免疫检测法及其应用
免疫学临床应用
（二） 抗原或抗体的检测方法
凝集反应 沉淀反应 补体参与的抗原抗体反应 免疫标记技术
（一）凝集反应（agglutination）
颗粒性抗原（红细胞、细菌、 乳胶颗粒等）与 抗体特异性结合，形成肉眼可见的凝集块。
1 、直接凝集(direct agglutination) 玻片凝集、试管凝集
2、间接凝集（indirect agglutination） 可溶性抗原包被在乳胶颗粒或红细胞表面，与相应 抗 体混合出现的凝集现象。
3、细胞因子检测
可用于鉴定分离的淋巴细胞亚群，监测某些疾病状态的细胞免疫功 能。IL-2、IL-2R、rIFN 、TNF等检测。
①免疫学方法：ELISA、RIA等。
②细胞生物学方法 ③分子生物学方法，如聚合酶链反应（PCR）法等
4、体内免疫细胞功能测定：皮肤试验
（1）迟发型超敏反应：旧结核菌素试验（ OT试验 ） 皮试（+）——有一定的细胞免疫能力 皮试（—）——细胞免疫功能缺损
免疫重建(immunoreconstitution)
将免疫功能正常个体的造血干细胞或淋巴细胞移植 给患有免疫功能缺陷的个体，使后者的免疫功能全部 或部分得到恢复。
一、免疫增强疗法和免疫抑制疗法
二、特异性免疫治疗和非特异性免疫治疗
三、主动免疫治疗（active immunotherapy） 和被动免疫治疗（passive immunotherapy）
（三）计划免疫
二、新型疫苗的发展 三、疫苗的应用
1、抗感染 2、抗肿瘤 3、计划生育 4、防止免疫病理损伤
复习题
一、名词解释 凝集反应、沉淀反应、ELISA、人工主动免疫、 人工被动免疫、类毒素、LAK细胞、TIL细胞
二、问答题 1、简述抗原抗体反应的特点。 2、何谓免疫标记技术？简述三大免疫标记技术 的原理和应用。 3、试比较人工主动免疫与人工被动免疫。
免疫检测方法的发展和应用前景
免疫检测方法的发展和应用前景随着生物技术的不断发展，免疫检测方法得到了广泛应用，成为了现代医学诊断领域的重要手段之一。
免疫检测方法可以检测体内外的各种物质，如微生物、细胞、药物、激素、蛋白质等。
随着技术的进步，免疫检测方法的发展也呈现出多样性和高灵敏度，逐渐成为一种简单、快速、经济、准确、可靠的检测手段。
本文将对免疫检测方法的发展及应用前景进行探讨。
一、免疫检测方法的发展1.传统免疫检测方法传统免疫检测方法主要包括放射免疫法、酶联免疫吸附法（ELISA）和免疫印迹法（Western Blotting）。
放射免疫法由于使用放射性同位素，已经逐渐被淘汰。
ELISA和Western Blotting由于具有灵敏度高、特异性好、操作简单等优点，至今仍被广泛应用。
2.现代免疫检测方法现代免疫检测方法主要包括荧光、化学发光、生物传感器等。
荧光和化学发光具有高灵敏度、高特异性、操作简单等优点，成为了分子诊断的常用方法。
生物传感器是一种新型免疫检测方法，它将光学、电子、机械、化学等多种技术相结合，具有检测速度快、准确度高等优点。
3.手持式免疫检测设备近年来，手持式免疫检测设备在诊断领域得到了广泛应用。
这种设备小巧、便携、易操作，可以在野外、家庭、医院等场合进行检测。
这种设备可以检测多种物质，如细菌、病毒、激素等。
二、免疫检测方法的应用前景1.临床诊断领域在临床诊断领域，免疫检测方法已经成为了一种常用的手段。
免疫检测可以用于癌症、心血管疾病、感染性疾病等的早期诊断和治疗监测。
同时，手持式免疫检测设备可以在医护人员无法到达的地区进行检测，提高了医疗服务的水平。
2.食品安全领域在食品安全领域，免疫检测可以用于检测食品中的有害物质和添加剂，如重金属、农药、防腐剂等。
免疫检测方法可以快速、准确地检测出有害物质的种类和含量，保障消费者的健康。
3.环境检测领域在环境检测领域，免疫检测可以用于检测环境中的有害物质，如工业废水、城市污水等。
检验免疫项目
检验免疫项目随着医学科技的不断进步，人们对疾病的认识越来越深入，预防和治疗的手段也越来越多样化。
其中，免疫检验项目是一种常见的检测手段，通过检测人体内的免疫反应来判断是否患病或对某种病原体产生了免疫力。
本文将从免疫检验的基本原理、常见的免疫检验项目以及其应用等方面进行探讨。
一、免疫检验的基本原理免疫检验是利用人体免疫系统的特异性反应原理，通过检测血清或其他体液中的抗体或抗原，来判断人体免疫系统对某种病原体的反应情况。
免疫检验包括直接免疫法和间接免疫法两种。
直接免疫法是指直接检测病原体或其产生的抗原，常用的方法有酶联免疫吸附试验（ELISA）、放射免疫测定（RIA）等。
这些方法通过检测血清或其他体液中的特异性抗体或抗原来判断是否患病或对某种病原体产生了免疫力。
间接免疫法是指通过检测血清或其他体液中的特异性抗体来判断是否患病或对某种病原体产生了免疫力。
常用的方法有补体结合试验（CHT）、凝集试验（AGT）等。
二、常见的免疫检验项目1. 乙肝病毒检测乙肝是一种由乙型肝炎病毒引起的疾病，常见的检测方法有HBsAg、HBsAb、HBcAb、HBeAg、HBeAb等。
其中，HBsAg是检测乙肝病毒是否存在的指标，HBsAb是检测人体是否对病毒产生了免疫力的指标，HBcAb是检测人体是否感染了乙肝病毒的指标，HBeAg和HBeAb则是判断病毒活动性的指标。
2. 艾滋病毒检测艾滋病是一种由人类免疫缺陷病毒（HIV）引起的疾病，常见的检测方法有抗HIV抗体检测、HIV病毒核酸检测等。
抗HIV抗体检测是检测人体是否感染了HIV的指标，HIV病毒核酸检测则是检测病毒是否存在的指标。
3. 梅毒检测梅毒是一种由梅毒螺旋体引起的性传播疾病，常见的检测方法有梅毒螺旋体抗体检测、梅毒螺旋体DNA检测等。
梅毒螺旋体抗体检测是检测人体是否感染了梅毒螺旋体的指标，梅毒螺旋体DNA检测则是检测病原体是否存在的指标。
4. 结核病检测结核病是一种由结核分枝杆菌引起的疾病，常见的检测方法有结核分枝杆菌抗体检测、结核分枝杆菌DNA检测等。
抗体的检测与临床应用
抗体的检测与临床应用抗体是一种能够识别和结合特定抗原的蛋白质分子，它在人体的免疫系统中具有重要的作用。
抗体的检测与临床应用是现代医学领域中至关重要的一环，可以帮助医生诊断疾病、评估疾病的病情和治疗效果。
本文将就抗体的检测方法和在临床应用中的重要性进行探讨。
一、抗体的检测方法1. 免疫层析法免疫层析法是一种简单、快速、灵敏且具有较高特异性的抗体检测方法。
它通过在试验纸条上固定抗体试剂和抗原试剂，利用抗体和抗原之间的特异性结合来检测目标抗体的存在，常用于急性感染病毒抗体的检测。
2. 免疫测定法免疫测定法是一种广泛应用于临床实验室的抗体检测技术，包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、放射免疫测定法（RIA）等。
这些方法能够准确、敏感地检测出目标抗体，被广泛用于实验室诊断、疾病筛查和药物监测等领域。
3. 免疫荧光法免疫荧光法是一种高度特异性和敏感性的抗体检测技术。
通过对样本中的抗体进行荧光染色，观察其在荧光显微镜下是否结合到特定抗原上，可以达到检测抗体的目的，被广泛用于自身免疫性疾病和传染病的诊断。
二、抗体的临床应用1. 疾病诊断抗体的检测在疾病诊断中起着不可替代的作用。
临床医生可以通过检测患者体内的特定抗体水平，判断其是否感染某种病原体或患有某种特定疾病，如HIV抗体检测、乙肝抗体检测等，有助于及早发现疾病并采取相应的治疗措施。
2. 疫苗接种疫苗接种是利用抗原引起机体产生抗体，从而形成免疫保护的一种预防性医学措施。
在接种疫苗前，医生通常会先对患者进行抗体检测，以确定其免疫状态，从而确定是否需要接种疫苗以及疫苗的接种剂量。
3. 疗效评估在治疗过程中，医生可以通过定期检测患者体内特定抗体的水平，来评估治疗的疗效和疾病的病情变化。
比如在肿瘤治疗中，通过监测患者血清中肿瘤标志物抗体的水平，来判断肿瘤的生长状态和预后。
4. 输血安全在输血过程中，抗体的检测也扮演着重要的角色。
通过对供血者和受血者的抗体进行检测，可以减少输血后的不良反应，保障输血的安全性。
免疫学检测技术及应用
划痕法
细胞因子的检测技术
一、 生物学检测技术 二、 免疫学检测技术 三、分子生物学检测技术
依赖细胞株测定法 ELISA法
分子杂交、PCR 等检测mRNA
细胞因子检测的特点
• 样品含量低 •样品具有时效性 •生物效应特异性差
Figure 14-12
细胞因子的功能
Cell activation
／immunogold staining)
（一）免疫荧光技术(又称荧光抗体技术) 原理：用荧光素(如异硫氰酸荧光素、罗
丹明B200等) 标记抗体(荧光抗体)，用荧光 抗体浸染细胞或组织切片，抗原与荧光抗体 结合，于荧光显微镜下观察荧光，确定被检 抗原的存在。
免疫荧光技术包括：
直接法
间接法
间接补体增强法
ELISA法： 直接法 间接法 双抗体夹心法(双位点法) 竞争法
ELISA
(三) 同位素标记技术(isotope-labelling technique) 放射免疫分析(radioimmunoassay,
RIA) 是一种用放射性同位素分析抗原抗体反应 相结合方法。 优点：灵敏度高, 可检测0.001pg／mL
Direct and indirect immunofluorescence staining of membrane antigen (mAg).
（二）免疫酶技术(immunoenzymatic techniques)
是将抗原抗体反应与酶催化底物的作用 相结合的一种方法。
主要有两种类型： 1.免疫酶染色 2.酶免疫测定（enzyme immunoassay, EIA）
•3H-胸腺嘧啶核苷参入法（3H-TdR）: 间接观察DNA 合成含量。灵敏度高，具有放射性。 •四甲基偶氮唑盐法（MTT）: MTT商品名为噻唑蓝。 原理：活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶可将外源性 MTT还原成蓝紫色结晶-甲瓒（formazan）, DMSO使 其溶解，酶标分析仪检测。简便，灵敏度高，稳定性 差。
免疫检测技术在生物医学领域的应用
免疫检测技术在生物医学领域的应用免疫检测技术是生物医学领域中的一种重要技术手段，用于检测和诊断各种疾病以及研究生物分子的结构和功能。
该技术以特异性抗原-抗体相互作用为基础，利用抗体与抗原的高度特异性和亲和力进行生物分子的检测和分析。
一、免疫检测技术的分类免疫检测技术可以分为直接法和间接法两种。
直接法是将标记抗体直接与待检生物分子结合，来检测其存在与否。
直接法具有操作简单、结果直观、检测时间短的特点，但其灵敏度相对来说较低。
间接法则是将未标记的抗体与待检测生物分子结合，再用标记抗体与结合到生物分子的抗体相互作用，最后测定标记物的信号强度。
间接法适用于低浓度生物分子的检测，其灵敏度比直接法高。
在免疫检测技术中，最常见的是酶联免疫吸附实验（ELISA），其灵敏度高、操作简单、对多种生物分子的检测和定量分析都有很好的效果，因此广泛应用在医疗和生物学研究领域。
二、免疫检测技术在医学领域中的应用1. 免疫检测技术在感染病毒检测中的应用在感染病毒的检测中，免疫检测技术被广泛应用。
例如ELISA技术可以用于检测患者的血清中是否存在病毒抗体，对于诊断病毒感染具有很高的敏感性和特异性。
2. 免疫检测技术在肿瘤检测中的应用肿瘤治疗的关键在于早期诊断。
免疫检测技术在肿瘤标记物的检测和诊断中也有很好的应用。
例如，前列腺特异性抗原（PSA）检测可以帮助早期发现前列腺癌，为及早治疗提供了可能。
血清中的癌胚抗原（CEA）和α胎蛋白（AFP）等标记物的检测也是肝癌等癌症的诊断重要手段。
3. 免疫检测技术在药物研发中的应用免疫检测技术可以帮助验证候选药物的作用、筛选药物靶点，以及監测药物的代谢和剂量调节。
以ELISA检测血中药浓度为例，可以非常直接地测定药物在体内的水平，对药物疗效和安全性评价具有非常重要的作用。
4. 免疫检测技术在免疫治疗中的应用随着生物技术的不断发展，免疫治疗成为新的疗法。
其中，多肽和肽类药物已成为临床治疗的热点之一，而免疫检测技术可以帮助有效监测其治疗效果。
免疫检测技术的新进展与应用
免疫检测技术的新进展与应用随着科技的不断发展和进步，很多原本不容易被察觉的病毒和疾病，如今都可以通过免疫检测技术来进行检测和诊断。
免疫检测技术可以利用人体自身的免疫系统来检测制定特定抗体。
而近年来，免疫检测技术也随着新科技的推动而迅速发展，更加准确和实用化，应用场景也越来越广泛。
一、技术基础免疫检测一般分为两种：直接和间接免疫检测。
直接检测是通过抗原-抗体反应来检测样本中的抗原或抗体。
常用的直接检测有放射免疫测定和酶联免疫吸附测定等。
间接检测则是通过检测抗体反应来推断样本中的抗原或抗体。
常见的间接检测有血凝法、凝集反应法、免疫荧光法等。
二、新技术随着科技不断发展，新型的免疫检测技术也不断出现，例如：1. 免疫层析技术：这是一种基于分子大小层次分离的技术。
常用的免疫层析实现方法有电泳法、吸附法、沉淀法等。
它具有简便、快速、经济等特点，被广泛用于单克隆抗体的制备以及药物分离纯化等。
2. 贡献基因工程技术：基因工程技术使得免疫检测的敏感度和特异性大大提高。
例如，通过重组DNA技术，可以生产出高亲和力的单克隆抗体，用于检测非常低浓度的分子和病原体。
3. 电化学免疫传感技术：这是一种基于电化学特性的检测技术。
与传统的免疫检测方法相比，电化学免疫传感技术具有快速、简便、高效等特点。
这是一种高灵敏度、高稳定性的检测技术，已经广泛应用于多种疾病的诊断和病原体的检测。
4. 快速免疫检测技术：这是一种快速鉴定病原体的技术，常用于外出野营、医学急救和实验室诊断等场合。
快速免疫检测技术需要简单设备和操作步骤，而且使用速度很快，一般不需要特殊的专业培训和设备。
三、新应用免疫检测技术的应用场景越来越广泛，除了传统的医学领域外，应用范围也涵盖了很多其他领域。
例如：1. 食品安全检测：食品中可能存在一些致病菌，如沙门氏菌等，通过对食品中的致病菌进行免疫检测，可以及时预防和控制食物中毒的发生。
2. 农业养殖：农业养殖中病毒的侵蚀，会带来无法计量的经济损失。
免疫检测法PPT课件
缺点
01
02
03
04
交叉反应
有时会出现交叉反应，导致假 阳性结果。
抗体依赖
免疫检测法依赖于抗体的质量 和特异性，因此抗体制备的难
度和成本较高。
样品处理要求高
对于某些生物样品，需要进行 复杂的预处理才能进行检测。
检测时间较长
相对于一些快速检测方法，免 疫检测法可能需要更长时间才
能获得结果。
改进方向
分类
根据检测原理和应用领域，免疫 检测法可分为酶联免疫吸附试验 、放射免疫分析、荧光免疫分析 、化学发光免疫分析等。
免疫检测法的应用领域
01
02
03
医学诊断
用于检测人体内的肿瘤标 志物、激素、病毒抗原、 药物残留等，辅助医生进 行疾病诊断和病情监测。
食品安全
用于检测食品中的农药残 留、兽药残留、毒素等有 害物质，保障食品安全。
情监测。
激素水平检测
性激素检测
通过检测性激素水平，有助于评估男性和女性的生殖健康状况，如 睾酮、雌二醇、孕酮等激素的检测。
甲状腺激素检测
甲状腺激素对人体的新陈代谢和生长发育具有重要作用，通过检测 甲状腺激素水平，有助于甲状腺功能亢进和减退的诊断和治疗。
肾上腺激素检测
肾上腺激素与人体应激反应、免疫功能等方面密切相关，通过检测肾 上腺激素水平，有助于相关疾病的诊断和治疗。Fra bibliotek传染病检测
结核病检测
性病检测
通过检测结核病抗体，有助于早期发 现和诊断结核病，为预防和治疗提供 依据。
免疫检测法在性病检测中发挥着重要 作用，如梅毒、淋病、尖锐湿疣等， 通过检测相关抗体和抗原，及时发现 和治疗性病。
肝炎检测
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免疫标记技术
编辑版ppt
免疫标记技术（immunolabelling technique）: 是指用荧光素、放射性同位素、酶、发光剂
或电子致密物质等作为示踪剂，标记抗体或抗原 进行的抗原抗体反应。
特点：高度灵敏、特异、快速，定性、定量、定 位 分类：免疫酶技术、免疫荧光技术、放射免疫技 术、免疫电镜技术、免疫胶体金技术和发光免疫 测定
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免疫酶技术及其应用
——ELISA
1
酶联免疫法
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ELISA
50年代的免疫荧光（IFA）和60年代的放射性免疫 （RIA）分析技术之后，70年代初又建立了用酶来标记 抗原或抗体的分析技术
1971年瑞典学者Engvail和Perlmann,荷兰学者Van Weerman和Schuurs分别报道将免疫技术发展为检测体 液中微量物质的固相免疫测定方法，即酶联免疫吸附 测定法 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA) 。它是一种特殊的试剂分析方法，是在免疫酶 技术( immunoenzymatic techniques ) 的基础上发展 起来的一种免疫测定技术 。
（4）加入针对抗原的酶标抗体：使之与结合在固 相上的抗原反应结合，洗涤。
（5）加底物显色：如有颜色显示，则表示标本中 存在特异性IgM抗体，是为阳性反应。
20
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亲和素-生物素-ELISA法
亲和素是一种糖蛋白，可由蛋清中提取。每个分 子由4个亚基组成，可以和4个生物素分子亲密结 合。
3
免疫酶技术
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免疫酶技术(enzyme immunoassay)：
是将抗原和抗体的特异性免疫反应与酶的催 化反应相结合而建立的一种免疫检测技术。
就是利用酶标记抗体或抗原，以检测相应抗 原或抗体的一种免疫学标记技术。
常用的酶：辣根过氧化物酶(HRP) 碱性磷酸酶（AP）。
4
基本原理
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此法适用于检验各种二价或二价以上的大分子 抗原，如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。 不能用于分子量小于5000的半抗原或小分子单 价抗原的测定。
11
双抗原夹心法测抗体
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反应模式与双抗体夹心法类似。
用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检 测相应的抗体。
此法中受检标本不需稀释，可直接用于测定。
①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫 活性。
②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶 标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测 定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原 或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。 用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他 物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物 质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催 化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相 关，故可根据颜色反应的深浅来进行定性或定量分析。由 于酶的催化频率很高，故可极大地放大反应效果，从而使 测定方法达到很高的敏感度。
5
酶联免疫法
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ELISA
6
编辑版ppt 7
实验材料
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ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。 在这种测定方法中有3种必要的材料：
1.固相的抗原或抗体
2.酶标记的抗原或抗体
3.酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性 状以及检测的具备条件，可设计出各种不同类 型的检测方法。
乙肝标志物中HBsAb的检测常采用本法。关 键在于根据抗原结构的不同制备酶标抗原。
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间接法测定抗体
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13
间接法的特点
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本法主要用于对病原体抗体的检测而进行传染病 的诊断。
间接法的优点是只要变换包被抗原就可利用同一 酶标抗体检测相应抗体。
间接法成功的关键在于抗原的纯度。特别应注意 除去能与一般健康人血清发生反应的杂质。若抗 原中含有无关蛋白，也会因竟争吸附而影响包被 效果。
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竞争法测抗体
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当抗原材料中的干扰物质不易除去，或不易得
到足够的纯化抗原时，可用此法检测特异性抗 体。
标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相 抗原结合。标本中抗体量越多，结合在固相上 的酶标抗体愈少，因此阳性反应呈色浅于阴性 反应。
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捕获包被法测抗体
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样品中针对某些抗原的特异性IgM常和特异性 IgG同时存在，后者会干扰IgM抗体的测定。 因此测定IgM抗本多用捕获法。
4.相应的检测仪器.
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检测方法
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1。夹心法 双抗体夹心法测抗原（常用） 双抗原夹心法测抗体
2。间接法测抗体（常用） 3。竞争法
竞争法测抗原 竞争法测抗体 4。捕获包被法测抗体 5。亲和素-生物素 ELISA法
9
双抗体夹心测抗原
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双抗体夹心测抗原
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待测抗原须有两个可以与抗体结合的部位，其 一端与包被于固相载体上的抗体结合，另一端 与酶标记的特异性抗体结合。
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竞争法测抗原
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◆如受检标本中无抗原，则酶标抗原能顺利地与固 相抗体结合。
◆如受检标本中含有抗原，则与酶标抗原以同样的 机会与固相抗体结合，竞争性地占去了酶标抗原 与固相载体结合的机会，使酶标抗原与固相载体 的结合量减少。
◆参考管中只加酶标抗原，孵育后，酶标抗原与固 相抗体的结合最充分。
先将所有样品IgM（包括特异性IgM和非特异 性IgM）固定在固相上，在去除IgG后再测定 特异性IgM。
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操作步骤如下
编辑版ppt
（1）将抗IgM抗体连接在固相载体上，形成固相 抗IgM，洗涤。
（2）加入稀释的待测标本：孵育后样品中的IgM 抗体被固相抗体捕获，洗涤。
（3）加入特异性抗原试剂：其仅与固相上的特异 性IgM结合，洗涤。
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Hale Waihona Puke 争法测抗原编辑版ppt15
竞争法测抗原
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（1）将特异抗体与固相载体连接，形成固相抗体。 洗涤。
（2）待测管中加受检标本和一定量酶标抗原的混 合溶液，使之与固相抗体反应，孵育洗涤。
（3）加底物显色：参考管中由于结合的酶标抗原 最多，故颜色最深。待测管颜色越淡，表示标本 中抗原含量越多。参考管颜色深度与待测管颜色 深度之差，代表受检标本抗原的量。