玉米成分转基因检测知识
PCR扩增检测转基因大豆、玉米
【实验步骤】 基因组DNA浓度和纯度的鉴定
取5μL样品溶于95μL三重蒸馏水中，用 Biophotometer分 析DNA的浓度，通过它对提取大豆DNA测OD值。并记 录数据。由OD260nm/OD280nm判定基因组DNA的浓度， 其比值在1.7~2.0之间较好，符合PCR检测要求。
聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction, PCR)是 一种选择性体外扩增DNA的方法，其基本原理类 似 于 DNA 的 天 然 复 制 过 程 。 它 包 括 : 变 性 (Denature) 、 退火(Anneal)和延伸(Extension)三个基
外源基因( EPSPS)特异性扩增 12 3 4567M 12
外源终止子(NOS) 特异性扩增
外源启动子(CaMV35S)特 异性扩增
1 未加模板对照 2 转基因大豆、玉米 3~7 非转基因大豆、玉米
PCR假阳性结果 1． 引物设计不当，应调换引物 2． 循环参数不合适，导致非特异性扩增 3． 靶序列的交叉污染
大豆凝集素(Lectin)基因、玉米特异性内源基
因IVR为内参 ？
西医学是最近三四百年来建立在解 剖学、 生物学 及现代 科学技 术基础 上、发 展起来 的一门 以“解 剖人、 肉体人 ”为概 念的、 新兴的 现代医 学科学 理论体 系。主 要采用 科学实 验方法 ，从宏 观到微 观，直 至目前 的分子 基因层 次水平 ，发展 极为迅 速，超 过其它 任何一 门医学 科学， 成为世 界医学 史上的 主流。 医学、比较医学、后现代医学、行为 医学等 所谓“ 医学” ，都称 不上一 门独立 的医学 科学， 关于这 一点在 灵魂医 学有关 章节中 将有相 关点评 。
【实验步骤】
大豆、玉米DNA 提取--改良的CTAB法
玉米转基因成分筛查方法比较
http ：//hljnykx ・ haasep. cnDOI ： 10.11942/j ・ issnl002-2767・ 2020.09・ 0078■黑龙江农业科学2020(9):78-84Heilongjiang Agricultural Sciences张海波，肖长文，刘冰，等•玉米转基因成分筛查方法比较[J].黑龙江农业科学,2020(9):78-84.玉米转基因成分筛查方法比较张海波⑺，肖长文3,刘冰⑺，张田1显，张英1，2(1.陕西省种子工作总站，陕西西妥710018；2.农业农村部农作物种子质量监督检验测试中心(西安)，陕西西安710018；3.黑龙江省种业技术服务中心，黑龙江哈尔滨150008)摘要：玉米转基因成分的筛查可联合利用CaMV35S 启动子(P-35S)和NOS 终止子(T-NOS)两个元件的组 合，但P-35S.T-NOS 有多组可供选择的检测方法。
本文通过检测标准查询、序列比对、特异性试验和灵敏度试验验证等方式，比较了检测标准中P-35S 、T-NOS 三组检测方法。
结果表明：3组标准检测方法对转基因玉 米的筛查表现出较强的特异性，检测灵敏度均可达到1 g ・kg"。
3组筛查方法可对玉米中的转基因成分进行快速、准确的筛查。
关键词：转基因检测；标准方法；CaMV35S 启动子；灵敏度玉米是中国重要的粮食作物和经济作物。
2018年全国玉米产量25 717. 39万t,是我国产 量最高的粮食作物「口。
中国的玉米产量仅次于美 国，为满足国内消费，中国每年仍需进口大量玉 米⑵，其中大部分是转基因玉米。
截至目前，获准作为加工原料进口到中国的转基因玉米转化体, 有耐除草剂玉米 T25、NK603、GA21、40278、 MON87427,抗虫玉米 血176、MON89034、MIR604、MON810、MLR162、TC1507、Bill, 5307.59122,抗虫耐除草剂玉米Btll X GA21、MON88017、4114,品种改良玉米 Event 3272 和 耐旱玉米MON87460&4],转基因技术的应用已成为国内外玉米育种的重要手段囚。
玉米中转基因成分的筛查检测策略
玉米中转基因成分的筛查检测策略作者：王培珍来源：《农民致富之友》2020年第24期玉米作为禾本科一年生的草本植物，其营养成分丰富，提供大量的碳水化合物。
转基因的玉米具有较强的耐寒性、耐旱性、耐贫瘠性等优良性质，容易种植。
但转基因玉米也存在着一定安全隐患，转基因检验受到广大消费者的重视。
基于此，本文将主要论述玉米中转基因成分的筛查检验策略。
一、玉米中转基因成分的筛查检测的重要性转基因成分检验技术是转基因生物研究和安全管理的基础，检验人员通过技术手段判断目的基因导入到玉米受体细胞中，并检验玉米受体细胞是否成功表达相关性状。
目前已经有65个国家和地区对转基因产品采取强制的标志性管理，2015年10月开始实行的中华人民共和国安全法第69条中明确规定了转基因食品应该明确标注。
转基因检验行业快速发展，因此建立一个迅速准确的基因检验方法，是当前检测技术所面临的关键问题。
截止到2018年中国玉米产量25733万吨，中国的转基因玉米转化事件有16个，转基因玉米种类过多，同时存在变异亚种，检验人员应该综合DNA序列分析，选取合适的基因元件，确定转基因玉米的筛查方法。
二、玉米中转基因成分的筛查检测技术1、PCR检验技术PCR检验技术是一种灵敏度高，目前发展较为成熟的转基因检验方法，根据特异性主要分为筛查基因特异性、翻译产物特异性等。
PCR检验的主要基因包括调控基因、标记基因、及导入到玉米细胞中的目的基因。
其中调控基因主要包括基因中前端和后端的启动子与终止子，标记基因主要包括抗草丁膦基因、抗卡那霉素基因。
PCR技术在玉米转基因成分检验中有很大的应用，但由于转基因玉米中含有多个目的基因，往往需要多重PCR进行检验，其快速提高检验效率，同时保证玉米中转基因成分的特异性。
2、环介导等温扩增检验技术环介导等温扩增检验技术作为一种新兴的DNA扩增方法，这种技术主要利用了特异性的核糖核苷酸引物，综合应用DNA聚合酶，促进DNA在常温下快速增殖，完成核酸的快速扩增。
抗除草剂转基因玉米的快速鉴定方法
抗除草剂转基因玉米的快速鉴定方法作者：王莹袁英来源：《江苏农业科学》2014年第04期摘要：以含不与除草甘膦结合的突变型5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合酶基因除草剂筛选标记的转基因玉米为材料，通过叶片喷雾和叶片离体平板培养等试验，建立快速非分子生物学抗除草剂转基因玉米的鉴定方法。
结果表明：用5 000 mg/L草甘膦叶片喷雾和用70 mg/L草甘膦叶片离体培养可快速准确地鉴定是否转入除草剂基因。
关键词：转基因玉米；抗除草剂；草甘膦；鉴定方法中图分类号： S513.01 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2014）04-0054-03收稿日期：2013-08-15基金项目：吉林省财政厅育种项目。
作者简介：王莹（1982—），女，吉林长春人，硕士，讲师，从事生物技术方向研究。
Tel：（0431）84602461；E-mail：grammy1981@。
通信作者：袁英，硕士，研究员，从事作物遗传转化研究。
Tel：（0431）87063098；E-mail：32854085@。
随着转基因作物商业化生产的发展，转基因作物种植面积从1996年的170万hm2增加到2012年的1.7亿hm2，增长了99倍，这是前所未有的突破，其中抗除草剂作物种植面积最大[1]。
在植物转基因研究过程中，通常采用选择性标记基因提高筛选效率，而除草剂基因是较常用的筛选标记基因，而5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合酶（EPSPS）基因最常用。
目前，国际上种植面积最大的抗除草剂转基因玉米是转EPSPS基因抗农达除草剂玉米[2]。
近几年，国内对抗除草剂转基因玉米和抗除草剂筛选方法的研究也取得了很大的成功[3-11]。
在转基因研究和安全评价等过程中对转基因植株的鉴定是必不可少的环节[12]，传统上初步鉴定转基因的方法是利用聚合酶链反应（PCR）鉴定目的基因DNA片段是否存在；但是PCR方法步骤繁琐，做大量鉴定运用时有一定的局限性。
利用筛选标记基因的农艺性状，建立快速有效的非生物鉴定方法非常必要。
转基因玉米识别
转基因玉米识别转基因玉米是一种经过基因工程技术改变了自身基因组的玉米品种。
转基因技术的应用在农业领域极为广泛，其目的是为了提高作物产量、增强抗病抗虫能力等。
然而，转基因食品引发的争议从未停止，其中转基因玉米识别成为一个非常重要的问题。
本文将从转基因玉米的定义、转基因玉米识别的方法和技术以及转基因玉米识别的重要性等方面展开讨论。
首先，转基因玉米指的是经过人为改变的基因组的玉米品种。
通常转基因玉米与传统玉米相比，会加入一些来自其他物种的基因，从而使其具备更好的抗虫抗草的特性。
通过这种基因改变，转基因玉米可以在不利环境中生长更健壮，产量更高。
然而，由于转基因食品与传统食品存在风险差异，转基因玉米的识别变得极为重要。
其次，转基因玉米的识别可以通过多种方法和技术来实现。
目前最常用的方法是基因检测技术，例如PCR和ELISA等。
PCR技术可以通过目标基因的扩增来检测是否存在转基因成分，而ELISA则是通过特异性抗体的结合来检测是否含有特定的蛋白质。
此外，还可以利用基因芯片和DNA测序等技术来实现转基因玉米的识别。
这些识别技术能够准确、快速地检测出转基因成分，为转基因食品监管提供科学依据。
然而，转基因玉米的识别具有重要的意义。
首先，它是保障消费者权益的重要手段。
许多消费者对转基因食品持怀疑态度，希望能够自主选择是否食用。
因此，转基因玉米的识别可以帮助消费者明确是否存在转基因成分，从而保护消费者的选择权。
其次，转基因玉米的识别对于食品安全具有重要意义。
尽管转基因食品在经过一系列严格的安全评价后才能上市，但依然存在一定的风险。
转基因玉米的识别可以及早发现转基因成分，帮助监管机构实施安全措施，保障公众的健康。
然而，转基因玉米的识别也存在一定的挑战。
首先，转基因玉米的识别技术需要不断更新和改进。
随着转基因技术的不断发展，可能会出现新的转基因品种或新的转基因成分，因此转基因玉米的识别技术需要与时俱进。
其次，转基因玉米的混合问题也需要解决。
转基因玉米的鉴别方法
转基因玉米的鉴别方法近些年来，转基因技术已被广泛应用于生物学研究领域。
其优势在于能够大大提高种子性状和抗病能力，以及更加持久地改变植物结构。
转基因玉米是它的一个典型例子。
为了更好地获得转基因玉米的品质，必须鉴别其真实身份。
本文讨论了转基因玉米的鉴别方法。
转基因玉米鉴别方法一般分为实验室和田间两种。
实验室鉴别方法包括PCR法、测序法以及染色体分析法。
PCR法是通过分析转基因玉米的特定DNA序列来鉴别其真实身份的方法。
测序法是通过翻译和序列比对来确定转基因玉米的真实身份的方法。
染色体分析法是通过检测植物染色体的数目和形状来判断转基因玉米的真实身份。
除了实验室鉴别方法外，转基因玉米还有一种田间鉴别方法。
这种方法需要在田间观察植株的形态特征，以及收获的玉米穗的外观特征。
一般来说，转基因玉米植株的外观特征有：籽粒大小明显较大，形状均匀，而非转基因玉米植株则有较多的尖尖玉；收获的玉米穗有非常明显的穗颈，籽粒大小更大，形状均匀，表皮较硬。
转基因玉米的鉴别方法在获取优良品种和植物生物学研究方面具有重要意义。
把实验室鉴别方法和田间观察方法多结合起来，可以更精确地鉴别转基因玉米的真实身份，从而获得较为优良的品种。
但是，无论实验室还是田间鉴别方法，都需要具备一定的专业技能才能得到准确结果，因此应该在有专业背景的人员的指导下进行。
综上所述，转基因玉米的鉴别方法一般分为实验室鉴别方法和田间鉴别方法。
实验室鉴别方法包括PCR法、测序法以及染色体分析法；田间鉴别方法主要是通过观察植株的形态特征以及收获的玉米穗的外观特征来鉴别。
为了获得更优良的品种，应该将实验室鉴别方法和田间观察方法结合，并在有专业背景的人员的指导下进行。
转基因玉米最简单的辨别方法
转基因玉米最简单的辨别方法什么是转基因玉米？转基因玉米是经过基因工程技术改变了其基因组的玉米品种。
通过引入外源基因，转基因玉米可以表现出与传统玉米不同的特点。
转基因技术的引入旨在改善玉米的耐虫性、耐草药性、抗病性等，以增加产量和改善农作物的质量。
转基因玉米的辨别方法由于转基因玉米与传统玉米的性状非常相似，传统的肉眼观察往往无法直接区分。
然而，科学家们通过不断的研究和发展，已经开发出一些有效的方法来鉴定转基因玉米。
以下是一些可以用于辨别转基因玉米的简单方法。
DNA检测方法通过检测玉米中的DNA序列，可以准确地判断玉米是否为转基因品种。
以下是一些常用的DNA检测方法：1.PCR（聚合酶链反应）：PCR是一种扩增DNA序列的技术，可以通过特定引物扩增转基因DNA的片段。
通过检测扩增产物的大小和特征，可以判断玉米是否为转基因品种。
2.实时荧光PCR：实时荧光PCR结合了PCR技术和荧光检测技术，可以在扩增过程中实时监测DNA的数量和特征。
通过比较样本和参考样品的荧光信号，可以判断玉米是否为转基因品种。
3.基因芯片技术：基因芯片技术利用微阵列芯片上固定的DNA探针，可以同时检测多个基因。
通过比较样本和参考样品的信号强度和特征，可以判断玉米是否为转基因品种。
蛋白质检测方法转基因玉米通常会在其基因组中表达外源基因，并产生相应的蛋白质。
通过检测玉米中的特定蛋白质，可以判断玉米是否为转基因品种。
以下是一些常用的蛋白质检测方法：1.ELISA（酶联免疫吸附试验）：ELISA是一种常用的免疫检测方法，可以通过特定的抗体检测目标蛋白质。
通过比较样本和参考样品的吸光度值，可以判断玉米是否含有转基因蛋白质。
2.质谱法：质谱法是一种分析样品中蛋白质的方法，通过测量蛋白质的质量和带电量，可以确定蛋白质的特征。
通过比较样品和参考样品的质谱图谱，可以判断玉米是否含有转基因蛋白质。
生理学和形态学特征除了分子方法外，还可以通过观察玉米的生理学和形态学特征来推测其是否为转基因品种。
转基因和非转基因玉米鉴别方法
转基因和非转基因玉米鉴别方法近年来，转基因技术在农业领域的应用日益广泛，转基因作物也成为人们关注的热点话题。
而在转基因作物中，转基因玉米占据着非常重要的地位。
但是，对于一般用户来说，很难直接通过外观来区分转基因玉米和非转基因玉米，因此鉴别方法显得尤为重要。
1. 外观鉴别法我们可以通过外观鉴别法来区分转基因玉米和非转基因玉米。
转基因玉米通常会在玉米颗粒表面有一些特殊标记，这些标记往往与转基因技术的相关信息有关。
而非转基因玉米则没有这些特殊标记。
我们还可以通过玉米颗粒的大小、颜色、形状等方面来进行外观鉴别。
2. 检测鉴别法检测鉴别法是一种比较客观和准确的鉴别方法。
通过在实验室中使用专门的设备和试剂，可以检测玉米颗粒中是否含有转基因成分。
这种方法的优势在于可以直接获取到玉米中的遗传物质信息，从而准确判断是否为转基因玉米。
3. 生物学鉴别法生物学鉴别法也是一种常用的鉴别方法。
通过对玉米的生长特性、抗病性、产量等方面进行观察和测量，可以初步判断出玉米是否为转基因种。
转基因玉米往往具有一些特殊的生长特性，这些特性可以被用来区分转基因玉米和非转基因玉米。
4. 分子生物学鉴别法分子生物学鉴别法是一种高级的鉴别方法。
通过采集玉米样品中的DNA，利用PCR等分子生物学技术分析其中是否含有特定的转基因序列，可以准确判断玉米是否为转基因种。
这种方法准确性高，但需要专业的实验室和技术支持。
通过上述的鉴别方法，我们可以比较准确地鉴别出转基因玉米和非转基因玉米。
但需要注意的是，不同的鉴别方法有其各自的优缺点，需要根据具体情况选择合适的方法进行鉴别。
由于转基因技术的不断发展和演变，鉴别方法也需要不断更新和完善。
对于用户来说，鉴别转基因玉米和非转基因玉米是一项重要的工作。
只有进行有效的鉴别，才能真正保障我们的饮食安全，以及促进农业可持续发展。
希望通过各种鉴别方法的研究和应用，能够为用户提供更加安全、健康的食品选择。
在进行转基因和非转基因玉米鉴别时，我们还需要考虑一些其他因素和方法。
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玉米成分转基因检测知识
转基因玉米就是利用现代分子生物技术，把种属关系十分遥远且有用植物的基因导入需要改良的玉米遗传物质中，并使其后代体现出人们所追求的具有稳定遗传性状的玉米。
转基因食品有很多优点：增加作物产量、降低生产成本；增强作物抗虫害、抗病毒等的能力；提高农产品耐贮性。
但转基因食品作为一种新物种，其对人体健康、生态平衡是否具有危害还未确定：可能通过基因漂流影响其他物种；转基因食品可能会引起过敏等等。
比如说水果玉米，就是那种吃起来带甜味的。
颗粒大小差不多，金黄色栗粒的，一般路边烧烤的那种玉米。
彩色玉米，就是栗粒有紫色白色黄色的哪种，这是最原始的转基因玉米了。
下列是对于其它相关转基因成分物质：
◆大豆◆马铃薯◆木瓜◆青椒
◆食用菌◆小麦◆烟草
◆油菜籽◆棉花◆植物性饲料
◆调味品◆食用油脂◆食品半成品、食品成品
◆水稻及其产品◆植物及其加工产品
下面我们来看一下实时荧光PCR反应体系：
试剂名称终浓度ЧL/反应
10×PCR反应缓冲液1× 5
MgCl2（25m mol/L） 2.5 m mol/L 5
dATP(10 m mol/L) 200 n mol/L 1
dGTP(10 m mol/L) 200 n mol/L 1
dCTP（10 m mol/L）200 n mol/L 1
dTTP(10 m mol/L) 100 n mol/L 0.5
dUTP(10 m mol/L) 200 n mol/L 1
UNG酶（1 U/чL）0.5U 0.5
上游引物（10чmol/L）200 n mol/L 1
下游引物（10чmol/L）200 n mol/L 1
探针（5 чmol/L）100 n mol/L 1
Taq酶（5U/чL） 2.5U 0.5
DNA模板（40 ng/чL~50ng/чL）- 5
补水至- 50
注：表中DNA模板为原料的模板量，加工产品可视加工程度适当增加模板量；也可根据具体情况或不同的反应总体积进行适当调整。
1×25
TaMan R Universal PCR Master
Mix(2×)
上游引物（10 чmol/L）150 nmol/L 0.75
下游引物（10чmol/L）150 n mol/L 0.75
DNA模板（40 ng/Чl~50 ng/чL）- 4.0
探针（5 чmol/L）50 nmol/L 0.50
补水至- 50
注：表中DAN模板为原料的模板量，加工产品可视加工程度适当增加模板量；也可根据具体情况或不同的反应总体积进行适当调整。
实时荧光定量PCR的反应参数为：50℃PCR前去污染2min；预变性95℃15s，60℃1min，45个循环。
待测样品外源基因检测Ct值大于或等于40，内源基因检测Ct值小于或等于24，设置的对照结果正常者，则可判定该样品未检出×××基因；
待测样品外源基因检测Ct值小于或等于36，内源基因检测Ct值小于或等于24，设置的对照结果正常者，则可判定该样品检出×××基因；
待测样品外援基因检测Ct值在36~40之间，应重做实时荧光PCR扩增。
再次扩增后的结果Ct值仍小于40，且设置的对照结果正常，则可判定该样品检出×××基因；再次扩增后结果Ct值大于40，且设置的对照结果正常，可判定该样品未检出×××基因。