生物膜特征指标测定方法
4种方法检测表皮葡萄球菌生物膜形成能力的应用价值探讨_李燕
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器械清洗生物膜测试法
器械清洗生物膜测试法引言：在医疗领域，器械的清洗是确保患者安全和预防感染的关键步骤之一。
然而，清洗器械表面的生物膜是一个挑战。
生物膜是一种由微生物聚集而形成的黏稠物质，其对清洗剂和消毒剂具有很强的抵抗力。
因此，如何准确评估生物膜的清洗效果成为了关注的焦点之一。
本文将介绍一种常用的器械清洗生物膜测试法。
一、什么是生物膜？生物膜是由细菌、真菌和其他微生物形成的一种复杂结构。
它们在器械表面形成一个黏稠的层，以保护微生物免受外界环境的影响。
生物膜可以在各种环境中形成，如水槽、管道和器械表面等。
生物膜的形成对清洗和消毒过程造成了困扰。
二、为什么需要测试生物膜的清洗效果？生物膜的存在给医疗设施和患者带来了潜在的风险。
生物膜中的微生物可以产生抗生素耐药基因，导致治疗的困难。
此外，生物膜还可以阻碍清洗和消毒剂的有效渗透，从而降低清洗的效果。
因此，测试生物膜的清洗效果对于确保器械的安全和预防感染非常重要。
三、器械清洗生物膜测试法的原理器械清洗生物膜测试法是一种通过测量清洗液中的生物膜残留物来评估清洗效果的方法。
该方法通过将清洗液与被测器械接触，并在一定时间后收集清洗液样本。
然后，使用一种适当的方法来检测清洗液中的生物膜残留物，如蛋白质或多糖。
四、器械清洗生物膜测试法的步骤1. 准备测试器械：选择一种代表性的器械作为测试对象，并确保其表面有生物膜残留。
清洗并干燥器械，准备测试之前需要的材料和试剂。
2. 浸泡测试：将清洗器械放入一定浓度的清洗液中，按照规定的时间进行浸泡。
确保清洗液与器械表面充分接触。
3. 收集清洗液样本：在浸泡结束后，使用试管或其他适当的容器收集清洗液样本。
4. 测试生物膜残留物：使用适当的方法来测试清洗液样本中的生物膜残留物。
常用的方法包括蛋白质测定法和多糖测定法。
5. 分析结果：根据测试结果评估清洗效果。
如果清洗液中的生物膜残留物低于预定的阈值，则可以认为清洗效果良好。
五、器械清洗生物膜测试法的优势1. 准确评估清洗效果：该测试法可以直接测量清洗液中的生物膜残留物，从而准确评估清洗效果。
结晶紫法测生物膜的原理
结晶紫法测生物膜的原理结晶紫法是一种常用的方法，用于测量和评估生物膜的形成和附着性。
生物膜是一种在环境中形成的复杂的微生物聚集体，可以附着在固体表面、液体界面以及空气液体界面上。
生物膜的形成对于微生物的生理功能和生态系统的稳定性具有重要的影响。
结晶紫法是通过评估生物膜附着面上的细菌数目来反映生物膜的形成和附着性的。
通常，结晶紫法涉及到以下几个步骤：1. 制备结晶紫溶液：将结晶紫固态染料加入适量的水溶液中，并充分溶解。
一般来说，结晶紫溶液的浓度为0.1%。
2. 准备生物膜样本：将待测的生物膜样本收集到试管或培养皿中，确保样本的完整性和代表性。
在收集样本前，应注意避免样本受到外界环境的干扰。
3. 染色：将制备好的结晶紫溶液加入到含有生物膜的试管或培养皿中。
溶液浸没样本后，轻轻摇晃杯子，确保结晶紫充分覆盖整个样本表面。
4. 洗涤：将试管或培养皿中的结晶紫溶液倒掉，用无菌蒸馏水轻轻冲洗样品。
这样可以除去不与细菌附着在一起的过多染色剂。
5. 干燥：将试管或培养皿倒置放置于无菌台上，任其自然干燥。
过程中不要触摸或移动样品。
6. 计数：使用显微镜对染色后的样品进行观察。
在适当的放大倍率下，数清生物膜附着面上的紫色结晶体数目。
结晶体的数目反映了生物膜附着面上的细菌数目。
结晶紫法的原理是基于细菌细胞膜的防御机制。
生物膜附着面上的细菌会为了适应固体表面环境的变化，产生胞外多糖物质，形成一种类似基质的结构，从而稳定细菌附着在固体表面。
结晶紫是一种碱性染料，对于胞外多糖有很好的亲和力。
当结晶紫溶液与细菌附着表面接触时，细菌会与染料结合形成紫色结晶体。
通过计数样品中染色后的紫色结晶体的数目，可以评估生物膜附着面上的细菌数目，从而间接反映生物膜的形成和附着性。
紫色结晶体的数目越多，说明生物膜附着面上的细菌数目越多，生物膜的形成和附着性也越强。
结晶紫法具有操作简单、高效快捷的优点，适用于不同类型的生物膜样本。
然而，需要注意的是，结晶紫法只能提供生物膜附着面上细菌数目的估计值，并不能提供关于生物膜微生物种类和结构的详细信息。
器械清洗生物膜测试法
器械清洗生物膜测试法一、器械清洗生物膜测试法的原理生物膜是一种由微生物聚集在固体表面形成的粘附结构，常见于医疗器械、水处理设备和食品加工设备等。
生物膜不仅影响器械的清洗效果，还可能导致交叉感染和器械损坏等问题。
器械清洗生物膜测试法通过培养和检测生物膜中的微生物来评估清洗效果。
二、器械清洗生物膜测试的方法1. 采样：从待测试的器械表面取样，在不同部位和不同时间点进行采样，以获取全面的信息。
2. 培养：将采样得到的样品放入含有适当培养基的培养皿中，利用培养皿的条件（如温度、湿度等）促使微生物生长。
3. 检测：通过目测、显微镜观察、生物化学试剂等方法，检测培养皿中是否有生物膜形成，以及生物膜中存在的微生物种类和数量。
三、器械清洗生物膜测试的应用1. 评估清洗效果：通过器械清洗生物膜测试法，可以定量评估清洗过程中生物膜的清除情况，判断清洗效果是否符合要求。
2. 指导清洗流程优化：通过定期进行器械清洗生物膜测试，可以发现清洗过程中可能存在的问题，指导清洗流程的优化和改进。
3. 预防交叉感染：生物膜是交叉感染的重要来源，及时检测和清除生物膜可以有效预防交叉感染的发生。
4. 保护器械使用寿命：生物膜的存在会导致器械的损坏，通过及时清除生物膜可以延长器械的使用寿命。
四、总结器械清洗生物膜测试法是一种重要的评估器械清洗效果的方法，通过培养和检测生物膜中的微生物，可以及时发现和解决器械清洗过程中可能存在的问题，保障医疗器械的安全使用。
在实际应用中，器械清洗生物膜测试法可以用于评估清洗效果、指导清洗流程优化、预防交叉感染和保护器械使用寿命等方面。
通过广泛应用和不断改进，可以提高器械清洗的效果，确保医疗器械的安全性和可靠性。
生物膜的结构和功能分析方法
生物膜的结构和功能分析方法生物膜是生命体系中的重要组成部分，它由生物体表面的微生物或细胞形成，包裹着细胞或物体，发挥着多种功能，如生物间相互作用、物质转运、能量转换和信号传导等。
因此，了解生物膜的结构和功能对于研究生物学、医学和环境科学等领域具有重要意义。
本文将介绍几种常用的生物膜结构和功能分析方法。
一、电子显微镜法电子显微镜法是一种常用的生物膜结构分析方法，它可以观察生物膜的超微结构，并获得高分辨率的图像。
在生物膜的观察中，传统的透射电子显微镜(TEM)可以获得高分辨率的内部结构图像，但不能对生物膜的表面结构进行观察。
而扫描电子显微镜(SEM)可以观察到生物膜的表面结构，但对内部结构的分辨率较低。
因此，在实际应用中，常常采用透射电子显微镜和扫描电子显微镜相结合，用TEM观察生物膜的内部结构，再用SEM观察膜表面的形态，从而获取生物膜的完整结构信息。
二、荧光显微镜法荧光显微镜法是研究生物膜功能的重要方法之一。
荧光标记技术是在生物分子中加入荧光分子，使其具有荧光性，利用荧光显微镜来观察其分布和运动状态，从而揭示生物分子的功能和调控机理。
例如，荧光蛋白(GFP)标记技术是将GFP蛋白加入生物分子中，使其发出荧光，并用荧光显微镜来观察生物分子的分布和动态变化。
通过这种方法，可以观察到微生物在生物膜上的分布和界面相互作用等。
三、红外光谱法红外光谱法是一种常用的生物膜组成分析方法，可以定量测定生物膜中不同成分的含量和结构。
红外光谱法的基本原理是利用不同分子的振动模式对其进行鉴定和分析。
在生物膜分析中，常用的红外光谱包括ATR-FTIR光谱和反射式光谱。
其中，ATR-FTIR光谱可以快速分析生物膜的组成成分和结构，反应快速并且无需样品预处理。
而反射式光谱则可以分析生物膜的表面环境和分子特征，并且可以对常规光谱进行修饰，从而提高其分析灵敏度和分辨率。
四、磁共振成像技术磁共振成像(MRI)技术是一种非侵入性的生物膜分析方法，可以直接观察生物体内的组织和器官，并获得高分辨率的图像。
生物膜结构的研究方法
生物膜结构的研究方法生物膜是由生物体生长形成的一种薄膜结构，其主要功能是保护生物体内部的细胞和组织，并维持生物体内外环境的稳定性。
研究生物膜结构对于深入理解生物体的功能机制和开发相关产品等方面具有重要意义。
本文将介绍生物膜结构的研究方法。
一、传统的显微镜观察方法传统的显微镜观察方法是观察生物膜的常用方法之一。
其主要原理是通过将生物膜放置于显微镜下，利用透射或反射光线将生物膜的结构显现出来。
这种方法具有简单、直观等优点，可以观察到生物膜的形态、大小、结构等信息。
但是，由于传统显微镜对于分辨率和清晰度的要求较高，难以观察生物膜的微小结构和内部细节。
同时，传统显微镜的放大倍数也有限，无法获得高分辨率的生物膜图像。
二、电子显微镜观察方法电子显微镜观察方法是当前研究生物膜结构的主要方法之一。
其原理是利用电子束替代光线进行观察，在高压下，电子束可以穿透生物膜，并形成高分辨率的图像。
电子显微镜具有极高的分辨率和清晰度，可以获得生物膜的三维结构信息。
同时，电子显微镜也可以结合其它技术，如冷冻电镜等，以获得不同条件下的生物膜结构信息。
三、荧光显微镜观察方法荧光显微镜观察方法是一种将生物膜内的特定分子或结构标记成荧光物质，然后通过激发荧光，从而观察生物膜结构的方法。
荧光显微镜具有荧光标记分子高度特异性、分辨率高等特点，可以在生物膜内精确、动态地观察特定分子或结构的空间分布和动态变化。
四、质谱分析方法质谱分析方法是一种通过分析生物膜内分子的质量、电荷等物理特性，来确定其化学成分的方法。
通过质谱分析，可以确定生物膜的分子组成和分子量分布，从而深入了解生物膜的化学成分和生物膜内分子间相互作用的特点，提供关于生物膜性质的更加深入的认识。
五、核磁共振方法核磁共振方法是一种通过分析生物膜内分子核的能量变换，来确定分子结构的方法。
通过核磁共振方法，可以获得生物膜内分子结构的详细信息，如膜中分子的旋转、取向、化学键长和角度等。
核磁共振方法的优势在于它可以用于测量生物膜结构的动态过程，如分子运动、离子交换等，从而深入了解生物膜的结构和功能机制。
生物膜脂磷含量的测定
生物膜脂磷含量的测定方法生物量是生物膜分析中的重要参数，它同微生物活性具有一定的正相关性。
在水处理微生物分析中，生物量的测定方法主要包括传统的培养法（细菌数量）、直接测定生物膜总量（如MLSS、MLVSS、TOC、COD等）或某些细胞组分（如胞外多聚物、总蛋白质、肽聚糖、脂多糖、脂磷等）等。
磷脂是细胞生物膜的主要组分，90%～98%的生物膜脂类以磷脂的形式存在，磷脂在细胞死亡后很快分解，很多研究证明脂磷是可以用来表示活菌总数的较为理想的指标。
于鑫对该方法进行了改进，本文主要参照于鑫的方法测定。
测定步骤：（1）萃取液配制：氯仿:甲醇:水=1:2:0.8（体积比。
氯仿、甲醇均为分析醇，水为纯水）。
（2）从反应器中取适量生物载体样品，置于100mL具塞三角瓶中，加入萃取液19mL。
（3）用力振摇三角瓶10min，然后静止放置12h。
（4）向萃取液中加入氯仿和纯水各5mL（使得氯仿:甲醇:水的比例为1:1:0.9），稍振摇后，转移到分液漏斗中，静止12~24h。
（5）将漏斗中最下层的氯仿相5mL转移至10mL具塞比色管中，于70℃水浴蒸干。
（6）消解：向10mL比色管中加入0.8mL过硫酸钾溶液，并加水至10mL刻度线。
高压蒸汽灭菌锅121℃消解30min。
（7）其余步骤同磷的测定（总磷---钼酸铵分光光度法）。
（8）将载体样品在102℃烘干衡重后称重。
最终计算结果以nmolP/g载体表示。
计算公式：设所有炭表面含有a mg磷的生物量，b为每克活性炭含有生物的摩尔数。
（a mg×106）/(31g/mol×Gg)=b nmol/g。
生物膜指数
生物膜指数
生物膜指数是一种用来衡量水质指标的重要参数。
在处理水质和污水处理方面，生物膜的量被用作表征有机物含量的间接指标。
生物膜主要由微生物群体及其自身的代谢产物组成，它可以附着在固相物质的表面，在显微镜下呈薄雾状，肉眼不可见。
生物膜指数可以反映水体中有机物的含量和污染程度，从而评估水质状况。
生物膜指数越大，表示水质污染程度越高。
其原理是生物膜的形成需要消耗溶解氧，而溶解氧的消耗与有机物的含量成正比。
因此，生物膜的量与水质中的有机物含量之间存在一定的相关性。
测量生物膜指数的方法主要包括滤膜法、BOD-DO关系法和曝气池生物膜法等。
在实际应用中，需要综合考虑各种因素，如水体的温度、pH值、溶解氧等，以准确评估水质状况。
生物膜指数的应用不仅限于水质监测和污水处理领域，还可用于研究微生物生态学、环境工程等领域。
因此，对于水质处理、环境保护等相关领域的研究人员和从业人员来说，了解和掌握生物膜指数的概念和应用具有重要意义。
如需获取更多关于“生物膜指数”的信息，建议咨询环境工程专家或查阅相关文献资料。
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第2章生物膜特征指标测定方法选择合适的生物膜指标进行测定和评价非常重要。
本研究课题主要的生物膜指标包括：生物膜量、生物膜胞外聚合物的量、活性生物量和生物膜的活性。
下面分别介绍它们的测定方法。
2.1 生物膜量2.1.1 生物膜的剥落生物膜固定在载体的表面，很难直接测量生物膜干重。
因此，评价载体生物膜量前，必须首先把生物膜从载体表面剥落下来。
生物膜的剥落方法很多，其中，有效剥落方法主要有机械剥落、超声剥落和超声加化学剥落。
在生物膜剥落在生物膜的多项分析中起关键作用，剥落回收率的高低直接影响其他分析的精确度。
（1）机械剥落。
对生物膜载体使用简单的机械方法，使生物膜脱离载体的表面。
这种剥落方法，简单、易于操作。
但该法却不适用于表面具有孔隙或表面粗糙度较大的载体。
生物膜机械剥落方法在生物膜反应器中得到广泛应用。
（2）超声剥落。
利用超声波冲击剥落生物膜。
可根据具体情况，选择合适的超声波工作功率。
（3）超声加化学剥落。
考虑到生物膜胞外聚合物对生物膜的胶联特性，若单纯使用超声波进行生物膜剥落，一般需要超声波的功率较高，作用时间较长。
Liu（1994）提出可将生物载体首先置于1M 的碱液中，并水浴30 分钟，温度控制在60～80℃。
经处理后，生物膜与载体表面的胶联度大大降低。
这时，再经过超声波处理，可在较低功率及较短时间作用就可得到非常好的剥落效果。
2.1.2 评价生物膜量的指标（1）生物膜干重。
生物膜剥落后，含有生物膜的溶液经事先称重的0.45μm滤膜过滤，把滤膜置于温控105℃的干燥箱内，干燥至恒重，过滤前后的重量之差即为剥落生物膜干重。
生物膜干重是生物膜参数中最为常用的指标。
（2）生物膜挥发性干重（VSS）。
生物膜干重反映的是生物膜总量。
生物膜的生物化学活性只与活性生物量相关，而生物膜挥发性干重可以反映生物膜活性生物量。
为了获得较准确的活性生物量信息，在生物膜的研究中，常常选用可挥发性生物膜重( Ameziane et al., 2002)。
在生物膜干重测量后，将样品置于550℃的马福炉内灼烧至恒重，总干重的失重即为可挥发性生物膜部分。
挥发性生物膜重量反映了生物膜中有机组分的含量。
（3）生物膜TOC。
细胞的结构骨架主要是有机碳组成。
通过测定生物膜总有机碳含量，即TOC，可间接了解生物膜量的变化。
特别是对于硝化生物膜等增长缓慢的微生物，其生物膜量一般较少，不便用直接干重法测量。
在这种情况下，生物膜TOC 的分析更具有准确性。
目前，TOC 的分析已经仪器化。
（4）生物膜COD。
生物膜的化学需氧量（COD）可间接描述生物膜量，在生物膜反应器动力学研究中应用较广(Liu et al., 2007)。
剥落后的生物膜样品可由传统法测定生物膜COD,也可应用半自动法测定（Jirka et al,1975）。
2.2 生物膜胞外聚合物生物膜胞外聚合物（EPS）是生物膜中围绕在细菌周围的高度含水的多聚大分子,其组成和物理化学属性决定生物膜的粘附、构型及生物学特性；EPS 由多种有机物组成，包括多糖、蛋白质、核酸、磷脂、褐藻酸、腐质等，主要是多糖和蛋白质(蒲晓芬等, 2005)。
在生物膜研究中，常常用生物膜中的胞外聚多糖和蛋白质的量代表生物膜中EPS。
2.2.1 胞外聚多糖聚多糖（Polysaccharide）是细胞增长过程中的一种代谢物质，在细胞固定以及形成生物膜过程中起着重要作用。
多聚糖在细胞的分泌、积累与细胞活性及其数量有关，它在生物膜研究中是经常测定的参数之一。
多聚糖的测定可根据Dubois 等人（Dubois et al, 1956）提出的苯酚-硫酸比色法，具体方法如下：生物膜经剥落后悬浮于溶液中，将其pH 调到中性，完全混合；取1mL 悬浮样品放入清洁试管内，然后加入1mL50g ·L-1 的苯酚溶液，经10～20s 的振荡混合后，再加入5mL95%的硫酸溶液，让其在黑暗中反应10min.；反应结束后，再振荡10s；最后，置试管于20～30℃水浴中10min.;水浴后，在490nm 处比色分析。
苯酚-硫酸比色法在确定生物膜多聚糖研究中已经非常成功（Belkhadir et al, 1988; Liu et al, 1994）。
2.2.2 蛋白质与生物膜重量概念相比，生物膜中蛋白质最重要的特性在于它反映了生物膜的活性。
蛋白质是活性细胞的重要组成部分。
一般认为生物膜总的蛋白质的含量不超过生物膜总重的5%（Lazarova et al,1994）。
目前，较为常用的细胞总蛋白质的分析方法是Bradford (Bradford,1976) 提出的，又称考马斯亮蓝法；这种方法与其他蛋白质分析方法相比具有简便、省时、准确度高的优点。
具体分析方法如下：第一步要准备Bradford 试剂，取100mgBrilliant indocyanin G（考马斯亮蓝G-250）溶于50mL 乙醇中，然后加入100mL85%的磷酸溶液，轻轻震动均匀，最后加入超纯水，并定容至1000mL,然后对其过滤处理，所得到滤液即为Bradford 试剂。
经超声波加碱液剥落的生物膜样品，经加入磷酸把其pH 调到中性。
完全混合生物膜悬浮液后，取1mL 样品放入清洁试管中，然后加入5mLBradford 试剂，振荡混合10s 后，让其在黑暗处反应10min.。
结束后，在595 处比色分析。
Bradford 所提出的细胞蛋白质分析法在好氧异养生物膜、厌氧生物膜、硝化生物膜动力学研究中应用极为广泛（Belkhadiret al,1988; Capdeville et al,1990; Chen et al., 2007）。
该法的突出优点是灵敏度高、测定简便快速以及干扰物质少。
2.2.3 本课题测定胞外聚合物的方法在本课题研究中，聚多糖的测定采用苯酚-硫酸比色法；蛋白质的测定采用考马斯亮蓝法(Bradford,1976)。
2.3 生物膜的活性虽然生物膜中的活性物质占生物膜总量的比例很小，但这些活性物质却与生物膜中的生物化学反应密切相关。
了解生物膜的活性，对研究和了解生物膜的特性具有很重要的意义（Lazarova et al,1995; 刘雨等，2000）。
在本课题研究中，生物膜微生物的活性通过氯化三苯基四氮唑(TTC)-脱氢酶活性测定法进行。
利用氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride ，TTC；Shanghai Reagent Co., Ltd, Shanghai, China)的还原性产物TTC-甲瓒(TF)的量，来表示微生物的活性。
主要步骤如下：（1）生物膜样品的制备取10g载体生物膜，用蒸馏水润洗2次，置于锥形瓶中，用玻璃珠剧烈摇动将生物膜打碎，用生理盐水20mL稀释，用玻棒搅动，使成悬液，备用。
（2）主要仪器和试剂氯化三苯基四氮唑( TTC)-葡萄糖标准溶液:TTC分析纯0.1 g与葡萄糖l g共溶于100 mL 蒸馏水中，棕色试剂瓶保存；甲苯(分析纯)；三氯甲烷(分析纯)；三羟甲基氨基甲烷(Tris)-HCI 缓冲溶液，pH值为8．6；其它：硫化钠。
（3）标准曲线的制作在分液漏斗中依次注入l，2，3，4，5，6 mL浓度为l g ·L-1 TTC-葡萄糖标准溶液，2 mL Tris-HCI缓冲溶液及lmL 10％Na2S新配溶液,摇匀；待溶液充分显色后，准确加入甲苯溶液5mL，振摇，完全提取TF。
放置片刻；待溶液分层后，取有机溶液层, 移至lcm比色皿中,稳定2 min用752紫外分光光度计在波长485nm处，测对应的吸光度(A)值，对脱氢酶活性作图，以试剂空白作对照，绘制标准曲线。
（4）生物膜脱氢酶活性测定取生物膜制备液2mL于带塞试管中，依次加入Tris-HCl缓冲液、0.1 mol·L-1葡萄糖液、0.5％TTC各2 mL，置入37±1℃恒温箱中培养6 h后取出，加2滴浓硫酸终止反应，准确加入5 mL甲苯，振摇，在4000 rpm下离心5 min，取有机溶剂层比色。
在上述条件下，将1h产生1µgTF的量为1个酶活力单位。
2.4 活性生物量2.4.1 活性生物量的分析方法目前，测定生物膜中活性生物量的主要方法有平板计数法和生物化学成分分析法（何振立，1994）。
前者是在显微镜下计数，并测定各类微生物体的体积大小，然后根据一定观察面积上微生物的数目、体积及微生物的比重计算出每克生物膜所含的微生物量；或根据微生物体的干物质含量及干物质含碳量(通常为47％)，进一步换算成每克生物膜微生物体的碳含量。
微生物的比重、干物质含量及含碳量等参数一般通过纯培养试验获得。
直接计数法技术难度大，计数和体积测量都可能发生较大误差，因此不太适宜用作常规分析(Bakken and Olsen, 1983;Bratbak, 1985)。
后者主要有总腺苷酸法、胞壁酸法和脂磷法等，这些方法也受转换因子的限制具有一定的不确定性；此外，这些方法，技术比较繁琐、耗时，在某些测定中，需要比较贵重的仪器等。
为方便有效地测定生物膜活性生物量，Findlay 等人(Findlay et al., 1989)对脂磷生物化学法的提取、消化和比色等程序加以改进，经过改进后，脂磷法使用更容易，适用范围更广泛。
磷脂存在于所有活性细胞的细胞膜中，是所有细胞中生物膜（biologicalmembrane）的主要组分，这些磷脂能被非常灵敏地提取和定量；当细胞衰亡时，磷脂会很快被降解，所以，死细胞中脂磷含量很低。
因此，可以用脂磷含量近似表示活性生物量的多少，即通过测定与脂结合的磷的方法来定量生表示生物膜的活性生物量。
脂磷分析法测定的是样品的生物总量。
脂磷法已经被证明是一种测定生物膜活性生物量的好方法(Arnaiz et al., 2007) 。
生物量的结果以nmolLipid-P ·g-1填料（或nmol Lipid-P ·mL-1填料）表示，1nmol P 约相当于大肠杆菌（E.Coli）大小的细胞108个。
2.4.2 本课题测定生物膜活性生物量方法本课题实验采用脂磷法测定生物膜活性生物量。
具体方法为：（1）试剂过硫酸钾、抗坏血酸、钼酸盐溶液按总磷测定的钼酸铵分光光度法制备。
（2）工作曲线的绘制以KH2PO4 溶液绘制标准曲线(标准贮备液：50μgP·mL-1；标准溶液：吸取标准贮备液1mL移入50mL容量瓶中，稀释至刻度线，摇匀，浓度为1μgP·mL-1)。
分别吸取标准溶液0.00mL，0.05mL，0.10 mL，0.20mL，0.40mL，0.75mL，1.00mL，1.50mL，2.00mL加入10mL比色管中，稀释至10mL标线。