血浆氨测定
0～5岁正常健康儿童血浆氨基酸水平测定及临床意义
主垦!堕压塞旦堕堂!!!!至!旦箜!鲞箜i塑曼!i些鱼!垫里翌!丛型!塑!坦!!!：!!!：!：盟!：!O～5岁正常健康儿童血浆氨基酸水平测定及临床意义姚梦霖陈耀勇刘丽赵小媛程静李秀珍周伟石国光曾其毅【摘要】目的观察正常健康儿童各年龄组血浆游离氨基酸变化规律，建立儿童正常参考值，为氨基酸代谢相关性疾病的诊治提供依据。
方法应用反相高效液相(R T—H PLC)柱前衍生法对246例5岁以下正常健康儿童进行血浆游离氨基酸水平检测。
结果新生儿组血浆游离氨基酸水平与1个月以上年龄组儿童差异有统计学意义(P<0．05)；6个月龄后血浆游离氨基酸水平趋于稳定(P>0．05)；大部分血浆游离氨基酸水平不存在性别差异(P>0．05)；与15年前国内资料比较半数左右血浆氨基酸有统计学差异。
结论血浆氨基酸与年龄具有一定的关系，与性别可能无关。
【关键词】血浆氨基酸；儿童Pl as m a am i no a ci ds i n nor m al ch i l d r e n under5yea r s ol d Y A O M eng—f i n，C H E N Y ao—yon g，LI U Li，e t a1．C hi l dr en’H ospi t al of G u a ng z ho u，G u a ng z ho u510000，C hi na【A bst r act】O bj ec t i ve To t est pl a sm a a m i no aci ds i n nor m a l chi l dr en un de r5year s ol d f or pr ovi d i ng nor m al val u es a nd he l p i ng di a gnosi s a nd t r e at m e nt of a m i n o aci d m e t abol i sm cor r el at ed di se a se．M et hods T he l evel s of pl as m a a m i n o aci d of di f f er ent age s a nd se x e s246hea l t hy chi l d r en w er e det ect ed by r ev er sed—phase hi gh—per f or m ance l i qui d chr om at ogr aphy(R T-H P LC)．R es ul t s The r e w as t r a ns par e nt di f f er ence of pl as m a f ree a m i no aci d s con cent r at i on bet w ee n ne onat e a nd1-6m ont hs chi l dr en(P<0．05)，and t he pl a sm a a m i no aci d sco ncen t r a t i on di f f er ence w as s i gni f i cant bet w e en chi l dr en bei ngyo un ge ra nd ol de r t ha n6m ont h s(P<0．05)．T he a m i no aci d s l ev el s w e r e not co nsi de r ab l y di f fer ent am ong t he chi l dr en w h o w er e ol der t h an6m ont hs．M os t pl a sm a a m i no aci d s l ev el s w e r e not s i gnif i cant l y di f f er ent bet w ee n di f f er ent sex es．A bou t on e hal f pl a sm a a m i no aci ds con cent r at i on w er e s i gni f i cant l y di f f er ent bet w ee n ou r dat a and i nt er nal da t a15year s ago(P<0．05)．C o nc l us i o n T he pl a sm a a m i no aci ds con cent r at i on i s r el at e d t oag eand pr oba bl y i s not r el at e d t o gend er．【K ey w or ds】Pl a sm a f ree a m i no ac i d；Chi l dr e n血浆氨基酸是氨基酸在各组织间转运和代谢的主要形式，氨基酸的变化不仅反映体内蛋白质的代谢状态，也反映氨基酸自身代谢情况，测定血浆氨基酸水平对于判断体内蛋白质代谢及氨基酸代谢状况具有重要的意义。
干化学法测定血浆氨
干化学法测定血浆氨王小青;徐克;孙云辉【期刊名称】《浙江检验医学》【年(卷),期】2004(000)002【摘要】目的评价干化学法测定血浆氨的性能及影响因素。
方法用美国强生公司生产的VITROS DT60Ⅱ半自动生化分析仪及干化学法测定血浆氨,并进行应用研究。
结果血氨浓度在13.5~460μmol/L内线性良好,精密度高低值批内CV为9.17%和5.76%,回收率为96.2%~104.7%,正常人血氨参考值为30.81±27.60μmol/L。
血标本采集后置4℃0.5h、1h,室温0.5h测定结果,同即刻测定值比较P均>0.05,无显著性差异;放置4℃2h,室温1h、2h测定结果,同即刻测定值比较P均<0.05,有显著性差异。
结论干化学法测定血浆氨具有快速、简便、准确、可靠等优点,适合急诊使用。
血氨标本采集后应及时送检、测定,标本室温放置时间不能超过半小时,4℃放置时间不得超过一小时。
【总页数】2页(P24-24,29)【作者】王小青;徐克;孙云辉【作者单位】浙江省温州市第二医院;浙江省温州医学院检验系【正文语种】中文【中图分类】R446.1【相关文献】1.干化学法测定血浆氨的价值 [J], 王小青;徐克;孙云辉2.干化学法测定血浆乳酸的应用与评价 [J], 史小波;李晗3.干化学法测定血浆氨的全自动分析 [J], 王树辉;李贵芳;谭文4.真空采血管对干化学法检测血浆氨的影响 [J], 宋翼;余久如5.简单快速高效液相色谱法测定血浆及尿中氨苯喋啶和羟基氨苯喋… [J], Masch.,H因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
血氨是什么检查项目
血氨是什么检查项目血氨（Blood Ammonia）是指血液中氨的浓度，是一种重要的生化指标，常用于评估肝脏功能和排除相关疾病的诊断。
氨在正常情况下由肝脏转化为尿素，然后经尿液排出体外。
如果肝脏功能出现问题，氨就会在体内积累，导致血氨浓度升高。
本文将详细介绍血氨检查项目，包括其意义、检查方法、结果解读及其与相关疾病的关系。
一、血氨检查的意义血氨检查是评估肝脏功能的重要指标之一。
由于氨是由肝脏转化为尿素的关键物质，而尿素是人体代谢废物的主要形式，因此血氨浓度的升高往往意味着肝脏功能受损。
二、血氨检查的方法血氨检查一般需要抽取一定量的静脉血样本。
在检查前需接受快速空腹等预处理，以获得准确的检测结果。
具体的检查方法包括：1. 静脉采血：采用无菌注射器抽取静脉血样，并将其置于干燥和冰镇条件下，以防止氨的挥发和降解。
2. 血液处理：将血液样本快速离心，分离出血浆，并在冷冻条件下保存待检测。
3. 血氨测定：通过酶法、色谱或质谱等技术对血浆中的氨浓度进行测定。
4. 结果分析：根据测定结果与参考范围进行对比，判断血氨浓度是否异常。
三、血氨检查结果的解读正常成年人的血氨浓度通常在10-50 μmol/L（微摩尔/升）之间。
血氨浓度的异常可以分为三种情况：1. 血氨浓度偏高：肝脏功能受损、肝性脑病、静脉回流受阻、肾功能不全、胃肠道出血、酒精中毒等。
2. 血氨浓度偏低：先天性尿素循环失调症、肝移植后抗排异反应治疗等。
3. 血氨浓度严重偏高：持续高血氨症、尿毒症等。
四、血氨与相关疾病的关系1. 肝硬化和肝性脑病：肝脏功能受损导致氨无法转化为尿素，血氨浓度升高，可引发肝性脑病，表现为认知和运动障碍等神经系统症状。
2. 肾功能不全：由于肾脏排泄功能受损，导致体内氨无法正常排出，血氨浓度升高。
3. 肾性脑病：肾功能不全引起的高血氨症，可导致神经系统功能异常，并引发肾性脑病。
4. 先天性尿素循环失调症：由于先天性遗传缺陷，尿素循环酶缺失，导致氨不能转化为尿素，血氨浓度持续升高，表现为嗜睡、痉挛、呕吐等症状。
血氨检测临床意义
正常人体内游离血氨含量极低(血氨正常值2０~60μｍｏl/Ｌ)、ﻫ临床意义:血氨值偏高可能影响肝病患者肝昏迷的发生、其根据主要就是:①本病发作时患者血氨及脑脊液中氨浓度明显升高;②给某些肝硬变或慢性肝病患者大量高蛋白饮食或含铵药物,可诱发本病;限制蛋白质摄入与采取降血氨治疗后,病情有好转,可使患者从昏迷中清醒、③给动物喂食大剂量铵盐可使门静脉血氨浓度升高,当超过肝脏处理氨的能力时,体循环血氨升高,动物出现神经症状及昏迷、氨对中枢神经系统的毒性作用,目前认为主要就是造成脑能量代谢障碍,以及直接干扰神经细胞膜的正常功能而造成、但就是氨中毒不就是肝性脑病的唯一发病机制、因为部分患者血氨并不增高,另一些血氨增高的肝病患者并不出现肝性脑病,昏迷程度也不与血氨升高呈平行关系,降低血氨措施并不对每个病例都有效血氨(ｂｌood ammonia;ｐlａｓma amｍoｎｉa;seｒｕｍ aｍmonia):体内各组织各种氨基酸分解代谢产生的氨以及由肠管吸收进来的氨进入血液,形成血氨。
血氨正常值2０～60μmoｌ/L。
、血清:２2—45ｕmol/Ｌ或40—80ｕｇ/dl(酶法)。
换算成SＩ单位因素:０、587.血氨测定的临床意义2011－05-2５0６:31:46 作者:佚名来源:网络转载人体内血氨(Plasma amｍoｎia)含量极微,但氨对人体有毒,能影响神经细胞的新陈代谢。
血氨的来源增加与去路减少,都会引起血氨增高。
血氨测定对肝性脑病的诊断与鉴别诊断有极其重要的意义。
一、生化特性血液中氨的人体内血氨(Pｌａsma ａmmｏnia)含量极微,但氨对人体有毒,能影响神经细胞的新陈代谢。
血氨的来源增加与去路减少,都会引起血氨增高。
血氨测定对肝性脑病的诊断与鉴别诊断有极其重要的意义。
一、生化特性血液中氨的来源主要为肠道中细菌分解尿素与由氨基酸脱氨所生成。
此外,组织细胞中有多种脱氨酶,能使蛋白质、核苷酸脱氨而生成氨。
在正常情况下,氨的主要去路就是在肝脏通过鸟氨酸循环合成尿素。
血浆氨检测的标本送检要求及注意事项
⾎浆氨检测的标本送检要求及注意事项⼀、概述⾎浆氨检测是临床实验室常规检测项⽬之⼀，主要⽤于评估肝功能、预测肝性脑病以及协助诊断尿素循环异常等疾病。
为了确保检测结果的准确性，患者及医护⼈员在送检标本时需遵循⼀定的要求和注意事项。
本⽂将对⾎浆氨检测的标本送检要求及注意事项进⾏详细阐述。
⼆、标本送检要求1.标本采集时间：⾎浆氨的测定应在清晨空腹时采集，以避免饮⻝对检测结果的影响。
如病情需要，也可在其他时间采集标本。
2.采⾎姿势：采⾎时应采取坐位或卧位，避免因体位改变导致⾎浆氨浓度波动。
3.⽌⾎带使⽤：采⾎时，应避免使⽤⽌⾎带过紧或时间过⻓，以免影响⾎浆氨的浓度。
4.采⾎量：采⾎量⼀般为5-10ml，保证标本量充⾜，以满⾜检测需要。
5.保存容器：使⽤真空采⾎管或适当的清洁⼲燥容器采集⾎液，避免使⽤玻璃试管。
6.避免溶⾎：采集标本时应避免红细胞破裂，溶⾎会影响⾎浆氨的测定结果。
7.及时送检：采集的标本应尽快送⾄实验室进⾏检测，避免⻓时间放置导致⾎浆氨浓度的变化。
三、注意事项1.饮⻝控制：患者在检测前应避免⾼蛋⽩饮⻝，因为蛋⽩质在消化过程中会产⽣氨，影响⾎浆氨的测定结果。
同时，避免⼤量饮酒，酒精代谢过程中会产⽣⼤量氨。
2.药物影响：某些药物如巴⽐妥类、苯妥英钠等，可能导致⾎浆氨浓度升⾼。
因此，在检测前应告知医⽣近期⽤药情况。
3.疾病⼲扰：某些疾病如肝脏疾病、消化道出⾎等，可能导致⾎浆氨浓度升⾼。
因此，对于异常的⾎浆氨结果，应结合临床情况综合分析。
4.检测仪器：采⽤全⾃动⽣化分析仪进⾏⾎浆氨的测定，可提⾼检测效率并减⼩误差。
同时，应定期对分析仪进⾏校准和维护，以确保检测结果的准确性。
5.质量控制：实验室应遵循质量控制规范，定期进⾏室内质控和室间质评，以确保⾎浆氨检测结果的准确性。
对于异常结果，应进⾏复检和确认，避免误判和漏检。
6.⽣物安全：实验室⼯作⼈员在处理⾎液标本时应注意个⼈防护，避免直接接触⾎液或⻜溅物。
血氨检验方法以及临床意义
血氨检验方法以及临床意义人体内血氨含量极微，血氨的来源增加和去路减少，都会引起血氨增高。
由于氨对人体有毒，能影响神经细胞的新陈代谢，故血氨测定对肝性脑病的诊断和鉴别诊断有极其重要的意义。
(一)原理血浆氨的酶法测定基于下列反应：α-酮戊二酸+NH4++NADPH L-谷氨酸+NADP++H2O在过量α-酮戊二酸、NAD(P)H和足量谷氨酸脱氢酶(GLDH)条件下，酶促反应的速率，即NAD(P)H转变成 NAD(P)+使340 nm吸光度的下降速率与反应体系中氨的浓度呈正比关系。
(二)标本采集氨测定的准确性在很大程度上取决于标本的留取和收集。
为了准确测定血氨浓度，必须注意以下几点：1．吸烟是血氨浓度假性增高的主要原因。
采血前1天的午夜后应禁止吸烟。
严重吸烟的患者，采血前应淋浴，穿新的睡衣裤。
采血医务人员也必须是非抽烟者。
2．实验室周围环境和实验室空气中的氨是标本氨污染的原因。
为了减小标本和器皿受实验室空气中氨的污染，最好在特定实验室中采集标本和进行测定，并限制人员进出实验室，器皿必须经过化学处理。
3．血氨测定应用血浆进行测定，可选用草酸钾、EDTA或肝素抗凝剂，不能使用肝素铵抗凝剂，氟化物抗凝剂将使测定值增高。
4．标本采集后必须立即置冰浴中，尽快离心分离出血浆，并及时进行测定。
即使在0℃，从采血到测定开始时间，滞留15分钟以上就可引起血氨浓度升高。
另外，标本中含氮物质的分解代谢是氨污染的另一原因。
采集后，血液中氨基酸即可发生脱氨分解，可造成血氨浓度升高。
5．尿氨也可以测定。
尿应在无防腐剂条件下收集，并尽快测定。
(三)试剂全部试剂必须用去稀氨溶液制备。
去稀氨溶液用蒸馏水经氢型阳离子交换树脂处理获得。
1．66．7 mmol／L KH2PO4溶液：取9．12 g KH2PO4溶入去稀氨溶液中，定溶到1 L，4℃保存。
2．66．7 mmol／L Na2HPO4溶液：取9．51 g Na2HPO4溶解并加去稀氨溶液到1 L，4℃保存。
AMM氨测定试剂盒(谷氨酸脱氢酶法)产品说明书
氨测定试剂盒（谷氨酸脱氢酶法）说明书【产品名称】通用名称：氨测定试剂盒（谷氨酸脱氢酶法）英文名称：Blood ammonia Assay Kit（AMM）【包装规格】R1：2⨯60ml 、R2：2⨯15ml ；R1：2⨯40ml 、R2：2⨯10ml；R1：1⨯40ml 、R2：1⨯10ml；R1：2⨯20ml、R2：2⨯5ml；校准品(选配):2⨯2ml(水平1:1⨯2ml;水平2:1⨯2ml)。
【预期用途】用于体外定量测定人血浆中氨的含量。
临床上主要用于肝性脑病的辅助诊断。
【检验原理】过量的α-酮戊二酸、NADH 和足量谷氨酸脱氢酶（GLDH)存在的条件下，NADH 转变成NAD+,在340nm 监测吸光度下降速率与样本中氨的含量成正比。
GLDHNH 4++α-酮戊二酸+NADH→谷氨酸+NAD ++H2O【主要组成成分】由试剂R1、R2和校准品组成。
试剂R1：谷氨酸脱氢酶(GLDH)3.5KU/L、α-酮戊二酸（C 5H 6O 5）6.55mmol/L、氯化钠（NaCl）140mmol/L；试剂R2：叠氮钠（NaN 3)0.1%、还原型辅酶（NADH)1.1mmol/L；校准品：含醋酸铵的水溶液。
校准品可溯源至贝克曼血氨参考品439770，注：浓度见每批瓶标示。
不同批号试剂盒中各组分不可以互换。
【储存条件及有效期】试剂和校准品在2℃～8℃无腐蚀性气体中避光储存，若无污染，可稳定至失效期。
有效期365天。
试剂和校准品开瓶后2℃～8℃可稳定7天。
备注：生产日期及失效日期见外盒或瓶标签。
【适用仪器】日立7180、奥林巴斯AU680、贝克曼LX-20/DXC800、迈瑞BS-380、朕江T900全自动生化分析仪。
【样本要求】1、静脉采血，EDTA 抗凝血浆样本。
2、样本采集后需尽快分离，如不能做到这一点，应该将收集来的血样立即放在冰块上或放置冰箱内，并且在30分钟内离心，分离后的血浆请置于2℃～8℃并在2小时内进行测定。
血氨测定
有两类血氨测定方法。
一类为两步法，先从全血中分离出氨，再进行测定，如扩散法（已淘汰）；另一类为一步法，不需从全血中分离出氨采用干化学法即可直接测定。
（1）干化学直接显色测定法：在床旁取静脉血2MI，用Berthelot（酚-次氯酸盐）试剂显色，参照标准，计算氨的含量。
如果严格掌握实验条件，本法分析结果能满足临床要求。
（2）谷氨酸脱氢酶速率法：血浆中的氨在足量的r酮戊二酸和NADPH存在时，经谷氨酸脱氢酶作用生成谷氨酸，并消耗NADPH，NADPH的下降速率与血浆氨浓度成正比。
血氨酶法测定重复性差，多不采用。
（3）血氨的"真值"问题：血浆中氨含量很低；血浆中的谷氨酰胺和多肽易水解释放出氨；红细胞内氨较血浆高2.8倍，故血标本久置会使血浆氨含量急骤增高；分析过程受氨污染的机会也较多；不同方法的分析结果有很大差别。
血浆中氨基酸检测技术探讨_周文芳
· ２６ ·
周 文 芳 ：血 浆 中 氨 基 酸 检 测 技 术 探 讨
２ 检 测 技 术 ２．１ 高 效 液 相 色 谱
高效液相色谱是检测氨基酸比较通用的方法， 其 检 测 成 本 低 、重 复 性 好 、灵 敏 度 高 。 从 衍 生 方 法 角 度可分为柱前衍生法和柱后衍生法。柱前衍生技术 在于检测过量衍生 试 剂 对 柱 子 是 否 有 影 响，衍 生 生 成 物 是 否 稳 定 ，衍 生 是 否 完 全 ；柱 后 衍 生 技 术 就 不 存 在过量衍生试剂对 柱 子 的 影 响 问 题，其 关 键 在 于 是 否能衍生完全，柱子 流 出 的 其 他 杂 质 是 否 干 扰 检 测 信号。从分离角度，普 通 的 Ｃ１８ 柱 和 氨 基 酸 分 析 专 用 柱 的 分 析 差 异 较 大 ，ＡｃｃＱ·Ｔａｇ 柱 就 是 典 型 的 氨 基酸 分 析 柱，它 经 特 别 检 验 筛 选 出 的 ４ ｍｍ 高 效 Ｎｏｖａ－ＰａｋｏＣ１８柱，能够把１８种氨基 酸 完 全 分 离，普 通 Ｃ１８柱则 达 不 到 完 全 分 离 的 效 果。 从 检 测 器 角 度 讲 可 用 紫 外 检 测 器 ，也 可 用 荧 光 检 测 器 ，需 要 根 据 衍生试剂而定。
的氨基 酸 与 茚 三 酮 反 应 液 在 加 热 的 条 件 下 反 应
（１３５ ℃），生成可用 紫 外 检 测 器 在 ５７０ｎｍ、４４０ｎｍ 检测到的蓝紫色物质（仲氨生成浅黄色物质 ４４０ｎｍ 检测）外标法定量。王洪健 等［１６］在 氨 基 酸 自 动 分 析 仪测定食品中牛磺 酸 的 方 法 建 立 一 文 中 提 出，氨 基 酸 分 析 仪 灵 敏 度 高、专 一 性 强，最 低 检 出 限 为 １０ｐｍｏｌ。 ２．３ 液 相 色 谱 －质 谱／质 谱 联 用
血氨的检测及临床意义
血氨的检测及临床意义一、概述1、正常人体中含有少量游离的氨（ammonia，NH3），主要来源于肠道中未被吸收的氨基酸，未消化的蛋白质及由血液中渗入肠道中的尿素，经大肠埃希菌作用脱氨基生成的氨，以及蛋白质代谢过程中生成的氨。
2、氨是有毒物质，人体内的氨通过以下途径解毒：①肝内经鸟氨酸循环合成尿素，经肾脏排出体外；②转变为氨基酸上的氨基；③在肾脏泌氨中与肾小管腔中的H+形成铵盐，随尿排出体外。
肝脏将氨合成尿素，是保证血氨正常的关键。
3、当肝脏功能严重损伤（80%肝组织遭破坏）时，氨不能被解毒，在中枢神经系统聚集，会引起肝性脑病。
二、检测方法血氨测定是临床常用的蛋白质代谢产物检查项目之一。
血浆氨浓度的测定可归纳为不需从血浆中分离出氨的直接测定法（酶法及氨电极法）及需要从全血中分离出氨再进行测定的间接测定法（扩散法，离子交换法）两大类；另有较新的干化学测定方法临床最常用的方法是应用谷氨酸脱氢酶的酶学方法优点是提高测定特异性和缩短分析时间。
三、参考区间成人血浆氨浓度18～72μmol/L。
因检测方式的不同，实验室参考区间可能有所不同，具体应以报告单参考值为准。
有研究指出，血浆氨浓度女性比男性低10%，儿童血液中血氨正常值普遍比成人正常值高，新生儿比儿童更高。
四、注意事项1、吸烟对患者和标本都是氨污染的原因，如采血前1小时吸一支雪茄烟，将使空腹静脉血氨浓度增高100～200g/L。
血氨检测标本采集前一天的午夜后应禁止吸烟。
2、实验室周围环境和实验室空气中的氨是标本氨污染的原因。
为了减少标本和器皿受实验室空气中氨的污染，最好在特定实验室中采集标本和进行测定；限制人员进出实验室；器皿必须经过化学处理。
3、检测标本应使用草酸钾、EDTA 或肝素抗凝的血浆标本，不能用肝素钱和氟化物抗凝，将使测定值增高。
4、标本中含氮物质的分解代谢是氨污染的另一原因。
采集后，血液中氨基酸即可发生脱氨分解，可造成血氨浓度升高。
即使在0℃，采血后15分钟以上就可引起血氨浓度升高；在25℃时，血氨浓度增高速率约为0.017μg/（min·ml）血液。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
终点法特点：
优点是简单。
缺点是难以确定反应时间段酶促反应是否处于线性期。
注意：固定时间法时间段的预定不宜太长
（二）连续监测法
定义：测定底物或产物随时间的变化量，又称为 速率法。
原理：
该方法每隔一定时间（10s～60s）测定一次底物 或产物的变化量，连续测定多点，然后将测定结果对 时间作图，绘制反应速度曲线。
A单试剂连续监测法
B双试剂连续监测法
实验目的
掌握酶法测定血浆氨的原理及方法 熟悉工具酶的概念及应用 了解血浆氨测定的临床意义
实验原理
NH3+ H ++ NADH + α-酮戊二酸 GLDH L-谷氨酸 +NAD+ + H2O
氨在谷氨酸脱氢酶的作用下与α-酮戊二酸反应
生成谷氨酸,并将NADH 氧化为NAD+,测定 在340nm波长处的吸光度下降值，通过与标 准品340nm处吸光度的下降值比较,计算测定 样本中氨的浓度。
临床意义
肝昏迷的监测
儿科Reye综合症的诊断
注意事项
准确加样 严格控制反应时间 准确读数 避免氨污染
样品管 3.0ml
—— —— 1.5ml 60ul
各管混匀，37℃水浴放置10分钟 Ｒ２
各管混匀，20S和100S时读取各管吸光度值
结果计算
△A 标准=(A1-A2)标准-(A1-A2)空白
△A样品=(A1-A2)样品-(A1-A2)空白
氨浓度（umol/L）=△A 样品/△A 标准×标准浓度 血氨标准液=58.8 u类似,利用酶催化反应的高效率和
专一性，可以测定底物浓度
测定方法
固定时间法 按照对酶 促反应时 间的选择 不同 连续监测法
（一）固定时间法
定义：测定酶促反应开始后一段时间内底物的减少 量或产物的增加量。
分类： 终点法：在反应进行到预定时间后要终止反应。
两点法：该方法反应时间的预定是从t1～t2 。
酶法测定血浆氨
华中科技大学附属协和医院检验科
Michaelis 和 Menten 根据 Henri 提出的酶-底 物复合物学说,推导了单底物酶促反应方程
V max[ S ] V0 Km [ S ]
酶促反应进程曲线
工具酶
定义： 工具酶：作为试剂用于测定待测酶活性或底物浓 度的酶。
分类： 工具酶有氧化还原酶类、转移酶类和水解酶类
特点：
优点: 能动态观测酶促反应进程，可以明显地找到反 应的线性期，结果准确可靠，标本和试剂用量少， 可在较短时间内完成测定。
缺点：
要求高，要求能够精确地控制温度、pH值和底物浓 度等反应条件，要求仪器具有恒温装置及自动监测 功能，半自动及自动生化分析仪都能达到这些要求。
连续监测法反应曲线
测定条件（基本操作参数)
测定方法 两点法 读数时间 90S 试样比例 2:1 比色光径 1cm 实验温度 37℃ 测定波长 340nm
测定步骤
试剂R1加5ml新鲜去离子水溶解10min混匀
Ｒ１ 蒸馏水 标准 样品
空白管 3.0ml
1.5ml —— —— 60ul
标准管 3.0ml
—— 1.5ml —— 60ul