酶免疫技术
效应，大大的提高了ELISA的敏感度。此方法
常用于检测微量抗原或抗体。
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生物素标 亲和素 记的酶 生物素标 记的抗体
A B C | E L I S A
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（二）酶联免疫电转移印斑法
免疫印迹法(Western blotting) 免疫印迹法可对非放射性标记蛋白组成的复 杂混合物中的某些特定蛋白进行鉴别和定量，该 法将凝胶电泳与固相免疫结合，把电泳分区的蛋 白质转移至固相载体，再用酶免疫、放射免疫和 化学发光等技术测定。 免疫印迹法与 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳结合， 广泛应用于临床和基础研究中检测基因产物的多 态性抗原表达，艾滋病血清中抗体或抗原的表达 及风湿性疾病中类风湿性因子和抗体等。 32
OD405 OD280
= 0.3-0.7
0.5左右即1分子I gG结合 上1-2个酶蛋白
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二、最适工作浓度的选择 在建立某一ELISA检测中，应对包被抗原 或抗体的浓度和酶标抗体或抗原的浓度予以选 择，以达到最合适工作的测定条件和测定费用 的节省。 （一）直接法测酶标抗体 （二）间接法测抗体 （三）夹心法测抗原
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96 孔 酶 标 板
A B C D E F G H
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10 11 12
可拆卸酶标条
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（一）双抗体夹心法 双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法。
1. 将特异性抗体与固相载体联结，形成固相抗 体，然后洗涤。
2. 加受检标本使之与固相抗体接触反应一段时 间，形成固相抗原抗体复合物，然后洗涤。 3. 加酶标抗体，然后洗涤。 4. 加底物显色，根据颜色的深浅程度对该抗原 定性或定量。
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第三节 固相酶免疫测定的原理和类型
一、基本原理 酶联免疫吸附测定（ ELISA ）方法的基 本原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相 载体表面，并保持其免疫活性；②使抗原或 抗体与某种酶联接成酶标抗原或抗体，这种
酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留
酶的活性。
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在酶标检测中，按不同的步骤把受检标
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间 接 法
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（三）竞争法 竞争法可用于测定抗原，也可用于测 定抗体。以测定抗原为例，受检抗原和酶 标抗原竞争与固相抗体结合，因此结合于 固相的酶标抗原量与受检抗原的量呈反比 。
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操作步骤： • 将特异性抗体与固相载体联结，形成固相抗 体，然后洗涤。 • 待测管中加受检标本与一定量酶标抗原的混 合溶液，与固相抗体反应，然后洗涤。在参 考管中只加酶标抗原。 • 加底物显色，参考管中由于结合的酶标抗原 量最多，颜色最深。参考管颜色深度与待测 管颜色之差，代表受检标本中抗原的量。待 测管越淡，表示标本中抗原量越多。
因子或分泌特异性抗体，加入酶标抗体后即 可通过与底物呈显色反应，根据显色的深浅 测定出抗体量，也可在显微镜下观察抗体形 成细胞或用酶联免疫斑点仪进行分析。
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B
B
E L I S P O T
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谢 谢
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6
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（二）抗原和抗体 在ELISA实验中要求所用的抗原纯度高、 抗体效价高，结合力强。 （三）免疫吸附剂 固相的抗原或抗体称为免疫吸附剂。将 抗原或抗体固化的过程称为包被。在包被后再 用 1~5% 牛血清白蛋白包被一次，可以消除非 特异性吸附干扰，这一过程称为封闭。
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（四）酶和底物 ELISA中所用的酶要求纯度高，催化反应的转 化率高，专一性强，制备成的酶标抗体或抗原性质 稳定，继续保留着它的活性部分和催化底物的力。 最常用的酶为辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶。
酶免疫测定具有高度的特异性和敏感性， 几乎所有的可溶性抗原抗体系统均可用以检测 。它的最小测量达ng甚至pg水平。
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（一）ABC- ELISA 亲和素 - 生物素系统在 ELISA 检测中被广 泛应用。一个分子的亲和素能与 4个分子的生 物素结合，用生物素分别接上抗体和酶，通
过亲和素的桥梁作用，将抗体-生物素-亲和素
本和酶标抗原或酶标抗体与固相载体表面的
抗原或抗体反应。用洗涤的方法使固相载体 上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开， 加入酶反应的底物后，底物被催化变为有色 产物，根据颜色反应的深浅进行定性或定量
分析。
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二、方法类型和操作步骤 固相酶免疫测定可用于测定抗原，也可用 于测定抗体，可以定量，也可以定性。 三个必要的试剂： ①固相抗原或抗体 ②酶标记的抗体或抗原 ③酶反应的底物 主要器材：
2
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第一节
酶免疫技术的分类
酶免疫技术 ──是以酶标记的抗体或抗原作为 主要试剂的免疫检测方法，是标记免疫技术中最 常用的一种检测方法。 酶免疫技术可分为酶免疫组织化学技术和酶 免疫测定两大类。酶免疫组织化学技术应用酶标 记的抗体与组织切片上相应抗原起反应，然后与 酶底物作用，形成有色沉淀物，可以在普通光学 显微镜下观察。如酶作用的产物电子密度发生一 定的改变，则可用电子显微镜观察，称为酶免疫 电镜技术。
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酶免疫测定根据抗原抗体反应后是否要分离 结合的与游离的酶标记物而分为均相和非均相两 种类型。 Ab*+Ag → Ab*Ag +Ab* Ab*Ag 为结合的标记物， Ab* 为游离的酶标 记物。在抗原抗体反应后，把 Ab*Ag 与 Ab* 分离 ，然后测定 Ab*Ag 或 Ab* 中的标记物的量，从而 推算出标本中的Ag量，这种方法称为非均相法。
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2.过碘酸盐氧化法
本法只用辣根过氧化物 酶的交联。用过碘酸盐将其 分子表面的多糖氧化为醛基。 用硼氢化钠中和多余的过碘 酸。使酶上的醛基与蛋白质 （抗体）结合。 E-OH + NaIO4
E-CHO + NH2-IgG E-CH=N-IgG + NaHB4 E-CH2NH-IgG
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标记率：
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双 抗 夹 心 法 示 意 图
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（二）间接法 间接法是检测抗体最常用的方法，其原理为 利用酶标记的抗抗体检测已与固相抗原结合的受 检抗体。 1. 将特异性抗原与固相载体联结，形成固相抗原， 然后洗涤。 2. 加稀释的受检血清，形成固相抗原抗体复合物， 然后洗涤。 3. 加酶标抗体（酶标抗抗体），然后洗涤。 4. 加底物显色，颜色的深浅程度表示受检抗体量。 本法只要更换不同的固相抗原，可以用一种 酶标抗抗体检测各种与抗原相应的抗体。
MY
免疫标记技术优势?
由于免疫标记技术有较高的敏感性，很多过去 传统血清学方法测不出的情况都有可用这些方法进 行；由于能定位，因此对一些疾病的发病机制提供 了有力的证据，如可在细胞和亚细胞水平上观察和 鉴定抗原（或受体），抗体或抗原抗体复合物。 免疫标记技术优点：特异性强、敏感度高、检 测速度快、能定性和定量甚至定位、且易于观察。 荧光抗体技术、放射免疫测定法和酶免疫测定 法，通常被称为三大标记技术。
E-NH2 + HC-(CH3)-CH O
E-N=CH-(CH3)-CH + NH2-P
E-N=CH(CH2)3CH=N-P
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一步法 优点：操作简单、重复性好。
缺点：标记效率低（6%），酶与酶、抗体 与抗体间也有交联。
二步法 优点：标记效率高，是一步法2-8倍，无酶 与酶、抗体与抗体间的交联。 缺点：操作较复杂，抗体与酶易变性，透 析时抗体易沉淀析出。
不需进行 Ab*Ag 与 Ab* 分离，可以直接测定 游离的Ab*量，从而推算出标本中的 Ag量，这种 方法称为均相法。
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酶免疫技术分类
酶免疫技术
酶免疫测定 酶免疫组织化学技术
非均相酶免疫测定
均相酶免疫测定
固相酶免疫测定
液相酶免疫测定
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第二节
固相酶免疫测定的技术要点
固相酶联免疫测定的技术要点包括三个方面： 即试剂的制备、反应条件的选择和操作的标准化。 一、试剂的制备 ELISA的主要试剂为特异性的抗原或抗体、酶 标记的抗原或抗体和与标记酶关联的酶反应底物。 （一）固相载体 ELISA最常用的载体是聚苯乙烯，它具有较强 的吸附蛋白质的性能，抗体或蛋白质抗原吸附其后 保留原来的免疫活性。
第七章
免疫标记技术?
酶免疫标记技术
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免疫标记技术包括两个方面，一是标记物 与抗原、抗体的连接技术；二是标记后的抗原、 抗体进行特异性检测的方法。
免疫标记技术是指用放射性同位素、荧光 素、酶、胶体金、化学（或生物）发光剂等标 记物，标记抗原或抗体进行的抗原抗体反应； 并借助于荧光显微镜、同位素液闪仪、酶标仪 、化学发光仪等精密仪器测定抗原抗体复合物 中的标记物，通过标记物的放大作用，进一步 1 提高了免疫检测技术的敏感性。
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三、测定方法的标准化
（一）加样 要保证每次加样的精确性。
（二）保温 要严格控制保温时间和温度。
（三）洗涤 在ELISA实验中，洗涤虽不是一反应
步骤，但却决定着实验成败的关键。洗涤
的目的是洗去反应液中没有与固相的抗原
或抗体结合的物质以及在反应过程中非特
异性吸于固相载体的干扰物质。 （四）比色 用酶标仪读数
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在ELISA中常用的供氢体底物为邻苯二胺。
（五）结合物
用化学的方法将抗原或抗体同酶结合，制成酶 标记的抗原或抗体称为酶结合物，用于酶免疫检测 试验。最常用的标记方法主要有两种，即戌二醛交 联标记法和过碘酸盐氧化标记法。 8
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1.戌二醛交联法 戌二醛是一种常用的同型双功能交联剂，它 的两个醛基可分别与酶蛋白(E)和抗体或抗原的蛋 白(P)氨基形成Schiff碱(-N=C-)形成桥连接起来。 戌二醛交联法分为一步法和二步法。
酶免疫技术的实验报告
酶免疫技术的实验报告实验目的：本实验旨在通过酶免疫技术（Enzyme Immunoassay, EIA）来检测特定抗原或抗体的存在，了解其原理和应用，提高实验操作技能。
实验原理：酶免疫技术是一种利用酶标记的抗体或抗原进行检测的方法。
它结合了酶的催化活性和免疫反应的特异性，通过酶的催化作用放大信号，提高检测的灵敏度。
常用的酶免疫技术包括酶联免疫吸附测定（ELISA）等。
实验材料：1. 待测样本：含有目标抗原或抗体的生物样本。
2. 酶标记的抗体或抗原：用于与待测样本特异性结合。
3. 酶底物：与酶反应产生可检测的信号。
4. 标准品：用于建立标准曲线，定量分析。
5. 洗涤液：用于去除未结合的酶标记物。
6. 酶标仪：用于测定吸光度或荧光强度。
实验步骤：1. 准备实验所需的试剂和材料，包括待测样本、酶标记物、酶底物、标准品等。
2. 根据实验设计，选择合适的ELISA方法（直接ELISA、间接ELISA、夹心ELISA等）。
3. 将待测样本和标准品按照一定比例稀释，并加入到预先包被的酶标板中。
4. 孵育一定时间后，用洗涤液清洗酶标板，去除未结合的样本和酶标记物。
5. 加入酶底物，使酶催化底物产生可检测的信号。
6. 在酶标仪上测定吸光度或荧光强度，记录数据。
7. 根据标准品的吸光度或荧光强度，建立标准曲线，计算待测样本中目标抗原或抗体的浓度。
实验结果：通过实验操作，我们得到了以下结果：- 标准曲线的建立：根据标准品的吸光度或荧光强度，绘制出标准曲线，其线性关系良好。
- 待测样本的定量分析：根据标准曲线，计算出待测样本中目标抗原或抗体的浓度。
实验讨论：在本实验中，我们成功地应用了酶免疫技术来检测特定抗原或抗体的存在。
实验结果表明，酶免疫技术具有较高的灵敏度和特异性，适用于生物医学研究和临床诊断。
然而，实验过程中也存在一些局限性，如酶标记物的稳定性、非特异性结合等问题，需要进一步优化实验条件。
实验结论：通过本次实验，我们掌握了酶免疫技术的原理和操作流程，能够利用该技术进行生物样本中特定抗原或抗体的检测。
酶联免疫法国内外的技术发展
酶联免疫法国内外的技术发展酶联免疫法是一种常用的生物技术方法，被广泛应用于医学诊断、生物学研究和药物开发等领域。
本文将对酶联免疫法的国内外技术发展进行介绍和分析。
一、酶联免疫法的基本原理酶联免疫法是一种利用酶和抗体相互作用的免疫学方法。
其基本原理是将待测物与标记有酶的抗体或抗原结合，形成特异性的抗原-抗体复合物。
通过酶的催化作用，可以将待测物定量转化为颜色、荧光或发光等信号，从而实现对待测物的检测和定量。
二、国内酶联免疫法技术发展在国内，酶联免疫法的技术发展取得了长足进步。
首先是检测方法的改进。
近年来，随着技术的发展，新的检测方法不断涌现，如发展了高灵敏度的酶标仪和多光子显微镜等设备。
这些新方法的应用，提高了检测的灵敏度和准确性。
其次是标记物的改进。
传统的酶联免疫法常用酶标记物是辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP），而近年来，越来越多的新型标记物被引入，如金纳米颗粒、荧光染料和荧光蛋白等。
这些新型标记物不仅具有更好的稳定性和灵敏度，还可以实现多重检测。
此外，还有一些新颖的酶联免疫法技术被开发出来，如电化学酶联免疫法和微流控酶联免疫法等。
三、国外酶联免疫法技术发展国外对酶联免疫法的研究和应用也非常活跃。
一方面，国外在酶联免疫法的基础上进行了许多改进，提高了其灵敏度和准确性。
例如，引入了放射性同位素标记物，使得检测的灵敏度大幅提高。
另一方面，国外还开发了一些新的酶联免疫法技术，如酶放大技术和磁性颗粒酶联免疫法。
这些新技术不仅可以提高检测的灵敏度和速度，还可以实现高通量和自动化。
四、酶联免疫法的应用领域酶联免疫法在医学诊断、生物学研究和药物开发等领域有着广泛的应用。
在医学诊断中，酶联免疫法可以用于检测各种疾病标志物，如肿瘤标志物、感染性病原体和自身免疫性疾病相关的抗体等。
在生物学研究中，酶联免疫法可以用于研究蛋白质相互作用、细胞信号传导和基因表达调控等。
在药物开发中，酶联免疫法可以用于筛选药物靶点和评估药物的效力。
酶免疫的原理和分类
酶免疫的原理和分类酶免疫是利用特定酶底物反应来检测和测定抗原或抗体的一种免疫学技术。
酶免疫的原理主要是利用酶与抗原或抗体之间的特异性结合反应，使底物或抑制剂的酶催化发生变色反应，从而间接或直接测定抗原或抗体的存在或浓度。
酶免疫可根据底物的酶或抗酶分为酶标记的抗体法（ELISA、RIA等）和酶抗酶法（Western blot，抗全球等）。
酶免疫的原理是基于抗原与抗体之间的特异性结合，这种结合是通过亲和力和特异性的相互作用而实现的。
酶免疫的关键步骤是通过标记技术将抗体或抗原与酶结合在一起，形成酶-抗原或酶-抗体复合物。
因为酶是一种高度选择性的催化剂，它能够催化特定底物的变色反应。
当抗原或抗体与酶结合后，加入相应的底物后，酶能够催化底物的反应，产生变色信号。
根据底物的类型和酶的选择，酶免疫可实现颜色、荧光或化学发光等不同的检测方式。
酶免疫的分类主要根据底物的酶或抗酶进行划分，包括酶标记的抗体法和酶抗酶法。
酶标记的抗体法是最常用的酶免疫方法之一。
在酶标记的抗体法中，将抗体与酶（如辣根过氧化物酶、辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶等）结合，并通过标记剂或结合剂将酶连接到抗体上。
此时，抗体已经被标记上了可以催化底物变色的酶。
当抗原与标记了酶的抗体发生特异性结合后，加入合适的底物，通过酶的催化作用，底物发生特定的变色反应。
颜色的产生与底物的催化反应程度与抗原的含量和浓度成正比，可以通过测量颜色强度来确定抗原的存在和浓度。
酶抗酶法是另一种常用的酶免疫方法。
在酶抗酶法中，首先用特异性抗原进行特定蛋白的检测与酶结合，并通过标记剂或结合剂将酶连接到抗体上形成酶-抗体复合物，形成抗原-酶-抗体复合物。
然后，在将待测物（可能是蛋白或核酸）进行电泳分离或免疫滴定后，用含有特异性酶的抗体与特定蛋白进行特异性结合，结合的酶-抗体复合物与抗原-酶-抗体复合物进一步形成“夹夹”式化合物，通过添加特定底物，酶催化底物的变色反应来检测待测物的存在或浓度。
简述酶免疫技术的原理
简述酶免疫技术的原理
酶免疫技术是一种利用酶作为信号标记物来检测特定分子的技术。
其原理基于酶与底物之间的特异性反应和酶催化反应的高度灵敏性。
酶免疫技术的主要步骤如下：
1. 抗原与抗体结合：在实验中，首先将待检测的抗原与已知与之特异结合的抗体进行反应，形成抗原-抗体复合物。
这里的抗体通常是经过特定方式制备的单克隆或多克隆抗体。
2. 添加酶标记二抗：接下来，将与抗体特异结合的酶标记二级抗体加入反应体系中，并与抗原-抗体复合物作用。
酶标记二抗是一种具有亲和力的抗体，其可与特异抗体发生结合反应。
酶标记二抗上结合有特定的酶，常用的有辣根过氧化酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）。
3. 底物添加和酶反应：在酶标记二抗与抗原-抗体复合物反应完毕后，加入与酶标记物对应的底物，并提供适宜的反应条件。
酶标记物与底物之间发生特异性反应，产生显色、发光或荧光等信号。
4. 信号检测与分析：通过合适的检测方法，例如比色法、放射免疫法、荧光免疫法等，对产生的信号进行测量和分析。
通过测定信号的强度，可以判断待测物质的含量或存在与否。
酶免疫技术的原理基于酶的高催化活性、底物特异性反应以及抗原与抗体的特异结合。
借助于酶与底物之间的反应，可以将待测抗原的信号放大，提高检测
的敏感性和可靠性。
酶免疫技术在分子诊断、生物学研究和生物制药等领域广泛应用。
酶联免疫的原理及应用
酶联免疫的原理及应用引言酶联免疫（Enzyme-linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种常用的实验室技术，广泛应用于医学诊断、生物制药和基础研究等领域。
它通过利用抗体和酶的结合，实现对特定分子的定量或定性检测。
本文将介绍酶联免疫的原理和应用，并阐述其在医学和科研中的重要性。
酶联免疫的原理酶联免疫的原理基于抗体与抗原的特异性结合以及酶的催化作用。
一般而言，酶联免疫包括两个主要步骤：抗原与抗体的结合和酶的检测。
下面将具体介绍这两个步骤。
抗原与抗体的结合酶联免疫的第一步是将待检测的抗原与特异性的抗体结合。
该抗体一般由动物免疫生成，并与待检测的抗原发生特异性结合作用。
这种结合可以通过多种手段实现，例如直接结合、间接结合和竞争性结合等。
结合后的抗原-抗体复合物将固定在试验物质表面，为下一步的酶检测提供基础。
酶的检测酶联免疫的第二步是利用酶的催化作用对固定在试验物质表面的抗原-抗体复合物进行检测。
常用的酶包括辣根过氧化物酶（Horseradish Peroxidase，HRP）和碱性磷酸酶（Alkaline Phosphatase，AP）等。
这些酶能够催化底物的反应，产生可检测的颜色或荧光信号。
具体而言，酶联免疫将待测物固定在微孔板上，并加入与待测物发生特异性结合的抗体。
然后，加入酶标记的第二抗体，该抗体能够与被检测物的抗体结合。
最后，加入适当的底物，使酶催化产生可测量的信号。
通过测量信号的强度，可以间接地推断待测物的浓度或存在与否。
酶联免疫的应用医学诊断酶联免疫在医学诊断中广泛应用。
它能够用于检测疾病标志物，如肿瘤标志物、免疫球蛋白和生化指标等。
临床医生可以通过酶联免疫的结果判断疾病的存在和严重程度，并据此进行诊断和治疗决策。
例如，酶联免疫已经被应用于乳腺癌、前列腺癌和艾滋病等疾病的诊断。
生物制药酶联免疫在生物制药中也有重要的应用。
它可以用于检测和定量生物药物，例如蛋白质药物和抗体药物等。
酶免疫技术思维导图
捕获法
用于血清中IgM类抗病原体抗体，测定特异性抗体亚型，类风湿因子
原理：先用抗人IgM（抗人μ链抗体）包被固相载体，以捕获标本中所有IgM，洗涤去除未结合物，加入已知抗原与相对应 的待测IgM结合形成免疫复合物，再加入针对已知抗原的酶标抗体，形成抗人IgM抗体-IgM-抗原-酶标抗体复合物
自动化酶联免疫分析系统
多任务，多通道，平行过程处理
用于小分子抗原或半抗原的测定，属于竞争性结合分析模式
酶放大免疫测定（EMIT）
原理：半抗原与酶结合形成酶标半抗原，保留半抗原与酶的生物活性，当酶标半抗原与抗体结合后，半抗原分子上的酶蛋白与 抗体密切接触，导致酶的活性受到抑制
均相酶免疫测定
克隆酶供体免疫测定
待测标本中半抗原浓度低，与抗体结合的酶标半抗原的比例就高，游离酶标半抗原少，反应显色就越浅，即显色的深浅与样本中待测半抗原的浓度呈正相关。
同一张膜条可以检测多种抗体，检测自身抗体谱
斑点酶免疫吸附实验（dot-ELISA）
实质上是双抗体夹心法
用于单个B细胞分泌抗体的功能检测，从单细胞水平检测细胞分泌的细胞因子或抗体 包被单克隆抗体，成正比
酶联免疫斑点实验
每一个斑点代表一个分泌细胞因子的细胞，PPD（结核菌素）、CEF（T细胞表位肽）
应用于抗原组分及免疫活性测定，艾滋病感染确诊
双抗原夹心法
原理
方法类型与原理
间接法
测抗体，也可以测抗原（少见）
通用性强，但易出现假阳性，时间长，针对免疫球蛋白分子同种型抗原表位，一种酶标二抗检测同一种属中各种与抗 原相对应的抗体，非竞争性结合试验。
原理：先将定量的特异性抗体包被在固相载体表面，待测抗原与定量的酶标抗原竞争性结合固相抗体，结合于固相 的酶标抗原量与待测抗原浓度呈负相关
第八章酶免疫技术
酶放大免疫分析技术 示意图
克隆酶供体免疫分析示意图
克隆β-D半乳糖苷酶的两种片段： 酶受体（EA）和酶供体（ED）
二、异相酶免疫测定
与均相不同 之处
需分离游离与结合的酶标记物
分类：液相酶免疫测定 固相酶免疫测定
Ag+Ab-E
AgAb-E+Ab-E
物、激素等）
1、已知抗体包 被于载体表面
1、已知抗体包 被于载体表面
+
竞争法测抗原
-
E
E
E
3、加酶作用 的底物不显色 或显色弱
E
E
E
2、加待检物 抗原与酶标抗 原竞争与抗体 结合
2、加待测物 和酶标抗原， 酶标抗原与抗 体结合
E
E
3、加酶作用 的底物显色
ELISA检测抗体的方法
间接法
方法
用已知抗原包被，加入待测血清，再加酶标的抗人IgG（抗 抗体或二抗）加底物显色。
底物显色
1、固相化抗人 IgM 2、加待测物 特异性IgM与 非特异性IgM 和抗人IgM结合
1、固相化抗人 IgM
2、加待测物 只有非特异性IgM 和抗人IgM结合
3、加特异性 抗原，与特异 性抗体结合
E E E
3、加特异性抗 原，不能与非 特异性IgM结合
+
E
E
4、加酶标抗体 与特异性抗原结 合，加底物显色
原理
酶标记物与相应的抗原或抗体结合后， 标记酶的活性会发生改变，不用分离结合 和游离酶标记物，通过测定标记酶的活性 的改变，而确定抗原或抗体的含量。
均相酶免疫测定
最具代表性的两种技术
酶免疫组化技术的原理
酶免疫组化技术的原理
酶免疫组化技术是一种常用的分子生物学实验技术，用于检测和定位特定的蛋白质分子在组织或细胞中的分布情况。
其原理主要包括以下几个步骤：
1. 抗原-抗体反应：将待检测的组织切片或细胞固定在载玻片上，并用抗原与其结合。
抗原可以是特定蛋白质、多肽或小分子化合物。
然后，在组织或细胞中加入适当浓度的抗体，与特定的抗原结合形成抗原-抗体复合物。
2. 二抗结合：在抗原-抗体复合物形成后，加入与抗体来源物种不同的第二抗体，称为二抗。
二抗通常是兔抗小鼠或小鼠抗兔等，可以与抗原-抗体复合物中的抗体结合形成二抗-一抗-抗原三者的复合物。
3. 酶标记：二抗中一般会标记某种酶，例如辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AP）。
这些酶可以与特定底物发生反应，产生可见的颜色变化或荧光信号。
4. 底物反应：将特定酶标记的二抗加入待检测的组织或细胞中，并加入适当的底物。
酶与底物反应后，会产生染色或荧光信号。
这些信号可以在显微镜下直接观察或在酶标仪等设备中测量。
信号的强度可用来反映待检测的蛋白质分子在组织或细胞中的含量或分布情况。
通过以上步骤，酶免疫组化技术可以对待检测的蛋白质分子进行高灵敏度的定位和定量分析，广泛应用于生命科学研究和临床诊断中。
酶免疫技术名词解释
酶免疫技术名词解释酶免疫技术是一种广泛应用于生命科学、生物技术和医学领域的技术。
它是利用酶作为探针，实现分子分析和检测的一种方法。
酶免疫技术拥有许多独特的优点，如高度灵敏、特异性强、操作简便等，因此被广泛应用于临床诊断、生物医学研究、环境监测和食品安全等领域。
下面是一些关于酶免疫技术相关的名词解释。
1. 酶标记：酶标记是指在酶免疫技术实验中，通过对探针分子进行修饰，使其与酶结合并形成稳定的复合物。
这种复合物可以作为信号源，在检测过程中被检测出来。
2. 性能参数：在酶免疫技术实验中，用来评估探针的性能的参数。
包括特异性，敏感性，可重复性等。
这些参数决定了实验的可靠性和准确性。
3. 单抗：单克隆抗体（Monoclonal Antibody，mAb）是一种特殊的抗体，可与目标分子的特定区域（表位）结合。
在酶免疫技术实验中，单抗被广泛应用于酶标记和检测分析。
4. 酶免疫法（ELISA）：酶免疫法是一种利用酶做为标记物，通过对抗体与抗原之间的特异性结合来检测抗原或抗体的方法。
这种方法广泛应用于多种疾病的诊断和治疗。
5. 酶反应体积：在酶免疫技术实验中，所需的反应体积越小，检测灵敏度越高。
然而，不同反应最优的体积需要通过实验来确定。
6. 活化酶底物：活化酶底物是一种反应物，被酶催化后可以产生可检测的信号，如荧光、发光、吸收光谱等。
在酶免疫技术实验中，活化酶底物被广泛应用于酶标记和检测分析。
7. 酶聚合素链反应（EPCR）：酶聚合素链反应是一种利用DNA聚合酶复制DNA分子的技术。
在酶免疫技术中，EPCR被广泛应用于检测遗传学分析。
8. 分子探针：分子探针是一种有机分子，在酶免疫技术中用于特定分子的检测。
它们可以与互补的DNA或RNA 配对，并用作免疫试剂或标记物。
分子探针在分子诊断学中起着至关重要的作用。
9. 酶抑制剂：酶抑制剂是一种分子化合物，可以抑制酶的活性。
在酶免疫技术中，酶抑制剂被广泛应用于检测分析中，以增加检测灵敏度和准确性。
免疫学检验中的酶免疫技术
免疫学检验中的酶免疫技术20世纪中期，以放射免疫技术为代表的标记免疫技术相继问世，它将某种可微量或超微量测定的物质（如放射性核素、荧光素、酶、化学发光剂等）标记于抗原（抗体）上制成标记物，加入到抗原抗体的反应体系中与相应的抗体（抗原）反应，以检测标记物的有无及含量间接反映被测物的存在与多少。
这些将标记技术与抗原抗体反应结合起来的免疫学检测技术以其敏感性高、准确性好、操作简便、易于商品化和自动化等特点逐渐替代了凝集、沉淀等经典的免疫学检验技术，不仅用于抗原、抗体、补体、免疫细胞、细胞因子等免疫相关物质的检测，也用于酶、微量元素、激素、微量蛋白等体液中各种微量物质的检查，可以说一切具有抗原性或半抗原性的物质原则上均可利用现代免疫检验技术进行检测，使免疫学检验渗透到医学的各个领域。
目前，免疫学检验中的标记技术主要包括酶免疫技术、荧光免疫技术、放射免疫技术、金免疫技术、化学发光免疫技术等。
其中酶免疫技术是以酶标记的抗体（抗原）作为主要试剂，将抗原抗体反应的特异性和酶催化底物反应的高效性和专一性结合起来的一种免疫检测技术。
作为经典的三大标记技术之一，酶免疫技术在检验医学中得到广泛应用并不断得到更新。
一、常用的酶及显色底物在酶免疫技术中用于标记的酶应具有催化活性高、催化专一性强；与抗原抗体偶联后不影响抗原抗体的免疫反应性和酶活性；催化的底物易于配制、保存且催化底物产生的信号产物易于观察和检测；对人无害且价廉、易得等特点，目前常用的酶及底物见表1。
表1 常用酶及底二、标记物的制备在酶免疫技术中制备标记物的抗原应纯度高、抗原性完整；制备标记物的抗体应特异性好、效价高、亲和力强、比活性高、能批量生产和易于分离纯化。
制备酶标记物的方法应符合简单、产量高；避免酶、抗体（抗原）、酶标记物各自形成聚合物；标记反应不影响酶的活性和抗原抗体的免疫反应性等原则。
标记物制备的方法基本属于两类：（一）交联法交联法是以一可同时与酶和抗体（抗原）结合的交联剂作为“桥”，分别连接酶与抗体（抗原）的方法，此类方法中目前最常用的是戊二醛交联法，形成的结合物为：酶-戊二醛-抗体（抗原）（二）直接法直接法是用一活化剂首先将酶活化，被活化的酶分子上的基团直接可与抗体（抗原）结合形成标记物，如过碘酸钠法。