安全国家标准食品中苯并（a）芘的测定》（GB 5009.27—2016），采用液相色谱法测定食用油中苯并（a）芘的含量，对本实验室苯并（a）芘检测能力进行验证，并对实验结果进行分析讨论。
两份能力验证样品检测结果均为满意，说明本实验室苯并（a）芘检测能力良好。
关键词：能力验证；苯并（a）芘；液相色谱Analysis of Proficiency Test Results for the Determination ofBenzo(a)prene in Edible OilsYANG Yue, LI Lili, FU Jinhua(Yingkou Food and Drug Inspection Center, Yingkou 115003, China)Abstract: According to GB 5009.27—2016, the content of benzo (a) pyrene in edible oil was detected by liquid chromatography. The detection ability of benzo (a) pyrene in our laboratory was verified, and the experimental results were analyzed and discussed. The results of the two proficiency verification samples were satisfactory, indicating that the laboratory’s benzo (a) pyrene detection ability was good.Keywords: proficiency test; benzo(a)pyrene; liquid chromatography苯并（a）芘是一种多环芳烃类化合物，是公认的致癌物，可引起消化道、肺部、皮肤等部位发生癌症[1-2]。
苯并[a]芘的测定
![苯并[a]芘的测定](https://img.taocdn.com/s3/m/4b03d5122a160b4e767f5acfa1c7aa00b52a9ded.png)
• 4、操作方法 • （1）样品提取 • 粮食及低水分含量食品 • 回流抽提，碱皂化6~8h（90下） • 皂化液趁热转移至分液滤斗 • 洗涤接收瓶（50mL95%乙醇） • 加水（100mL）振摇提取 • 静置分层 • 下层二次提取（70mL环已烷） • 合并环已烷 • 洗涤环已烷层（水，100mL×3） • 洗涤水环已烷提取（30mL×2） • 浓缩至40mL（60 ℃水浴中）
• （５）计算
• 相F 对 F荧40光6 强(度F401 F411) / 2
x
ms F
( Fi
F0 )
m V2 V1
• （二）HPLC法
• １、原理
•
用KOH-甲醇水（1:1）溶液皂化样品中脂肪，环已烷
提取多环芳烃（PAH），再经60%硫酸净化，Sephadex LH-
20色谱柱富集样品中PAH，用高效液相色谱仪检测。
• 二、食品中苯并[a]芘的来源 ➢ BaP是含碳燃料及有机化合物热解过程中的产
物，是煤、石油、天然气、木材等不完全燃烧 的产物。 • 空气中BaP含量为0.01~100μg/m3; • 地表水中BaP含量为0.03~0.1μg/L; • 土壤中BaP含量为0~400μg/kg
➢在熏烤、烘烤过程中形成 • 燃烧产物与食品的直接接触、烟尘与食品的
• 植物油
环已烷100mL
DMF40mL×3
称样20g
分液滤斗
提取
环已烷层 DMF层
环已烷40mL
DMF层
提取
环已烷层 弃去 2%硫酸钠240mL
DMF层
分液滤斗
环已烷100mL×2
混匀 提取
• 鱼、肉及其制品 • 称样， • 加无水硫酸钠（1：1或1：2）搅拌 • 环已烷抽提取 • 蔬菜 • 称样、晾干、加丙酮（150mL）捣碎， • 过滤至分液滤斗 • 加水、 环已烷提取 • 环已烷重复提取 • 环已烷层洗涤（水，125mL×2） • 浓缩至25mL
苯并[a]芘的测定
![苯并[a]芘的测定](https://img.taocdn.com/s3/m/fead663d581b6bd97f19ea79.png)
植物油
环已烷100mL DMF40mL×3
称样20g
分液滤斗
提取
环已烷层 DMF层
环已烷40mL
DMF层
提取
环已烷层 弃去 2%硫酸钠240mL
DMF层
分液滤斗
环已烷100mL×2
混匀 提取
回目录 返回
鱼、肉及其制品 称样， 加无水硫酸钠（1：1或1：2）搅拌 环已烷抽提取
蔬菜 称样、晾干、加丙酮（150mL）捣碎， 过滤至分液滤斗 加水、 环已烷提取 环已烷重复提取 环已烷层洗涤（水，125mL×2） 浓缩至25mL
回目录 返回
加工环节的污染 设备管道 酱油、醋、酒、饮料 包装材料 糖果、面包、冷饮包装用蜡纸 润滑油等
工业废水、废气的污染 三废的排放 沥青的利用（沥青中苯并芘含量为2.5~3.5%）
细菌、原生生物、淡水藻类及某些高等植物的组织内 合成 藻类、水生植物BaP含量为0.005 μg/kg 植物BaP含量0.01~0.02μg/kg
（５）计算 相对荧光强度
F F406 (F401 F411) / 2
x
ms F
( Fi
F0 )
m V2 V1
回目录 返回
（二）HPLC法 １、原理
用KOH-甲醇水（1:1）溶液皂化样品中脂肪，环已烷提 取多环芳烃（PAH），再经60%硫酸净化，Sephadex LH20色谱柱富集样品中PAH，用高效液相色谱仪检测。 ２、操作方法 （１）皂化
回目录 返回
3、仪器 脂肪抽提器 层析柱（10cm×350cm） 层析缸 K-D浓缩器 紫外灯 荧光分光光度计
回目录 返回
4、操作方法 （1）样品提取 粮食及低水分含量食品
MM FS CNG 食品中苯并 a 芘的测定方法
MMFSCNG0143 食品 苯并(a)芘 分光光度法MM_FS_CNG_0143食品中苯并(a)芘的测定方法1. 适用范围本方法适用于食品中苯并(a)芘的测定。
样品量为50 g，点样量为1 g时，方法最低检出浓度为1ng/g。
2.原理概要样品先用有机溶剂提取，或经皂化后提取，再将提取液经液-液分配或色谱柱净化，然后在乙酰化滤纸上分离苯并(a)芘，因苯并(a)芘在紫外光照射下呈蓝紫色荧光斑点，将分离后有苯并(a)芘的滤纸部分剪下，用溶剂浸出后，用荧光分光光度计测荧光强度与标准比较定量。
3.主要仪器和试剂3.1.主要试剂苯、丙酮、石油醚(60～90℃)、无水乙醇：重蒸馏。
乙醇(95％)、甲酸(88％～90％)、氢氧化钾、甲酸(40％)、硫酸钠溶液(20g/L)。
环己烷(或石油醚，沸程30～60℃)：重蒸馏或经氧化铝柱处理无荧光。
二甲基甲酰胺或二甲基亚砜。
无水硫酸钠：120℃烤2h以上。
咖啡因甲酸溶液(150g/L)：称咖啡因(医用或试剂用)15g，溶于适量甲酸中，再稀释至100mL。
脱脂棉：用二氯甲烷回流4 h以上。
展开剂：乙醇(95％)-二氯甲烷(2：1)。
硅镁型吸附剂：将60～100目筛孔的硅镁吸附剂经水洗四次(每次用水量为吸附剂质量的4倍)于垂融漏斗上抽滤干后，再以等量的甲醇洗(甲醇与吸附剂量克数相等)，抽滤干后，吸附剂铺于干净瓷盘上，在130℃干燥5 h后，装瓶贮存于干燥器内，临用前每100g加5g水减活，混匀并平衡4h以上，最好放置过夜。
层析用氧化铝(中性)：120℃活化4 h。
乙酰化滤纸：将中速层析用滤纸裁成30 cm×4cm的条状，逐条放入盛有乙酰化混合液(180mL苯、130mL乙酸酐、0.1mL硫酸)的500mL烧杯中，使滤纸充分地接触溶液，保持溶液温度在21℃以上，时时搅拌，反应6h，再放置过夜。
取出滤纸条，在通风橱内吹干，再放入无水乙醇中浸泡4h，取出后放在垫有滤纸的干净白瓷盘上，在室温内风干压平备用，一次可处理滤纸15～18条。
苯并[a]芘的测定
![苯并[a]芘的测定](https://img.taocdn.com/s3/m/fad1d824ed630b1c59eeb541.png)
回目录
返回
二、食品中苯并[a]芘的来源
BaP是含碳燃料及有机化合物热解过程中的产物，是
煤、石油、天然气、木材等不完全燃烧的产物。
空气中BaP含量为0.01~100μg/m3; 地表水中BaP含量为0.03~0.1μg/L;
土壤中BaP含量为0~400μg/kg
返回
加工环节的污染 设备管道 包装材料 酱油、醋、酒、饮料 糖果、面包、冷饮包装用蜡纸
润滑油等
工业废水、废气的污染 三废的排放 沥青的利用（沥青中苯并芘含量为2.5~3.5%） 细菌、原生生物、淡水藻类及某些高等植物的组织内 合成 藻类、水生植物BaP含量为0.005 μg/kg 植物BaP含量0.01~0.02μg/kg
回目录
返回
在熏烤、烘烤过程中形成 燃烧产物与食品的直接接触、烟尘与食品的直接接触
粮食烘干
高温下脂肪、胆固醇等成分的热解或热聚（10~70倍）
高温下食品的焦化或炭化
淀粉390℃时产生 0.7μg/kg 650 ℃时产生17μg/kg 650 ℃下葡萄糖产生7mg/kg、脂肪酸产生88mg/kg
回目录
0.02~0.14
英国
荷兰
0.48
0.12~0.42
意大利
0.1~0.3
回目录 返回
奥地利
0.36
五、防治措施
加强环境治理
改变生产方式
改进烹调和加工方法 改变饮食习惯 去毒处理
回目录
返回
六、测定方法
（一）分配柱层析净化荧光测定法 1.原理 样品先用有机溶剂提取，或经皂化后提取，再将提 取液经液－液分配或色谱柱净化，然后在乙酰化滤纸上 分离苯并(a)芘，因苯并(a)芘在紫外光照射下呈蓝紫色 荧光斑点，将分离后有苯并(a)芘的滤纸部分剪下，用 溶剂浸出后，用荧光分光光度计测荧光强度与标准比较 定量。
食品中苯并a芘的测定
食品中苯并（a）芘的测定前言苯并（a）芘是一种多环芳香族碳氢化合物，是已发现的200多种多环芳烃中最主要的环境和食品污染物，是一种强烈的致癌物质，对机体各器官，如对皮肤、肺、肝、食道、胃肠等均有致癌作用。
被国际癌症研究机构列为I类致癌物。
苯并（a）芘在食物中也有，谷类食物、蔬菜、脂肪和油类是摄入苯并（a）芘的主要膳食来源，食物在高温、长时间烹调中会产生苯并（a）芘我们按照国标《GB 5009.27-2016食品安全国家标准食品中苯并（a）芘的测定》中提供的食品中苯并（a）芘检测的方法对黄豆样品进行苯并（a）芘的测定。
使用LabTechSePRO全自动高通量柱膜通用固相萃取系统和MV5多通道平行浓缩仪来代替传统的手动净化和浓缩，不仅实现了净化、浓缩过程的全自动化，省却了大量的手动工作，提高效率，而且减少了人为误差，实现了高回收率和良好的实验重复性。
关键词SePRO全自动高通量柱膜通用固相萃取系统；MV5多通道平行浓缩仪；食品；苯并（a）芘；GB 5009.27-20161、仪器设备及试剂1.1仪器设备SePRO全自动高通量柱膜通用固相萃取系统（莱伯泰科公司）；MV5多通道平行浓缩仪（莱伯泰科公司）；LC600 二元高压梯度高效液相色谱：配有荧光检测器（莱伯泰科公司）；萃取柱：MIP-BAP 苯并(a)芘专用SPE小柱，500mg 6mL（CNW公1.2试剂二氯甲烷，正己烷，乙腈（色谱纯 FISHER Chemical）；苯并（a）芘标准储备液：100ug/mL，乙腈，国家标准物质；苯并（a）芘标准工作液：取100μL的标准储备液与10mL的容量瓶中，用乙腈定容，得到浓度为1μg/mL的标样工作液。
2、实验过程2.1 样品预处理取一定量的黄豆，将其磨碎成均匀的样品，储于洁净的样品瓶中，于室温下保存。
2.2 提取称取1g（精确到 0.001g）试样，加入 5 mL 正己烷，旋涡混合 0.5 min，40℃下超声提取10min，4000r/min离心5min，转移出上清液。
液相色谱法测定油性食品中苯并(α)芘的方法改进
液相色谱法测定油性食品中苯并(α)芘的方法改进李凤梅;张玉娜;赵宏坤【摘要】采用Florisil固相萃取柱净化样品,建立了高效液相色谱(HPLC)荧光法测定食品中苯并(α)芘的方法.样品以环己烷为提取剂,净化、蒸发浓缩后用流动相溶解.荧光检测器激发波长283 nm,发射波长404 nm.流动相为V(乙腈)∶V(水)=85∶15,流速1.0 mL/min,外标法定量.苯并(α)芘在O ～ 100 ng/mL浓度范围内线性关系良好,相关系数r2=0.9998;方法的测定低限:橄榄油、罗非鱼和猪肉均为1.0 μg/kg,添加浓度1.0 ～100 μg/kg,其回收率范围81.0％～93.2％,变异系数0.65％～6.15％.【期刊名称】《粮油食品科技》【年(卷),期】2013(021)002【总页数】4页(P42-45)【关键词】苯并(α)芘;食品;高效液相色谱法;固相萃取【作者】李凤梅;张玉娜;赵宏坤【作者单位】青岛农业大学食品科学与工程学院,山东青岛 266109【正文语种】中文【中图分类】TS227苯并芘是多环芳烃中具有代表性的、公认的强致癌物质之一，对人的健康有巨大危害。
城郊农田苯并(α)芘等多环芳烃化合物污染与废弃物的焚烧、工业“三废”、锅炉烟尘等有关，城市生活垃圾、农药的施用、污泥以及化肥也是农田苯并(α)芘污染的来源。
苯并(α)芘污染的途径主要是通过对空气的污染，空气污染后的尘埃降落造成了土壤及农作物的污染，然后通过皮肤、呼吸道等均可被人体吸收，严重危害人体健康。
在煎烤、烧烤、油炸动物性肉制品的过程中，食品也会产生3，4－苯并(α)芘，人和动物摄入该肉制品后会导致肿瘤和癌变，对健康造成潜在的威胁。
目前苯并(α)芘的测定方法有多种，本文在查阅文献的基础上，采用固相萃取柱对样品进行净化处理，探索固相萃取－高效液相色谱－荧光检测法测定油性食品中的苯并(α)芘的最佳方法，以建立和完善食品中苯并(α)芘的检测方法。
油条食品中苯并芘的测定
油条食品中苯并芘的测定摘要:建立高效液相色谱法测定油条食品中苯并[α]芘的测定方法。
本法色谱条件易于掌握,测得数据重复性好,线性关系好,精密度和准确度均能满足分析要求。
同时本实验对县城城区某油炸食品供应点的油条食品中苯并[α]芘含量进行了测定。
关键词:苯并[α]芘油条测定油条是我国主要的早餐食品之一。
油条中含有的苯并[α]芘是一种公认的强致癌物质,可诱发皮肤、肺和消化道癌症。
其随食物被摄入人体内后,很快被肠道吸收入血液并分布于全身,危害很大。
由于苯并[α]芘在人体中具有累积作用,长期食入直接危害到人们的健康,特别有些商贩,为了追求利益,使用多次高温加热的食用油,这对人的健康危害更为严重。
而不良的饮食习惯,到目前为止还没有引起人们的高度重视。
苯并[α]芘的测定方法很多,如:有气相色谱法,液相色谱法和薄层法等。
本实验建立了液相色谱荧光法测定油炸食品中B[α]P含量的分析方法,并对宝丰县城区油条食品中的苯并[α]的含量进行了测定,评价油炸食品安全性,对提高人们的食品安全意识和保障健康具有重要意义。
1 材料与方法1.1材料油炸食品采于宝丰县城区几个油炸食品供应点。
样品采集后置于冰箱冷冻保存。
1.2试剂KOH(分析纯);95%乙醇(分析纯);超纯水;苯(分析纯,重蒸馏);无水硫酸钠(优级纯);苯并[α]芘对照品;高效液相色谱流动相组成为色谱纯乙腈及超纯净水。
1.3仪器与设备高效液相色谱仪、色谱工作站;荧光检测器,20μl进样阀;药材粉碎机;旋转蒸发仪;Simplicity 185 personal超纯水器;色谱柱:Diamonsil C18(4.6mm×250mm,5μm);T660/H超声波清洗器(功率360W,频率35kHz)。
1.4方法1.4.1对照品溶液的配制准确称取苯并[α]芘对照品(HPLC级)10mg,置于100ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,该贮备液浓度为100μg/ml,准确吸取储备液制成浓度分别为1.0、0.5、0.1、0.05、0.005μg/ml的标准工作液。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
环已烷重复提取
环已烷层洗涤（水，125mL×2）
浓缩至25mL
（2）净化 装柱 加样吸附 洗脱（苯30mL） 减压浓缩至0.1~0.5mL
（3）分离 点样 展开（95%乙醇：二氯甲烷=2：
1） 观察（紫外灯照射） 剪下斑点，加苯浸泡溶解。
（4）测定
食品中苯并[a]芘的测定
一、苯并[a]芘的结构与性质
简称为BaP
针状结晶，沸点310~320℃
溶解特性：水中溶解度为0.004~0.012mg/L
烷、苯、甲苯、
易溶于石油醚、环已烷、已
二甲苯、丙酮
稍溶于乙醇、甲醇
化学性质：稳定，常温下不与硫酸作用，能与硝酸、
高氯酸 反应
碱性条件下稳定
荧光特性：紫外线（360nm）下产生典型紫色荧光
欧共体
0.03ug/kg
调料
德国
1.0ug/kg
肉及肉制品
意大利
食品及饮料
荷兰
1.0ug/kg
肉制品
北欧国家 肉制品
1.0ug/kg
3、一些国家的每日允许摄入量(ug)
0.03ug/kg
五、防治措施 ➢ 加强环境治理 ➢ 改变生产方式 ➢ 改进烹调和加工方法 ➢ 改变饮食习惯 ➢ 去毒处理
六、测定方法
苯并[a]芘标准液
苯并[a]芘标准贮备液：100ug/mL
3、仪器
脂肪抽提器
层析柱（10cm×350cm）
层析缸
K-D浓缩器
紫外灯
荧光分光光度计
4、操作方法 （1）样品提取 粮食及低水分含量食品 回流抽提，碱皂化6~8h（90下） 皂化液趁热转移至分液滤斗 洗涤接收瓶（50mL95%乙醇） 加水（100mL）振摇提取 静置分层 下层二次提取（70mL环已烷） 合并环已烷 洗涤环已烷层（水，100mL×3） 洗涤水环已烷提取（30mL×2） 浓缩至40mL（60 ℃水浴中）
四、限量标准 1、国家标准允许限量标准
品种
指标
品种
指标
肉 烧烤猪肉、禽肉 ≦5 制 品 叉烧肉、羊肉串 ≦5
植 豆油、花生油 物 植物油 油 茶油
≦10 ≦10
火腿、板鸭
≦5
其它油
≦10
烟熏鱼
≦5 粮 稻谷
≦5
熏鸡、熏马肉 ≦5 食 小麦
≦5
熏红肠、香肠 ≦5
大麦
≦5
2、其它一些国家、地区标准
20色谱柱富集样品中PAH，用高效液相色谱仪检测。
２、操作方法
（１）皂化
称取100g样品直接皂化
（２）提取、净化
环已烷萃取，甲醇水洗涤、水洗涤
浓缩
60%硫酸洗涤、水洗涤 过滤（过硅胶、无水硫酸钠）、滤液浓缩
（３）富集
加样于Sephadex LH-20柱上，
异丙醇洗脱
浓缩至干
测定标准斑点及样品斑点的荧光激发光谱 和发射光谱
读取F401nm、F406nm、F411nm
（５）计算
相F 对 F荧40光6 强(度F401 F411 ) / 2
x
ms F
( Fi
F0 )
m V2 V1
（二）HPLC法
１、原理
用KOH-甲醇水（1:1）溶液皂化样品中脂肪，环已烷
提取多环芳烃（PAH），再经60%硫酸净化，Sephadex LH-
植物油
环已烷100mL DMF40mL×3
称样20g
分液滤斗
提取
环已烷层 DMF层
环已烷40mL
DMF层
提取
环已烷层 弃去 2%硫酸钠240mL
DMF层
分液滤斗
环已烷100mL×2
混匀 提取
鱼、肉及其制品
称样，
加无水硫酸钠（1：1或1：2）搅拌
环已烷抽提取
蔬菜
称样、晾干、加丙酮（150mL）捣碎，
（一）分配柱层析净化荧光测定法
1.原理
样品先用有机溶剂提取，或经皂化后提取， 再将提取液经液－液分配或色谱柱净化，然后
在乙酰化滤纸上分离苯并(a)芘，因苯并(a)芘
在紫外光照射下呈蓝紫色荧光斑点，将分离后
有苯并(a)芘的滤纸部分剪下，用溶剂浸出后，
用荧光分光光度计测荧光强度与标准比较定量。
样品
二、食品中苯并[a]芘的来源 ➢ BaP是含碳燃料及有机化合物热解过程中的产
物，是煤、石油、天然气、木材等不完全燃烧 的产物。
空气中BaP含量为0.01~100μg/m3; 地表水中BaP含量为0.03~0.1μg/L; 土壤中BaP含量为0~400μg/kg
➢ 在熏烤、烘烤过程中形成
燃烧产物与食品的直接接触、烟尘与食品的直接接
触
粮食烘干
高温下脂肪、胆固醇等成分的热解或热聚（10~70
倍）
高温下食品的焦化或炭化
淀粉390℃时产生 0.7μg/kg 650 ℃时产生
17μg/kg
650 ℃下葡萄糖产生7mg/kg、脂肪酸产生88mg/kg
➢ 加工环节的污染
设备管道 酱油、醋、酒、饮料
纸
包装材料 糖果、面包、冷饮包装用蜡
润滑油等
甲醇溶解、定容（１mL）
（４）测定
色谱条件：流动相甲醇：水（75:25）流速 1.5mL/min
4.6mm×250mm
色谱柱ODS
柱温30℃
➢ 工业废水、废气的污染
三废的排放
沥青的利用（沥青中苯并芘含量为
2.5~3.5%）
➢ 细菌、原生生物、淡水藻类及某些高等植物的组 织内合成
藻类、水生植物BaP含量为0.005 μg/kg
部分食品中的Bap含量（μg/kg）
种类
含量
种类
含量
熏奶酪
0.01~5.6
腊肉
0.86~27.6
熏鱼
1.3~15.2
烤牛肉
0.41~1.58
熏香肠
0.8~2.5
烤羊肉串 1~2.84
熏火腿
3.2
烤鸭皮
0.75~2.39
熏排骨
0.34~5.0
烤鸭
0.06
炸油条
1.4~11
香肠
0.3~0.5
烘大饼
3.0~7.0
蛋清肠
0.18~0.3
三、BaP的危害
BaP为致癌、致突变化学物质，可致多种癌症，并具
有致畸性和遗传毒性。
溶剂提取 皂化提取
液液分配 柱层析
纸层析
荧光分析
2、试剂
试剂需重蒸，并检查其荧光特性
吸附剂：硅镁型吸附剂 水洗并活化，加5% 水减活
（120℃ 4h）
中性氧化铝 活化
乙酰化滤纸制备：
滤纸（30cm×4cm）→乙酰化（180mL苯： 130mL乙酸酐：0.1mL硫酸）6h,并浸泡过夜→取出 风干