水质微生物检测基础
水质微生物检测
第二节饮用水种类及卫生微生物指标
一、饮用水分类 1、生活饮用水：供人生活的饮水和生活用水 2、包装饮用水： • 饮用天然矿泉水 • 饮用天然泉水 • 其他天然饮用水 • 饮用纯净水 • 饮用矿物质水 • 其他包装饮用水
二、饮用水介绍
（一）、生活饮用水 • 新发布的产品标准 GB5749-2006 • 标准检验方法为 GB/T5750-2006 • 水质检验项目由原35项增加至106项，旧标准微生
0 MPN/100mL
0 CFU//250mL 0 CFU//250mL 0 CFU//50mL
各类水质的微生物指标要求(续)
瓶 装 饮 用 纯 净 GB17324 － 水卫生标准 1998
菌落总数 ≤ 大肠菌群 ≤
霉菌和酵母 ≤
致病菌（沙门氏菌、
志贺氏菌、金黄色葡萄
球菌）
瓶（桶）装饮用 GB19298 － 水卫生标准 2003
• PH：水中微生物适宜范围是pH6.5～8.5，这与一般自然水 的pH值范围相适应。 海水的pH7.5～8.5，海水中多数微生 物生长的最适pH7.2～7.6；
• 化学物质：有机物，无机物：氨、硝酸盐、磷酸盐、硫酸 盐、碳酸盐，金属离子：汞、铜；
• 营养物质：异养微生物，营养贫乏时，微生物倾向吸附颗 粒。
第三节生活饮用水微生物检测
一、水样中微生物项目检测方法 GB/T 5750.12
1 菌落总数
1 平皿计数法
2 总大肠菌群大肠菌群
1 多管发酵法
2 滤膜法
4大肠埃希氏菌
二、水微生物的种类
• 水微生物的种类很多，有细菌、真菌、病毒、藻 类和原生动物；
• 水中大多数微生物属于异养微生物，它能利用水 中有机物质生长，另一类为自养微生物，它只需 无机物质就能合成新的细胞。
水中微生物的测定-国标法(水质检测)
水中微生物的测定-国标法(水质检测)
摘要
本文介绍了水中微生物的测定方法，以国家标准法为基础。
水中微生物的测定是水质检测的重要环节，可以评估水的卫生状况，以及相关的环境健康风险。
引言
水是人类生活中必不可少的资源，保证水质安全对于人类健康至关重要。
水中微生物作为一种主要的水质指标，可以反映水中存在的微生物污染程度。
因此，精确测定水中微生物的数量是进行水质检测的基本要求之一。
国标法测定方法
样品收集与处理
1. 确定采样点及采样时间，避免样品受到外界干扰。
2. 使用干燥及密闭的收集水样，并尽量防止样品受到氧气、光照和高温的影响。
3. 避免采样与外界环境接触，以防止二次污染的发生。
样品制备与预处理
1. 根据国家标准法的要求，将收集的水样进行适当的稀释，使其微生物数量在可测量的范围内。
2. 使用适当的培养基进行预处理，以促进微生物的生长。
微生物测定方法
1. 平板计数法：将经稀释处理的水样均匀地分布在培养基上，通过培养基固化后，计数形成的菌落数量，并据此推算出水样中微生物的浓度。
2. 膜过滤法：通过将水样通过细孔滤膜，然后将膜过滤板放置在含培养基的平板上，根据过滤后膜上菌落的数量计算水样中微生物的浓度。
结论
本文介绍了水中微生物的测定方法，基于国家标准法。
这些测定方法可以用于水质检测，评估水的卫生状况，以及相关的环境健康风险。
采样、制备和处理样品的正确操作，以及准确的测定方法选择，对于保证测定结果的可靠性至关重要。
水质微生物的检测
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在某些情况下，水体中的细菌总数也可指示水体受粪便等污染物污染的情况。
这里的细菌总数其实是指营养琼脂培养后形成的菌落总数。
目前世界各国对于控制饮用水的卫生质量，除采用大肠菌群等指标外，一般还采用细菌总数这个指标。
我国GB5749-85《中华人民共和国国家标准生活饮用水卫生标准》中规定生活饮用水细菌总数每毫升不得超过100个。
二、水质微生物检验方法GB5750-85《中华人民共和国国家标准生活饮用水标准检验法》提供了水质中细菌总数和总大肠菌群的检测方法。
（一）细菌总数的检测：国家标准中，细菌总数是指1ml水样在营养琼脂培养基中，于37℃经24h培养后，所生长的细菌菌落的总数。
对生活饮用水，直接吸取1ml水样于平皿中，加入营养琼脂后混匀，37℃培养24h，进行计数。
对水源水，根据情况对样品进行10倍梯度稀释，选择适宜稀释液1ml，加注平皿，营养琼脂混匀，37℃培养24h，进行计数。
37℃生长时能度，120.1ml接种10三、说明：1100个，因此可以直接吸取1毫升到平板进行培养。
2．培养时间。
与食品中菌落计数不同，测定水中细菌总数，培养时间采用24h。
3．总大肠菌群的测定方法，由于饮用水和水源水可能的污染程度不同，因此采用不同的接种量，检数表也不相同。
4．当接种量超过1毫升时，一般采用多倍浓度培养液。
如配制3倍浓缩乳糖蛋白胨培养液50mL，加入100mL 水样后，总体积为150mL，培养液恢复到正常浓度。
5．滤膜法检测总大肠菌群，一般在检测较大量低浊度水样时采用，大量水样滤过滤膜后，水中所含有的所有细菌均截留在滤膜上。
水质检测基础知识及上岗考试题
水质检测基础知识及上岗考试题一、仪器设备知识1。
电导电极有哪几种？答:有光亮和铂黑两种2。
DJS-1型光亮电导极运用范围?答:被测溶液的电导率低于10μs/cm时使用3。
电导仪”低周”的适用范围答：测量电导率低于300μs/cm的液体时使用4.测PH值用的玻璃电极为什么要用蒸馏水浸泡后才能使用?答：因为干玻璃电极不显示PH效应,只有经过水化的玻璃电极才显示PH效应，所以玻璃电极要浸泡在蒸馏水中备用.5.玻璃电极使用前为什么要处理?答:玻璃电极经浸泡24小时以上,玻璃电极形成了稳定的水化层，使玻璃电极的膜电位在一定温度下与试液的PH值成线性关系,因此玻璃电极在使用前应在蒸馏水或0.1N盐酸中浸泡24小时以上。
6.电子天平的称量原理？答：电子天平的称量依据是电磁力平衡原理.7。
PHS-3C型酸度计工作原理?答:是利用PH电极和参比电极对被测溶液中不同酸度产生的直流电位,通过放大器输送到转换器，以达到显示PH的目的.8.721型分光光度计的使用范围是什么?答:721型分光光度计可用于实验室中可见光谱360~800nm范崐围内进行定量比色分析.9。
使用分光光度计的注意事项?答:连续使用时间不宜过长，要正确拿比色皿,拿毛玻璃面，洗涤并保管好比色皿,不要用去污粉或毛刷刷洗.10.721分光光度计对工作环境有什么要求?答: 应安放在干燥房间内,放置在坚固平稳的工作台上使用,崐应远离高强磁场。
电场及高频波的电气设备.避免在有硫化氢。
亚崐硫酸氟等腐蚀性气体的场所使用.11.721分光光度计工作原理是什么？答：721分光光度计是根据朗伯—比耳定律设计的A=KCL。
当入崐射光. 吸收系数K.溶液的光径长度L不变时,透射光是根据浓度而崐变化的.12.721分光光度计由哪几部分组成?答:由光源。
单色器.比色皿和检测器四部分构成.13。
电子天平应安放在什么环境下？答1)稳定，尽可能避免震动（2)保证无大的温度变化，无腐蚀(3）避免阳光直射和通风（4)电源要稳定二.专业技术知识14.碱性碘化钾溶液应(避光)保存,防止(碘逸出)15。
水质微生物检验用培养基
EC-MUG培养基用途：用于多管发酵法测定生活饮用水及水源水中大肠埃希氏菌。
配方：（g/L）胰蛋白胨 20g磷酸氢二钾 4g氯化钠 5g磷酸二氢钾 1.5g乳糖 5g三号胆盐 1.5gMUG 0.05g∙本品参照GB/T5750.12-2006标准配方配制；∙pH值6.9±0.2；∙用标准菌株检验符合质控标准。
MFC琼脂培养基用途：用于饮用水，水源水中耐热大肠菌群滤膜法的测定。
配方：（g/L）胰胨 10g酵母浸粉 3g乳糖 12.5g三号胆盐 1.5g多胨 5g苯胺蓝 0.2g氯化钠 5g玫红酸 0.1g琼脂 15g∙本品参照GB/T5750.12-2006标准配方配制；∙pH值7.4±0.1；∙用标准菌株检验符合质控标准。
MUG营养琼脂（MUG Nutrient Agar）用途：用于生活饮用水及其水源水中大肠埃希菌的测定。
配方：（g/L）蛋白胨 5g牛肉浸膏粉 3g琼脂粉 15g4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖醛酸苷（MUG） 0.1g∙本品参照GB/T5750.12-2006标准配方配制；∙pH值6.8±0.2；∙用标准菌株检验符合质控标准。
MMO-MUG培养基（Minimal Medium ONPG-MUG）用途：用于生活饮用水及水源水的大肠菌群酶底物法检测。
配方：（g/L）硫酸铵 5g亚硫酸钠 40mg氯化钠 10g两性霉素B 1mg氯化钙 50mg硫酸锰 0.5mg硫酸锌 0.5mg茄属植物萃取物 0.5g硫酸镁 100mgHEPES钠盐 5.3gONPG 0.5gMUG 0.075gHEPES 6.9g∙本品参照GB/T5750.12-2006标准配方配制；∙pH值7.2±0.1；∙用标准菌株检验符合质控标准。
假单胞菌琼脂基础培养基/CN琼脂基础（CN Agar Base）用途：用于铜绿假单胞菌检测与计数-滤膜法。
配方：（g/L）明胶蛋白胨 16g氯化镁 1.4g酪蛋白水解胨 10g硫酸钾 10g琼脂 12g加热煮沸溶解，分装，121℃高压灭菌15分钟，临用时在无菌环境下加入配套试剂抗生素液（04-059）和甘油液（04-060）（用法与用量见配套试剂说明）。
微生物检验流程及操作标准
微生物检验流程及操作标准全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：微生物检验是一种重要的实验室技术，用于检测食品、水质、环境等样品中的微生物存在情况。
微生物检验需要严格遵守一系列操作标准和流程，以确保检验结果的准确性和可靠性。
下面我们将介绍一下微生物检验的流程及操作标准。
一、样品采集1. 样品的采集需要采用无菌工具，并保持样品在采集过程中不受到外界环境的污染。
2. 样品的采集过程应尽量避免接触到任何可能引入外源微生物的物质，比如皮肤、空气等。
3. 采集的样品应标明正确的标识信息，包括样品名称、采集地点、采集日期等。
二、样品处理1. 样品收到实验室后，需要尽快进行处理，避免样品内的微生物增殖或死亡。
2. 样品处理过程需要保持在无菌条件下进行，使用无菌工具进行操作。
3. 样品处理过程中需要按照检验要求进行适当的稀释，以确保实验得出准确的结果。
三、培养基准备1. 培养基的制备需要按照标准的配方和步骤进行，以确保培养基的质量符合要求。
2. 制备培养基时需要严格遵守无菌操作规范，避免细菌、真菌等外源微生物的污染。
3. 制备好的培养基需要在适当的条件下保存，确保培养基的稳定性和有效性。
四、接种操作1. 在进行微生物检验之前，需要准备好无菌的接种环、移液器等工具。
2. 采取适当的方法将处理好的样品接种到培养基上，避免接种时引入外源微生物。
3. 接种操作需要在无菌条件下进行，避免培养物受到任何污染。
五、培养与观察1. 接种后的培养基需要置于适当的温度和湿度条件下进行培养，促使样品中的微生物生长。
2. 定期观察培养基上的生长情况，记录生长的数量和形态，用于后续的分析和鉴定。
3. 在观察过程中需要注意反复进行无菌操作，避免细菌、真菌等外源微生物的污染。
六、鉴定与结果解读1. 当样品中的微生物生长到一定程度时，需要进行鉴定和分析，确定其种属和数量。
2. 鉴定过程需要参考相关的鉴定手册和标准，进行适当的试验和测试。
3. 根据鉴定结果进行结果解读，判断样品中微生物的种类和数量是否符合标准要求。
水质微生物检测
不同稀释度的平均菌落数
10-2 164 295 271 30 1650 11 305 0 10-3 20 46 60 8 513 5 12 0
两个稀释度 菌落数之比
—— 1.6 2.2 2 —— —— —— ——
菌落总数/ （CFU/mL）
16400 37750 27100 1500 513000 270 30500 < l×l0
第十二章 水质微生物检测
第一节 水中微生物
一、水生境的特征 影响水中微生物分布类群的主要因素： 温度 静水压 光照 溶解氧 氢离子强度 化学物质 营养物质
• 光照：日光中紫外线射入水中强度明显减弱，具有光合作 用的微生物和藻类主要分布在水的表层； • 溶解氧：水中的需氧微生物利用溶解氧，水体表层主要是 需氧和兼性需氧微生物，深层和水底以厌氧微生物为主； • PH：水中微生物适宜范围是pH6.5～8.5，这与一般自然 水的pH值范围相适应。 海水的pH7.5～8.5，海水中多数 微生物生长的最适pH7.2～7.6； • 化学物质：有机物，无机物：氨、硝酸盐、磷酸盐、硫酸 盐、碳酸盐，金属离子：汞、铜； • 营养物质：异养微生物，营养贫乏时，微生物倾向吸附颗 粒。
50 cfu/mL 3 MPN/100mL 10 cfu/mL 10 cfu/mL 不得检出
10000 个/L 2000 个/L
第三节生活饮用水微生物检测
一、水样中微生物项目检测方法 GB/T 5750.12
1 菌落总数 2 总大肠菌群
1 平皿计数法 1 多管发酵法 2 滤膜法
3 酶底物法
3 耐热大肠菌群 4大肠埃希氏菌
四、各类水质的微生物指标要求
标准名称 生活饮用水 卫生标准 标准号 GB5749-2006 细菌学项目 菌落总数 总大肠菌群 耐热大肠菌群 大肠埃希氏菌 贾第鞭毛虫 隐孢子虫 细菌总数 总大肠菌群 粪大肠菌群 大肠菌群 粪链球菌 铜绿假单胞菌 产气荚膜梭菌 限量 100cfu/ml 不得检出， MPN/100mL； cfu/100mL 不得检出， MPN/100mL； cfu/100mL 不得检出， MPN/100mL； cfu/100mL <1 （个/10L） <1 （个/10L） 100（cfu/ml） 每 100ml 水样中不得检出 每 100ml 水样中不得检出 0 MPN/100mL 0 CFU//250mL 0 CFU//250mL 0 CFU//50mL
水质微生物检测
免疫学方法
利用特异性抗体进行检测，具 有较高的特异性和灵敏度，是 未来发展的重要方向。
生物传感器技术
生物传感器技术可实现快速、 连续的检测，具有广阔的应用 前景。
自动化与智能化
通过自动化和智能化技术，可 提高检测效率，减少人为误差
。
未来研究方向与趋势
新型检测方法的研发
针对不同水质和微生物种类，研发新型的检 测方法。
水质微生物检测
目录
• 水质微生物检测概述 • 水质微生物检测技术 • 水质微生物检测标准与法规 • 水质微生物检测实践与应用 • 水质微生物检测的挑战与展望
01
水质微生物检测概述
定义与目的
定义
水质微生物检测是对水体中微生 物的数量、种类和活性进行检测 的过程。
目的
评估水质的安全性和卫生状况， 预防和控制水传播疾病，保障公 众健康。
检测方法
培养法、荧光原位杂交技 术、PCR-DGGE等。
工业废水微生物检测
检测目的
监控工业废水处理效果，确保达标排放。
检测项目
总需氧量、总有机碳、氨氮等。
检测方法
化学分析法、生物分析法、在线监测技术等。
05
水质微生物检测的挑战 与展望
当前面临的主要挑战
微生物多样性
水质中的微生物种类繁 多，包括细菌、病毒、 原生动物等，检测难度
质量控制与保证
加强水质微生物检测的质量控制与保证，确 保检测结果的准确性和可靠性。
标准化与规范化
建立水质微生物检测的标准化和规范化体系， 提高检测结果的可靠性。
多指标综合评价
结合多种指标进行综合评价，以更全面地反 映水质状况和微生物污染情况。
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② smear 取 菌 苔 少 许 涂片
（ 1mm 小菌落半个） ②促使菌体蛋白质凝固，固定 与盐水混匀，涂成 在载玻片上，以免染色水洗的 大于1cm2 均匀涂膜 。 时候，细菌被水洗掉。
无 无 菌 菌 操 操 作 作
③涂毕→环移至涂膜中 央侧立，待环内菌膜破 裂，接种环烧灼灭菌。 干燥dry
↑ ↑ 灭菌接种环 细菌合适 细菌较多
按其致病性可分为:
★病原性微生物 ★非病原性微生物
微生物的特点
个体小,面积大：小于0.1mm。肉眼不可见。 分布广,种类多（10万多种） ：自然界中到处都
有，如水、空气、土壤等, 土壤中的数量最多。
代谢强，转化快：发酵乳糖的细菌在1小时内可
分解其自重1000～10000倍的乳糖；产朊假丝酵母 合成蛋白质的能力比食用公牛强10万倍
细菌的繁殖
细菌生长速度很快，一般约20min分裂一次。若按此速度 计算，细菌群体将庞大到难以想象的程度。但事实上由于 细菌繁殖中营养物质的逐渐消耗，有害代谢产物的逐渐积 累，细菌不可能始终保持高速度的无限繁殖。经过一段时 间后，细菌繁殖速度逐渐减慢，死亡菌数增多，活菌增长 率随之下降并趋于停滞。
热原与内毒素
消毒与灭菌
热力灭菌法：使蛋白质、酶及核酸永久性破环，细胞膜溶 辐射灭菌法
解，导致细胞发生不可逆转的死亡。 1、紫外线：波长200-300nm的紫外线具有杀 1、干热灭菌法—采用灼烧或干热空气灭菌 ，使用方便，
菌作用。穿透物质的能力很差，一般要求紫外灯 适用于玻璃器皿和瓷器等耐高温的固体物的灭菌 。 距离照射物不超过1.0米为宜 2、湿热灭菌法—利用热蒸汽杀死微生物。 2、电离辐射 高压蒸汽灭菌：利用高温高压蒸汽进行灭菌的方 高速电子、 X射线、γ射线 法 ，蒸汽的穿透力较热空气强可以杀死一切微生 3物，包括细菌的芽孢，真菌的孢子或休眠体等耐 、微波 高温的个体 。最可靠最适用最广泛的灭菌方法。 波长1mm~1m
微生物基础知识 培训
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微生物的定义
微生物（microorganism, microbe）:存在于自然界 中的一群体型细小、结构简单、肉眼看不见，必须 借助于特殊仪器放大后才能观察到的微小生物
按其结构、化学组成及生活习性可分为:
★原核类:仅有原始核质，无核仁或核膜，细胞器很不完善。如细菌、 放线菌、支原体、立克次氏体、衣原体、螺旋体 ★真核类:细胞核的分化程度较高，有核膜、核仁和染色体，细胞器完 整。如真菌（酵母菌和霉菌）、 原生动物、藻类 ★非细胞类:体积微小，能通过除菌过滤器。如病毒和朊病毒等
固定 Fixation
细菌是一类细胞细而短、结构简单、细胞壁坚韧，以二分裂方式无性 繁殖的原核微生物，分布广泛。
1.
细菌的形态与结构 （1） 球菌 多数球菌直径在1微米左右，外观呈球形 或近似球形。由于繁殖时分裂平面不同可形成不同的排 列方式，分为双球菌、链球菌、葡萄球菌等。 （2） 杆菌 形态多数呈直杆状，也有的菌体稍弯，多 数呈分散存在，也有的呈链状排列，分为棒状杆菌、链 状杆菌、球杆菌等。 （3） 螺形菌 菌体弯曲，呈弧形或螺旋形。如幽门螺 杆菌。
多数微生物几十分钟内就可以繁殖一代
生长旺，繁殖快：微生物有惊人的繁殖速度，大
适应性强，易变异（耐药性产生的原因）
葡萄球菌
酵母菌（芽痕）
棒状杆菌
大肠杆菌
弧状菌
链球菌
• 菌落单位----CFU
菌落单位
由单个菌细胞或几个同种菌细胞在培养基上长成肉 眼可见的菌落，每个菌落就是1CFU
光滑型菌落
粗糙型菌落
3、其他理化特性①耐热性：120℃加热4h，可破坏98%。 180℃加热2h或250℃加热30min，才可彻底破坏。②滤过 性：其体积小，约在1~5nm之间，故能通过滤器进入滤液 中。③具有水溶性及不挥发性。④能被强酸、强碱和氧化 剂破坏
消毒与灭菌
下列术语常用于表示物理或化学方法对微生物的杀灭程度 消毒：杀死物体上病源微生物的方法,并不一定能杀死细 菌的芽胞。消毒所用的试剂称为消毒剂。 灭菌：杀灭物体上所有微生物的方法。灭菌比消毒要求高， 包括杀灭细菌芽孢在内的全部病原微生物和非病原微生物。 抑菌：抑制体内或体外细菌的生长繁殖。常用的抑菌剂为 各种抗生素，可抑制细菌的繁殖。 防腐：防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法，细菌一般不 死亡。同一种化学药品在高浓度时为消毒剂，低浓度时常 为防腐剂。 无菌：不存在活的细菌。防止细菌进入人体或其他物品的 操作技术，为无菌操作。
结晶紫
卢戈碘液液
G-菌：
类脂质多
95%乙醇
复红
肽聚糖少
意义
鉴别细菌：把细菌分成G+和G-两大类。 选择抗菌药物：例如G+球菌对青霉素敏感,G-杆菌耐 药。
ห้องสมุดไป่ตู้
了解细菌的致病机理：G+菌大多产生外毒素,G-菌产 生内毒素。 革兰染色的步骤 涂片 → 干燥 → 固定→ 染色 紫碘酒红，分分半半
①接种环取盐 ①手持载玻片一端，涂膜朝 水3ul×2滴, 上，两个涂膜快速通过火焰 水滴间距小于 外层3次，时间2～3秒钟。 2cm。
许多细菌、病毒和真菌（如酵母菌）都能产生热
原。热原是微量即可引起恒温动物体温异常升高 的物质的总称。主要物质为细菌内毒素、胞壁酰 二肽及其他抗原抗体复合物、半抗体原物质和某 些药物（类固醇）等。
1、细菌内毒素一般指革兰阴性细菌细胞壁的结构成分，主 要是脂多糖。
2、细菌内毒素生物学活性可分为两类：一是致病作用，一 是保护性反应。
微生物的分布
土壤：是微生物生活的最适环境 水：仅次于土壤的微生物分布、定居的第二场所 空气：空气中的微生物主要来源于带有微生物菌体及孢子
的灰尘，这类微生物大多数是腐生性的，还来源于人和动 物，它们大多数是通过呼吸道排出的，其中也包含有病原 微生物，悬浮在大气中。
微生物的类群和形态结构
一、细菌
细菌虽小，仍具有一定的细胞结构和功能。细胞壁、细胞 膜、细胞质和核质等各种细菌都有，是细菌的基本结构。
球菌(coccus)
脑膜炎奈瑟菌
肺炎链球菌
杆菌(bacillus)
不同杆菌的大小、长短、粗细很不一致。
大 中 小
炭疽芽胞杆菌 3-10 μ m
大肠埃希菌 2-3 μ m
布鲁菌 0.6-1.5 μ m
水质微生物 采样
·自来水：现将自来水龙头用火焰烧灼3min，灭菌；再打 开水龙头防水5min（常用的水龙头可以 防水2~3min）；采样水置于无菌锥形瓶中，采样总量 占锥形瓶的80%左右，以便摇匀。
·水源水：选取可疑及有代表性的水域，一般距离水面 10~15cm采样；河道水采样时，将瓶口朝向、 水流方向，在指定位置打开瓶盖。
·采样结束后，样品冷藏运输，尽快检测。
样品处理、实验准备、实验步骤及报告详见作业指导书
染色
革兰氏染色法
革兰染色法是丹麦内科医生 Christain Gram 于1884年创立的一种细菌复染色方法，已有130多 年的历史，仍在广泛使用。
通透性学说、等电学说、化学学说
G+菌： 肽聚糖多 交联度大 类脂质少