实验二溶血空斑
溶血反应的实验报告
溶血反应的实验报告
溶血反应实验报告
实验目的：通过溶血反应实验，观察不同浓度的溶液对红细胞的溶解作用，了
解溶血现象的产生原因和影响因素。
实验材料：新鲜离心血液、生理盐水、不同浓度的溶液（如高渗溶液、低渗溶
液等）、离心管、试管、显微镜等。
实验步骤：
1. 取适量的新鲜离心血液置于离心管中；
2. 分别将不同浓度的溶液加入试管中，如高渗溶液、低渗溶液等；
3. 将试管中的溶液与离心管中的血液混合均匀；
4. 放置一段时间后，观察溶液与血液的反应情况；
5. 使用显微镜观察红细胞的形态变化。
实验结果：
1. 高渗溶液会导致红细胞内部的水分流失，红细胞收缩变形，最终溶解；
2. 低渗溶液则会导致水分进入红细胞，使红细胞膨胀破裂；
3. 生理盐水对红细胞没有明显的溶解作用。
实验结论：
1. 高渗溶液和低渗溶液都会对红细胞产生溶解作用，导致红细胞的破裂和溶解；
2. 溶血反应的产生与溶液的渗透压有关，高渗溶液会导致红细胞失水而溶解，
低渗溶液则会导致红细胞吸水而溶解；
3. 生理盐水对红细胞没有溶解作用，可作为溶液的对照组。
通过这次实验，我们深入了解了溶血反应的原理和影响因素，为进一步研究红
细胞的生理功能和疾病诊断提供了重要的实验基础。
希望通过这次实验，我们能够更好地理解溶血现象，并为医学研究和临床诊断提供更多的参考依据。
2015年临床医学检验中级职称考试考点点评
2015年临床医学检验中级职称考试考点点评2015年临床医学检验中级职称考试的有关考点知识，小张老师通过本文特梳理这方面的考点内容如下，供广大考生参考复习。
一、溶血空斑形成的试验经典的溶血斑试验用于检测实验动物抗体形成细胞的功能，其原理是将绵羊红细胞（SRBC）免疫小鼠，4天后取出脾细胞，加入SRBC及补体，混合在温热的琼脂溶液中，浇在平皿内或玻片上，使成一蒲层，置37温育。
由于脾细胞内的抗体生成细胞可释放抗SRBC抗体，使其周围的SRBC致敏，在补体参与下导致SRBC溶血，形成一个肉眼可见的圆形透明溶血区而成为溶血空斑（plaque）。
每一个空斑表示一个抗体形成细胞，空斑大小表示抗体生成细胞产生抗体的多少。
这种直接法所测至的细胞为IgM生成细胞，其它类型Ig由于溶血效应较低，不能直接检测，可用间接检测法，即在小鼠脾细胞和SRBC混合时，再加抗鼠Ig 抗体（如兔抗鼠Ig），使抗体生成细胞所产生的IgG或IgA与抗Ig抗体结合成复合物，此时能活化补体导致溶血，称间接空斑试验。
但是上述直接和间接空斑形成试验都只能检测抗红细胞抗体的产生细胞，而且需要事先免疫，难以检测人类的抗体产生情况。
如果用一定方法将SRBC用其它抗原包被，则可检查与该抗原相应的抗体产生细胞，这种非红细胞抗体溶血空斑试验称为空斑形成试验，它的应用范围较大。
现在常用的为SPA-SRBC溶血空斑试验。
SPA能与人及多数哺乳动物IgG的Fc段呈非特异性结合，利用这一特征，首先将SPA包被SRBC，然后进行溶血空斑测定，可提高敏感度和应用范围。
在该测试系统中，加入抗人Ig抗体，可与受检细胞产生的免疫球蛋白结合形成复合物，复合物上的Fc段可与连接在SRBC 上的SPA结合，同时激活补体，使SRBC溶解形成空斑。
此法可用于检测人类外周血中的IgG产生细胞，与抗体的特异性无关。
用抗IgA．IgG或IgM抗体包被SRBC，可测定相应免疫球蛋白的产生细胞，这种试验称为反相空斑形成试验。
抗体形成细胞介导的溶血空斑和溶血试验
抗体形成细胞介导的溶血空斑和溶血试验
李景鹏
【期刊名称】《黑龙江畜牧兽医》
【年(卷),期】1998()8
【摘要】研究了用绵羊红细胞免疫大鼠，其脾脏中抗体形成细胞中，免疫后第４天平均有８２３个抗体形成细胞。
免疫后第３天细胞介导的溶血平均为２２．９９％，免疫后第４天为９２．４５％。
讨论了溶血空斑法的条件并与溶血法作了比较。
【总页数】2页(P4-5)
【关键词】空斑形成细胞;溶血试验;免疫;细胞介导
【作者】李景鹏
【作者单位】东北农业大学生物工程系
【正文语种】中文
【中图分类】S852.4
【相关文献】
1.一种新型的定量测定特异性体液免疫功能的溶血空斑试验 [J], 安云庆;辛永梅
2.直接溶血空斑试验的几项条件的探讨 [J], 王金锐
3.一种改良的溶血空斑试验 [J], 李郁英
4.辅酶Q10的毒性试验及对溶血空斑形成细胞的刺激效应 [J], 胡钧;许以盛;张汉云;李朝达
5.医学免疫实验学的微视频教学设计——溶血空斑试验(小室法) [J], 刘欢;贺亚玲;唐慧;崔林;周旋;李玲
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
溶血实验报告
溶血实验报告
溶血实验报告
实验目的：通过溶血实验，检测某种物质对红细胞的溶血作用，了解其对血细胞的影响。
实验原理：红细胞溶血是指红细胞在一些特定条件下，被溶解，导致红细胞膜的破裂并释放细胞内的血红素和其他细胞成分。
溶血的原因可分为两种：渗透性溶血和溶解性溶血。
渗透性溶血是指渗透物质通过红细胞膜进入细胞内，使细胞膨大，最终引起细胞破裂。
溶解性溶血是指一些溶解物质直接破坏红细胞膜，导致红细胞破裂。
实验步骤：
1. 准备实验用的离心管、显微镜玻片、盖玻片、顶底计数板。
2. 取适量的新鲜血液，使用生理盐水稀释至5%浓度。
3. 在离心管中分别加入10 mL的生理盐水、0.5%牛胆酸溶液
和1%甘露醇溶液，分为三组。
4. 分别将每组离心管加入一定量的5%红细胞悬液，控制其比
例为1：5。
5. 分别在离心管中加入适量试样，如药物或化学物质。
6. 定时将离心管置于37℃水浴中，孵育30分钟。
7. 孵育完成后，取适量溶液涂在显微镜玻片上，加上盖玻片，观察显微镜下红细胞的变化。
8. 使用顶底计数板计数，并记录红细胞的溶解率。
实验结果：根据观察显微镜下红细胞的变化和计数板计数的结
果，记录不同试样下的红细胞溶解率。
实验结论：根据实验结果，可以得出不同试样对红细胞的溶解程度。
比较不同试样的溶解率，可以评估其对红细胞的溶血作用。
实验结果可以为进一步研究血液疾病和药物的安全性提供参考。
溶血试验的实验报告
溶血试验的实验报告实验目的：通过溶血试验，评估红细胞的溶血情况，了解红细胞的稳定性和膜的完整性，为血液学研究和临床诊断提供参考。
实验原理：溶血试验是通过观察红细胞在不同浓度的盐水中溶解的情况，来评估红细胞膜的完整性和红细胞的稳定性。
正常情况下，红细胞在等渗盐水中不会溶解，而在低渗盐水中会发生溶血。
实验材料：1. 新鲜抗凝血（EDTA或肝素）2. 0.9%生理盐水3. 低渗盐水（0.5% NaCl溶液）4. 试管若干5. 离心机6. 显微镜7. 计数板实验步骤：1. 取新鲜抗凝血1ml，加入试管中。
2. 将试管放入离心机中，以3000转/分钟的速度离心5分钟。
3. 离心后，取出试管，弃去上层血浆，保留红细胞层。
4. 向红细胞层中加入0.9%生理盐水1ml，轻轻摇匀，使红细胞充分悬浮。
5. 将混合液再次离心，离心条件同上。
6. 离心后，弃去上层液体，保留红细胞层。
7. 分别取两个新的试管，标记为“等渗盐水组”和“低渗盐水组”。
8. 向等渗盐水组试管中加入0.9%生理盐水1ml，向低渗盐水组试管中加入0.5% NaCl溶液1ml。
9. 将离心后的红细胞分别加入等渗盐水组和低渗盐水组试管中，各0.5ml。
10. 轻轻摇匀，使红细胞与盐水充分混合。
11. 将试管置于室温下静置30分钟。
12. 观察并记录红细胞的溶血情况。
13. 如有必要，使用显微镜和计数板进行更详细的观察和计数。
实验结果：1. 在0.9%生理盐水中，红细胞保持完整，未见明显溶血现象。
2. 在0.5% NaCl溶液中，红细胞发生溶血，可见红细胞膜破裂，细胞内容物释放。
实验结论：实验结果表明，红细胞在等渗环境下保持稳定，而在低渗环境下发生溶血。
这与红细胞膜的完整性和渗透压调节机制有关。
溶血试验是一种简单有效的评估红细胞稳定性的方法，对于血液学研究和临床诊断具有重要意义。
注意事项：1. 抗凝血的选择应根据实验要求和条件进行，避免溶血。
2. 离心过程中要确保离心机的稳定性，避免因操作不当导致红细胞损伤。
溶血性实验2014
溶血性实验分光光度法测定1、原理根据红细胞破裂释放出来的血红素在可见光波长段具有最大吸收的原理,采用分光光度法测定受试物的溶血程度。
2、实验方法取新鲜血液8mL,肝素抗凝,加入10mL0.9%生理盐水稀释。
向1mL纳米粒溶液(pH6.5)中加入100μL稀释血液,于37℃摇床中温浴一定时间后,750g离心5min以去除完整的红细胞及红细胞碎片。
将离心得到的上清液加入到2mL 乙醇/盐酸混合溶液(39:1;99%乙醇(v/v):37%盐酸(w/v))中沉淀除血红蛋白外溶液中的所有组份,再以750g离心5min,取上清于紫外分光光度计398nm处测吸光度值。
其中阳性对照(positive control, pc)为蒸馏水,阴性对照(negative control , nc )为0.9%生理盐水,均用同样方法处理得纳米粒溶液的溶血率(Hemolysis rate, HR%)组别阴性对照组阳性对照组试验组新鲜血液mL 8 8 8蒸馏水0 1 00.9%生理盐水 1 0 0材料0 0 13结果观察:①最大吸收波长的确定:取阳性管的上清液在紫外可见分光光度计上扫描,测得最大吸收波长。
②溶血率的测定:将各管的溶液置入干燥离心管中离心,取上清在分光光度计上,在最大吸收波长处,以阴性管为空白读取各管A值。
4结果判断:用下式计算各试验管的溶血率%:溶血率(%)=(A试-A阴)/(A阳-A阴)×100%式中:Ａ试为试验管吸光度;Ａ阴为阴性对照管吸光度;Ａ阳为阳性对照管吸光度。
一般溶血率<5%,否则不宜用于临床。
溶血素与补体激活实验报告
实验报告4. 补体结合反应实验原理补体结合反应是一种有补体参与，并以绵羊红细胞和溶血素作为指示系统的抗原抗体反应。
参与本反应的五种成分可分为两个系统：一为待检系统，即为已知抗原（或抗体）和待检抗体（或抗原）；另一个为指示系统，即绵羊红细胞和其相应的溶血素。
待检抗原、抗体和补体作用后，再加入指示系统。
若待检系统中的抗原和抗体相对应，两者特异性结合后激活补体，补体被消耗。
再加入的指示系统无补体结合，不出现溶血；若待检系统中的抗原与抗体不对应或缺少一方，补体不被激活，当指示系统加入后，绵羊红细胞和溶血素复合物激活补体，产生溶血现象。
5. 空斑形成实验是一种体外检测IgM、IgG类型抗体产生细胞的实验方法，又称空斑形成细胞（PFC)测定。
可作为评估药物影响抗体产生水平以及临床筛选抗肿瘤新药的重要依据。
经绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞与一定量的绵羊红细胞混合后，抗体形成细胞产生的抗体与绵羊红细胞结合；在补体参与下，绵羊红细胞溶解，形成肉眼可见的溶血空斑。
一个空斑即代表一个抗体形成细胞。
一、SRBC的制备（一）无菌抽取绵羊血1.手术剪减去绵羊颈部毛发备皮，止血带扎住颈部，碘酒消毒，酒精棉球再擦拭。
2.抽取一定量的绵羊血，注入无菌玻璃瓶，轻轻摇晃获得抗凝绵羊血，摇晃时不能用力过猛，防止SRBC破裂。
（二）绵羊红细胞的制备1.在无菌实验室中，用移液枪吸取5ml抗凝绵羊血于试管中，共4支试管。
2.配平后对称放入离心机中2000rpm离心10分钟。
3.4支试管，胶头滴管吸去上清液，加入适量的灭菌生理盐水后轻轻摇晃混匀。
4.再次配平后，2000rpm离心10分钟，2-3次。
5.吸去上清液，获得绵羊红细胞。
（三）绵羊红细胞悬液制备1.20%绵羊红细胞悬液制备在无菌实验室中，用移液枪吸取2ml绵羊红细胞于锥形瓶中，用移液管再加入8ml灭菌生理盐水，混合均匀。
2.2%绵羊红细胞悬液制备在无菌实验室中，用移液枪吸取1ml绵羊红细胞于锥形瓶中，量筒量取49ml无菌生理盐水加入锥形瓶，混合均匀。
空斑实验
问：我准备做病毒空斑实验，不知到怎样配置甲基纤维素覆盖培养液，敬请各位指教答：1、我是这么做的：24孔板VERO，HSV11）24孔板预板2）24h后，弃培养液，用hanks液洗1次3）接种病毒液0.1ml/孔4）放入37度5％CO2培养箱1h，期间每15min慢摇一次，使病毒充分吸附5）加入1％甲基纤维素（1ml/）孔覆盖培养基，放入37度5％CO2培养箱继续培养6）3天后，吸弃培养基7）加入5％甲醛1ml/孔固定4min，弃甲醛，加入结晶紫0.8ml/孔染色20min8）自来水缓缓冲洗染液，计算孔斑数2、我的老师做空斑试验也是用甲基纤维素，不过浓度是2%，配置方法是：甲基纤维素：3克溶于150ml 蒸馏水中，最终浓度为2%；染色用的碘液：25g溶于500ml95%的乙醇中。
最终浓度为5%做出的效果很好。
不过甲基纤维素要提前很长时间配置，大约2周，高压后放入冰箱，使用前无菌操作加入培养液，混匀放入冰箱，过一天后再拿出，使劲摇匀，使纤维素达到一种匀质的状态，静置至起泡完全消失后使用。
染色可以用中性红0.1%（w/v)温箱孵育2-3小时，若是6孔板每孔加1ml;倾倒后即可计数。
问：“1％甲基纤维素（1ml/）孔覆盖培养基，放入37度5％CO2培养箱继续培养”是指把1％甲基纤维素直接加入已放好培养基的孔里，还是甲基纤维素和培养基混好再加入细胞中？配方比例是什么？甲基纤维素要提前很长时间配置，大约2周为什么？什么时候可以计数了？以什么为标准呢？答：1、1％甲基纤维素（1ml/）孔覆盖培养基应是指按1ml/孔的量加甲基纤维素覆盖培养基。
甲基纤维素覆盖培养基应该就是指Viscous medium,它是一种专门培养基。
简单的说就是在普通细胞培养液里面添加了甲基纤维素来提供粘性,甲基纤维素应非营养物质。
因甲基纤维素难溶，所以要先配并灭菌好甲基纤维素溶液。
然后在无菌条件下往其中补加其他培养基所需成分，注意MEM 配的是10×的，这样要加的MEM 溶液体积就少的多。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验二溶血空斑
实验目的：
了解血液抗原与抗体的作用，掌握血凝反应的基本原理和实验方法，了解溶血空斑试
验的原理，探讨影响溶血空斑的因素。
实验原理：
人和动物的血液表面都有各种化学物质，其中最明显的有抗原和抗体。
血型抗原通常
是在红细胞的表面，而血型抗体则在血清中。
在正常情况下，抗原与抗体之间不会产生相
互作用，但是在体外与不同类型的血液混合时就会出现反应。
在血凝反应过程中，当同种
抗体与同种抗原相遇时，它们会结合起来形成一个可见的团块。
抗体对于外来抗原有着高
度的选择性，即其能够选择性的结合到特定的抗原，而不涉及其他抗原类型。
通常存在四
种血型：A、B、AB、O。
每一种血型都有特定的抗体和抗原。
溶血是指红细胞破裂释放出细胞内物质的过程。
红细胞的膜结构具有半渗透性，并且
固定量的抗体或淀粉样物质能与它们结合。
当不兼容的血液混合时，体内的抗体结合到血
型抗原表面，从而导致血细胞的破裂和血液中出现游离的血红蛋白，也称为溶血现象。
溶血空斑试验是一种检测抗体特异性和浓度的试验。
在试验中，试管中的血浆加入已
知抗原类型的红细胞悬液，然后让其稀释，最终加入悬液的红细胞浓度足以产生溶血空斑。
抗体与相应抗原结合时会在红细胞表面形成网状结构，称为空斑。
空斑在显微镜下呈现为
圆形透明的结构，其大小和数量取决于抗体浓度和特异性。
抗体浓度越高，抗体与红细胞
结合的位置越小，空斑越大。
实验步骤：
设计课题：
本实验选择 ABO 血型系统，探究不同抗体浓度对溶血空斑的影响。
器材：
平滴管5ml，离心机，显微镜，石蜡片，波茨玻璃吸管，无菌吸球，超声波清洗器。
试剂：
离心管，血型鉴定血清（A、B、O）、丙酮、0.9％生理盐水、0.3％凝血酶液、4％牛
血清蛋白、洗涤缓冲液。
操作流程：
1.实验器材的清洗：取下一个 50 毫升的玻璃容器，加入浓度为 10% 的氢氧化钠溶液，用玻璃棒搅拌，再洗净，然后反复用蒸馏水洗净。
之后，使用超声波清洗器清洁吸球。
将使用密闭器前的所有仪器和试剂清洗，使其无残留物和干净。
2.稀释抗体：取一个清洁的干燥离心管，添加适量的 4% 牛血清蛋白，然后向其中加
入 10ml 的洗涤缓冲液，充分混合。
将 AB 血型鉴定血清的浓度用洗涤缓冲液稀释成1：2、1：4、1：8、1：16、1：32等五种稀释浓度，称为不同抗体（A、B、O）浓度的抗体液。
将充分混合的抗体液在上述浓度下保存。
3.制备红细胞悬浮液：取 1ml 的 ABO 血型散体加入 9ml 的 0.9% 生理盐水，将其
中的浑浊情况和悬浮红细胞的均匀性观察，之后进行共沉淀，将上清液吸去，上述步骤总
共重复 3 次。
最后使用 0.3% 的凝血酶溶液进行红细胞的致密度调整，用 0.9% 生理盐
水洗净红细胞并致密化。
4.制备试片：将 2ml 的凝血酶致密的 ABO 血型红细胞悬浮液加入 2ml 的丙酮，充
分混合，制造溶血空斑试片。
将试片切成合适大小（约 10mm x 10mm）的石蜡片，吸出多
余丙酮，继续干燥15~20分钟，装入红细胞计数板和玻璃管，并在其中添加 6% 的试剂。
5.制备溶血空斑：在红细胞悬浮液和洗涤缓冲液的基础上制备与抗体不同浓度的试液。
将各试剂液加入白色比照板中，用平滴管加水调整体积，将体积相等的 red cell 和各抗
体液混合，然后加 1~2 滴洗涤缓冲液（目的是调整 pH 和增加保护红细胞的牛血清蛋白的浓度），轻轻振荡，然后加入石蜡片中（大约为5 μl），在 5 分钟内在计数板中显微镜下查看三个慢速的溶血空斑。
6.研究结果：观察空斑的大小和数量，并据此记录和分类统计。
实验结果：
根据实验步骤操作，制备不同抗体浓度的溶血空斑，结果如下表所示：
| 抗体浓度 | A | B | O |
| --------------------- | ------------ | ------------ | ------------ |
| 1：2 | 微小空斑 | 微小空斑 | 微小空斑 |
| 1：4 | 小空斑 | 小空斑 | 小空斑 |
| 1：8 | 中空斑 | 中空斑 | 中空斑 |
| 1：16 | 大空斑 | 大空斑 | 大空斑 |
| 1：32 | 很大空斑 | 很大空斑 | 很大空斑 |
在 ABO 血型系统中，抗体的种类和浓度直接影响着溶血空斑的大小和数量。
在溶血
空斑的形成过程中，抗体主要结合到红细胞表面的抗原，当抗体浓度较低时，其空斑数目
和大小较小，当浓度逐渐上升时，空斑数目和大小逐渐增大。
在本实验中，当抗体浓度为 1：2 时，空斑非常微小，几乎难以辨认。
在抗体浓度为1：4 时，空斑仍然非常小，仅能微弱地观察到。
当抗体浓度逐渐上升到 1：8 时，空斑
的大小和数量明显增加，具有很好的可见性，随着抗体浓度的进一步上升，空斑的大小和
数量不断增加。
实验结果说明如果抗体的浓度超出一定范围（1：8），其与红细胞表面的抗原结合和
溶血发生的可能性会大大增加。
这种现象与临床上的输血有很大关系，如果将不同血型的
血液随意混合，特异性抗体与补体的结合会引发溶血反应，引起一系列的生理反应甚至死亡。
实验考虑到的误差：
1. 内外因素影响的影响：实验过程中可能存在的外界因素干扰，如温度、湿度、光
线等等。
我们可以采取一些预防措施，如将切割过的石蜡板保存在纸盒中，避免太阳光直
接照射；保持实验室稳定的室温和湿度；尽量在同一时间进行实验，减少外界因素的影
响。
2. 误操作：在实验过程的石蜡板的切割和处理中，可能会误伤试液和红细胞悬浮液，影响实验结果。
我们应该使用精细的实验步骤和器材，防止误操作的发生。
3. 细胞不均匀分布：在制备红细胞悬浮液时，我们可能没有完全避免红细胞不均匀
分布的情况，导致空斑大小和数量不完全准确。
我们可以在制备试片前仔细检查红细胞悬液，尽量避免有颗粒或凝块的情况，从而减少试剂的浪费和误差。
另外，我们还应该严格遵守实验的操作规范，正确安放仪器和试剂，避免交叉污染和
化学反应的干扰。
只有进行标准化操作，才能得到科学准确的实验结果。