CTC循环肿瘤细胞
ctc循环肿瘤细胞课件
ctc循环肿瘤细胞课件一、教学内容本节课的教学内容选自人教版小学科学六年级下册第五单元《生物与生活》的第三课时《细胞的生活》。
本节课主要学习细胞的基本结构和功能，重点掌握细胞膜、细胞质、细胞核等结构，以及它们在维持细胞生命活动中的作用。
二、教学目标1. 了解细胞的基本结构，认识细胞膜、细胞质、细胞核等组成部分。
2. 理解细胞各部分结构的功能，掌握细胞膜的作用以及细胞质和细胞核在细胞生命活动中的重要性。
3. 培养学生的观察、思考和动手能力，提高他们对生物学知识的兴趣。
三、教学难点与重点重点：细胞膜、细胞质、细胞核等结构的功能。
难点：细胞膜的作用以及细胞质和细胞核在细胞生命活动中的重要性。
四、教具与学具准备教具：PPT、细胞模型、显微镜等。
学具：笔记本、彩色笔、显微镜等。
五、教学过程1. 实践情景引入：邀请一位同学分享他在生活中观察到的细胞现象，如种子的发芽、伤口的愈合等。
2. 知识讲解：通过PPT展示细胞的基本结构，讲解细胞膜、细胞质、细胞核等组成部分，以及它们在细胞生命活动中的作用。
3. 例题讲解：以洋葱表皮细胞为例，引导学生观察细胞结构，理解细胞膜、细胞质、细胞核等功能。
4. 随堂练习：让学生分组观察不同植物细胞的结构，填写观察记录表，巩固所学知识。
5. 动手实践：让学生用显微镜观察洋葱表皮细胞，并尝试绘制细胞结构图。
六、板书设计板书内容：细胞的基本结构：细胞膜：保护、控制物质进出细胞质：含有细胞器，维持细胞生活活动细胞核：储存遗传信息，控制细胞生长、分裂七、作业设计1. 作业题目：观察身边的植物细胞，描述细胞膜、细胞质、细胞核等结构的特点及功能。
2. 答案：请根据观察结果，描述细胞膜、细胞质、细胞核等结构的特点及功能。
八、课后反思及拓展延伸1. 课后反思：本节课通过实践情景引入、知识讲解、例题讲解、随堂练习、动手实践等环节，让学生掌握了细胞的基本结构和功能。
在教学过程中，要注意关注学生的学习情况，及时解答他们的疑问，提高教学效果。
循环肿瘤细胞CTC检测 PPT
阴性富集流程图
全亚型、高效率、非依赖
通用于绝大部分实体肿瘤、非血源性循环稀有细胞的富集
我们的选择
imFISH
imFISH技术将基因水平的FISH技术与蛋白水平的 免疫荧光染色技术相结合,是兼具核遗传信息及细 胞形态改变的精准CTC鉴定分析方法。
技术优势： ➢ 核酸水平稳定性、灵敏度高（80％） ➢ 引入CD45染色，提高特异性（97％) ➢ 细胞计数、核型分析、表型分析、分子分型
便捷性
CTC只需采集少量外周静脉血便可进行检测，对人体基 本无创，取样便捷，适于动态连续性监测。
循环肿瘤细胞CTC临床应用方向
CTC临床重点应用：一、辅助诊断
判断病灶良恶性 无创便捷，发现早期隐匿转移
辅助传统TNM参考分期 提供适时诊断信息，实现精准治疗
辅助诊断
CTC检测应用于辅助诊断
诊断难
异常占位，良性? 恶性? 病灶位置不宜活检怎么办? 有创操作，是否有瘤细胞种植？
诊准难
肿瘤异质性的影响? 临床分期与病理分期不一致?如何针对肿瘤时空信 Nhomakorabea变化提供
即时诊断信息?
辅助诊断
CTC功能：
对尚未完善病理诊断的患者，CTC 可联合影像学、血清学作为辅助判断病灶良恶性的指标。 同时,CTC是对原发灶与转移灶信息的全面反映，可弥补现有传统TNM 分期的不足，提示早 期微转移的存在风险，指导临床调整诊疗策略，制定更加合理的个体化诊疗方案（如进一 步筛查转移、拟定新辅助化疗、辅助化疗方案等。
联合影像学更客观评价疗效 监测耐药发生
疗效评估、耐药性监测
胰腺癌
49.00% （单8）
75.49%
72.39% 70.3% 70.92%
（8+17） （8+17） （1+8） （8+3）
人外周血循环肿瘤细胞(CTC)
人外周血循环肿瘤细胞(CTC)检测技术的研发及临床应用开发美国肿瘤协会于2006 年发表的年度报告指出，目前全世界范围内每3 人中就有1 人在其一生中会患有某种肿瘤，而且肿瘤发病率在发展中国家随着污染程度的增加，患病几率还会高于1/3 的比例。
现今全世界用于肿瘤治疗与防治的费用每年以16.5% 的比例递增。
仅用于乳腺癌，结直肠癌及前列腺癌（还不包括发病率最高的肺癌）的投资，目前世界范围内已达每年92 亿美元。
目前全世界用于肿瘤诊断的方法可归为三大类：病理学（活检切片）；影像学（超声，X光，CT, PET 等）和血清学（血清肿瘤相关蛋白，如CA-125, CA-199, CEA 等），但所有这些方法都有不可避免的缺点，例如灵敏性及特异性差，过于依赖医生判断的主观性等。
因此目前临床急需一种能够为医生及病人提供准确，快速的肿瘤检测手段。
经过长时间的大量研究，美国FDA 认证的人外周血循环肿瘤细胞（Circulating Tumor Cell, CTC）检测目前已被公认为最好及最可观的检测手段之一。
目前已有越来越多的国内外医生开始应用此技术作为肿瘤检查的重要辅助手段。
不仅于此，CTC 检测也被公认为是目前国外新近流行的肿瘤治疗方法-即阻断肿瘤细胞入血转移的唯一有效检测指标。
除了上述CTC可作为肿瘤检测手段外，CTC还可成功应用于以下一系列其它方面的用途：(1)个体化治疗的体外肿瘤药物筛选；(2)体内化疗药物药效的快速评估: 相对于每12周一查的CT 诊断，CTC在第1-2周即可显示药效结果，这一点对临床医生和病人尤为重要；(3) 根据CTC数目，判断病人愈后状况及存活时间；（4）肿瘤病人复发的监测与及时诊断；及（5）正常人群体检普查以利于尽可能的肿瘤早期诊断。
除了应用于临床外，CTC 亦可应用于众多药厂和科研机构的基础研究，包括寻找新的肿瘤标识物以及开发新的抗肿瘤药物等。
目前美国FDA已于2004年认证了美国上市公司Immunicon/Veridex的CTC检测技术及其临床应用。
ctc循环肿瘤细胞检测
CTC循环肿瘤细胞检测循环肿瘤细胞（CTC）是一种罕见的血液中的癌细胞，可以从原发肿瘤脱落，并通过血液循环传播到其他部位。
CTC的检测对于癌症的早期诊断、治疗选择和预后判断具有重要意义。
CTC循环肿瘤细胞检测是一种非侵入性、无创的方法，可以提供关于肿瘤发展和蔓延的有价值的信息。
本文将介绍CTC循环肿瘤细胞检测的原理、方法和应用。
原理CTC循环肿瘤细胞检测的原理基于CTC的特殊性质。
CTC具有一定的生物特性，如细胞形态学特征、表面标记、核酸和蛋白质表达等，使其能够与正常血液细胞区分开来。
通过对CTC进行特异性标记和分离，可以将其从血液中分离出来，并进行进一步的表征和分析。
目前，CTC的检测方法大致可以分为两类：物理方法和生物学方法。
物理方法包括密度梯度离心、滤膜分离和微流控芯片等，通过差异化的物理性质实现CTC的分离。
生物学方法则利用CTC与正常血液细胞之间的生物学区别，如表面标记的差异、特定蛋白和核酸标记等，通过生物学分子靶向的方式进行CTC的富集和分离。
方法CTC循环肿瘤细胞检测的方法多样，具体的选择取决于实验室的设备和研究目的。
下面将介绍几种常见的CTC检测方法：密度梯度离心法密度梯度离心法是最早用于CTC检测的方法之一。
该方法通过利用瘦脂蛋白或葡聚糖等高分子物质在不同浓度下形成的梯度来分离CTC。
通过对梯度离心后，在不同密度层次上找到CTC，并进行进一步的分析和鉴定。
滤膜分离法滤膜分离法基于滤膜的孔径大小来分离不同大小的细胞。
通过选择合适的滤膜孔径，可以将CTC与正常血液细胞分离开来。
然后，通过对滤膜上沉积的细胞进行进一步的标记和分析，即可获得CTC的信息。
微流控芯片法微流控芯片法是一种新兴的CTC检测方法。
该方法利用微流控技术，在芯片上制造出复杂的细流体网络，并通过微米级别的微通道将CTC富集和分离。
微流控芯片法具有高通量、高灵敏度和高特异性的优点，被广泛应用于CTC的检测。
应用CTC循环肿瘤细胞检测在临床和研究领域具有广泛的应用前景。
2023版《循环肿瘤细胞检测在胃肠道肿瘤诊疗中的应用中国专家共识》解读ppt课件
CTCs具有稀有性、异质性和动态变化的特点，是一种非侵入性的“液态活检”手 段。
检测原理及技术方法
检测原理
基于物理、生化及免疫学方法对血液中的CTCs进行富集和鉴 定。
技术方法
包括大小、密度、电荷等物理特性差异进行富集的方法（如 滤膜法、微流控芯片技术等）、利用抗体与抗原特异性结合 进行捕获的方法（如免疫磁珠法）以及其他新兴技术（如基 于核酸适配体的方法等）。
2023版《循环肿瘤细胞检测在胃 肠道肿瘤诊疗中的应用 中国专家共识》解读
汇报人：XXX 2023-11-17
目 录
• 引言 • 循环肿瘤细胞检测的基本原理与技术 • 循环肿瘤细胞检测在胃肠道肿瘤诊疗中的应用 • 专家共识详细解读 • 未来展望与研究方向
01 引言
背景介绍
癌症负担
胃肠道肿瘤是我国常见的恶性肿瘤之一，严重威胁着人民的健康和生命安全， 给社会和家庭带来巨大的负担。
VS
早期发现
CTC检测有助于胃肠道肿瘤的早期发现， 从而提高治疗的成功率和患者的生存率。
在胃肠道肿瘤分期中的应用
判断肿瘤侵袭程度
通过CTC检测可以判断胃肠道肿瘤的侵袭程度，有助于准确分期。
指导治疗方案
准确的分期信息有助于医生为患者制定更合适的治疗方案。
在胃肠道肿瘤预后评估中的应用
预测生存时间
CTC检测可用于预测胃肠道肿瘤患者的生存时间，为患者提供更个性化的治疗建议。
探索循环肿瘤细胞检测在其他肿瘤类型中的应用
拓宽应用领域
基于现有研究基础，进一步探索循环肿瘤细胞检测在 其他肿瘤类型（如肺癌、乳腺癌等）中的应用，为更 多肿瘤患者提供个体化诊疗服务。
跨瘤种比较
开展循环肿瘤细胞检测在不同肿瘤类型中的比较研究 ，揭示其在各类肿瘤中的共性与特性，为临床提供更 多维度的参考信息。
关于循环肿瘤细胞(CTC)的一些认识
关于循环肿瘤细胞（CTC）的一些认识摘要：通常把进入人体外周血的肿瘤细胞称为循环肿瘤细胞（circulating tumor cell）。
随着人们对循环肿瘤细胞研究的深入，尤其是伴随现代检测技术的广泛应用，CTC逐渐被人们所重视。
循环肿瘤细胞的检测可有效地应用于体外早期诊断，化疗药物的快速评估，个体化治疗包括临川筛药、耐药性的检测，肿瘤复发的监测以及肿瘤新药物的开发等。
检测CTC 有着良好的应用前景，随着这一研究领域的不断发展，必将产生新的诊疗手段，从而使肿瘤的治疗提高到一个崭新的阶段。
关键词：循环肿瘤细胞；CTC；检测方法；临床意义早在1896年，Ashworth曾报道1例因癌症死亡的患者外周血中发现了类似肿瘤的细胞，并首次提出循环肿瘤细胞（circulating tumor cell, CTC）的概念[1]。
随着人们对循环肿瘤细胞研究的深入，尤其是伴随现代检测技术的广泛应用，CTC逐渐被人们所重视。
1、概述CTC指自发或因诊疗操作进入外周血循环的肿瘤细胞。
随着肿瘤细胞的不断增殖,部分细胞可以通过分泌一种抑制黏附因子表达的物质,增加其运动能力并使之与肿瘤母体脱离。
这些脱落的肿瘤细胞再分泌一种蛋白溶解酶，以破坏周边宿主结缔组织并进入脉管系统。
诊疗操作也可使肿瘤细胞扩散进入外周血循环。
2、检测方法2.1免疫细胞化学（immunocytochemistry, ICC）这一检测方法基于抗原抗体结合反应的原理，利用单克隆抗体（McAb）与特异的肿瘤标记物结合，并通过酶与底物反应显色来判断肿瘤细胞的存在。
检测的肿瘤标志物主要分三类：①上皮细胞角蛋白（CK），如CK19；②上皮细胞膜特异性抗原，如黏蛋白类，包括EMA、HMFG、HEA125等；③肿瘤相关糖蛋白（TAG），如TAG12。
1980年，Sloane等首次采用ICC的方法检测乳腺癌患者骨髓中的肿瘤细胞。
该方法可以进行形态学分析，但是检测的细胞量少，敏感性只有10－4～10－5（即在1万~10万个单核细胞中发现一个肿瘤细胞），而且许多分化差的肿瘤不能表达目标抗原，而非上皮细胞中细胞角蛋白和上皮细胞抗原亦可能阳性,故特异性不高。
循环肿瘤细胞CTC检测及临床应用
循环肿瘤细胞C T C检测及临床应用Prepared on 22 November 2020循环肿瘤细胞检测及临床应用中文摘要：循环肿瘤细胞是从原发肿瘤扩散，进入到血液或淋巴系统的肿瘤细胞。
循环肿瘤细胞在血液中含量稀少，一般先将循环肿瘤细胞富集，然后再进行检测，现在已经开发了多种细胞富集和检测技术。
本文主要对CTCs的富集和检测技术研究进展，以及CTCs在临床分析和研究上的应用进行了综述。
关键词：循环肿瘤细胞富集检测临床Abstract:Circulatingtumorcellscomefromtheprimarytumorproliferation,andprolife ration,癌症转移的过程是循环肿瘤细胞(CirculatingTumorCells，CTCs)从原发肿瘤分离，通过循环系统扩散，进入血液或者淋巴系统，在远处形成新的肿瘤，最终导致大多数的癌症病人死亡。
1869年，Ashworth在一例癌症死亡患者的外周血中发现了类似肿瘤的细胞，并首次提出了CTCs的概念。
从此，越来越多的研究表明，CTCs的出现与癌症密切相关。
通过上皮-间质转化(EMT)，实体瘤的上皮细胞进行细胞的变化，使他们通过增加流动性和侵袭性脱离组织，进入到血液中，附着，、发展成远端转移。
由于CTCs能够代表原发肿瘤的表型和遗传组成，并能够作为任何转移性肿瘤的”液体活检”，CTCs的富集分离和特征研究，十分具有吸引力。
CTCs的富集和计数技术已经建立，其中CTCs的计数可以成为预测指标，当其大于已知的阈值时，就预示着病人就患有转移性乳腺癌，、前列腺癌，、结直肠癌等。
基于临床试验，美国FDA批准了一种临床检测CTCs的CellSearch技术，用于上述癌症的CTCs的富集和计数。
CellSearch技术成功的证明了CTCs确实表征了疾病的活跃，CTCs数量的增加预示着病情的恶化，可以通过CTCs了解原发性和转移性肿瘤，以CTCs为基础的分析，可以帮助人们实时诊断和预测，对病情做出决定，并取样检测耐药性。
循环肿瘤细胞(CTC)检测
循环肿瘤细胞（CTC）检测一、什么是循环肿瘤细胞（CTC）？循环肿瘤细胞（Circulating Tumor Cell，CTC）是存在于外周血中的各类肿瘤细胞的统称，因自发或诊疗操作从实体瘤病灶（原发灶、转移灶）脱落，进入外周血循环的肿瘤细胞。
CTC非常稀少，每毫升血液中109血细胞只有几个CTC。
大部分CTC在进入外周血后会发生凋亡或被吞噬，少数能够逃逸并发展成为转移灶，增加恶性肿瘤患者的死亡风险。
二、肿瘤的发生及检测诊断全国肿瘤登记中心发布的2015年年报显示，2011年我国新增癌症病例约337万例，比2010年增加28万例——这相当于每分钟有6人被诊断为癌症。
然而，令人担忧的是这样的情势似乎仍未到达峰顶，未来可能还会不断增加。
美国约翰-霍普金斯大学Kinmel 癌症中心的Bert-Vogelstein 等专家在2013年3月份的一篇综述文章中写道：在今年将死于癌症的一百万人里，绝大部分是因为他们的癌症没有在发生、发展的前90%的时间内被发现。
因此，我们需要明确一点：癌症是一种慢性病，它只是被突然发现，并非是突然发生的。
我们需要尽可能早的发现它，从而提高治愈率。
伴随肿瘤的发生过程，肿瘤细胞的大小也随之增大。
传统方法诊断出癌症的时候，大部分已经是晚期。
晚期癌症的治愈率极低，其五年生存率也很低。
在肿瘤的发生过程中，早期到中期之间是最佳治疗期，因此，如果在早期就可以发现肿瘤的存在，必然可以提高治愈率。
临床癌症研究（Clinical Cancer Research）杂志上发表的荟萃分析（Meta-analysis）证实CTC在乳腺癌预测中的价值，结果表明早期和转移性乳腺癌患者的循环肿瘤细胞CTC检测是一个稳定的预测和预后工具。
如果将肿瘤易感性基因检测和循环肿瘤细胞检测完美结合，那么能够将肿瘤的早期发现率提高数倍。
肿瘤易感性检测是对未来可能患有癌症的一种风险预测。
如果风险等级高，除了改变生活方式外，还可以定期做循环肿瘤细胞检测，即CTC检测，而且检查频率可以适当增加，每2-3个月检查一次，从而达到实时监控的目的。
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行 业 背 景
• 中国肿瘤发病率285.91/10万，每年新发病例321万，6人/分钟 确诊恶性肿瘤。 • 肿瘤13标:中晚期蛋白标记物，PSA, CA125,CA199等。 • 影像学检测：CT，MRI, PET，仅检出5mm以上肿瘤。 • 病理诊断：穿刺样本检测，创伤性。 • 技术瓶颈：仅能检测中晚期肿瘤、难以早期诊断 ！ • 液体活检：通过检测血液及其他体液中更加特异的肿瘤指纹来 实现肿瘤早期诊断。 • 循环肿瘤细胞（CTC）：肿瘤上脱落的活细胞，可能代表了转移 的种子； • 循环肿瘤DNA（ctDNA）则是来自死细胞的遗传物质，通常以 DNA短片段的形式存在。
循环肿瘤细胞的分离富集
CTCs分离、分型、分析
CTCs的检测方法及代表技术产品
原 理 技术产品
阳性富集法： •CellsearchTM系统 •CTC芯片（CTC-chip） •MACS®Cell Separation 免疫捕获法(根据细胞表面 标志物) 阴性筛选法：
•Easy Sep
•Cyttel
循环肿瘤细胞的概念与特性
循环肿瘤细胞，circulating tumor cell，CTC
1896年在患者外周血中发现与原发肿瘤细胞体积和形态相似的细胞 目前CTCs定义为自发或因诊疗操作脱离实体瘤原发灶或转移灶进入外周血循环的肿瘤细胞 在肿瘤转移灶形成前即可在外周血中检测到循环肿瘤细胞
阴性富集
Cyttel/Cytelligen 检测系统
• 原理:
利用CD45磁珠抗体吸附白细胞，在磁场作用 下去除白细胞，CTCs被富集沉淀
• 特点：
可检出EpCAM、CK阴性的间质型CTCs
样本处理步骤多，CTCs易丢失
阴性筛选法--Cyttel
步骤较多，CTCs容易丢失
鉴定不稳定
• 判定标准：DAPI阳性、CD45阴性，8 号染色体扩增； • 特异性不足
magn et
CTC
WBC
CellsearchTM CTCs鉴定
上皮来源的CTCs的判定：DAPI（细胞核）阳性、角蛋白CKs阳性、CD45阴性
阳性富集- CTCs-Chip
• 芯片的表层排布了78 000个包被抗 EpCAM抗体的微位点 • 血液样本流经芯片时，抗体与肿瘤细胞 结合粘附在芯片上 • 制造相对困难，成本昂贵，
※从红细胞和白细胞中富集恶性肿瘤细胞
•CTCs的鉴定：如何鉴定所获细胞为CTCs？
※将恶性肿瘤细胞与红细胞、白细胞、正常上皮细胞、造血干细胞等区分开来
循环肿瘤细胞的分析鉴定
对于分离富集的CTC可以进行基因型或者表型分 析等以计数CTC或者鉴定其分子特性 免疫表型分析： • 靶细胞丢失 PCR分析： • 高效率，高灵敏度，特异性，操作简单。 • 假阳性率较高、细胞形态学被破坏、需要更严 格的标本保存条件和实验条件 单个CTC分子信息监测（克服白细胞污染）
肿瘤循环细胞的特性
稀有性：每ml血液约107个白细胞中仅有1个CTC 非典型形态：比血液细胞、正常组织细胞的体积大、细胞核大，不规则，核质比高、 不容易发生形变 异质性：细胞表面抗原标志物表达差异、携带不同的分子信息、转移潜力差异 易聚集成团CTM：成瘤迁移能力是CTC的23-50倍 外周血细胞的遮蔽阻碍了它们的分离与分子鉴定，因此ＣＴＣ的检测是制约其临床应 用的关键
• 显微位点周围的血流通畅性限制了与抗
体覆盖位点接触的CTC数量
阳性富集- Adna Test 检测系统
原理： • 联合上皮细胞标志及肿瘤特异性标志通过免疫磁珠分选特异性肿瘤的CTCs • 联合抗MUC1和EpCAM抗体检测乳腺癌和直肠癌 • 通过RT-PCR扩增肿瘤标志物来鉴定CTCs • 特点： • 较单一使用EpCAM抗体更特异 • 不适用于EpCAM和CK阴性或弱化的CTCs • PCR鉴定敏感性高，但易造成假阳性
根据治疗前后CTC个数判 断预后及存活时间
肿瘤复发检测
CTC数目增多是肿瘤复发的前 兆
化疗药物的疗效评判
根据化疗前后CTC数目变 化，确定药物是否有效
肿瘤新药物的开发
配合研制新的抗肿瘤药物
循环肿瘤细胞的检测
如何检测CTCs？
由于外周血中CTC非常稀少，通常CTC检测会首先利用细胞的物理性质或生 物特性等对CTC加以分离富集。 •CTCs的富集：如何获取Cs可以是间质型、上皮型、上皮间质混合型、成团的CTCs(CTM)
CTCs检测的临床可行性
临床意义
体外早期诊断
肿瘤在1mm时，血液中可 检测出CTC
健康状态 癌前病变 恶性肿瘤 肿瘤转移
CTC检测
耐药性检测
动态跟踪CTC数目，判断是否 产生耐药性 CTC 监测分析
预后判断
阳性富集-CellsearchTM
使用抗EpCAM抗体抗体包被磁微粒，使其与肿瘤细胞结合，在特定磁 场作用下达到分离CTC的目的。
Anti-EpCAM Coated ferrofluids
magnet
7.5ml
Automated fluorescence detection system
Anti-CK (epithelial cells) Anti-CD45 (WBCs) DAPI (viable cells )
阳性富集
CellsearchTM系统 CTC芯片（CTC-chip） MACS®Cell Separation 磁性细胞分选系统
原理：
采用抗EpCAM（CD326）结合免疫磁珠捕获EpCAM阳性CTCs
特点：
捕获的CTCs纯度较高 能够捕获到血液中上皮型、上皮间质混合型的CTCs 无法捕获到间质型CTCs（EpCAM阴性）
过滤法(根据细胞大小) 密度梯度离心 （根据细胞密度）
ISET膜过滤 OncoQuick分离体系
免疫捕获法——磁珠分选
原理：
将特异性抗原包被在已有同源二抗的磁珠上制成免疫磁珠再与靶细 胞上抗抗原结合成“靶细胞—抗原抗体—磁珠”复合物，在磁场
作用下向一定方向移动，从而富集靶细胞.
分选策略 • 阳性富集：使用表面耦联抗目的细胞抗体的磁珠，细胞与磁珠结 合后直接在磁场中被分离出来。 • 负性筛选：通过去除无关细胞使目的细胞得以纯化