食品中苯并a芘的测定
食用油中苯并（a）芘测定能力验证结果分析
分析检测食用油中苯并（a）芘测定能力验证结果分析杨 跃，李丽丽，付锦华（营口市食品药品检验检测中心，辽宁营口 115003）摘 要：依据《食品安全国家标准食品中苯并（a）芘的测定》（GB 5009.27—2016），采用液相色谱法测定食用油中苯并（a）芘的含量，对本实验室苯并（a）芘检测能力进行验证，并对实验结果进行分析讨论。
两份能力验证样品检测结果均为满意，说明本实验室苯并（a）芘检测能力良好。
关键词：能力验证；苯并（a）芘；液相色谱Analysis of Proficiency Test Results for the Determination ofBenzo(a)prene in Edible OilsYANG Yue, LI Lili, FU Jinhua(Yingkou Food and Drug Inspection Center, Yingkou 115003, China)Abstract: According to GB 5009.27—2016, the content of benzo (a) pyrene in edible oil was detected by liquid chromatography. The detection ability of benzo (a) pyrene in our laboratory was verified, and the experimental results were analyzed and discussed. The results of the two proficiency verification samples were satisfactory, indicating that the laboratory’s benzo (a) pyrene detection ability was good.Keywords: proficiency test; benzo(a)pyrene; liquid chromatography苯并（a）芘是一种多环芳烃类化合物，是公认的致癌物，可引起消化道、肺部、皮肤等部位发生癌症[1-2]。
食用油中苯并(a)芘的快速检测 胶体金免疫层析法(KJ201910)
附件10食用油中苯并（a）芘的快速检测胶体金免疫层析法(KJ201910)1 范围本方法规定了食用油中苯并（a）芘的胶体金免疫层析快速检测方法。
本方法适用于食用油中苯并（a）芘的快速测定。
2 原理本方法采用竞争抑制免疫层析原理。
样品中的苯并（a）芘经提取后与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体和试纸条或检测卡中检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。
通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中苯并（a）芘进行定性判定。
3 试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。
3.1 试剂3.1.1正己烷：色谱纯。
3.1.2乙腈：色谱纯。
3.1.3二甲基亚砜（DMSO）。
3.1.4NaH2PO4•2H2O。
3.1.5Na2HPO4•12H2O。
3.1.6氯化钠。
3.1.7吐温-20。
3.1.8氢氧化钠溶液（2 mol/L）：称取80g氢氧化钠用水溶解，并定容至1L。
3.1.9PBST溶液：称取0.2965 g NaH2PO4•2H2O、2.9 g Na2HPO4•12H2O、8.76 g氯化钠与0.55 g 吐温-20用水溶解并定容至1 L。
3.2 参考物质苯并（a）芘参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量见表1，纯度均≥95%。
表1 苯并（a）芘参考物质中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量注：或等同可溯源物质。
3.3 标准溶液的配制苯并（a）芘标准储备液（0.1mg/mL）：精密称取适量苯并（a）芘标准品（3.2），置于10 mL 容量瓶中，用乙腈（3.1.2）溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为0.1mg/mL的苯并（a）芘标准储备液；或可直接购买苯并（a）芘标准储备液。
0 ℃~5 ℃避光保存备用，有效期1年。
3.4 材料苯并（a）芘胶体金免疫层析试剂盒，适用基质为食用油。
3.4.1金标微孔（含胶体金标记的特异性抗体）。
食品安全国家标准食品中苯并(a)芘的测定编制说明
为 0.4ml（油脂）和 1ml（其他 3 种食品）。定容体积与取样量对应，便于结果计算。
进样体积：由 10μL 调整为 20μL。在色谱峰形对称的前提下提高了仪器检测灵敏度。
表 6 色谱参考条件的整合
序 参数
号
GB/T 22509
NY/T 1666
SC/T 3041
整合后
1
色谱柱
多环芳香烃柱
C18
次独立测试
次 独 立 测 试 差＜15%
次独立测试
结果的绝对
结果的绝对
结果的绝对
差值不大于
差值不大于
差值不大于
两个测定值
两个测定值
两个测定值
的算术平均
的算术平均
的算术平均
值 20%。
值 20%。
值 20%。
8、定量限
最低检测浓度 依据 GBT 27404-2008 对测定低限的计算公式
计算：标准曲线最低点
4、仪器和设备 检测仪器采用高效液相色谱仪，配有荧光检测器。该设备在食品检测实验室是通用设备。 5、分析步骤 5.1 试样制备
4
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把 4 种食品分成三类撰写。分别是植物性产品、动物性产品、液体油脂。
根据 GB 2760 附录 F《食品分类系统》，油脂及其制品分成不含水的油脂与水油状脂肪乳化制
国际标准：ISO 15302：2007《动植物油脂 苯并(a)芘的测定 反相高效液相色谱法》。
以上 2 个国外检测方法标准均采用高效液相色谱法。
2
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三、标准的重要内容及主要修改情况
与标准文本相对应，下面从范围、原理、试剂和材料、仪器和设、分析步骤、分析结果的表述、
苯并[a]芘的测定
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植物油
环已烷100mL DMF40mL×3
称样20g
分液滤斗
提取
环已烷层 DMF层
环已烷40mL
DMF层
提取
环已烷层 弃去 2%硫酸钠240mL
DMF层
分液滤斗
环已烷100mL×2
混匀 提取
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鱼、肉及其制品 称样， 加无水硫酸钠（1：1或1：2）搅拌 环已烷抽提取
蔬菜 称样、晾干、加丙酮（150mL）捣碎， 过滤至分液滤斗 加水、 环已烷提取 环已烷重复提取 环已烷层洗涤（水，125mL×2） 浓缩至25mL
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加工环节的污染 设备管道 酱油、醋、酒、饮料 包装材料 糖果、面包、冷饮包装用蜡纸 润滑油等
工业废水、废气的污染 三废的排放 沥青的利用（沥青中苯并芘含量为2.5~3.5%）
细菌、原生生物、淡水藻类及某些高等植物的组织内 合成 藻类、水生植物BaP含量为0.005 μg/kg 植物BaP含量0.01~0.02μg/kg
（５）计算 相对荧光强度
F F406 (F401 F411) / 2
x
ms F
( Fi
F0 )
m V2 V1
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（二）HPLC法 １、原理
用KOH-甲醇水（1:1）溶液皂化样品中脂肪，环已烷提 取多环芳烃（PAH），再经60%硫酸净化，Sephadex LH20色谱柱富集样品中PAH，用高效液相色谱仪检测。 ２、操作方法 （１）皂化
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3、仪器 脂肪抽提器 层析柱（10cm×350cm） 层析缸 K-D浓缩器 紫外灯 荧光分光光度计
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4、操作方法 （1）样品提取 粮食及低水分含量食品
食品中苯并[a]芘的测定
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环已烷重复提取
环已烷层洗涤（水，125mL×2）
浓缩至25mL
（2）净化 装柱 加样吸附 洗脱（苯30mL） 减压浓缩至0.1~0.5mL
（3）分离 点样 展开（95%乙醇：二氯甲烷=2：
1） 观察（紫外灯照射） 剪下斑点，加苯浸泡溶解。
（4）测定
食品中苯并[a]芘的测定
一、苯并[a]芘的结构与性质
简称为BaP
针状结晶，沸点310~320℃
溶解特性：水中溶解度为0.004~0.012mg/L
烷、苯、甲苯、
易溶于石油醚、环已烷、已
二甲苯、丙酮
稍溶于乙醇、甲醇
化学性质：稳定，常温下不与硫酸作用，能与硝酸、
高氯酸 反应
碱性条件下稳定
荧光特性：紫外线（360nm）下产生典型紫色荧光
欧共体
0.03ug/kg
调料
德国
1.0ug/kg
肉及肉制品
意大利
食品及饮料
荷兰
1.0ug/kg
肉制品
北欧国家 肉制品
1.0ug/kg
3、一些国家的每日允许摄入量(ug)
0.03ug/kg
五、防治措施 ➢ 加强环境治理 ➢ 改变生产方式 ➢ 改进烹调和加工方法 ➢ 改变饮食习惯 ➢ 去毒处理
六、测定方法
苯并[a]芘标准液
苯并[a]芘标准贮备液：100ug/mL
3、仪器
脂肪抽提器
层析柱（10cm×350cm）
层析缸
K-D浓缩器
紫外灯
荧光分光光度计
4、操作方法 （1）样品提取 粮食及低水分含量食品 回流抽提，碱皂化6~8h（90下） 皂化液趁热转移至分液滤斗 洗涤接收瓶（50mL95%乙醇） 加水（100mL）振摇提取 静置分层 下层二次提取（70mL环已烷） 合并环已烷 洗涤环已烷层（水，100mL×3） 洗涤水环已烷提取（30mL×2） 浓缩至40mL（60 ℃水浴中）
动植物油脂中苯并(a)芘含量测定
1
使石油醚流至无水 硫酸钠的顶部 。 向层析柱中移入样 品溶液 , 清洗层 析柱后加入80ml石 油醚洗脱 ,流速为 1ml/min,弃去前 20ml石油醚 ,收集 其余洗脱液。
检 测2ຫໍສະໝຸດ 3 8实验结
果
处
理
定性定量方法 采用标准物质的保留时间对样品峰进行准确定性 , 采用外标法以峰面积计算定量。 色谱柱的选择 PAH专 用 柱：专用于 PAH的测定 ,可很好分离苯并 (a)芘在内的PAH成分; Dikma C18柱：正常动植物油脂中苯并(a)芘的测定。
10
T
h
a
n
k
s
危 害
• 苯并芘又称苯并（а）芘，英文缩写BaP。 • 是强致癌物之一，食用受其污染的食品。 • 具有公认的致畸、致癌的慢性毒性。 • 长期生活在含BaP的空气环境中，会造成慢性中毒 。
5
测定动植物油脂中苯并(a)芘的 含量
反相高效液相色谱法
检 测
本方法的优点
准确度较高 前处理操作简单 适用范围广的方法
大 事 件
3
物 质 的 理 化 常 数
中文名称：苯并(a)芘（3,4-Benzypyrene）
分子式：C20H12 熔 点：179℃ 分子量：252.32 沸点：475℃
外观与性状：无色至淡黄色、针状、晶体(纯品)
溶解性：不溶于水，微溶于乙醇、甲醇，溶于苯、甲苯、 二甲苯、氯仿、乙醚、丙酮等
4
苯并（a）芘
9
１、油料种子被污染。 本品在工业上无生产和 ２、采用浸出法制油时，也易造 防止苯并（ａ）芘对食品的污 使用价值，一般只作为 成对油脂的污染； 染及其对人的危害，要避免高 生产过程中形成的副产 ３、油脂在使用的过程中也可形 温烘烤食品，尤其不要用煤火 物随废气排放。 成多环芳烃类物质。 （或炭火）直接烘烤食品；不 吃或少吃烟熏食品。 油脂中的苯并（ａ）芘可用碱炼 法或高温脱除以活性碳吸附去除。
MM FS CNG 食品中苯并 a 芘的测定方法
MMFSCNG0143 食品 苯并(a)芘 分光光度法MM_FS_CNG_0143食品中苯并(a)芘的测定方法1. 适用范围本方法适用于食品中苯并(a)芘的测定。
样品量为50 g，点样量为1 g时，方法最低检出浓度为1ng/g。
2.原理概要样品先用有机溶剂提取，或经皂化后提取，再将提取液经液-液分配或色谱柱净化，然后在乙酰化滤纸上分离苯并(a)芘，因苯并(a)芘在紫外光照射下呈蓝紫色荧光斑点，将分离后有苯并(a)芘的滤纸部分剪下，用溶剂浸出后，用荧光分光光度计测荧光强度与标准比较定量。
3.主要仪器和试剂3.1.主要试剂苯、丙酮、石油醚(60～90℃)、无水乙醇：重蒸馏。
乙醇(95％)、甲酸(88％～90％)、氢氧化钾、甲酸(40％)、硫酸钠溶液(20g/L)。
环己烷(或石油醚，沸程30～60℃)：重蒸馏或经氧化铝柱处理无荧光。
二甲基甲酰胺或二甲基亚砜。
无水硫酸钠：120℃烤2h以上。
咖啡因甲酸溶液(150g/L)：称咖啡因(医用或试剂用)15g，溶于适量甲酸中，再稀释至100mL。
脱脂棉：用二氯甲烷回流4 h以上。
展开剂：乙醇(95％)-二氯甲烷(2：1)。
硅镁型吸附剂：将60～100目筛孔的硅镁吸附剂经水洗四次(每次用水量为吸附剂质量的4倍)于垂融漏斗上抽滤干后，再以等量的甲醇洗(甲醇与吸附剂量克数相等)，抽滤干后，吸附剂铺于干净瓷盘上，在130℃干燥5 h后，装瓶贮存于干燥器内，临用前每100g加5g水减活，混匀并平衡4h以上，最好放置过夜。
层析用氧化铝(中性)：120℃活化4 h。
乙酰化滤纸：将中速层析用滤纸裁成30 cm×4cm的条状，逐条放入盛有乙酰化混合液(180mL苯、130mL乙酸酐、0.1mL硫酸)的500mL烧杯中，使滤纸充分地接触溶液，保持溶液温度在21℃以上，时时搅拌，反应6h，再放置过夜。
取出滤纸条，在通风橱内吹干，再放入无水乙醇中浸泡4h，取出后放在垫有滤纸的干净白瓷盘上，在室温内风干压平备用，一次可处理滤纸15～18条。
苯并[a]芘的测定
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二、食品中苯并[a]芘的来源
BaP是含碳燃料及有机化合物热解过程中的产物，是
煤、石油、天然气、木材等不完全燃烧的产物。
空气中BaP含量为0.01~100μg/m3; 地表水中BaP含量为0.03~0.1μg/L;
土壤中BaP含量为0~400μg/kg
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加工环节的污染 设备管道 包装材料 酱油、醋、酒、饮料 糖果、面包、冷饮包装用蜡纸
润滑油等
工业废水、废气的污染 三废的排放 沥青的利用（沥青中苯并芘含量为2.5~3.5%） 细菌、原生生物、淡水藻类及某些高等植物的组织内 合成 藻类、水生植物BaP含量为0.005 μg/kg 植物BaP含量0.01~0.02μg/kg
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在熏烤、烘烤过程中形成 燃烧产物与食品的直接接触、烟尘与食品的直接接触
粮食烘干
高温下脂肪、胆固醇等成分的热解或热聚（10~70倍）
高温下食品的焦化或炭化
淀粉390℃时产生 0.7μg/kg 650 ℃时产生17μg/kg 650 ℃下葡萄糖产生7mg/kg、脂肪酸产生88mg/kg
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0.02~0.14
英国
荷兰
0.48
0.12~0.42
意大利
0.1~0.3
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奥地利
0.36
五、防治措施
加强环境治理
改变生产方式
改进烹调和加工方法 改变饮食习惯 去毒处理
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六、测定方法
（一）分配柱层析净化荧光测定法 1.原理 样品先用有机溶剂提取，或经皂化后提取，再将提 取液经液－液分配或色谱柱净化，然后在乙酰化滤纸上 分离苯并(a)芘，因苯并(a)芘在紫外光照射下呈蓝紫色 荧光斑点，将分离后有苯并(a)芘的滤纸部分剪下，用 溶剂浸出后，用荧光分光光度计测荧光强度与标准比较 定量。
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食品中苯并（a）芘的测定
前言
苯并（a）芘是一种多环芳香族碳
氢化合物，是已发现的200多种多环
芳烃中最主要的环境和食品污染物，
是一种强烈的致癌物质，对机体各器
官，如对皮肤、肺、肝、食道、胃肠
等均有致癌作用。
被国际癌症研究机
构列为I类致癌物。
苯并（a）芘在食
物中也有，谷类食物、蔬菜、脂肪和
油类是摄入苯并（a）芘的主要膳食来
源，食物在高温、长时间烹调中会产
生苯并（a）芘
我们按照国标《GB 5009.27-2016食品安全国家标准食品中苯并（a）芘的测定》中提供的食品中苯并（a）芘检测的方法对黄豆样品进行苯并（a）芘的测定。
使用LabTechSePRO全自动高通量柱膜通用固相萃取系统和MV5多通道平行浓缩仪来代替传统的手动净化和浓缩，不仅实现了净化、浓缩过程的全自动化，省却了大量的手动工作，提高效率，而且减少了人为误差，实现了高回收率和良好的实验重复性。
关键词
SePRO全自动高通量柱膜通用固相萃取系统；MV5多通道平行浓缩仪；食品；苯并（a）芘；GB 5009.27-2016
1、仪器设备及试剂
1.1仪器设备
SePRO全自动高通量柱膜通用固相萃取系统（莱伯泰科公司）；
MV5多通道平行浓缩仪（莱伯泰科公司）；
LC600 二元高压梯度高效液相色谱：配有荧光检测器（莱伯泰科公司）；
萃取柱：MIP-BAP 苯并(a)芘专用SPE小柱，500mg 6mL（CNW公1.2试剂二氯甲烷，正己烷，乙腈（色谱纯 FISHER Chemical）；
苯并（a）芘标准储备液：100ug/mL，乙腈，国家标准物质；
苯并（a）芘标准工作液：取100μL的标准储备液与10mL的容量瓶中，用乙腈定容，得到浓度为1μg/mL的标样工作液。
2、实验过程
2.1 样品预处理
取一定量的黄豆，将其磨碎成均匀的样品，储于洁净的样品瓶中，于室温下保存。
2.2 提取
称取1g（精确到 0.001g）试样，加入 5 mL 正己烷，旋涡混合 0.5 min，40℃下超声提取10min，4000r/min离心5min，转移出上清液。
再加入5mL正己烷，重复提取一次。
合并上清液，用2.3的净化方法进行净化。
2.3 净化
采用苯并(a)芘分子印迹柱，按照图1所示的固相萃取方法进行提取液样品的净化。
将所得净化液在40 ℃下氮气吹干，准确吸取1mL乙腈涡旋复溶0.5min，过微孔滤膜后供液相色谱测定。
图1苯并(a)芘净化的固相萃取方法
2.4 加标样品处理
在 2.2所得的上清液中，加入10μL的苯并(a)芘标准工作液（1μg/mL），混匀后，再按2.3的步骤对加标样品进行处理。
样品的加标浓度为10ng/mL。
2.5 高效液相色谱-荧光检测条件
色谱柱：C18，柱长250mm，内径4.6mm，粒径5μm，或性能相当者；
流动相：乙腈+水=88+12；
流速：1.0mL/min；
荧光检测器：激发波长384nm，发射波长406nm；
柱温：35 ℃；
进样量：20μL。
3、实验结果
3.1 苯并（a）芘标样液相色谱图
图2为10ng/mL的苯并（a）芘标样的液相色谱图。
图210ng/mL的苯并（a）芘标样液相色谱图
3.2 空白样品色谱图
图3为空白样品的色谱图，在苯并（a）芘的出峰时间处没有峰，说明该样品中没有苯并（a）芘检出。
图3空白样品色谱图
3.3加标样品色谱图
图4为加标样品的色谱图。
图4加标样品色谱图
3.4加标回收率结果
表1为加标回收率结果，6个平行样的回收率90.1%~97.4%，RSD为3.0%。
表1加标回收率结果
序号化合物
回收率%
RSD 1 2 3 4 5 6 平均值
1 苯并(a)芘97.4 92.8 90.1 96.5 91.5 94.4 93.8 3.0
4、结果与讨论
本文按照国标《GB 5009.27-2016 食品安全国家标准食品中苯并（a）芘的测定》的方法对黄豆样品进行苯并（a）芘的测定，实验的回收率为90.1%~97.4%，RSD为3.0 %。
由此可见，方法中使用LabTechSePRO全自动高
通量柱膜通用固相萃取系统和MV5多通道平行浓缩仪来代替传统的手动净化和浓缩，实现了净化、浓缩过程的全自动化，不仅省却了大量的手动工作，提高效率，而且减少了人为误差，实现了高回收率和良好的实验重复性。
参考标准
1、GB 5009.27-2016 食品安全国家标准食品中苯并（a）芘的测定
撰写人：苏丽评
审稿人：LN WX。