实验室基本操作规范、规程、管理办法
实验室操作规章制度

实验室操作规章制度第一章总则第一条为了规范实验室操作行为,确保实验室安全、保障人员健康,特制定本规章制度。
第二条实验室操作人员应当严格遵守本规章制度,听从实验室主管指挥,服从操作规程。
第三条实验室操作人员应当遵守实验室安全管理制度,加强安全意识,防范各类安全事故。
第四条实验室操作人员应当爱护实验室仪器设备,遵守操作规程,保持实验室环境整洁。
第五条实验室操作人员应当勤勉工作,严谨治学,杜绝偷懒、粗心大意等不良行为。
第六条实验室操作规章制度由实验室主管负责执行,实验室管理员协助管理。
第七条实验室操作人员有违反本规章制度行为的,将接受相应的处罚。
第二章实验室安全管理第八条实验室操作人员进入实验室前,必须佩戴实验室指定的防护用具,包括实验服、手套、护目镜等。
第九条实验室操作人员在进行实验操作时,应当熟悉实验仪器设备的使用方法,严格遵守操作规程,严禁擅自调试仪器设备。
第十条实验室操作人员在实验室内禁止吸烟、喧哗、嬉闹等不文明行为。
第十一条实验室操作人员应当保持实验室通道畅通,不得堆放杂物,确保逃生通道畅通。
第十二条实验室操作人员应当及时清理和处理实验室废弃物品,分类投放。
第十三条实验室操作人员应当定期进行实验室安全演练,增强应急处理能力。
第十四条实验室主管应当定期组织安全检查,并对实验室安全进行评估,及时处理安全隐患。
第三章实验室仪器设备管理第十五条实验室操作人员必须按照仪器设备使用说明书的规范操作,严禁私自调试仪器设备,防止损坏设备。
第十六条实验室操作人员在使用完毕后,应当及时清洁仪器设备,保持设备干净整洁。
第十七条实验室操作人员发现仪器设备故障或异常情况,应当及时向实验室主管报告,停止使用。
第十八条实验室操作人员应当爱惜仪器设备,杜绝粗暴使用、乱拖乱放等不良行为。
第四章实验室环境管理第十九条实验室操作人员应当保持实验室环境整洁,不得在实验室内随意丢弃垃圾、食物等杂物。
第二十条实验室操作人员应当保持实验室通风良好,不得私自更改通风设备。
实验室标准操作规程 sop

实验室标准操作规程 sop实验室标准操作规程(SOP)是为了确保实验室工作的安全、有效进行而制定的一套规范和操作指南。
一、实验室基本安全规定1. 实验室进出口限制只允许经过授权人员进入,并确保所有人员都佩戴个人防护装备,如实验手套、防护眼镜和实验服等。
2. 禁止在实验室内进食、饮水或吸烟。
必要时,可以在专门指定的区域进行这些活动。
3. 所有设备和仪器必须正确安装并定期检查维护。
在使用之前,操作人员应对设备进行必要的清洁和消毒。
4. 实验室工作台面应保持整洁干净。
实验结束后,应立即清理工作台面和仪器设备,并将废弃物和化学品妥善处理。
5. 实验室必须配备必要的急救设施和应急联系信息,以便在发生意外或紧急情况时能够及时采取必要的措施。
二、实验室个人防护规定1. 所有人员必须正确佩戴个人防护装备,包括实验手套、实验服、防护眼镜和呼吸面罩等。
在实验开始之前,应检查个人防护装备的完整性和可用性。
2. 在进行有害化学药品操作时,必须佩戴适当的防护手套和防护眼镜。
根据实验操作的具体要求,可能还需要佩戴防护面罩或全面罩等。
3. 在进行火焰操作时,必须佩戴耐火手套,并确保工作区域周围没有易燃物体。
实验室必须配备灭火器,并定期进行灭火器的检查和维护。
4. 当进行有害气体操作时,必须配备适当的通风设备,以确保实验室内的空气质量符合安全标准。
三、化学品操作规定1. 所有化学品必须正确标记和储存,并遵循相关的安全规定和储存要求。
2. 所有化学品的使用必须在通风良好的实验室内进行,并遵守相关的操作指南。
3. 所有化学品的使用必须经过授权人员的审批,并严格按照操作指南进行操作。
4. 具有刺激性、腐蚀性或毒性的化学品操作必须在化学抽风柜内进行,以避免直接接触。
5. 所有化学品的废弃物必须经过正确的分类和处理,不能倾倒在普通垃圾桶中。
四、实验室仪器操作规定1. 在使用实验室仪器之前,必须进行必要的培训,并了解仪器操作的基本原理和步骤。
试验室的安全操作规定范本

试验室的安全操作规定范本实验室是科研、教学等实验性工作的重要场所,而实验室安全操作规定则是保证实验室工作安全的重要依据。
以下是实验室安全操作规定的范本:一、实验室入场与出场规定:1. 实验室入场前必须佩戴适当的个人防护装备,包括实验室制服、实验室鞋、安全眼镜、手套等。
2. 进入实验室前,应注意清洁双手,确保手部无任何残留物质。
3. 出场时,应遵循实验室等级区域规定的身体清洁要求,按照相关规定进行处理。
二、实验室仪器设备的使用规定:1. 使用前必须对仪器设备进行检查,确保其完好无损。
2. 严禁非相关人员进行未经许可的仪器设备操作。
3. 使用仪器设备时,应按照操作手册中的要求进行正确操作,不得擅自改变操作方式。
4. 使用完毕后,应及时关闭仪器设备,妥善保管,并通知相关人员进行维护保养。
三、实验室化学品的管理规定:1. 实验室内的化学品应按照相应标准分类、存放,并制定明确的管理制度。
2. 进行化学实验时,应严格按照实验操作规程进行操作,确保操作安全。
3. 使用化学品过程中,严禁将未经处理的废液直接倒入下水道或垃圾桶中,应按照规定进行正确处理。
4. 实验室内的化学品使用完毕后,应及时清理、整理,并妥善存放。
四、实验室火灾与急救规定:1. 实验室内禁止使用明火,必要情况下可使用电炉、燃气炉等设备进行操作。
2. 在实验室内使用易燃物质时,应注意避免与火源接触,并确保充分通风。
3. 实验室内如发生火灾,应立即采取措施扑灭火源,并及时报警,确保自身安全。
4. 实验室内如出现人员伤病,应及时采取急救措施,并立即向相关人员报告。
五、实验室环境与卫生规定:1. 实验室内应保持清洁整齐,不得随意堆放杂物。
2. 使用过的实验器材应及时清洗干净,并归位妥善保管。
3. 实验室内应保持空气流通,定期进行通风换气,确保空气质量。
4. 实验室内的地面、墙壁等应保持干净整洁,防止滑倒或碰撞等危险事件的发生。
六、实验室安全培训与演练规定:1. 实验室使用人员应接受相关安全培训,了解实验室安全操作规定,并定期进行安全知识考核。
实验室安全标准操作规程(3篇)

实验室安全标准操作规程第一章概述1. 引言实验室安全是保障实验室工作人员生命安全和实验室设备资产安全的重要任务。
为了规范实验室操作行为,减少事故发生的风险,制定并严格执行实验室安全标准操作规程至关重要。
2. 目的本实验室安全标准操作规程的目的是确保实验室工作人员在实验室环境中进行安全操作,并对实验室的安全管理制度进行详细的规定,以保障实验室工作的安全性和高效性。
3. 适用范围本实验室安全标准操作规程适用于所有实验室工作人员,包括实验室管理员、实验室技术人员以及实验室使用人员。
第二章实验室规章制度1. 实验室入口管理(1)实验室人员必须刷卡或密钥进入实验室,并且需要佩戴有效身份证件。
(2)实验室入口需要进行视频监控,进出实验室的人员需接受安全检查。
(3)禁止携带易燃、易爆、有毒有害物品进入实验室。
2. 实验室个人防护(1)实验室工作人员在进入实验室前必须穿戴个人防护装备,如实验服、耐酸碱手套、安全鞋等。
(2)实验室工作人员必须戴上护目镜或面罩,以防止眼部受伤。
(3)禁止在实验室进食、喝水或吸烟。
3. 实验室用电安全(1)实验室用电设备必须符合国家标准,并经过定期维护检查。
(2)禁止私拉乱接电线,不得超负荷使用电器设备。
(3)实验室不得堆放易燃、易爆物品,电源开关需保持干燥、清洁。
4. 实验室易燃物品管理(1)实验室易燃物品必须专门存放在防火柜中,禁止堆放在通道、电源等不安全位置。
(2)禁止在实验室内使用明火操作,确保实验室通风良好。
(3)实验室易燃物品出库需经过审批,并记录出库信息。
5. 实验室化学品管理(1)实验室中使用的化学品必须标识清晰,严禁随意更改或涂抹标识。
(2)每个实验室必须制定化学品储存位置图,禁止化学品堆放在易燃、易爆物品旁边。
(3)实验室工作人员必须戴上化学品防护手套,并使用抽风设备处理有害气体溢出。
6. 实验室设备使用管理(1)实验室设备必须按照说明书进行正确使用,并进行定期的维护保养。
实验室安全操作规定和仪器安全管理制度(3篇)

实验室安全操作规定和仪器安全管理制度是保障实验室工作安全的重要措施。
下面是一些常见的实验室安全操作规定和仪器安全管理制度:1. 实验室入场和离场管理:- 实验室内必须佩戴实验室服装、安全鞋和其他必要的个人防护装备。
- 进入实验室前必须经过培训,并且清楚了解实验室的安全规定。
- 离开实验室时,必须关闭所有仪器设备,清洁工作台和实验区域,并且将残留化学品归位。
2. 化学品安全管理:- 所有化学品必须按照分类进行存储,并且在实验室内明确标识。
- 化学品的使用必须使用适当的个人防护设备,如手套、护目镜等。
- 使用化学品时要注意防止误差和混淆。
3. 实验操作规范:- 操作前必须了解实验操作的方法和步骤,并且制定合理的实验计划。
- 操作时要注意仪器设备的正确使用和操作,不得随意修改或强行使用损坏的仪器。
- 操作时要严格按照实验室的操作流程和安全规定,禁止擅自进行危险操作。
4. 仪器设备安全管理:- 仪器设备必须定期进行检查和维护,确保其正常运行和安全使用。
- 禁止未经授权的人员擅自操作仪器设备,使用前必须经过培训和授权。
- 使用仪器设备时,必须了解其性能和操作方法,并且按照指定的参数和标准进行操作。
以上是一些常见的实验室安全操作规定和仪器安全管理制度,具体的规定可以根据实验室的情况进行制定和完善。
另外,实验室的安全操作规定和仪器安全管理制度还应与相关法律法规和标准相符合,以确保实验室工作的安全性和可靠性。
实验室安全操作规定和仪器安全管理制度(2)实验室安全操作规定:1. 实验室内禁止吸烟、饮食和吃东西,严禁带入易燃、易爆、有毒或有害物品。
2. 必须佩戴实验室要求的个人防护装备,如实验手套、实验眼镜、防护服等。
3. 在进行实验前,必须了解实验的危险性和安全操作步骤,并遵循相关操作规程。
4. 使用实验室设备和仪器时,必须按照正确的操作方法使用,并确保设备和仪器正常运行。
5. 实验过程中发现异常情况,如气味、烟雾、火灾等,应立即停止实验,并向实验室主管或安全管理人员报告。
试验室的安全操作规定(5篇)

试验室的安全操作规定取试剂1、手应该保持清洁干爽,瓶盖不准乱放,取过试剂后应立即封闭瓶盖。
2、取固体试剂时,应该用清洁的小勺取用,取强缄试剂后应立即清洗干净小勺。
3、取液体试剂时,取液体试剂的吸管在没有洗干净的情况下不准进入别的液体试剂中。
4、所有配制好的试剂应该有标签并标有配制的时间、日期和配制的比例。
5、配制的试剂应按所需的配制,不要配制太多,以免造成浪费。
二、配制好的试剂的保存易腐蚀的(氢氟酸氟化钾氟化铵氢氧化钾氢氧化钠......)等配制好的试剂应放在塑料瓶中。
见光易分解(过氧化氢高锰酸钾氯化亚锡硫酸亚铁铵氨水乙醇......)等配制好的试剂应放在避光的棕色塑料瓶中。
要封闭好。
3、各种有挥发性的试剂应放在通风干燥避光的地方保存。
4、有毒的化学试剂应有专人保管。
三、配制试剂时注意事项1、配制硫酸溶液时应将硫酸缓慢的加入有冷水的耐热玻璃容器中。
2、取各种酸性液体时应注意,不要溅出来,最好是戴防护手套。
3、取高氯酸时不准戴手套操作。
四、装机器时的注意事项1、严格按照装配说明或装配图装配2、再装配玻璃器皿时要小心轻放,往管道里装时要沾涂润滑剂(肥皂水洗涤剂),以免弄伤。
五、使用分析天平时要先校准后再使用。
六、化验室化验人员在当班时要注意安全,在当班时要离开的人员要交代清楚后方能离开七、化验室化验人员下班时要检查水电气,关好水源,切断电源,关闭氧气后方能离开八、化验室应保持清洁干燥通风。
无关人员不准随便进入试验室的安全操作规定(2)试验室是科学研究和实验活动的重要场所,为确保实验室工作的安全和顺利进行,必须制定一系列的安全操作规定。
下面是一个示例,供您参考。
一、实验室进出管理1. 实验室必须配备专门的入口和出口,并严格限制非实验人员的进入。
2. 凡进入实验室的人员必须经过登记,并佩戴个人防护用具,如实验服、手套、防护眼镜等。
3. 禁止携带易燃、易爆、有毒等危险物品进入实验室。
二、实验室设备及设施管理1. 实验室设备必须定期进行维护和保养,并有专门负责人进行检查和记录。
试验室工作管理制度及各仪器操作规程

试验室工作管理制度及各仪器操作规程一、试验室工作管理制度1.试验室工作守则-在实验室内要保持良好的工作秩序,不得吸烟、喝酒等,避免发生火灾和事故。
-严格遵守试验室安全操作规程,正确佩戴个人防护装备,并定期进行检查和更新。
-对试验室设备仪器要进行日常检查和维护,确保设备的正常运转。
-在试验室工作期间,要保持清醒、专注,不得在工作时间内进行无关活动。
2.试验室工作流程管理-试验室工作以项目为单位,根据项目需求确定试验计划和工作流程。
-每个项目设立专人负责,确保负责人具备相关专业知识和技能。
-试验室工作流程包括实验前准备、实验过程、数据记录和结果分析等环节。
-试验室工作流程管理要进行记录和总结,及时修正和优化工作流程。
3.试验室设备管理规定-对试验室设备进行清单管理,其中包括设备名称、型号、购置日期等信息。
-试验室设备定期进行保养和维护,及时修理和更换不再使用的老旧设备。
-设备管理要进行标准化,制定设备操作规程和维护记录,确保设备的正常运行。
4.试验室安全管理制度-试验室安全管理负责人负责制定安全操作规程,并进行安全教育和培训。
-试验室要配备必要的消防设备,定期进行消防演练和检查,确保安全防范措施的有效性。
-对试验室可能存在的危险因素要进行风险评估,采取相应措施进行防范。
5.试验室工作质量管理-试验室工作要遵循科学严谨的原则,确保数据的准确性和可靠性。
-对试验过程和结果要进行记录和复核,避免人为操作和误差。
-试验室工作要进行质量控制,采用合适的质量保证方法,确保试验结果的可信度。
1.天平操作规程-精确称量物质前,先进行零点调整,确保称量准确。
-尽量避免用手直接接触待称物,使用相应工具移动和操作。
-天平使用完毕后,要清洁天平平台,保持干净整洁。
2.试剂瓶操作规程-使用试剂瓶前,先检查瓶盖是否紧密,并摇晃试剂瓶,确保液体均匀。
-使用试剂时要小心倒取,避免液体溅出或发生其他意外。
-使用完试剂瓶后,要将瓶盖紧闭,并妥善保存试剂瓶。
实验室技术规范和操作规程(总)

三、仪器设备的使用规程四、个人防护用品的使用规范五、实验室消毒规程1.目的:为防止检验过程中致病微生物对检验人员及环境的污染,制定切实可行的消毒隔离制度,确保工作人员和环境的安全。
2。
适用范围适用于与病原微生物实验活动相关的科室和人员.3。
消毒隔离制度3.1。
工作人员须穿工作服,戴工作帽,必要时穿隔离衣、胶鞋,戴口罩、手套.3.2.使用合格的一次性检验用品,用后进行无害化处理。
3.3。
严格执行无菌技术操作规程,静脉采血必须一人一针一管一巾一带;微量采血应做到一人一针一管一片;对每位病人操作前、后洗手或手消毒。
3。
4.无菌物品如棉签、棉球、纱布等及其容器应在有效期内使用,开启后使用时间不超过24小时.使用后的废弃物品,应及时进行无害化处理,不得随意丢弃.3.5。
各种器具应及时消毒、清洗;各种废弃标本应分类处理。
3.6。
报告单应消毒后发放.3.7.检验人员结束操作后应及时洗手,毛巾专用,每天消毒.紫外线消毒每日2次;在进行各种检验时,应避免污染;在进行特殊传染病检验后,应及时进行消毒,与有场地、工作服或体表污染时,应立即处理,防止扩散,并视污染情况向上级报告。
六、废弃物的生物安全处理规程医疗废物处置制度及流程1.目的:将操作、收集、运输、处理废弃物的危险减至最少,将其对环境的有害作用减至最少.2.范围:实验室用的所有废弃物品。
3。
制度要求:3。
1.医疗废弃物是指将要丢弃的所有物品。
在实验室内,废弃物最终的处理方式与其污染被清除的情况紧密相关。
废弃物处理的首要原则是所有感染性材料必须在实验室内清除污染、高压灭菌或焚烧。
3。
2医疗废物与生活垃圾严格分开,严禁混放,装入符合规定的医院统一发放的垃圾袋中,装量和容量达四分之三并有效封口,已装入袋中的垃圾不得取出.3。
2。
微生物实验室的病原体培养基、标本、菌种和毒株等高度危险性废物应就地高压灭菌(或消毒液浸泡)后由专人回收至院内暂存点再交给集中处置中心焚烧(日产日清);3。
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实验室基本操作规范、规程为保证化验工作质量,保证人身及设备安全,规范化验操作步骤,特制定本规程。
一操作安全(一)化验室用电炉、酒精灯等热源设备,操作人员一定要注意严防火灾发生。
(二)化验室用高压灭菌设备等,操作人员一定要严格按规程操作,防止蒸汽灼伤。
(三)操作人员配制和使用强腐蚀性药品时,必须做好相应的防护,严防人身伤害的发生。
二环境和卫生(一)基本要求1 进入化验室前必须换上专用拖鞋。
2 化验室内不得有蚊蝇。
3 化验室要保持清洁、有序;各房间要定期打扫,消毒;物品要定点放置且摆放整齐。
4 活体微生物要及时处理,废弃的平板要先洗完再灭菌。
5 化验室人员要注意个人卫生,勤洗衣服,勤洗澡,勤剪指甲等。
(二)无菌室使用要求1 无菌室使用前须先关闭紫外灯管,打开风机,半小时后即可进行无菌操作。
操作前要先用75%酒精棉球消毒手部、腕部等,对放在工作台上的物品也要用棉球擦拭,然后严格按无菌要求进行操作,要尽量缩短操作时间。
2 使用完毕后,要将台面清理干净,关闭风机,再次将台面用酒精棉球擦拭干净,然后打开紫光灯离开。
3 无菌室应每周清扫一次,用来苏水对地面及门窗进行擦拭,如必要时采用甲醛薰蒸法。
三基本操作(一)器皿的洗涤与包扎1 新器皿因含有游离碱,先用1%盐酸处理一夜,再用清水洗,也可用水煮0.5-1小时后,取出再用水清洗干净。
2 常用玻璃仪器如三角瓶、培养皿、试管、漏斗、烧杯等,先用毛刷沾洗衣粉或肥皂粉刷洗,然后用自来水冲洗干净,放入70-80烘箱中烘干或自然晾干,放入清洁柜内备用。
检查器皿的内壁,若水均匀分布成一薄层而不出现水珠,说明油污已除净,即可烘干备用。
3 用来做油镜观察的玻片,可以先用滤纸先把油污轻轻地擦去,然后放入肥皂水或洗衣粉水中浸泡,然后用清水冲洗,晾干备用,用时浸泡在75%浓度洒精中。
4 移液管的使用一般先用水冲洗,再插入洗液中,浸泡数十分钟后取出,用自来水冲洗干净即可。
5 接种瓶使用时先用水冲洗,然后用洗衣粉刷洗干净,再用清水冲洗,然后晾干;接种瓶口和胶管口用棉塞塞住,然后盖以纱布、牛皮纸进行包扎,放入蒸柜中进行灭菌。
(二)高压蒸汽锅的使用方法1 往灭菌锅内加水至高水位处;2 将待灭的物品放在灭菌锅内,物品之间留有适当的间隙,以利蒸汽的畅通;3 将灭菌物品最上方盖几层报纸,拧紧上盖;4 将电源打开,加热至夹层水沸腾,盖上夹层放气阀,将干燥阀扭向消毒方向,至放气阀排大气3分钟,关闭;继续升温至0.1Mpa压力时,使压力保持恒定,并开始计时;5 30分钟后关闭电源,让锅自然降压,待压力完全降至“零“后打开上盖,取出灭菌的物品;6 灭菌锅长时间不用,要放尽锅内水,以免日久腐蚀。
(三)培养基的配制1 根据配方计算出实验中各种药品所需的量,然后分别称取;2 将药品倒入杯内,加入少量的水进行加热溶解,加热过程中要不断搅拌,待完全溶解后,补足水分到所需的体积;3 用滴管逐滴加入5%氢氧化钠溶液调节PH,边搅拌边用精密PH试纸测其PH,直到符合要求为止。
4 按实验要求将培养基进行分装,装入试管中的量不宜超过总高度的1/5,装入三角瓶的量以总体积的一半为限;在分装过程中,应注意勿使培养基沾污管口或瓶口,以免弄湿棉塞造成污染。
5 培养基分装好以后,在试管口或瓶口加上一只棉塞,一方面阻止外界微生物进入培养基内而引起的污染,另一方面保证有良好的通气性能,使微生物能不断的从外界获得无菌空气。
6 棉塞塞好以后,在外面包上一层牛皮纸,以防止灭菌时冷水的沾湿和灭菌后的灰尘侵入,贴上标签,注明培养基的名称及配制日期。
7 一般情况下,培养基配好后应立即灭菌,如不及时灭菌,应放入冰箱内保存。
8 灭菌后,固体培养基如需制成斜面,应在未凝固前将试管口方搁置在一根长的玻棒或木条上即可。
搁置的斜面要适当。
(四)转接操作1 斜面接种(1)接种前在已灭菌的接种试管上贴上标签,注明菌名,接种日期,标签纸要贴在斜面的上方,距离试管口约2-3cm的位置,便于在接种时相核对。
(2)点燃酒精灯,左手食指、中指和无名指分别夹上菌种和斜面(斜面向上),使斜面近水平。
先用右手将棉塞旋松,再拿接种环在火焰上烧红,把有可能进入试管的其余部分也过火灭菌,用右手的无名指、小手指和手掌边先后拔出菌种管和待接试管的棉塞,让试管口缓缓过火,将灼烧过的接种环伸入菌种管,先使环接菌种管的培养基部分,使环冷却,侍冷却后轻轻沾取少量菌苔,然后将接种环移出菌和管,在火焰旁将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管,从斜面培养基的底部向上做“z“形来回密集划线。
接好种的试管口再次过火,盖紧棉塞,将接种环烧红灭菌。
(3)将接好种的斜面放在28℃恒温箱中培养。
2 试管斜面转茄子瓶(1)先将试管和茄子瓶用75%酒精棉球消毒;(2)点燃酒精灯,以左手拿茄子瓶和试管(试管放在茄子瓶中部,试管口与茄子瓶对齐,姆指在上按住试管,其余四指托住茄子瓶),将接种环通过火焰灼烧,以右手小指和手掌边缘夹住茄子瓶,小指和无名指同时夹住试管棉塞,迅速在拔火焰旁去,然后将接种环缓缓伸入试管中,靠近试管壁或边缘琼脂冷却一下,待接种环冷却后,挑起菌苔,在火焰旁迅速伸入茄子瓶中由底向上做“z“形划线,尽量将茄子瓶斜面划满,退出接种环,将瓶口及棉塞再次过火并塞紧,最后将接种环烧红灭菌。
(3)一支试管一般接3-5个茄子瓶。
3 试管(茄子瓶)斜面转摇瓶(1)将试管(茄子瓶)用75%酒精棉球擦拭干净;(2)点燃酒精灯,一人先将接种环或金属刮棒烧红灭菌,然后用左手拿试管(茄子瓶)靠近火焰,右手拔去棉塞,置于无菌区;另外一人在火焰旁拔去装无菌水或灭菌液体培养基的三角瓶棉塞,向试管(茄子瓶)内倒入少许液体,塞上棉塞,将接种环在火焰旁伸入试管(茄子瓶)内,用水冷却一下,然后将斜面上的菌苔刮下,制成菌悬液,抽出接种环,用火焰灭菌。
在无菌区拔去待转接的三角瓶的棉塞,将菌悬液倒入三角瓶中,塞上棉塞,最后置于摇床上培养。
(3)一支试管一般转一个三角瓶,一个茄子瓶一般可以转接数个三角瓶。
4 摇瓶转摇瓶(两人操作)(1)将摇瓶用75%酒精棉球拭。
(2)点燃酒精灯,先将菌液摇瓶摇晃几下,注意不要荡湿棉塞,然后一人左手倾斜拿起摇瓶,右手在火焰旁拔去棉塞,将瓶口过一下火焰。
另一个人右手倾斜拿待转接的摇瓶,左手在火焰旁拔去棉塞,迅速将菌液倒入待转接的三角瓶中,瓶口尽量少沾菌液,瓶口和棉塞先过一下火焰,然后旋紧棉塞。
(3)根据情况,一个摇瓶转数个摇瓶。
5 摇瓶菌液倒入接种瓶(两人操作)(1)点燃酒精灯,一人左(右)手拿接种瓶,瓶身稍倾斜,另外一只手拿酒精灯,灯放在接种瓶口斜下方,将接种瓶口用火焰保护起来,拔去接种瓶棉塞,另外一个人在酒精灯火焰旁拔去摇瓶棉塞,摇瓶口过一下火焰,然后将菌液倒入接种瓶内,倒的时候尽量让接种瓶口少沾菌液。
(2)菌液倒好后,在火焰旁拿出灭菌的接种瓶瓶盖,用火焰烧一下,迅速盖在接种瓶上。
四发酵液的取样操作(一)发酵液取样瓶采用100ml三角瓶,棉,外包一层皮纸,0.1Mpa压力灭菌30min后使用。
(二)取样时按无菌操作要求,由发酵工人配合。
五检验操作(一)草炭及成品含水量的测定称取草炭成品30-40克(精确到0.01克)3份,放入到烧杯内,置105干燥箱内烘干4小时,冷却后称重,根据烘干前后重量差计算含水量,取3个样品的平均值。
计算公式:H2O%= 烘干前重量—烘干后重量———————————× 100%烘干前重量(二) PH的测定1 液体菌液用PH计或精密试纸直接测定。
2 成品及草炭需随机称取样品8克,将样品置于干净烧杯内,按1:2加入无离子水,浸泡振荡均匀。
预热PH计,用标准溶液(PH6.86)校正仪器后,测定样品悬液PH,边测边搅拌,仪器读数稳定后记录,每个样品重复三次。
或取部分溶液用滤纸过滤,直接用精密试纸进行测定。
(三)草炭细度的测定称取草炭100克,放入杯内,置105 干燥箱内烘干一小时,过孔径0.18mm标准筛,称重筛下部分的重量,其与样品的重量之比,即为筛余物的含量。
(四)革兰氏染色1 加一滴蒸镏水于载玻片上,再用接种环取少量菌苔与玻片上的水滴混合均匀,形成薄的菌膜。
2 涂片在空气中干燥,然后手持玻片一端,有菌膜的一面朝上,玻片在微火上通过几次(用手指触涂片反面,以不烫手为宜)。
3 冷却后,将玻片置于玻片搁架上,加草酸铵结晶紫染色液(加量以盖满菌膜为度),染色1-2分钟,倾去染色液,用自来水冲洗,然后滴加路哥氏碘液,染1-2分钟,水洗,再滴加95%乙醇溶液脱色20-30秒,立即水洗,以终止脱色,再滴加番红2-3分钟,水洗,最后用吸水纸轻轻吸干。
(五)血球计数板直接计数法1 在正式计数前,先用显微镜检查计数板的计数室,看其是否沾有杂质或干涸着的菌体,若有污渍则需作清洗。
先用95%酒精棉球轻轻擦洗计数室的计数室,再用蒸镏水冲洗计数板,并用滤纸吸干其上的水分,最后用擦镜纸擦干净,然后进行镜检,直至计数室无污渍时才可用于计数,否则仍需重复能上操作。
2 将待测菌液振荡混匀,取盖玻片安放在放在计数室上面,然后用接种环挑一环均匀的菌悬液,使它沿着盖玻片和计数板间的缝隙渗入计数室,连续二至三次,直至充满计数室平台为止,用滤纸吸干周围的水份,静置4-5分钟。
3 将加好菌悬液的计数板置于显微镜载物台的中央,先在低倍镜下寻找计数室上的大方格,寻找时显微镜的光圈要适当缩小,使视野偏暗,然后顺着大方格线移动计数板,使计数室位于视野中间,转至高倍镜,适当调节光亮度,使菌体和计数室线条均清晰为止,然后将计数室一角的中格移至视野中。
4 通常以计五个中格的菌数来代表计数室的含菌量,将所要计数的中格中的菌计总数,为了避免重复和遗漏,将分布在方格线上的菌一律以接触方格底线和右侧线上的菌计入格内。
菌数1ml=50000×五个中格的总菌数×稀释倍数5 计数完毕后,计数板先用95%酒精轻轻擦洗,再用蒸镏水淋洗,然后用滤纸吸干,最后用擦镜纸擦干净,放入盒内。
(六)活菌计数法1 倒平板:将所检测菌的固体培基倒入6个无菌培养皿内编号为10-5、106-每个稀释度三套。
2 稀释:取10克样品放入带玻珠的100ml无菌水中,振荡20min,静置20min,编号为10 –1。
用5ml灭菌吸管吸5ml菌悬液放入45ml无菌水中混匀振荡,编号为10-2,依次稀释到10-5和10-6。
3 分别精确吸取10-5和10-6的菌液0.1ml放入对应的平板内,用灭菌的三角涂棒进行均匀涂布,然后置28 恒温箱中倒置进行培养。
培养到期后,数平板内的单个菌落数即可计数。
六原始记录的填写原始记录是实验时所做的记录,是必需保存的重要资料。
记录要真实、清楚、详尽地记录在记录本上,注明时间、品种、仪器、操作人等多项内容,要采用法定计量单位,更正记错数据时要在其上划一条线代表消去,并在旁边写明更正数据。