革兰氏染色的机理和步骤
简述革兰氏染色方法的步骤及原理。
简要方法步骤:涂片→干燥→冷却→结晶初染→碘液媒染→酒精脱色→番红复染→干燥→镜检。
原理:与两类细菌的细胞壁成分笔结构有密切关系。
革兰氏阴性菌的细胞壁中含较多的类脂质，而肽聚糖含量较少。
当用酒精脱色时，类脂质被溶解，从而增加了细胞壁的通透性，使初染后的结晶紫碘的复合物易于渗出，结果细胞被脱色，经复染后则呈现复染剂的颜色。
而革兰氏阳性菌细胞壁中肽聚糖含量多且交联度大，类脂质含量少,经酒精脱色后，肽聚糖层的孔径变小，通透性降低，因而细胞仍保留初染时的颜色。
革兰氏染色原理步骤
革兰氏染色原理步骤革兰氏染色是用于细菌分类和鉴定的一种常用染色方法。
其步骤如下：1. 准备好细菌培养物。
将待染色的细菌培养物均匀涂布在玻璃片上，形成细菌涂片。
2. 固定细菌涂片。
将涂片在火焰上加热，杀死细菌并使其附着在玻璃片上。
3. 滴加革兰染色液。
将革兰染色液滴在细菌涂片表面，使其完全覆盖细菌。
4. 革兰染色液浸渍。
将细菌涂片放置在革兰染色液上，静置约1分钟，确保染色液充分浸渍细菌。
5. 温和洗涤。
用蒸馏水轻轻冲洗细菌涂片，以去除多余的革兰染色液。
6. 涂紫晶染色液。
将涂片放置在紫晶染色液上，静置约1分钟，使细菌染成紫色。
7. 温和洗涤。
用蒸馏水轻轻冲洗细菌涂片，以去除多余的紫晶染色液。
8. 加碘液。
将碘液滴在细菌涂片上，静置1分钟，使细菌形成革兰氏阳性细菌与革兰氏阴性细菌的复合物。
9. 温和洗涤。
用蒸馏水轻轻冲洗细菌涂片，以去除多余的碘液。
10. 酒精去色。
用75%乙醇溶液滴在细菌涂片上，静置10-30秒，直到溶液从细菌涂片上下滴。
11. 温和洗涤。
用蒸馏水轻轻冲洗细菌涂片，以去除多余的酒精。
12. 涂甲基蓝染色液。
将涂片放置在甲基蓝染色液上，静置30-60秒，使细菌染成蓝色。
13. 温和洗涤。
用蒸馏水轻轻冲洗细菌涂片，以去除多余的甲基蓝染色液。
14. 倒置晾干。
将细菌涂片倒置在干净的滤纸或架子上晾干。
完成上述步骤后，通过显微镜观察细菌涂片即可看到革兰氏染色的结果，革兰氏阳性细菌呈紫色，革兰氏阴性细菌呈蓝色。
革兰氏染色机理
革兰氏染色机理介绍革兰氏染色是一种常用的细菌染色技术，能够将细菌分为革兰阳性和革兰阴性两类。
本文将详细介绍革兰氏染色的原理、步骤和应用。
原理革兰氏染色的原理是利用革兰阳性和革兰阴性细菌细胞壁的差异，通过染色后的颜色反映出两者的区别。
步骤革兰氏染色步骤如下：准备细菌样品1.取一份细菌培养液的样品。
固定细菌样品1.将细菌样品滴在洁净的玻璃片上。
2.用火焰将玻璃片加热，使细菌附着在玻璃片上。
染色1.用紫色碘溶液滴在固定的细菌样品上，静置1分钟。
2.用水冲洗碘溶液。
脱色1.将酒精滴在细菌样品上，直至从玻璃片上脱色。
染色1.用红色素溶液滴在细菌样品上，静置1分钟。
2.用水冲洗红色素溶液。
倒置晾干1.将玻璃片倒置在纸巾上晾干。
结果解读根据革兰氏染色的结果，可以得出以下结论：革兰阳性细菌革兰阳性细菌在染色后呈紫色，这是因为细菌细胞壁含有较多的革兰阳性染色颗粒。
革兰阴性细菌革兰阴性细菌在染色后呈红色，这是因为细菌细胞壁含有较少的革兰阴性染色颗粒。
应用革兰氏染色技术在微生物学领域有广泛的应用，包括但不限于以下方面：细菌分类革兰氏染色可以帮助鉴定不同类型的细菌，根据染色结果可以进行初步的分类和鉴定。
感染诊断医学上，革兰氏染色可以用于感染诊断，帮助医生判断细菌感染的类型和严重程度。
细菌研究在细菌研究领域，革兰氏染色常用于观察细菌形态和细胞壁结构的变化，为研究细菌的生长和繁殖机制提供基础数据。
食品安全革兰氏染色也可以用于食品安全领域，帮助检测食物中是否含有细菌污染物，保障食品的安全性和卫生标准。
总结革兰氏染色机理通过染色反映了革兰阳性和革兰阴性细菌细胞壁的差异。
通过上述步骤，我们可以得到染色后的细菌样品，并通过染色结果对不同类型的细菌进行初步分类和鉴定。
革兰氏染色在微生物学研究、临床医学和食品安全等领域有着广泛的应用。
革兰氏染色的过程和原理
革兰氏染色的过程和原理
革兰氏染色是一种常用的细菌染色方法，通过此方法可以将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。
该染色方法基于不同细菌细胞壁组成的差异，通过特定的染色步骤使细菌在显微镜下呈现不同的颜色。
革兰氏染色的过程包括以下几个步骤：
1. 取一片细菌培养物，涂抹在玻片上，使其形成薄膜。
2. 将涂片在火焰中烘烤，以使细菌附着在玻片上。
3. 将烘烤后的涂片浸入革兰氏紫染色剂中，静置数分钟。
4. 用蒸馏水冲洗涂片，直至洗涤液不再有紫色溢出。
5. 在涂片上滴加碘酒，静置一段时间。
6. 用蒸馏水冲洗涂片，直至洗涤液不再有颜色溢出。
7. 滴加脱色剂（乙醇或乙醚）在涂片上，迅速冲洗。
8. 用蒸馏水冲洗涂片，直至洗涤液不再有颜色溢出。
9. 滴加革兰氏染色剂（碱性洋红）在涂片上，静置1-2分钟。
10. 用蒸馏水冲洗涂片，直至洗涤液不再有颜色溢出。
11. 用纸巾或吹风机轻轻吹干涂片。
12. 使用显微镜观察涂片下的细菌。
革兰氏染色的原理是基于细菌细胞壁的差异。
革兰氏阳性菌的细胞壁含有较厚的层状壁，并富含肽聚糖和穿孔蛋白，所以在革兰氏紫染色剂作用下会显现紫色。
而革兰氏阴性菌的细胞壁较薄，内层有脂多糖包裹，所以在革兰氏紫染色剂作用下不易显现出紫色。
革兰氏染色是一种常用的初步细菌分类方法，通过观察细菌在显微镜下的染色特性，可以初步判断细菌的类型，对于临床诊断和细菌研究都有重要意义。
实验三 革兰氏染色法
三、实验器材及试剂
• 枯草芽孢杆菌、大肠杆菌 18～24h 培养 物 • 革兰染色液一套（草酸铵结晶紫染液、卢 戈碘液、95%乙醇、番红染液） • 酒精灯，玻片，接种环，吸水纸，香柏油， 二甲苯，显微镜。
五、注意事项
5、染色时注意看清染料名称，按序进行、滴加染料 以能覆盖涂片为度不宜过多，要掌握好染色时间， 尤其是酒精脱色时间，不宜过长或过短。染色中除 脱色时摇动玻片外均要端平玻片或将其静放台面上。 染色过程中，不可使染液干枯。
6、水洗切勿先倒去染料，而是用较小水流冲洗在玻 片一端，用水流将它们缓缓带走，避免直接冲洗菌 膜处，要切忌将未经火焰固定的标本染色水洗。
④复染：加番红染液1～2滴于标本面上，染1min， 水洗后吸干。
四、实验步骤
5、镜检 用毛边纸或滤纸轻轻吸干(珍贵标本应自然干燥)，
待标本充分干燥后加油，用油镜观察并判断细菌的 染色结果。
6、实验后处理 用二甲苯擦油镜镜头后用擦镜纸擦干，整理、
清洁显微镜，把显微镜放回原处，把标本片放入消 毒缸中消毒5min后清洗。
四、实验步骤
2、干燥 将涂片放空气中自然干燥，或在离火焰较远处
烘干，切勿高温烘烤，因温度太高会破坏菌体形态。
3、固定 手持载玻片一端，将涂片在火焰外焰上连续通
过 3 个来回，每个来回约1s， 就可固定标本，直 到手背试触涂片反面热而不烫为宜。
四、实验步骤
4、染色
①初染：滴加结晶紫染液1～2滴于标本面上，染色 1min，轻轻水洗，甩干； ②媒染：滴加卢戈碘液1～2滴于标本面上，染色 1min，轻轻水洗，甩干； ③脱色：滴加95％酒精1～2滴于标本面上， 频频倾 动玻片， 直到不再溶下染料为止， 约30s， 视标本 片材料厚薄而增减时间，然后水洗，甩干；
革兰氏染色法的过程及原理
革兰氏染色法的过程及原理一，过程1 ．涂片将培养的不同菌分别作涂片（注意涂片切不可过于浓厚），干燥、固定。
固定时通过火焰l 一2 次即可，不可过热，以载玻片不烫手为宜。
2 ．染色( 1 ）初染加草酸铰结晶紫一滴，约一分钟，水洗。
( 2 ）媒染滴加碘液冲去残水，并覆盖约一分钟，水洗。
( 3 ）脱色将载玻片上面的水甩净，并衬以白背景，用95 ％酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止，约20 一30 秒钟，立即用水冲净酒精。
( 4 ）复染用番红液染1 一2 分钟，水洗。
( 5 ）镜检干燥后，置油镜观察．革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。
以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，常常呈假阳性。
( 6 ) 同法在一载玻片上以大肠杆菌与枯草芽孢杆菌混合制片，作革兰氏染色对比。
二，原理革兰氏染色法（Gram stain ）不仅能观察到细菌的形态而且还可将所有细菌区分为两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G＋表示：染色反应呈红色（复染颜色）的称为革兰氏阴性细菌，用G 一表示。
细菌对于革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。
革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肤聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，当用乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫一碘复合物被保留在细胞内而不易脱色，因此，呈现蓝紫色；革兰氏阴性细菌的细胞壁中肤聚糖含量低，而脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫一碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上了复染液（番红）的颜色，因此呈现红色。
革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度，如脱色过度，则阳性菌可被误染为阴性菌：而脱色，不够时，阴性菌可被误染为阳性菌。
此外，菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时间过长，或已死亡及部分菌自行溶解了，都常呈阴性反应。
青霉素作用机制干扰细菌细胞壁的合成。
青霉素你的结果与细胞壁的成分粘肽结构中德D-丙氨酰-D-丙氨酸近似，可与后者竞争转肽酶，阻碍你粘肽的形成，造成细胞壁的缺损，使细菌失去细胞壁的渗透屏障，对细菌起到杀灭作用。
革兰氏染色原理及步骤
革兰氏染色原理及步骤革兰氏染色是一种常用的细菌染色方法，它能够区分细菌的结构特征，帮助我们进行细菌分类和鉴定。
革兰氏染色的原理和步骤对于微生物学和临床医学都具有重要意义。
下面我们将详细介绍革兰氏染色的原理及步骤。
首先，让我们来了解一下革兰氏染色的原理。
革兰氏染色是利用细菌细胞壁的化学成分差异来区分细菌的一种染色方法。
细菌细胞壁由多聚糖和肽聚糖构成，而革兰氏阳性菌的细胞壁含有较多的肽聚糖，可以保持紫晶染色剂的结合，呈紫色；而革兰氏阴性菌的细胞壁含有较多的多聚糖，不能保持紫晶染色剂的结合，呈粉红色。
接下来，我们来看一下革兰氏染色的步骤。
首先，准备好需要的试剂和材料，包括革兰氏染色试剂、细菌液、石蜡片、酒精灯等。
然后，将细菌涂抹在石蜡片上，用酒精灯加热杀菌。
接着，滴加革兰氏染色试剂，静置片上1分钟，然后用水冲洗。
最后，用干净的纸巾吸干水分，镜检。
革兰氏染色的步骤看起来简单，但是在操作过程中需要注意一些细节。
首先，细菌的涂抹要均匀，太多或太少都会影响染色效果。
其次，加热杀菌的时间和温度要掌握好，过热会破坏细菌结构，影响染色效果。
再者，革兰氏染色试剂的使用要注意按照说明书上的要求进行，时间过长或过短都会影响染色效果。
最后，在镜检时要仔细观察，区分细菌的染色情况，准确判断细菌的类型。
总的来说，革兰氏染色是一种简单而有效的细菌染色方法，通过对细菌细胞壁的特性进行染色，帮助我们区分和鉴定细菌。
在实际操作中，我们需要严格按照步骤进行，注意细节，确保染色效果的准确性和可靠性。
革兰氏染色的原理和步骤对于微生物学研究和临床诊断都具有重要意义，希望大家能够加强对革兰氏染色的理解和掌握，提高实验操作的技能水平。
革兰氏染色法的过程及原理
革兰氏染色法的过程及原理革兰氏染色法是一种用于细菌分类和鉴定的重要染色方法。
该方法由丹麦细菌学家克里斯汀·革兰发现并发展起来，于1884年首次发布。
革兰氏染色法能够将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大类，具有重要的临床和实验室应用价值。
染色：将待检测的细菌接种于玻璃片上，用火焰烘烤杀灭细菌并固定在玻璃片上。
接着，将玻璃片放入甲醇中，用火焰加热将甲醇蒸发。
然后，将玻璃片浸泡在革兰之前的染色液中，染色液由紫色的亚甲基紫和碘化钾组成。
这一步骤的目的是通过紫色染料使细菌固定在玻璃片上。
洗涤：将玻璃片放入碘化钾溶液中洗涤。
碘化钾能与细菌细胞壁上的一些成分形成复合物，使细菌呈现蓝色。
固定：将玻璃片放入醇中洗涤。
醇有助于将紫色染料从革兰阴性菌的细胞壁中洗去。
显微观察：将玻璃片放入显微镜下观察。
在显微镜下，革兰阳性菌呈现紫色，而革兰阴性菌呈现红色。
根据这一特征，可以进行细菌的初步分类和鉴定。
革兰氏染色的原理是基于细菌细胞壁的差异。
革兰氏阳性菌具有较厚的细菌细胞壁，由于其壁中含有较多的肽聚糖和穿过壁的肽聚糖横向支链，革兰阳性菌在染色过程中能够较好地固定紫色染料，显示为紫色。
而革兰氏阴性菌则具有较薄的细菌细胞壁，壁中的肽聚糖和肽聚糖支链较少，使得革兰阴性菌无法固定紫色染料，而显示为红色。
革兰氏染色法的原理还与染色液中紫色染料的结构有关。
紫色染料中的亚甲基紫分子带有正电荷，而革兰阳性菌细胞壁中的较多的负电荷物质使其对亚甲基紫具有亲和力，从而固定了紫色染料。
而革兰阴性菌细胞壁中的负电荷物质相对较少，因此无法固定紫色染料，而被酒精洗去，再经过后续的红色染料染色，显示为红色。
然而，革兰氏染色法也存在一些局限性，比如一些细菌可能失去一些特性，导致染色结果不准确。
此外，一些细菌在真菌的单位时间染色效果不佳，也需要进行其他进一步的鉴定方法。
因此，在细菌分类和鉴定中，革兰氏染色法常常与其他染色方法和生化试验相结合使用，以提高鉴定的准确性和可靠性。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
1.革兰氏染色的机理和步骤机理：G+、G-主要由其CW化学成分的差异而引起对乙醇的通透性，抗脱色能力的差异。
主要有肽聚糖的厚度和结构所决定。
G+的CW:肽聚糖层厚，脂质含量低。
乙醇脱色时CW脱水，孔径减少，透性降低，不易脱色，呈初染得蓝紫色。
G-的CW：肽聚糖层薄，脂质含量高。
乙醇脱色时，类脂被乙醇溶解，透性升高，细胞被复染显红色。
步骤：①涂片：在干净的载玻片上滴一滴水，用接种环挑取菌体均匀涂布于水中。
②固定：将玻片靠近酒精灯火焰，蒸干水分，但不要烤焦。
③初染：用碱性颜料结晶紫对菌液涂片进行初染。
④媒染: 以碘液媒染1min，水洗，吸干水分。
(细胞内形成结晶紫与碘的复合物，增强相互作用）⑤脱色(关键步骤）：以95%的乙醇脱色30s，应适当振荡均匀，是乙醇脱色完全。
⑥水洗，吸干。
⑦复染：??(第2张）复染30s，水洗吸干。
⑧干燥镜检。
2、用渗透皮层膨胀学说解说芽孢耐热机制。
芽孢的耐热性在于芽孢衣对多价阳离子和水分的透性很差，以及皮层的离子强度很高，这就使皮层产生了极高的渗透压去夺取芽孢核心中水分，其结果造成皮层的充分膨胀和核心的高度失水，正是这种失水的核心才赋予芽孢极强的耐热性。
3、引起微生物培养过程中PH变化的几种可能反应，并说明如何能够维持微培PH稳定。
答：培养过程中，由于营养物质被分解利用，代谢产物的形成与积累，会导致PH变化。
（第2张中的图）还与培养基的C/N比有关，C/N高，经培养基后PH显著下降，C/N 低，经培养基后PH明显上升。
PH调节：①加入缓冲剂--------常用:一氢二氢磷酸盐，K2HPO4 呈碱性，KH2PO4 酸性，只在一定的PH范围内调节（6.4--7.2）②大量产酸的菌株，加CaCO3调节，CaCO3难溶于水，不会使培养液的PH过度增加，但可不断中和微生物产的酸。
③培养液中存在天然的缓冲系统，如AA，肽，Pr均属两性电解质，也起缓冲的作用。
④过酸：治标------加NaOH、Na2CO3中和，治本-----加适量氮源：NaNO3、Pr、NH3·H2O；增加通风量。
⑤过碱：治标-----H2SO4、HCl中和，治本----加适量碳源:G类，脂类;减小通风量。
3、抗生素法和菌丝过滤法为何能浓缩营养缺陷型突变株？抗生素法（青霉素法）：适用于细菌。
原理：青霉素抑制肽聚糖链间的交联，组织了合成完整的CW，野生型B处于正常生长繁殖，所以对青霉素敏感，可被抑制或杀死；营缺B在基本培养基上休眠状态存活下来，从而达到浓缩营缺型目的。
制霉菌素法适用于真菌，其可与cm上？（第1张）醇作用，引起cm损伤，因为它只能杀死生长繁殖着的真菌，所以......菌丝过滤法:基本培上，野生型霉菌，？菌的孢子能萌发并长成菌丝，而缺型孢子一般不萌发，或不能长成菌丝，因此培养一段时间后，用灭菌脱脂棉或滤纸滤去菌丝，收集滤液，重复数遍后可除去大部分野生型，从而……4、生产蛋白酶的枯草芽孢杆菌发生遗传变异，使得产量性状下降，你如何解决？写出具体实验方案。
答：将一定量的枯草芽孢杆菌培养液，做一定浓度的稀释，涂布在含有酪素蛋白质的基本培养基上，37°C培养一段时间后，取出培养基，观察单菌落形成的透明圈大小，取透明圈直径与菌落直径之比较大的菌落，挑取培养做进一步的鉴定，即可得到高产蛋白酶的枯草芽孢杆菌。
5、以磺胺为例，说明化学治疗机的作用机制。
答：机理:磺胺是叶酸组成部分对氨基苯甲酸的结构类似物，（磺胺类药物取代对氨基苯甲酸，干扰叶酸的合成，抑制了转甲基反应，导致代谢紊乱，从而抑制B生长），磺胺的抑菌作用是因为许多细菌需要自己合成叶酸而生长，磺胺对人体细胞无毒性，因为人体缺乏从对氨基苯甲酸合成叶酸的相关酶-----二氢叶酸合成酶，不能用外界提供的对氨基苯甲酸自行合成叶酸，而必须直接利用叶酸为生长因子进行生长。
（磺胺类----与正常代谢产物竞争酶的活性中心，干扰了酶的功能，从而干扰代谢的正常进行）。
6、画出生长曲线。
（第1张）1、微生物的共性？哪个最基本?答：①体积小，面积大（最基本）②吸收多，转化快③生长旺，繁殖快思适应性强，易变异⑤分布广，种类多。
2、比较G+，G- B在CW结构，组成，对溶菌酶，青霉素的敏感性4方面的异同点。
3、表型延迟现象？如何克服？答：表型延迟：表型的改变落后于？（第四张）改变的现象，分为①分离性延迟;突变的？经DNA复制和细胞分裂后变成纯合状态，表型才能表现出来。
②生理性延迟;杂合状态→纯合状态，仍不能表现出来，（如营缺型）通过中间培养（CM，培养过夜），可使突变？稳定下来，克服表型延迟。
4、培养B常用的斜面培养基是什么？简述配制程序。
答：牛肉膏蛋白胨培养基①称量;按配方依次准确称量②融化:取少量水于烧杯中，加1%的蛋白胨，加热溶解，加0.5%的牛肉膏，加热溶解，加0.5%的NaCl,热熔，加水补充到所需体积。
③调PH至7.6左右。
④加琼脂固体2%，热熔。
⑤分装入试管，加塞，包扎，高压灭菌⑥搁置斜面（斜面长度不超过试管一半）⑦无菌检查：将灭菌的培养基放入37°C的温室中培养24-28h，以检查灭菌是否彻底。
5、啤酒酵母在分批发酵中的生长曲线分哪几个时期？在菌种扩培时，哪个时期做种子？为什么？答：延滞期，对数生长期，稳定期，衰退期。
对数期做种子。
利于缩短延滞期。
6、菌种衰退的根本原因？防治措施？答：？的自发突变。
措施：①减少传代次数②创造良好的培养条件③采用不易衰退的菌种传代④采取良好的菌种保藏措施4、菌种衰退的根本原因，防止措施。
如何区分衰退和饰变？答：根本原因：？的自发突变。
（②传代次数的影响，是负突变株比例占优势，③培养条件）防止措施见上题。
区分：衰退：指随着菌体的不断生长，负突变菌株的数量占整个菌体数量的比例增大，最终导致菌株的生产性能大幅下降的现象。
①原有形态性状不典型，②生长速率下降③代谢产物生产力下降④对宿主侵袭力下降⑤抵抗力下降饰变:遗传物质结构不发生变化，而只在转录与转译水平上的表型变化，可以同一条件继续培养，观察子代的情况。
饰变特点：暂时性，不可遗传性，表现为全部个体的行为。
变异：遗传性，群体中极少数个体的行为。
5、gone？突变的特点？答：①自发性②非对应性③稀有性（突变率10-6~10-9）④独立性⑤可诱发性（升高10~10^5倍）⑥稳定性⑦可逆性（原养型<=>突变型）6、v（第三张）的特点。
答：①形体微小，能通过细胞滤器（0.22um），电子显微镜下才能看见②不具有细胞机构，主要成分NA，Pr③V只含有一种核酸，DNA 或RNA④无核糖体，即无产能酶系，也无Pr,NA合成酶系，专性活细胞内寄生⑤无个体生长，也不进行二分裂，以NA,Pr等“元件”装配，实现大量繁殖。
⑥离体下以无生命的生物大分子状态存在⑦对大多数抗生素不敏感，对干扰素敏感。
7、？月元病毒的致病机理。
答：月元病毒是一种Pr侵染颗粒，仅有Pr组成，称作PrP。
细胞型PrP----PrP^c对蛋白酶敏感，无凝聚能力，而致病型PrP---PrP^sc对蛋白酶有一定抗性，可凝集成纤维状组织，PrP^sc进入细胞后，与PrP^c结合，形成PrP^sc---PrP^c复合体，PrP^c构型发生改变，转化成PrP^sc，PrP^sc数量呈指数增加，其潜伏期长，对中枢神经损害严重。
估菌计数法及其特点（笔记P31）乳糖操纵子（P30）1、2、伴孢晶体？它在何种B中产生？答：伴孢晶体：苏云金芽孢杆菌等少数芽孢杆菌在其形成芽孢的同时，会在芽孢旁形成一颗菱形或双锥形的碱溶性蛋白晶体（δ肉毒素）称为伴孢晶体。
对约200种昆虫无为鳞翅目幼虫有毒杀作用，可制成B杀虫剂。
3、霉菌菌落的特征？答：①质地疏松，呈絮状，网状，绒毛状，地毯状。
②形态大，分为局限性生长（青、曲）和蔓延性生长（根毛）③菌落干燥（孢子）④颜色丰富，正反颜色常不一致，中心与边缘常不一致。
⑤各种霉菌，在一定培养基上，形成的菌落大小，形状，颜色相对稳定，为分类依据之一。
4、利用磷酸盐或碳酸钙如何维持PH稳定性？答：①磷酸氢二钾略呈碱性，磷酸氢二钾略呈酸性，两物质以等摩尔浓度溶液PH为6.8，其缓冲能力一般在6.4~7.2范围内有效。
磷酸氢二钾+H阳离子---->磷酸氢二钾+K阳离子磷酸二氢钾+K阳离子+OH- →磷酸氢二钾+H2O②大量产酸的菌株，加入碳酸钙调节，碳酸钙难溶于水，不会使培养基PH过度升高，但可不断中和微生物产的酸，同时放出二氧化碳，而降培养基PH控制在一定范围。
5、单倍体酵母细胞经??（第5张）诱变后，得到一系列的突变株，欲从中分离筛选出一株（Leu-),请设计合理的试验程序。
答：淘汰型野生型→（制霉菌素法）→检出→鉴定（滤纸片法）将单倍体酵母细胞突变株，制成菌悬液，均匀涂布于完全培养基上，长成单个菌落之后，以逐个检出的方式接种于完全培养基上，并影印到基本培养基上，在适宜条件下培养一段时间，在完全培养基上生长，而在基本培养基上不生长的，即为营养缺陷型菌株。
将此菌株检出离心，水洗之后制成适当浓度的菌悬液，与基本培养基均匀混合后，倾注于平板中，干燥凝固之后，在板上划分几个区，在区中加入蘸有色AA的滤纸片，经培养后，在纸片周围有浑浊的生长圈的，说明为色AA营养缺陷株。
6、MR,V.P.实验的原理。
答：MR：用来检测由G产生的有机酸，如甲酸，乙酸，乳酸等，细菌代谢糖产酸，PH降低，甲基红指示剂由橙色（PH=6.3）变成红色（PH=4.2）大肠杆菌---阳性：利用乳糖产生乳酸，培养后PH<4.5大肠杆菌---阴性：早起产有机酸，后转化有机酸→乙醇，丙酮酸。
②V.P. 用来测定细菌利用G产生非酸性或中性末端产物的能力，如丙酮酸。
丙酮酸经缩合→乙酰甲基甲醇（经碱性、氧化）→二乙酰。
二乙酰与蛋白胨中精AA中胍基作用，生成红色化合物，产气肠杆菌---阳性，大肠杆菌---阴性。
7、什么叫生长曲线？单细胞微生物的典型生长曲线分几期？划分依据？答：生长曲线：将少量纯种单细胞微生物接种到定量的液体培养基中，定时取样测定细胞数量，以培养时间为横坐标，以菌数的对数为纵坐标作图，得到一条反应在整个培养期间菌数变化规律的曲线。
分为延滞期，对数期，稳定期，衰亡期。
根据生长速率常数划分，即单位时间内分裂次数的不同。
8、为什么诱变时，要制成充分分散的单细胞或单孢子悬液？对放线菌进行诱变育种时，宜处理其孢子还是菌丝细胞？为什么？答：使每个细胞均匀接触诱变剂，减少表型延迟现象，并避免长出不纯菌落。
多使用单核无性孢子，由于孢子生理上处于休眠状态，单核区基中了大部分的DNA，减少分离表型延迟，提高突变效果。
培养基原则：①目的明确②适宜的营养物质③浓度及配比合适④控制PH条件⑤控制氧化还原电位⑥原料来源经济节约⑦灭菌处理1、青霉素的作用机制？答：原理：β-内酰胺环的结构与肽聚糖单体五肽尾末端的D-Ala-D-Ala二肽结构相近，因而可竞争性的抑制转肽酶的活性，抑制单体间交联，形成缺损的CW。