革兰染色实验报告、抗酸染色法实验报告
实验二 细菌涂(抹)片的制备和革兰氏染色

胞壁脱水、网状结构孔径缩小,通透性降低,使得结晶紫—碘的复合物不
易被洗脱而保留在细胞内。虽经洗脱和复染仍然保持初染剂的蓝紫色。 G细菌则不同,由于其细胞壁肽聚糖层较薄,类脂含量高,所以在脱色处理
时,类脂被乙醇溶解,细胞壁的通透性增大,使结晶紫—碘的复合物比较
容易被洗脱出来,用复染剂复染后,细胞被染上复染剂的颜色。
2、 细菌涂片的制备:讲解并示范涂片、干燥、固定的方法。
3、 细菌常用染色方法:革兰氏染色法
革兰氏染色法: 1. 制片:取待检病料或细菌培养物常规抹(涂)片、干燥、 固定。 2. 初染:滴加结晶紫,染色1-2分钟,水洗。 3. 媒染:用碘液冲去残水,并用碘液覆盖约1分钟,水洗。 4. 脱色:用滤纸吸取或甩去载玻片上的残水,将载玻片倾 斜,在白色背景下,用滴管流加95%乙醇脱色,直至流出的 乙醇无紫色时(20—30秒),立即水洗。
G+菌与G-菌细胞壁的区别
细胞壁
强 度 厚 度 肽聚糖层 肽聚糖量 糖类量 脂类量 磷壁酸80nm 可达50 层 50%~80% 约45% 1%~4% ﹢ ﹣
革兰阴性菌
较疏松 10~15nm 1~2层 5 %~80% 15%~20% 11~22% ﹣ ﹢
革兰氏染色法过程示意图
实验二细菌涂(抹)片的制备和革兰氏染色
目的要求:1、掌握细菌抹片的制备方法和常用染色方法。 2、认识革兰氏染色和抗酸性染色的反应特性。 实验内容: 1、 细菌抹片的制备:
细菌抹片
的制备
玻片准备:透明、洁净、无油渍。 抹片:液体材料、非液体材料、组织脏器材料的抹片方法讲解、示范。 干燥固定:火焰固定和化学固定的示范。讲解其目的及注意事项。
2. 脱色: 3%盐酸酒精脱色30秒~1分钟;用水冲洗。
细菌的简单染色和革兰染色实验报告

实验二:细菌的简单染色和革兰染色一、实验目的1.掌握细菌涂片的制备方法。
2.掌握细菌简单染色和革兰染色法的原理及操作步骤,识别细菌的革兰染色结果。
3.巩固显微镜油镜的使用方法。
4.学习无菌操作技术。
二、实验原理1、染色原理:细菌生长于酸性、中性和碱性溶液时常带负电荷,所以通常采用带正电荷的碱性染料(如美蓝、甲紫、碱性复红或孔雀绿等)使其着色。
当细菌分解糖类产酸时,细菌所带正电荷增加易被带负电的酸性染料(如伊红、酸性复红或刚果红)着色。
2、革兰染色法原理:革兰染色法可根据细菌细胞壁结构和成分的不同,将其分为革兰阳性菌和革兰阴性菌。
革兰阳性细菌的肽聚糖层较厚,经乙醇处理后使之发生脱水作用而使孔径缩小,结晶紫与碘的复合物保留在细胞内而不被脱色;而革兰阴性细菌的肽聚糖层很薄,脂肪含量高,经乙醇处理后部份细胞壁可能被溶解并改变其组织状态,细胞壁孔径大,不能阻止溶剂透入,因而将结晶紫与碘的复合物洗去而被脱色。
另外,革兰染色的差异并不能完全认为是化学的差别,也有物理结构不同的结果。
如酵母菌细胞壁的成份完全与细菌不同,但具有革兰染色阳性反应。
三、实验仪器,材料和用具1、仪器及用具:显微镜、酒精灯、火柴、接种环、载玻片、盖玻片、镊子、擦镜纸、镜油、无菌牙签2、菌种:大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、葡萄球菌、牙垢、未知菌S1和S33、试剂:结晶紫染液、革氏碘液、洗脱液(95%乙醇溶液)、番红染液四、实验步骤(1)简单染色1、载玻片的处理:用纱布将取出的载玻片擦干,把要涂菌的部位在火焰上烤一下,冷却待用。
2、涂片:左手持菌液试管,右手持接种环在火焰上烧灼灭菌,待接种环冷却后在火焰旁从试管中取一环菌液,在洁净无脂的载玻片上涂一直径约2mm的均匀薄膜。
3、干燥:涂片后待其自然干燥。
4、固定:将以干燥好的涂片标本朝上,在酒精灯火焰上通过2~3次,要求载玻片温度不能超过60度,以手背触载片不烫为宜。
5、染色:滴加一滴结晶紫染液,染色1min。
实验九-抗酸染色

临床病原生物学教研室
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一、实验目的:
1.掌握抗酸染色的原理和方法 2掌握结核分支杆菌痰涂片的报告方 法。
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二、实验原理:
❖ 分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质,主要是分 枝菌酸,它包围在肽聚糖的外面,所以分枝杆菌 一般不易着色,要经过加热和延长染色时间来促 使其着色。但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合 后,就很难被酸性脱色剂脱色,故名抗酸染色。
2)脱色: 3%盐酸酒精脱色30’’~1’;用水冲洗。
3)复染:用碱性美兰溶液复染1’,用水冲洗后用吸 水纸吸干。
3、油镜观察
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五、实验结果:
结核杆菌呈红色,常堆积成团,排列无 序,偶呈分枝状生长。 背景及非抗酸性细菌呈兰色。
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六、注意事项:
1、无菌操作 2、涂片厚度要适中 3、固定 4、冲洗 5、染色时间 6、初染加热的温度,勿沸腾
❖ 齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与 石炭酸复红牢固结合成复合物,用盐酸酒精处理 也不脱色。当再加碱性美兰复染后,分枝杆菌仍 然为红色,而其他细菌及背景中的物质为兰色。
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三、实验材料:
细菌:结核杆菌 染液:石炭酸复红液、3%盐酸酒精、碱性美
兰溶液 其它:接种环、酒精灯、载玻片等
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四、实验方法:
1、细菌涂片的制备 1)涂片:20mm*25mm薄涂片或
20mm*15mm厚涂片 2)干燥:自然干燥 3)固定:火焰固定
.四、实验ຫໍສະໝຸດ 法:1、细菌涂片标本的制备
涂片
干燥
固定
2、染 色
1)初染:用玻片夹夹持涂片标本,滴加石炭酸复红 2-3滴,在火焰高处徐徐加热,切勿沸腾,出现蒸汽 即暂时离开,若染液蒸发减少,应再加染液,以免 干涸,加热5-10分钟,待标本冷却后用水冲洗。
革兰氏染色和抗酸染色法

四、注意事项
1、注意涂片不宜过于浓厚。 2、火焰固定温度要适宜。 3、革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色 过度,革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌;如 脱色时间过短,革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳 性菌。脱色时间的长短还受涂片厚薄及乙醇用量多 少等因素的影响,难以严格规定。 4、染色过程中应吸去玻片上的残水,以免染色 液被稀释而影响染色效果。 5、选择幼龄的细菌。G+菌培养12-16h,E.coli 培养24h。若菌龄太老,由于菌体死亡或自溶常使 G+菌转呈阴性反应。
(4)用3%盐酸酒精脱色,直到流下的脱色剂无色为
止,水洗。 (5)用碱性美蓝染液复染30秒,水洗、干燥、镜检。
【结果观察】 1.结核杆菌染成红色,细长,直的或为微 弯曲,有的可表现出分枝特征,偶而有着 色不匀,成颗粒状者。亦可以见到有纵行 条索状排列。标本的其余部分及非抗酸性 细菌染成蓝色。必须逐一观察各个视野, 直待全部涂片找不到结核杆菌时,才可报 告阴性。
精处理也不易脱色,再经美兰复染,结核
杆菌及其它分枝杆菌仍呈红色,而非抗酸
菌和细胞杂质等呈蓝色。
【材料】
①结核病人的咳痰液:采取清晨第一口粘 痰,或浓缩集落菌法处理过的痰标本。 ②石炭酸复红染色液,3%盐酸酒精,碱性 美蓝染液 ③生理盐水
④载物玻片,滤纸片、接种环、玻片夹、 酒精灯、蜡笔等
2.涂片染色能查到结核杆菌者,一般需要
每ml痰液内含菌量至少应有500个以上, 甚至需达到5万以上。故材料多进行浓缩集 菌处理,以提高检出阳性率,也造成在染 色标本片观察中,不一定每个视野都能看 到结核杆菌。
3.结核杆菌易发生变异,在陈旧培养基或临
床治疗后标本材料中,结核杆菌往往菌体断 裂,或形成非抗酸性革兰氏阳性的短杆状、 球状颗粒,亦称Much颗粒。 4.标本经高压灭菌处理,不影响染色结果, 也保证操作者的安全。
细菌的简单染色和革兰染色实验报告

细菌的简单染色和革兰染色实验报告生32 程雨婧2013012406一、实验目的1、学习无菌操作技术,掌握细菌涂片的制备方法。
2、巩固显微镜油镜的使用方法。
3、掌握细菌简单染色法和革兰染色法的原理及操作步骤,识别细菌的革兰染色结果。
二、实验原理细菌生长于酸性、中性和碱性溶液时常带负电荷,所以通常采用带正电荷的碱性染料(如美蓝、甲紫、碱性复红或孔雀绿等)使其着色。
当细菌分解糖类产酸时,细菌所带正电荷增加易被带负电荷的酸性染料(如伊红、酸性复红或刚果红)着色。
简单染色法就是只用一种染料使细菌着色以显示其形态的方法。
革兰氏染色法(Gram Staining)由丹麦病理学家Christian Gram于1884年创立,是细菌学中很重要的鉴别染色法,因为通过此法染色,可将细菌鉴别分类为革兰氏阳性菌(G+)和革兰氏阴性菌(G-)这两种类型,是细菌学中最常用的鉴别性染色法。
革兰氏染色法之所以能够将细菌区分为革兰氏阳性菌(G+)和革兰氏阴性菌(G-)两大类,是因为这两类菌的细胞壁结构和成分不同。
一般认为革兰阴性细菌的肽聚糖层很薄,脂肪含量高,经乙醇处理后部份细胞壁可能被溶解并改变其组织状态,细胞壁孔径大,不能阻止溶剂透入,因而将结晶紫与碘的复合物洗去而被脱色,再经番红复染就染成了红色;革兰阳性细菌的肽聚糖层较厚,经乙醇处理后使之发生脱水作用而使孔径缩小,结晶紫与碘的复合物保留在细胞内而不被脱色。
除此之外,革兰染色的差异还应考虑物理结构的不同,例如酵母菌虽然是不是细菌,既不是革兰氏阴性菌,也不是革兰氏阳性菌,但具有革兰染色阳性反应。
三、实验器材1、菌种:大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、葡萄球菌、酵母菌、待鉴定的未知菌S1和S2。
2、仪器及其他用品:显微镜、酒精灯、打火机、接种环、载玻片、盖玻片、擦镜纸、擦镜液、吸水纸、镜油、无菌牙签。
3、简单染液:结晶紫染液、番红染液。
4、革兰染液:结晶紫染液、革氏碘液、95%乙醇溶液、番红染液四、实验步骤(一)简单染色1、载玻片的处理:从乙醇溶液中取出洗干净的载玻片,用吸水纸擦干,将要涂菌的部位在酒精灯火焰上烤一下,可以去除油脂,冷却待用。
5-111121-抗酸染色

微生物实验( 微生物实验(五)
痰标本抗酸染色 厌氧菌形态培养 分枝杆菌培养 麻风杆菌形态观察
2011-11-21
(一)厌氧菌的形态培养
• 经呼吸道、接触感染 经呼吸道、 • 引起麻风病 瘤型麻风(开放型): ):传染性强 瘤型麻风(开放型):传染性强 结核样型(闭锁性): ):传染性弱 结核样型(闭锁性):传染性弱 • 微检:标本涂片抗酸染色是诊断麻风的 微检: 主要依据
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麻风杆菌的抗酸染色
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抗酸染色
原理: 一、原理:
• 抗酸性杆菌(结核杆菌、麻风杆菌等)的细胞壁内含有 抗酸性杆菌(结核杆菌、麻风杆菌等) 大量的脂质(主要是分枝菌酸) 包围在肽聚糖的外面, 大量的脂质(主要是分枝菌酸),包围在肽聚糖的外面, 所以分枝杆菌用一般染色不易着色,需用强染剂(5%石 所以分枝杆菌用一般染色不易着色,需用强染剂(5%石 炭酸复红溶液)加温或延长染时间才可着色。 炭酸复红溶液)加温或延长染时间才可着色。但分枝菌 酸与染料结合后,又很难被酸性脱色剂(3%盐酸酒精 盐酸酒精) 酸与染料结合后,又很难被酸性脱色剂(3%盐酸酒精) 脱色,因而被染成红色,故名抗酸染色。 脱色,因而被染成红色,故名抗酸染色。 • 齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸 复红牢固结合成复合物,用盐酸酒精处理也不脱色。 复红牢固结合成复合物,用盐酸酒精处理也不脱色。当 再加碱性美兰复染后,分枝杆菌仍然为红色, 再加碱性美兰复染后,分枝杆菌仍然为红色,而其他细 非抗酸性菌)及背景中的物质为兰色。 菌(非抗酸性菌)及背景中的物质为兰色。
抗酸染色法实验报告

竭诚为您提供优质文档/双击可除抗酸染色法实验报告篇一:抗酸染色法抗酸染色法目录1简介2抗酸染色的原理3抗酸染色一般步骤?1)初染?2)脱色?3)复染4抗酸染色的染液配制简介编辑抗酸染色法acid-faststainingmethod1882年由埃利希(F.ehrlich)首创并经F.齐尔(Ziehl)改进而创造出的细菌染色法。
其中最具代表性的为对结核菌的齐尔-尼尔森(Ziehl-neelsen)染色法和齐尔-加贝特(Ziehl-gabbet)染色法。
用石炭酸复红染色后,用盐酸乙醇分色,再用美蓝进行对比染色,即不再脱色而呈现石炭酸复红的红色。
抗酸染色的原理编辑分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质,包围在肽聚糖的外面,所以分枝杆菌一般不易着色,要经过加热和延长染色时间来促使其着色。
但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后,就很难被酸性脱色剂脱色,故名抗酸染色。
齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物,用盐酸酒精处理也不脱色。
当再加碱性美兰复染后,分枝杆菌仍然为红色,而其他细菌及背景中的物质为蓝色。
抗酸染色一般步骤编辑1)初染用玻片夹夹持涂片标本,滴加石炭酸复红2-3滴,在火焰高处徐徐加热,切勿沸腾,出现蒸汽即暂时离开,若染液蒸发减少,应再加染液,以免干涸,加热3-5分钟,待标本冷却后用水冲洗。
2)脱色3%盐酸酒精脱色30秒~1分钟;用水冲洗。
3)复染用碱性美兰溶液复染1分钟,水洗,用吸水纸吸干后用油镜观察。
抗酸染色的染液配制编辑1、石炭酸复红碱性复红酒精饱和溶液10mL5%石炭酸90mL2、3%盐酸酒精浓盐酸3mL95%酒精97mL3、吕氏美兰液美兰酒精饱和液30mL氢氧化钾(1:10000)100mL篇二:实验二十四抗酸染色-jpkchnadlcn课程名称:微生物学检验技术授课专业:医学检验学时:2学时实验十七结核杆菌检验(m.TuberculosisTest)一、实验目的⒈掌握结核杆菌的菌落特征,镜下形态、染色特性⒉掌握抗酸染色的原理、操作步骤,结果报告二、实验器材与试剂⒈菌种:bcg⒉试剂:抗酸染液⒊其他:三脚架、铁片、木夹子等三、实验内容㈠微生物学诊断⒈标本采取根据病灶器官取材,包括痰,尿,脑脊液,粪便等。
革兰氏染色法实验报告共5篇

革兰氏染色法实验报告篇一革兰氏染色法是一种常用的细菌染色方法,可用于鉴定细菌的类型和形态。
以下是一份革兰氏染色法的实验报告范例,包含实验目的、实验原理、实验步骤、实验结果和结论等部分。
实验目的: 1.了解革兰氏染色法的原理和步骤; 2.掌握细菌的革兰氏染色方法; 3.观察细菌在革兰氏染色中的反应,并进行鉴定。
实验原理:革兰氏染色法是根据细菌细胞壁的特性而设计的一种染色方法。
细菌细胞在染色过程中会根据细胞壁的结构不同,分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
革兰氏阳性菌具有较厚的细胞壁,含有较多的革兰氏染色阳性物质(如染色时用的紫檀碱),因此在染色后会呈现紫色。
革兰氏阴性菌细胞壁较薄,不含有革兰氏染色阳性物质,染色时使用的碘酒(革兰氏碘化酒)能使它产生复合革兰氏染色阳性物质(碘靛紫),再用酒精脱色,再用洋红着色,使其产生颜色变化,最终呈现红色。
实验步骤: 1.准备好菌液:选取需检测的菌株,用无菌盘收集少量菌落,用少量生理盐水悬浮,制备菌液。
2.片玻璃片:在清洁无菌玻璃片上滴上一滴菌液。
3.烘干:将玻璃片架起,自然风干。
4.固定:将玻璃片的细菌涂片在火焰上迅速烘烤,使其牢固地附着在玻璃片上。
5.染色:将烘烤后的玻璃片放入紫檀液中,染色1分钟。
6.脱色:用酒精脱色10-30秒。
7.洗净:用自来水清洗片上的超染色剂。
8.再染:将片浸入碘靛紫溶液中,染色1-2分钟。
9.脱色:用酒精脱色10-30秒。
10.洗净:用自来水清洗片上的超染色剂。
11.观察:利用显微镜观察和比较细菌的形态和染色情况。
12.记录:记录细菌的形态、颜色等观察结果。
实验结果:通过观察细菌的形态和颜色,我们可以得出以下结论:•革兰氏阳性菌在染色后呈现紫色;•革兰氏阴性菌在染色后呈现红色。
结论:革兰氏染色法是一种常用的细菌染色方法,通过染色反应可以初步鉴定细菌的类型。
本次实验中,我们成功地使用革兰氏染色法对细菌进行了染色和鉴定,观察到了不同细菌的染色结果,并且将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两类。