9酶免疫技术
简述酶免疫技术的原理

简述酶免疫技术的原理
酶免疫技术是一种利用酶作为信号标记物来检测特定分子的技术。
其原理基于酶与底物之间的特异性反应和酶催化反应的高度灵敏性。
酶免疫技术的主要步骤如下:
1. 抗原与抗体结合:在实验中,首先将待检测的抗原与已知与之特异结合的抗体进行反应,形成抗原-抗体复合物。
这里的抗体通常是经过特定方式制备的单克隆或多克隆抗体。
2. 添加酶标记二抗:接下来,将与抗体特异结合的酶标记二级抗体加入反应体系中,并与抗原-抗体复合物作用。
酶标记二抗是一种具有亲和力的抗体,其可与特异抗体发生结合反应。
酶标记二抗上结合有特定的酶,常用的有辣根过氧化酶(HRP)和碱性磷酸酶(AP)。
3. 底物添加和酶反应:在酶标记二抗与抗原-抗体复合物反应完毕后,加入与酶标记物对应的底物,并提供适宜的反应条件。
酶标记物与底物之间发生特异性反应,产生显色、发光或荧光等信号。
4. 信号检测与分析:通过合适的检测方法,例如比色法、放射免疫法、荧光免疫法等,对产生的信号进行测量和分析。
通过测定信号的强度,可以判断待测物质的含量或存在与否。
酶免疫技术的原理基于酶的高催化活性、底物特异性反应以及抗原与抗体的特异结合。
借助于酶与底物之间的反应,可以将待测抗原的信号放大,提高检测
的敏感性和可靠性。
酶免疫技术在分子诊断、生物学研究和生物制药等领域广泛应用。
酶免疫技术原理

酶免疫技术原理酶免疫技术是一种常用的实验技术,其原理是将酶标记的抗体与待检测物相互作用,通过检测酶标记的反应产物来间接检测待检测物的存在或浓度。
酶免疫技术可以用于检测抗体、蛋白质、核酸等生物分子,也可以用于定量或半定量分析。
酶免疫技术的步骤通常包括以下几个步骤:1.抗原或抗体的加样和固定将待检测物加入到试剂盒中的孔洞中,然后使其在盒子表面固定。
2.疫苗抗体的反应将已知的疫苗抗体加入到试剂盒孔洞中,使其与待检测物结合。
3.标记酶的加入将用于标记酶的物质加入到试剂盒孔洞中,使其可以与疫苗抗体结合。
4.洗涤用冷凝水或其他方式,将未结合的物质从孔洞中提取出来,以保证准确性。
5.色素反应加入染料或颜料,使得待检测物和标记酶协同反应,产生色素反应。
6.结果的读取和分析根据产生的颜色和染料的浓度,来分析待检测物的浓度和质量。
酶免疫技术通常有两种形式:1.间接ELISA间接ELISA是酶免疫技术中最常用的一种方法。
它利用酶标记的二抗与待检测物的一抗结合,通过检测酶标记反应产物来间接检测待检测物的存在或浓度。
间接ELISA具有灵敏度高、特异性好、反应快、操作简便等特点。
2.竞争ELISA竞争ELISA是利用酶标记的抗体与水相抗原或待测物相竞争结合的一种方法。
当待测物或水相抗原与标记抗体竞争时,标记抗体附着在固定物上的数量姗姗而后,细胞内的信号会变弱或消失。
通过测定标记抗体的数量,可以计算出被测物质的含量。
酶免疫技术是一种有效的生物分析技术,其通过简单的实验流程和基于酶反应的原理,可以快速准确地检测分析生物分子的存在和浓度。
酶免疫技术在生物医学、环境科学、食品质量检测等领域有广泛的应用。
1.免疫学研究酶免疫技术在免疫学研究中有着重要的作用。
利用酶免疫技术,可以检测和定量各种免疫球蛋白、细胞因子和细胞表面标志物,研究它们在疾病状态和治疗方案中的作用。
2.临床诊断酶免疫技术在临床诊断中也有很重要的应用。
可以用于检测肿瘤标志物、气道标志物和血液蛋白等,帮助诊断癌症、哮喘和重症肌无力等疾病。
第三版免疫学检验技术第9-13章中级试题及答案

第九章酶免疫技术一、A11、下图所示的为哪一种ELISA技术的反应原理示意图()。
A、双抗原夹心法B、双位点一步法C、间接法测抗体D、竞争法E、捕获法2、钩状效应是指用ELISA一步法测定标本中待测抗原时,抗原浓度过(),实测值偏()的现象,极易造成假阴性A、低,高B、高,高C、高,低D、低,低E、高,不变3、ELISA试验中最常用的标记酶是()。
A、ASTB、HRPC、ACPD、LDHE、ALT4、酶增强免疫测定技术是最早取得实际应用的()。
A、均相酶免疫测定B、异相酶免疫测定C、固相酶免疫测定D、液相酶免疫测定E、固相-液相酶免疫测定5、利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体的方法,通常称为()。
A、双抗体夹心法B、双位点一步法C、间接法D、竞争法E、捕获法6、ELISA中最常用的固相载体是()。
A、聚氯乙烯B、聚苯乙烯C、三聚氧胺D、琼脂糖E、尼龙膜7、均相酶免疫测定不具有的特点是()。
A、常用于半抗原和小分子的检测B、操作简便,易于自动化C、不易受样品中的内源性酶的干扰D、酶与抗原结合后仍保留酶和抗原的活性E、灵敏度不及异相酶免测定8、酶增强免疫测定技术(EMIT)是一种()。
A、非均相酶免疫测定技术B、均相酶免疫测定技术C、酶免疫组织化学技术D、酶免疫测定与电泳相结合的技术E、电泳技术9、ELISA板包被后,最常用的封闭物质是()。
A、人白蛋白B、人球蛋白C、牛血清白蛋白D、牛血清球蛋白E、鼠白蛋白10、可用免疫渗滤试验和免疫层析试验检测的项目没有()。
A、抗HCV B、HIV C、HCG D、HBsAg E、HAV11、制备抗体酶结合物的方法通常采用()。
A、戊二醛交联法B、糖原染色法C、免疫印迹法D、酶耦联测定法E、捕获竞争法12、下列不属于ELISA测定方法中所必需的试剂()。
A、固相的抗原或抗体B、酶标记的抗原或抗体C、酶作用的底物D、戊二醛交联剂E、稀释的血清13、斑点免疫层析试验最常用的载体材料是()。
酶免检测技术原理及影响

2、反应环境条件: 电解质 酸8·碱5度g/LNaCl溶液
酸碱度 pH6--9为宜
温 度 温最适度温度为37℃
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二、酶免疫技术的分类、特点及原理
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1、酶免技术的分类
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酶 免 疫 技 术
酶免疫组化 组织切片或其它标本中抗原的定位
均相 1、酶放大免疫测定技术EMIT 2、克隆酶供体免疫分析CEDIA 小分子激素、半抗原测定
2加样量不一致3孵育时间不一致4洗涤条件不同5操作人员不同阳性对照不显1把终止液误当作酶结合物或底物使用严格按试剂说明书操作加液时看准标签正确稀释洗涤液不要漏加试剂2漏加试剂如酶结合物底物a3蒸馏水被污染或盛洗涤液桶被污染留有使酶失活的物质换用合格水盛蒸馏水的瓶子要洁净现象可能原因解决方法1底物失效或被污染更换底物2加好底物后在保温时受强光或紫外线照射显色时避光保温3反应时间过长准确定时4水浴箱温度过高调准水浴箱温度5加酶量过多50ul误当100ul
.灰区是客观存在的,没 有不存在灰区 的试剂, 我们只是尽量减少灰区的 出现比例。 .减少灰区最有效的方法 就是尽量将板洗涤干净。
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五、ELISA法检测常见问题及解决方法
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ELISA实验常见问题及解决方法
内源性标本因素 :
p 类风湿因子:一般为IgM型,可与变性IgG Fc段非特异结合,因此可能与包
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现象
可能原因
解决方法
1、试剂盒未平衡至室温 2、水浴箱温度不到37℃
实验前试剂盒置于室温平衡30分钟 以上
调整水浴箱温度至37℃ 孵育期间不宜多开门
3、孵育时间不够
显 色 4、样品加样量偏少
淡 5、酶结合物加样量偏少
酶免疫测定技术

酶免疫测定技术酶免疫测定技术(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,简称ELISA)是一种常用的生物分析技术,用于检测样品中特定蛋白质或其他分子的存在和浓度。
该技术基于抗原与抗体之间的高度特异性反应,通过酶的催化作用来实现信号放大,从而实现对目标分子的灵敏检测。
一、ELISA的原理ELISA技术主要包括间接ELISA、竞争ELISA、直接ELISA和夹心ELISA等多种变种。
其中,间接ELISA是最常用的一种。
在间接ELISA中,首先将待检样品溶液加入到微孔板中,使得目标分子与固相抗体结合。
然后,通过加入与目标分子特异性结合的二抗,与固相抗体结合。
最后,加入酶标记的二抗,使其与二抗结合,形成“抗原-固相抗体-二抗-酶标记二抗”复合物。
接下来,通过加入底物,使酶催化底物发生可见的颜色反应。
最后,根据反应的颜色强度测定目标分子的浓度。
二、ELISA的应用ELISA技术具有高灵敏度、高特异性和高通量的特点,因此在医学、生命科学研究、药物开发等领域得到了广泛应用。
1. 医学诊断ELISA技术在临床医学中被广泛应用于疾病的诊断和监测。
例如,ELISA技术可以用来检测人体内的病毒、细菌或其他病原体引起的感染。
通过检测患者体液中的特定抗体或病原体抗原,可以确定疾病的存在和严重程度。
2. 生物学研究ELISA技术在生物学研究中被广泛用于分析细胞因子、激素、细胞表面受体等生物分子的表达和调控。
例如,科研人员可以利用ELISA技术来测定细胞培养液中特定蛋白质的浓度,从而研究其在细胞信号传导、细胞分化和细胞凋亡等生物过程中的作用机制。
3. 药物开发ELISA技术在药物开发过程中发挥着重要的作用。
通过ELISA技术,药物研发人员可以测定药物在体内的药物浓度和药物代谢产物的浓度。
这有助于评估药物的吸收、分布、代谢和排泄(ADME)特性,从而指导药物的优化设计和临床应用。
三、ELISA的优势和局限性ELISA技术具有以下优势:1. 高灵敏度:ELISA技术可以检测非常低浓度的目标分子,通常在纳克/毫升的水平上。
酶免疫技术名词解释

酶免疫技术名词解释酶免疫技术是一种广泛应用于生命科学、生物技术和医学领域的技术。
它是利用酶作为探针,实现分子分析和检测的一种方法。
酶免疫技术拥有许多独特的优点,如高度灵敏、特异性强、操作简便等,因此被广泛应用于临床诊断、生物医学研究、环境监测和食品安全等领域。
下面是一些关于酶免疫技术相关的名词解释。
1. 酶标记:酶标记是指在酶免疫技术实验中,通过对探针分子进行修饰,使其与酶结合并形成稳定的复合物。
这种复合物可以作为信号源,在检测过程中被检测出来。
2. 性能参数:在酶免疫技术实验中,用来评估探针的性能的参数。
包括特异性,敏感性,可重复性等。
这些参数决定了实验的可靠性和准确性。
3. 单抗:单克隆抗体(Monoclonal Antibody,mAb)是一种特殊的抗体,可与目标分子的特定区域(表位)结合。
在酶免疫技术实验中,单抗被广泛应用于酶标记和检测分析。
4. 酶免疫法(ELISA):酶免疫法是一种利用酶做为标记物,通过对抗体与抗原之间的特异性结合来检测抗原或抗体的方法。
这种方法广泛应用于多种疾病的诊断和治疗。
5. 酶反应体积:在酶免疫技术实验中,所需的反应体积越小,检测灵敏度越高。
然而,不同反应最优的体积需要通过实验来确定。
6. 活化酶底物:活化酶底物是一种反应物,被酶催化后可以产生可检测的信号,如荧光、发光、吸收光谱等。
在酶免疫技术实验中,活化酶底物被广泛应用于酶标记和检测分析。
7. 酶聚合素链反应(EPCR):酶聚合素链反应是一种利用DNA聚合酶复制DNA分子的技术。
在酶免疫技术中,EPCR被广泛应用于检测遗传学分析。
8. 分子探针:分子探针是一种有机分子,在酶免疫技术中用于特定分子的检测。
它们可以与互补的DNA或RNA 配对,并用作免疫试剂或标记物。
分子探针在分子诊断学中起着至关重要的作用。
9. 酶抑制剂:酶抑制剂是一种分子化合物,可以抑制酶的活性。
在酶免疫技术中,酶抑制剂被广泛应用于检测分析中,以增加检测灵敏度和准确性。
第9章酶免疫试验

酶和酶作用底物
常用酶
糖蛋白(主酶) 亚铁血红素(辅基) 主酶与酶活性无关 辅基是酶的活性中心
RZ值与酶活性无关, 酶活性单位比RZ值 更为重要
辣根过氧化物酶(HRP)
RZ值:403nm (辅基)
与275nm(主酶) OD ELISA中应用最为广
值之比
泛的标记用酶
酶和酶作用底物
常用酶 碱性磷酸酶(AP) 菌源性AP
包被有待测细胞因子抗体的微孔板
基
+
分泌相应细胞因子的待测细胞
本
有或无刺激物培养
原 细胞因子被板上的特异性抗体捕获
理
后续的反应如同ELISA
一个斑点代表一个细胞因子分泌细胞,斑点的颜
色深浅程度与细胞分泌的细胞因子量相关
酶联免疫斑点试验(ELISPOT)
第五节 发光酶免疫试验(LEIA)
原理:参与催化某一发光反应的酶来标记抗 体(或抗原),在抗原-抗体反应后加入发光 物,酶催化和分解底物发光,由光检测仪检 测发光强度,最后通过标准曲线计算出被测 物的含量。
4°c过夜 封闭(牛血清白蛋白或小牛血清)
间接包被
亲和素-生物素化抗体(抗原) SPA-抗体(抗原)
间接吸附于固相载体上
三、酶结合物
1.辣根过氧化物酶(HRP) 2.碱性磷酸酶 (ALP) 3.β-半乳糖苷酶 (β-Gal)
四、酶的显色底物与酶促发光底物
常用底物 四甲基联苯胺 TMB
三大经典标记技术 放 荧酶 射 光免 免 免疫 疫 疫技 技 技术 术术
掌握:酶联免疫吸附试验; 熟悉:酶和酶作用底物、固相载体、酶
免疫测定的应用; 了解:酶标记抗体或抗原、酶免疫技术
的分类;
第一节 酶免疫试验的组成要素 第二节 酶免疫试验的分类 第三节 酶联免疫吸附试验 第四节 酶联免疫斑点试验 第五节 发光酶免疫试验 第六节 酶免疫试验的临床应用及常用商品试剂的方法
酶免疫技术

酶免疫技术:加速疾病检测的显微镜
酶免疫技术是一种高灵敏度、高特异性的检测方法,被广泛应用于医疗、食品安全、环境检测等领域。
该技术基于酶和抗原或抗体的特异性结合,利用化学反应转化出光、色或荧光信号,进而检测目标物质。
酶免疫技术的优势在于其对微量物质的检测能力,这使得其在疾病早期检测、病毒感染的筛查、癌症标志物的检测等方面具有广泛的应用前景。
同时,其简单快速、操作灵活、适应性强等特点也使其成为一个备受关注的研究热点。
一般而言,酶免疫技术包括ELISA、Western blot、免疫电泳等多种形式,不同的应用场景需要选择不同的技术。
其中,ELISA技术是最常见、最常用的酶免疫技术,其原理是将检测目标物质在固相载体上捕获,然后通过酶标记的抗体进行检测。
该技术被广泛应用于疾病检测、环境污染物的检测等领域。
虽然酶免疫技术在很短的时间内已经成为了最常用的检测方法之一,但仍有一些问题需要解决。
其中,对标准样品的控制、抗体的质量保证、检测灵敏度的提高等问题需要进一步改进和完善。
总之,作为一种成熟的检测技术,酶免疫技术在医疗、环保等领域的应用前景广阔,而其不断的技术创新和改进也将进一步提高其检测灵敏度和特异性,促进医疗诊断和环保监测的发展。
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酶免疫技术(一)单项选择题(A型题)1、HRP的活性基团是A.糖蛋白B.亚铁血红素C.白蛋白D.球蛋白E.色氨酸2、表示HRP纯度(RZ)的是A.入403nm/入275nm B.入420nm/入275nm C.入403nm/入290nmD.入275nm/入403nm E.入290nm/入275nm3、HRP(用于标记)的RZ值应大于A.3.0 B.3.1 C.3.2D.3.3 E.3.44、β-Gal的常用底物是A.OPD B.TMB C.5-ASAD.ABTS E.4MUG5、下列酶-底物-颜色反应组合中,正确的是A.HRP—OPD—蓝色B.HRP—TMB—红色C.AP—P—NPP—黄色D.HRP—P—NPP—蓝色E.AP—TMB—蓝色6、AMIT测定可以测定A.大分子抗原B.小分子抗原或半抗原C.补体D.PcAb E.McAb7、应用最广泛的均相EIA是A.CEDIA B.SPEIA C.AMITD.ELISA E.IFA8、关于酶免疫技术的特噗,正确的是A.酶标记物催化抗原反应,使其结果放大,提高了检测的灵敏度B.酶活性易受理化因素的影响,酶标记物稳定性差C.底物以酶催化后的成色,使酶标主免疫反应结果得以放大D.选择高度质量的标记用酶是建立酶免疫技术最重要的前提E.酶免疫技术检测方法较为繁琐9、关于固相化抗体的制备,正确是的A.抗体包被固相载体后,再用小牛血清蛋白包被一次为了稳寄存载体对抗体的吸附B.化学偶联包被抗体,可有效提高包被抗体的结合量.均一性和牢固程度C.为提高抗体的包被量,包被液的浓度应较高D.吸附法包被抗体时,选用偏酸性的缓冲液,可提高包被抗体的稳定性E.包被抗体时,温度越高越有利于提高包被抗体的稳定性10、关于载体的选择,正确的是A.醋酸纤维膜吸附蛋白的能力强于塑料板,但对微量样品的吸附不完全B.高分子微颗粒载体含有的基团易与抗体蛋白形成化学偶联,且结合容量大C.塑料制品吸附蛋白分子的稳定性和均一性好D.固相微颗粒因体积小,不易与磁性材料组合使用E.膜载体吸附抗体蛋白一般是采用化学偶联法11、酶免疫技术和于样品中抗原或抗体的定量测定是基于A.酶标记物参与免疫反应B.固相化技术的应用,使结合和游离的酶标记物能有效地分离C.含酶标记的的免疫复合物中酶可催化底物成色,其颜色的深玫与待测物含量相关D.酶催化免疫反应,复合物中酶的活性与样品测定值呈正比E.酶催化免疫反应,复合物中酶的活性与样品测定值呈反比12、关于HRP,描述正确的是A.HRP由具酶活性的蛋白主酶和亚铁血经素辅基构成B.测定HRP的RZ值,可判断酶活性的高低C.HRP对酶催化反尖中的受氢体专一性要求不高D.酶变性后,其RZ值不变E.邻苯二氨底物液被HRP催化显蓝色,其最大吸收波长为492nm13、均相酶免疫测定的基本特征是A.以应平衡后,抗原抗体复合物中酶活性人发生变化B.酶标抗原与抗体在固相介质表面形成复合物后,作用于底物成分C.不用分离B.F即可确定待测物质的含量,表明其反应不易受内源性酶的干扰D.反应属于非竞争结合,测定的灵敏度较高E.测定方法较为复杂,且不易用于自动化检测14、司于均相酶免疫测定的方法是A.酶联免疫化学光测定B.dot-ELISA C.双抗体夹心法ELISAD.酶增强免疫测定技术E.竞争法ELISA15、反应结束时,阴性以照管的呈色最强,此情况常见于A.双抗体夹心法ELISAB.竞争法ELISA C.间接法ELISA D.捕获法ELISA E.双抗原夹心法ELISA16、免疫渗滤试验衍生于A.RIA B.dot-ELISA C.免疫层析试验D.免疫印迹试验E.免疫扩散试验17、双位点DLISA中,造成抗原测定值低于实际含量的常见原因是A.固相抗过多B.反应时间不够C.标记抗体过多D.待测物过浓E.洗涤不彻底18、间接法ELISA中,形成的免疫复合物是A.固相抗原-抗体-酶标二抗B.固相抗体-抗原-酶标抗体C.固相二抗-IgM-抗原-酶标抗体D.固相抗体-酶标抗原固相二抗-抗体-酶标抗原19、下述酶免疫组织化学技术中,敏感性最高的方法是A.直接染色法B.间接染色法C.酶桥法D.过氧化物酶-抗过氧化物酶法E.亲和素-生物素-过氧化物酶技术20、酶桥染色法中的桥抗体是指A.免疫反应系统中的特异性抗体B.显色系统中的抗酶抗体C.第二抗体(抗抗体)D.第一抗体E.第三抗体(抗酶抗体)21、酶免疫组织化学技术中,常作的酶是A.胰蛋白酶,葡萄糖氧化酶B.辣根过氧化物酶,碱性磷酸C.胃蛋白酶,蛋白酶K D.碱性磷酸酶,胃蛋白酶E.葡萄糖氧化酶,蛋白酶K22、下列属于非标记免疫技术的是A.荧光标记免疫技术B.酶标免疫技术C.放射性核素标记免疫技术D.发光免疫技术E.免疫电泳技术23、制备ABC复合物时,亲和素的浓度不能高于A.10μg/mlB.20μg/mlC.30μg/mlD.35μg/mlE.40μg/ml 24、制备ABC复合物时,HRP-B的浓度不能高于A.2μg/mlB.4μg/mlC.6μg/mlD.8μg/mlE.12μg/ml25、PAP复合物中的酶是A.胶原酶B.胃蛋白酶C.葡萄糖氧化酶D.碱性磷酸酶E.辣根过氧化物酶26、免疫组化技术的优点不包括A.高特异性B.高敏感性C.形态学的直观性D.精确定量分析E.能对抗原表达情况进行分析27、与其他标记技术相比,免疫组化技术最大的优点是A.高特异性B.高敏感性C.形态学的直观性D.重复性好E.精确度高28、ABC技术由美籍华人Hsu于哪一年建立,已广泛应用于免疫学检测技术A.1961年B.1975年C.1981年D.1985年E.1990年29、PAP技术中酶的底物为A.TMBB.DABC.PNPD.TMBSE.OPD30、免疫组化技术不包括A.酶免疫组化B.酶免疫印迹C.荧光抗体染色D.免疫金细胞染色E.免疫电镜技术31、用于标记的HRP的RZ值应大于A.2.4B.3.0C.1.5D.3.5E.5.032、RZ表示A.酶活性B.催化效率C.标记率D.酶纯度E.效价33、HRP与底物TMB反应后的测定波长为A.278nmB.450nmC.403nmD.495nmE.492nm34、HRP与底物OPD反应后的测定波长为A.278nmB.450nmC.403nmD.495nmE.492nm35、HRP与TMB反应后,加H2SO4终止反应前呈A.蓝色B.橙黄色C.棕黄色D.黄色E.紫色36、每个亲和素能结合生物素分子的数目是A.4B.2C.1D.3E.837、生物素分子中与亲和素结合的部位是A.噻吩环B.咪唑酮环C.苯环D.羧基E.—NH—38、ELISA双抗体夹心法( )A.将酶标记特异抗体用于检测抗原B.先将待测抗原包被于固相载体C.标记一种抗体可检测多种抗原D.能用于半抗原的测定E.将酶标记抗抗体用于抗原检测39、HRP(用于标记)的RZ值应大于( )A.3.0B.3.1C.3.2D.3.3E.3.440、HRP的供氢体是( )A.TMBB.H OC.小分子醇过氧化物D.尿素过氧化物E.以上都不是41、关于ELISA的底物OPD的特点哪一条不正确( )A.具有致癌性B.灵敏度高C.比色方便D.配成应用液后稳定性好E.与酶反应后显橙黄色42、关于HRP,描述正确的是( )A.HRP由具酶活性的蛋白主酶和亚铁血红素辅基构成B.测定HRP的RZ值,可判断酶活性的高低C.HRP对酶催化反应中的受氢体专一性要求不高D.酶变性后,其RZ值不变E.邻苯二氨底物液被HRP催化显蓝色,其最大吸收波长为492nm44、HRP的活性基团是( )A.糖蛋白B.白蛋白C.球蛋白D.亚铁血红素E.色氨酸45、间接法ELISA中,形成的免疫复合物是( )A.固相抗体-抗原-酶标抗体B.固相二抗-IgM-抗原-酶标抗体C.固相抗体-酶标抗原D.固相二抗-抗体-酶标抗原E.固相抗原-抗体-酶标二抗46、制作ELISA载体材料最常用的的物质是( )A.聚氯乙烯B.聚苯乙烯C.硝酸纤维素膜D.尼龙膜E.磁性微粒47、用ELISA双抗体夹心法检测血清中甲胎蛋白(AFP),应选择的固相包被物是( )A.已知AFPB.酶标记AFPC.抗AFP抗体D.酶标记抗AFP抗体E.待检血清48、ELISA中最常用的酶是( )A.葡萄糖氧化酶和辣根过氧化物酶B.β-半乳糖苷酶和辣根过氧化物酶C.葡萄糖氧化酶和碱性磷酸酶D.脲酶和碱性磷酸酶E.辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶49、关于ELISA的固相载体论述有误的是( )A.最常用的是聚苯乙烯微量反应板B.每一批号的聚苯乙烯在使用前需检查其性能C.聚氯乙烯对蛋白质的吸附性能比聚苯乙烯低D.阳性和阴性标本测定结果差别最大者是最适用载体E.微孔滤膜也可作固相载体50、最常用于IgM测定的ELISA方法是( )A.双抗体夹心法B.间接法C.竞争法D.捕获法E.dot-ELISA法51、表示HRP纯度(RZ)的是( )A.λ275nm/λ403nmB.λ403nm/λ275nmC.λ290nm/λ275nmD.λ420nm/λ275nmE.λ403nm/λ290nm52、关于载体的选择,正确的是( )A.醋酸纤维膜吸附蛋白的能力强于塑料板,但对微量样品的吸附不完全B.高分子微颗粒载体含有的基团易与抗体蛋白形成化学偶联,且结合容量大C.塑料制品吸附蛋白分子的稳定性和均一性好D.固相微颗粒因体积小,不易与磁性材料组合使用E.膜载体吸附抗体蛋白一般是采用化学偶联法53、ELISA间接法通常用来检测( )A.抗体B.抗原C.免疫复合物D.抗抗体E.半抗原54、均相酶免疫测定的优点不包括( )A.多用于小分子激素和半抗原的测定B.勿需分离游离的酶标抗原C.易于自动化分析D.不易受样品中非特异的内源酶的干扰E.灵敏度可达10~9mol/L55、酶增强免疫测定技术(EMIT)是一种( )A.固相酶免疫测定技术B.液相酶免疫测定技术C.均相酶免疫技术D.酶免疫组织化学技术E.酶免疫测定与电泳相结合的技术56、酶桥染色法中的桥抗体是指( )A.免疫反应系统中的特异性抗体B.显色系统中的抗酶抗体C.第一抗体D.第二抗体(抗抗体E.第三抗体(抗酶抗体)57、ELISA中用于某种特异抗体的亚型测定常采用的方法是( )A.双抗体夹心法B.捕获法C.竞争法D.间接法E.双抗原夹心法58、与双抗体夹心法相比,ELISA间接法的主要优点是( )A.有较大的放大作用B.减少了操作步骤C.减少了冲洗次数D.可以用一种酶标抗体检测各种与抗原相应的抗体E.缩短反应时间59、关于ELISA竞争法正确的是( )A.用于检测抗原B.被检测物与酶标记物的免疫活性各不相同C.被测物多则标记物被结合的机会少D.待测管的颜色比参照管的淡表示被测物量少E.只用于检测抗体60、斑点ELISA与常规ELISA比较不同之处在于( )A.二者实验原理不同B.二者所用固相载体不同C.二者所用酶不同D.二者所用酶标抗体不同E.以上都不对61、ELASA板包被后,最常用的封闭物质是( )A.人白蛋白B.人球蛋白C.牛血清白蛋白D.牛血清球蛋白E.鼠白蛋白62、免疫渗滤试验衍生于( )A.免疫扩散试验B.免疫层析试验C.免疫印迹试验D.dot-ELISAE.RIA63、目前国内ELISA常用的酶是A.HRPB.APC.β-GalD.OPDE.TMB64、双抗体夹心ELISA可用于检测A.CEAB.胰岛素C.吗啡D.ANAE.RF65、何种ELISA方法其酶标二抗具有通用特性A.双抗体夹心B.一步法C.捕获法D.竞争法E.间接法66、间接ELISA可用于检测A.AFPB.胰岛素C.HIV抗体D.吗啡E.HBsAg67、酶免疫印迹所用的固相材料为A.NC膜B.聚苯乙烯C.磁性颗粒D.尼龙膜E.凝胶68、捕获法测定病原体抗体的类别是A.IgMB.IgGC.IgAD.IgDE.IgE69、以碳酸盐作为包被缓冲液,最佳pH为A.7.2B.7.4C.7.0D.8.6E.9.670、目前通用标记HRP的试验方法为A.戊二醛交联B.过碘酸钠氧化C.琥珀酸酐法D.混合酸酐法E.碳化二亚胺法71、生物素分子中可进行修饰,形成各种活化生物素的基因是A.Ⅰ环B.Ⅱ环C.羧基D.羟基E.酮基72、链霉亲和素的活性单位是以结合多少生物素所需的量来表示A.1μgB.2μgC.3μgD.4μgE.5μg73、免疫组化技术的关键步骤是A.标本处理B.抗体的处理与保存C.免疫染色D.设立对照试验E.结果判断74、PAP复合物中的酶是A.胶原酶B.胃蛋白酶C.葡萄糖氧化酶D.碱性磷酸酶E.辣根过氧化物酶75、组化染色前,应对标本进行固定,其最主要的目的是A.保存组织细胞的抗原性B.防止细胞脱落C.防止细胞自溶D.终止胞内酶的活性E.使细胞内蛋白质凝固76、免疫组化法吸收试验是用过量已知抗原与抗体充分反应,理想的温度是A.4℃B.25℃C.56℃D.37℃E.50℃77、下列不是激光光源特征的是A.单色性强B.波长范围较宽C.亮度高D.相干性好E.方向性强78、免疫组化技术基质的来源,错误的是A.活体组织B.血清C.病毒D.培养细胞E.细菌79、微孔板包被后,加入高浓度蛋白封闭空白位点,这一过程称为A.包被B.封闭C.本底D.钩状效应E.基质效应80、与假阴性测定结果密切相关的是A.包被B.封闭C.本底D.钩状效应E.基质效应81、未加入待测物质,试验结束后测定的OD值称为A.包被B.封闭C.本底D.钩状效应E.基质效应82、标记蛋白质氨基的活化生物素为A.N-羧基丁二酰亚胺酯(BNHS)B.生物素酰肼(BHZ)C.肼化生物素(BCHZ)D.光敏生物素E.生物胞素(MPB)83、标记核酸的活化生物素为A.N-羧基丁二酰亚胺酯(BNHS)B.生物素酰肼(BHZ)C.肼化生物素(BCHZ)D.光敏生物素E.生物胞素(MPB)84、标记蛋白质醛基的活化生物素为A.N-羧基丁二酰亚胺酯(BNHS)B.生物素酰肼(BHZ)C.肼化生物素(BCHZ)D.光敏生物素E.生物胞素(MPB)85、在PAP技术中,起“桥联”作用的成分是A.Ab1B.Ab2C.anti-HRPD.HRPE.anti-AP86、在PAP技术中,与特异性抗体(Ab1)具有同种型抗原表位的成分是A.Ab1B.Ab2C.anti-HRPD.HRPE.anti-AP87、在PAP技术中,能特异性识别待检抗原的成分是A.Ab1B.Ab2C.anti-HRPD.HRPE.anti-AP88、BAS在ELISA技术中应用最广泛的反应模式是A.BABB.ABCC.BRABD.BAE.LAB89、在ABC- ELISA技术中,亲和素与生物素化酶的比例关系是A.1︰4B.1︰2C.2︰1D.4︰1E.1︰1三、名词解释1.酶免疫技术:是指利用酶的高效催化和放大作用与特异性免疫反应结合而建立的一种标记免疫技术。