琼脂稀释法操作步骤
琼脂稀释法操作步骤
琼脂稀释法利用了琼脂培养基的固化特性，使得抗菌药物能够在培养基中均匀分布并保持相对稳定的浓度。当 接种了待测微生物后，微生物在含有不同药物浓度的琼脂平板上生长，通过比较不同平板上的菌落生长情况， 可以确定药物的最低抑菌浓度。
应用领域及意义
临床医学
用于指导临床用药，协助医生选择合 适的抗菌药物和剂量，提高治疗效果 。
02
实验准备
试剂与仪器
试剂
琼脂粉、培养基、抗生素标准品、无菌水等。
仪器
电子天平、pH计、高压蒸汽灭菌器、恒温培养箱、移液器、无菌吸管、无菌平 皿等。
实验前准备事项
实验室环境准备
确保实验室干净整洁，定期进行消毒处理。 实验前开启紫外灯照射30分钟，确保无菌操 作环境。
试剂与仪器准备
检查所需试剂是否齐全，有无过期或污染现 象。对实验所需仪器进行清洗和烘干，确保 无菌状态。
用计数板或显微镜对菌落进行计数，记录每 个培养皿中的菌落数。
根据菌落计数结果计算菌液浓度，以CFU/ml 表示。同时记录实验过程中的操作细节和观 察结果，以便后续分析和比较。
04
结果分析与解读
菌落计数方法
平板菌落计数法
将待测样品经过适当稀释后，涂布在琼脂平板上，培养一定 时间后形成可见的菌落，通过计数菌落数量来推算样品中的 微生物数量。
药学研究
用于评价新药的抗菌活性，为药物研 发提供实验依据。
应用领域及意义
• 微生物学研究：用于研究微生物对抗菌药物的敏感性及其 耐药机制。
应用领域及意义
意义
可用于监测微生物的耐药性变迁，为临床抗感染治疗提 供重要参考。
提供了定量的药物敏感性试验方法，有助于准确评价抗 菌药物的疗效。
有助于指导临床合理用药，减少抗菌药物的滥用和误用， 降低医疗成本。
琼脂糖凝胶电泳的操作步骤
琼脂糖凝胶电泳的操作步骤琼脂糖凝胶电泳的操作步骤如下:1. 制备1%琼脂糖凝胶(大胶用70ml,小胶用50ml):称取0.7 g(0.5 g)琼脂糖置于锥形瓶中,加入70 ml(50ml)1×TAE,瓶口倒扣小烧杯.微波炉加热煮沸3次至琼脂糖全部融化,摇匀,即成1.0%琼脂糖凝胶液.2. 胶板制备:取电泳槽内的有机玻璃内槽(制胶槽)洗干净,晾干,放入制胶玻璃板.取透明胶带将玻璃板与内槽两端边缘封好,形成模子.将内槽置于水平位置,并在固定位置放好梳子.将冷却到65?左右的琼脂糖凝胶液混匀小心地倒入内槽玻璃板上,使胶液缓慢展开,直到整个玻璃板表面形成均匀胶层.室温下静置直至凝胶完全凝固,垂直轻拔梳子,取下胶带,将凝胶及内槽放入电泳槽中.添加1×TAE电泳缓冲液至没过胶板为止 .3. 加样:在点样板或parafilm上混合DNA样品和上样缓冲液,上样缓冲液的最终稀释倍数应不小于1X.用10 ul微量移液器分别将样品加入胶板的样品小槽内,每加完一个样品,应更换一个加样头,以防污染,加样时勿碰坏样品孔周围的凝胶面.(注意:加样前要先记下加样的顺序).4. 电泳:加样后的凝胶板立即通电进行电泳,电压60-100V,样品由负极(黑色)向正极(红色)方向移动.电压升高,琼脂糖凝胶的有效分离范围降低.当溴酚蓝移动到距离胶板下沿约1cm处时,停止电泳.(5)电泳完毕后,取出凝胶,用含有0.5 ug/ml的溴化乙锭1×TAE溶液染色约20 min,再用清水漂洗10 min.(6)观察照相:在紫外灯下观察,DNA存在则显示出红色荧光条带,采用凝胶成像系统拍照保存实验原理闭合环状质粒、线性质粒和开环质粒DNA由于构形不同，在加溴化乙锭的琼脂糖凝胶电泳上呈现不同的迁移率，因而在紫外灯下观察，能区别闭合环状质粒DNA(cccDNA)、线性质粒DNA(L-DNA)和开环质粒DNA(ocDNA)。
实验材料和试剂(一)实验样品质粒pUC118(二)试剂1(l DNA/HindIII分子量标准2(溴酚蓝指示剂点样缓冲液0.2% 溴酚蓝50% 蔗糖3(1mg/ml溴化乙锭溶液4(电泳缓冲液(TAE)40 mmol/L Tris-乙酸1 mol/L EDTA(配制方法:24.2克Tris碱，5.71ml冰乙酸，10ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)，定容至5000ml)5(0.7% 琼脂糖凝胶(配制方法:称取琼脂糖0.35克，加入50ml TAE电泳缓冲液)(三)仪器微量移液器电泳仪水平电泳槽透射紫外观察仪实验步骤1(选择合适的水平式电泳槽，调节电泳槽平面至水平。
替加环素体外药敏试验操作规程专家共识
２．Ｅｔｅｓｔ＠（ＡＢ Ｂｉｏｄｉｓｋ）：Ｅｔｅｓｔ试验条是采用惰 性无孔塑料条，该试验条的一面标有ＭＩＣ刻度（ｍｇ／Ｌ）， 另一面含有预设的干燥、稳定、连续浓度梯度的抗菌 药物。Ｅｔｅｓｔ方法也可用于快速生长需氧菌和厌氧 菌的ＭＩＣ检测。但Ｅｔｅｓｔ法检测不动杆菌ＭＩＣ值高 于肉汤稀释法检测结果，尤其是ＭＩＣ值在２—４ ｍｇ／Ｌ 范围内时，容易出现假耐药一’１引。
表１替加环素药敏试验中各种质控菌株可接受的 质量控制范围‘２１
注：８琼脂稀释法；“一”示无相应标准
隔夜存放的替加环素ＭＨ琼脂会使检测结果升 高［６］，预先配制好的ＭＨ肉汤较ＭＨ琼脂更容易溶 解氧［９］，导致替加环素氧化失活，使检测结果升高。 因此，专家组认为检测替加环素体外药敏时，必须使 用当天新鲜配制的培养基。
３．ＭＩＣ测试条（ＭＩＣ Ｔｅｓｔ Ｓｔｒｉｐ，ＭＴＳ）：是一种类 似于Ｅｔｅｓｔ测试条的ＭＩＣ检测试条，是一种可渗透 性的专用纸条，该测试条与Ｅｔｅｓｔ测试条一样，一面 标有ＭＩＣ刻度（ｍｓ／Ｌ），另一面含有预设的、干燥、 稳定、连续浓度梯度的抗菌药物。ＭＴＳ也可用于厌 氧菌对替加环素ＭＩＣ的检测。ＭＴＳ检测替加环素 的体外药物敏感率与肉汤稀释法具有很好的一致 性，同时由于该方法操作简便，适用于单个样本的检
法旧川。
５．纸片扩散法：纸片扩散法可以用于测定常见 快生长菌及部分苛养菌。不能用于厌氧菌的药敏检 测。Ｍ．Ｈ琼脂平皿、接种物的制备、接种量、培养和 孵育条件等步骤，均应当遵照ＣＬＳＩ Ｍ２一Ａ９的规定进 行。如果质控菌株的测试结果在可接受限度的范围 内（在３０ ｄ内连续测定，质控值中超出可接受限度 的结果不多于３个），按照表２所示的折点可判读药 敏结果。
（二）检测方法 １．稀释法：稀释法包括琼脂稀释法和肉汤稀释
cas 琼脂平板法
cas 琼脂平板法CAS琼脂平板法概述CAS琼脂平板法是一种常用的微生物菌落计数方法，用于检测食品、药品、环境等样品中的微生物污染情况。
本文将介绍CAS琼脂平板法的原理、操作步骤以及注意事项。
一、原理CAS琼脂平板法是基于琼脂平板法发展起来的一种微生物菌落计数方法。
其原理是利用CAS琼脂培养基中的柠檬酸铁盐与细菌产生的外源性胞内酶反应，形成深蓝色或黑色菌落。
通过计数菌落的数量，可以确定样品中的微生物数量。
二、操作步骤1. 准备琼脂培养基：将CAS琼脂培养基按照说明书配制好，煮沸消毒后冷却至50℃左右。
2. 样品处理：将待检样品进行适当稀释，以确保菌落的数量在可计数范围内。
一般建议进行10倍到100倍的稀释。
3. 平板接种：将稀释好的样品取1ml接种于CAS琼脂平板上，均匀涂布。
4. 培养：将接种好的平板倒置放置于恒温培养箱中，温度为30-37℃，培养时间一般为24-48小时。
5. 计数：在培养箱中观察平板上的菌落，选择典型的单个菌落进行计数。
根据菌落的形状、颜色和大小等特征，可以初步判断菌落的种类。
6. 计算：根据所选菌落的数量以及稀释倍数，计算出样品中的微生物数量。
三、注意事项1. 操作环境要清洁，避免外界微生物污染样品。
2. 每个样品都应进行平板对照，以便排除背景菌落的干扰。
3. 在接种平板时要注意均匀涂布，避免菌落过于密集。
4. 培养箱的温度和时间要根据所检测的微生物种类进行调整，确保菌落的生长。
5. 在计数时要仔细观察，排除菌落重叠或异常的情况。
6. 根据实际情况，可以选择不同的稀释倍数，以确保菌落数量在可计数范围内。
结论CAS琼脂平板法是一种简单、快速、可靠的微生物菌落计数方法。
通过该方法，可以准确地检测样品中的微生物污染情况，为食品、药品、环境等领域的质量控制提供科学依据。
在实际应用中，我们还应结合其他检测方法和标准，综合评估样品的微生物质量，并采取相应的控制措施，确保产品的安全性和卫生质量。
琼脂稀释法操作步骤
抗菌药物保存液的准备1
估算抗菌药物最小称量 琼脂稀释法最高药物浓度为128ｕg/ml 药物和培养基的体积比1:14,即药物浓度将成
15倍稀释，因此保存液为 128ｕg/mlΧ15 = 1920ｕg/ml
如果1次用量为10ml ,则: 抗菌药物最小称量= 1920ug/ml*10 ml 抗菌药物的效价
精品课件
精品课件
精品课件
精品课件
药物平板的孵育
上述接种好的平板应在室温下静置至接种点上的 菌液被琼脂完全吸收，再将药敏平皿倒置，于 35℃孵育16-20小时
如葡萄球菌苯唑西林和甲氧西林，则需33-35℃， 绝对不能超过35℃，孵育24小时，阅读结果
万古霉素药敏试验的肠球菌和葡萄球菌等需孵24 小时后，阅读结果
用酒精棉球清洁多点接种器后，将点种针安装在 多点接种器架子上，再将加好菌液的点种板安置 上多点接种器的点种板位置上
精品课件
测试菌液的点种2
开启多点接种器进行点种，因每一根点种 针直径约3mm,因此点种到药物平板上每点 的菌液量约为2ｕl，所以接种量为104 CFU/ 点
点种时应先点种对照前的质控平板，然后 从最低药物浓度开始点种依次点种到药物 浓度最高的平板
精品课件
培养基
需氧菌 苛氧菌
厌氧菌
MH肉汤或琼脂 嗜血杆菌属：Haemophilus test medium base +补充因子SR158 链球菌属：MHA琼脂+5%脱纤维羊血 卡他莫拉菌属： MHA琼脂+5%脱纤维 羊血 淋球菌：CC Agar Base+L53 Wilkins chalgren anaerobe 琼脂
淋病奈瑟球菌需在5%CO2空气环境中孵育20-24小 时，阅读结果
微生物实验室sop
临床微生物学检验(sop)确保高压效果的可靠性。
【适用范围】蒸气式高压锅。
【该SOP变动程序】本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。
【操作方法】1．将水加到高压锅内至其刻度线，将欲灭菌物品放入锅内，关闭锅门，拧紧螺丝并确认已经封闭。
2．打开排气阀。
3．打开蒸汽开关，向锅内输入蒸汽或接通电源，使产生蒸汽。
4．观察排气阀的排气情况，待排出的气体由冷气变为蒸汽，压力表达到0.05mPa 时，关闭排气阀。
5．观察压力表，当压力升至0.15mPa时，开始计时。
6．压力达0.15mPa后，可调节进气阀，减少进气量，维持压力并使其稳定在0.15mPa。
电加热时，可切断电源，维持压力持续15分钟，至多不超过30分钟，否则营养物质破坏。
7．关闭进气阀门或切断电源，让锅内物品自然冷却，不可马上打开排气阀，以免发生意外。
8．待锅内压力降为零时，可打开锅盖，取出物品。
操作人员部门主管质量负责人姓名 ****** ****** ****** 日期 **年**月**日确保培养箱温度恒定。
【适用范围】各种类型隔水式、温度设定为27℃、35℃、42℃、56℃培养箱。
【该SOP变动程序】本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。
【操作方法】1．培养箱应放置于水平地面（或坚固的水平台），电源电压须匹配。
2．从注水口先将隔水箱内的水注满到浮标要求的位置。
3．将温度调节旋扭调至所需温度，然后将电源开关拨至“开”处。
4．每次使用时应在培养箱顶部插入标准温度计，监测实际温度。
5．培养箱工作温度波动范围应控制在±10C以内。
6．培养箱正面贴有温度记录表，记录每天上班和下班时温度，如温度超出正常范围，指示该温度的刻度应划上红圈，并把修正温度记录下来。
7．培养箱内外应保持清洁。
操作人员部门主管质量负责人姓名 ****** ****** ******日期 **年**月**日保证培养基的质量。
药敏试验程序及步骤
药敏试验程序及步骤微生物标本的采集通常有血液、脑脊液、尿液、伤口的脓液、胸水腹水、粪便、痰液及泌尿生殖系统的分泌物。
1）采集的一般原则：a早期采集b 无菌采集注意对局部及周围皮肤的消毒，渎道底部采集的标本（外通道）正常菌群寄生部位采集的标本应明确目的菌，采用选择培养基。
C 不同菌不同采集方法D 采集适量标本，量不应过少，注意采集不同时间不同部位标本，要全面有特征E 安全采集2）标本处理2h送到检验处，部分菌应保温于一定环境中保存注意安全尤其对烈性传染病。
有时可以直接用抽取标本的注射器如尸检组织、支气管洗液、心包液、痰、尿等标本要保存于4℃环境中，脑脊液保存于25℃3）各部位标本的采集及注意事项A 血液皮肤消毒采血部位采血量采血次数采血时间不同动物有所不同血液应马上送检室温保存不可冷藏。
配置的培养基血液和肉汤比为1：5～1：10血液中常见的病原体引起的疾病有葡萄球菌菌血症，肠球菌菌血症、革兰隐性杆菌、厌氧菌菌血症真菌血症。
B 脑脊液采集脑脊液一般用腰椎穿刺术获得。
采集后立即送检，一般不要超过1h，避免凝固和混入血液一般取3～5ml 35度保温送检不可至于冰箱保存做病毒检查时应放置冰块4度保存72h常见细菌性脑膜炎如流行性脑脊髓膜炎肺炎球菌脑膜炎，链球菌脑膜炎等真菌性脑膜炎常见隐球菌脑膜炎假丝酵母菌脑膜炎等特别是免疫功能低下和恶性疾病患者易并发。
如AIDS恶性肿瘤严重糖尿病等流行性乙型脑炎是一种人兽共患病肠道病毒可见多种病毒引起脑膜炎和肺炎c 脓液标本的采集首先用无菌生理盐水清洗脓液及病灶的杂菌，在采集标本，用针和注射器抽吸采取，再移入无菌容器立即送检也可用拭子在伤口深部采集渗出物，对于皮肤或下表皮的散播性感染，应采集病灶出边缘而非中央处的感染组织送检。
沙门氏菌药敏试验判定标准
沙门氏菌药敏试验的判定标准如下：首先，根据实验方法的不同，将沙门氏菌药敏试验分为两种判定标准，即琼脂稀释法和肉汤稀释法。
在琼脂稀释法中，当细菌浓度低于1×10^5 cfu/ml时，药物的最小抑菌浓度（MIC）就是其最低杀菌浓度（MBC）；当细菌浓度高于1×10^5 cfu/ml时，需要选择琼脂稀释法中的敏感菌株，通过将药物点种在平板培养基上，待对数期沙门氏菌生长繁殖后，再加入判断敏感性的划痕线，通过观察划痕线处是否生长细菌来判定敏感性。
如果细菌生长，则药物为沙门氏菌的敏感药物。
肉汤稀释法中，实验步骤和判定标准也有详细的说明。
首先，要选择合适的药物浓度进行药敏试验，然后将无菌的沙门氏菌人工培养物液体培养物接种到相应的肉汤培养基中，使其达到一定的细菌数密度。
随后将配制好的药物稀释液进行接种，通常用适当的接种工具挑取适量的细菌混合菌悬液接种于含药平板培养基中混合均匀，在接种前需要注意确保培养基与稀释药液充分混匀，并在4分钟以内完成接种。
完成接种后放在相应条件下培养。
沙门氏菌药敏试验的最后结果判定需要根据细菌生长情况、抑菌圈大小、敏感性带的位置以及是否出现多重耐药性带等因素综合考虑。
在判断结果时，如果细菌在培养基中生长良好，则表明该药物对沙门氏菌没有抑制作用。
如果细菌在含有药物的平板培养基中不生长或生长较少，则表明该药物对沙门氏菌具有高度敏感性。
如果敏感性带较窄或抑菌圈较小，则表明该药物对沙门氏菌的敏感性较低。
同时需要注意的是，如果沙门氏菌同时表现出多重耐药性，则表明该药物对沙门氏菌的敏感性很低。
综上所述，沙门氏菌药敏试验的判定标准涉及到多个方面，需要综合考虑多种因素进行判断。
因此在进行沙门氏菌药敏试验时，需要严格按照实验方法进行操作，以确保结果的准确性。
同时，对于不同的药物和细菌浓度组合，也需要进行充分的试验和验证，以确保药物的安全性和有效性。
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需氧菌
苛氧菌
MH肉汤或琼脂
嗜血杆菌属：Haemophilus test medium base +补充因子SR158
链球菌属：MHA琼脂+5%脱纤维羊血
卡他莫拉菌属： MHA琼脂+5%脱纤维 羊血
淋球菌：CC Agar Base+L53
厌氧菌 Wilkins chalgren anaerobe 琼脂
测试菌液的点种2
开启多点接种器进行点种，因每一根点种 针直径约3mm,因此点种到药物平板上每点 的菌液量约为2ｕl，所以接种量为104 CFU/ 点 点种时应先点种对照前的质控平板，然后 从最低药物浓度开始点种依次点种到药物 浓度最高的平板
药物平板的孵育
上述接种好的平板应在室温下静臵至接种点上的 菌液被琼脂完全吸收，再将药敏平皿倒臵，于 35℃孵育16-20小时 如葡萄球菌苯唑西林和甲氧西林，则需33-35℃， 绝对不能超过35℃，孵育24小时，阅读结果 万古霉素药敏试验的肠球菌和葡萄球菌等需孵24 小时后，阅读结果 淋病奈瑟球菌需在5%CO2空气环境中孵育20-24小 时，阅读结果
琼脂稀释法药敏平板的制备4
准备2只无药的平板,作点种前和点种后质 控对照 所有药物平板应保持表面干燥,不可有肉 眼可见的水珠(可在35℃孵箱内倒臵平板 开盖烘干15-20分钟)
琼脂稀释法药敏平板的制备5
如果需使用的药物平板为100Χ100mm的方平板, 则 每根玻璃管内需加入2.5ml的抗菌药物稀释液； 每次无菌吸管吸取的抗菌药物量应该为4.5ml 每只方平板应加入2ml抗菌药物试液 无菌吸管内应存留下2.5ml与下一个浓度的玻璃 试管内的2.5ml稀释液进行充分混匀 药敏培养基应加入28ml
琼脂稀释法药敏平板的制备2
取11支无菌玻璃试管(13Χ100mm),每支试 管标记为： 960,480,240,120,60,30,15,7.5,3.75,1. 875,0.935ｕg/m,并于上述每根管子中用 无菌移液管加无菌稀释液1.5ml
琼脂稀释法药敏平板的制备3
将保存在≤-20℃冰箱中的1920ｕg/ml浓度的抗 菌药物保存液取出融化后,用无菌移液管吸取 2.5ml加入到128ｕg/ml标记的平板内1ml 移液管内剩余的1.5ml加入到960标记的试管内, 混匀后再吸取2.5ml加入到64ｕg/ml标记的平板 内1ml 移液管内剩余的1.5ml再加入到480ｕg/ml标记 的玻璃试管内;混匀后再吸取2.5ml 依次类推,直至最后一个0.06ｕg/ml标记的平皿 内加入1ml,则抗菌药物稀释完成
抗菌药物保存液的准备1
估算抗菌药物最小称量 琼脂稀释法最高药物浓度为128ｕg/ml 药物和培养基的体积比1:14,即药物浓度将成 15倍稀释，因此保存液为 128ｕg/mlΧ15 = 1920ｕg/ml 如果1次用量为10ml ,则: 抗菌药物最小称量= 1920ug/ml*10ml
菌液准备1
生长法： 无菌环取4-5个菌落大小形态一致的菌落 顶部后接种于4-5mlMH肉汤内 35℃ 培养4-6小时到对数生长期，亦可过 夜培养,但不允许超过18小时 用肉汤/生理盐水校正至0.5麦氏管浓度12X108CFU/ml
菌液准备2
直接菌落悬浮法： 从孵育了18-24h新鲜培养物的平板上，用 无菌环取单个菌落 接种于无菌肉汤/生理盐水内 校正至0.5麦氏管浓度1-2X108CFU/ml 推荐用于苛氧菌和潜在的MRS
测试菌液的点种1
预先将点种针和点种板高压灭菌,并在孵箱内烘干 （52孔、100孔、或21孔） 将已调整好浊度(1-2Χ107CFU/ml)的菌液用微量 加样器将菌液依次加入菌液点种板小孔内,并作好 与药物平板相应的点种标记,一般每小孔内应加入 菌液270ｕl。每批试验均须保留有质控菌位臵和 无菌菌液位臵 用酒精棉球清洁多点接种器后，将点种针安装在 多点接种器架子上，再将加好菌液的点种板安臵 上多点接种器的点种板位臵上
喹诺酮类
MIC太低
培养基PH太高
多种药物
跳管
污染、管内接种物不 重复QC试验 正确、药物浓度错误、 使用新批号培养基 肉汤体积错误
抗菌药物最小称量=
结果阅读和判断
结果阅读时，平板应臵于黑色不反光的表面上， 记录的MIC是完全抑制细菌生长的最低抗生素浓度， 单个菌落或接种物所致的轻微的不清晰现象可忽 略不计。 如果在MIC判断终点附近持续存在或多个菌落，或 者低浓度不长，高浓度生长；或者有俗称的跳管 现象，就应该检查试验菌的纯度，有否污染菌生 长，并尽可能重复试验。 按当年的CLSI/NCCLS标准判断结果。
质
控
菌
株
药敏 其他
质控菌株
金黄色葡萄球菌
ATCC29213 ATCC25922 ATCC35218
+ + + + +
产β内酰胺酶
大肠埃希菌 大肠埃希菌
肺炎克雷伯菌 铜绿假单胞菌
ATCC700603 ATCC27853
产超广谱β内酰胺酶
质
控
菌
株
药敏 其他
质控菌株
肺炎链球菌 粪肠球菌
ATCC49619 ATCC29212 ATCC49766 ATCC49247
琼脂稀释法操作步骤
原理：
将抗菌药物配制到琼脂培养基中成：128ｕ g/ml 、64ｕg/ml 、32ｕg/ml ……0.06ｕ g/ml对倍稀释的浓度系列 多点接种器将制备好的细菌菌悬液迅速点 种到琼脂表面,经35℃16-20小时培养 肉眼观察细菌生长,以未见细菌生长平板的 最低药物浓度为最低抑菌浓度(MIC)
琼脂稀释法药敏平板的制备 1
配制融化的MH琼脂或适合其他苛氧菌、厌 氧菌等特殊细菌的培养基,待冷却到4850℃，浇制药物平板。 取灭菌的90mm平板12只,用记号笔在平板 底部作好“点种标记”、“药物名称”、 “药物浓度”,浓度从0.06ｕg/ml……128 ｕg/ml,每种浓度1只平板共12个浓度系列。
抗菌药物的效价
抗菌药物保存液的准备2
抗菌药物稀释 选择合适的抗菌药物稀释液进行药物稀释, 稀释液需要量见下列公式：
稀释液体积=
抗菌药物实际称量*效价
保存液浓度（1920ug/ml）
抗菌药物保存液的准备3
实际操作： 先计算完成一批试验需几次完成,每次用 量多少,然后可一起称量,一起稀释,然后 按每次需要量分装在试管中,贴上标签,注 明药物名称,浓度,体积数及配制日期,臵 与≤-20℃保存,备用。
菌液准备3
对绝大多数细菌来说,上述用生长法或直 接菌落悬浮法制备的0.5麦氏浊度的菌悬 液,应该再用无菌肉汤或生理盐水行1:10 稀释,此时菌液浓度为1-2*107CFU/ml,调 整好的菌液应该在制备后的15分钟内完成 点种
菌液准备4
如一次实验需完成50株或100株细菌,则细 菌要编上工作序号1-50或1-100,并在结果 记录纸上要一一对应写上工作序号和菌种 编号
+
+ + + +
检测胸腺嘧啶 氨苄西林敏感株 产β内酰胺酶(-) 氨苄西林耐药株
流感嗜血杆菌 流感嗜血杆菌
淋病柰瑟球菌：
厌氧菌
ATCC49226 ATCC25285
常见问题及解决指南
抗菌药 现象 可能原因 解决办法
氨基糖苷类
MIC太高
培养基PH太低
PH范围7.2-7.4。避 免CO2孵育降低PH PH范围7.2-7.4。