微生实验报告 2012.10.10 实验一 细菌的简单染色和革兰氏染色
细菌的简单染色和革兰染色实验报告
实验二：细菌的简单染色和革兰染色一、实验目的1.掌握细菌涂片的制备方法。
2.掌握细菌简单染色和革兰染色法的原理及操作步骤，识别细菌的革兰染色结果。
3.巩固显微镜油镜的使用方法。
4.学习无菌操作技术。
二、实验原理1、染色原理：细菌生长于酸性、中性和碱性溶液时常带负电荷，所以通常采用带正电荷的碱性染料（如美蓝、甲紫、碱性复红或孔雀绿等）使其着色。
当细菌分解糖类产酸时，细菌所带正电荷增加易被带负电的酸性染料（如伊红、酸性复红或刚果红）着色。
2、革兰染色法原理：革兰染色法可根据细菌细胞壁结构和成分的不同，将其分为革兰阳性菌和革兰阴性菌。
革兰阳性细菌的肽聚糖层较厚，经乙醇处理后使之发生脱水作用而使孔径缩小，结晶紫与碘的复合物保留在细胞内而不被脱色；而革兰阴性细菌的肽聚糖层很薄，脂肪含量高，经乙醇处理后部份细胞壁可能被溶解并改变其组织状态，细胞壁孔径大，不能阻止溶剂透入，因而将结晶紫与碘的复合物洗去而被脱色。
另外，革兰染色的差异并不能完全认为是化学的差别，也有物理结构不同的结果。
如酵母菌细胞壁的成份完全与细菌不同，但具有革兰染色阳性反应。
三、实验仪器，材料和用具1、仪器及用具：显微镜、酒精灯、火柴、接种环、载玻片、盖玻片、镊子、擦镜纸、镜油、无菌牙签2、菌种：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、葡萄球菌、牙垢、未知菌S1和S33、试剂：结晶紫染液、革氏碘液、洗脱液（95%乙醇溶液）、番红染液四、实验步骤（1）简单染色1、载玻片的处理：用纱布将取出的载玻片擦干，把要涂菌的部位在火焰上烤一下，冷却待用。
2、涂片：左手持菌液试管，右手持接种环在火焰上烧灼灭菌，待接种环冷却后在火焰旁从试管中取一环菌液，在洁净无脂的载玻片上涂一直径约2mm的均匀薄膜。
3、干燥：涂片后待其自然干燥。
4、固定：将以干燥好的涂片标本朝上，在酒精灯火焰上通过2~3次，要求载玻片温度不能超过60度，以手背触载片不烫为宜。
5、染色：滴加一滴结晶紫染液，染色1min。
微生实验报告 2012.10.10 实验一 细菌的简单染色和革兰氏染色
答：
染色时，乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节，脱色不足，阴性菌被误染成阳性菌，脱色过度，阳性菌被误染成阴性菌。
7、叙述无菌操作时应注意的问题？
答：
1、使用前超净工作台开15分钟紫外线
2、注意开通风
3、使用的器皿注意消毒
4、操作时戴无菌手套或并用75%酒精消毒
5、操作时尽量靠近酒精灯火焰
1．涂片：
取干净载玻片一片，在载玻片的左右各加一滴生理盐水，按无菌操作法取菌涂片，左边涂金黄色葡萄球菌，右边涂大肠杆菌，做成浓菌悬液。再取干净载玻片一块将刚制成的金黄色葡萄球菌浓菌悬液挑1~2环涂在左边制成薄的涂片，将大肠杆菌的浓菌悬液取1~2环涂在右边制成薄涂片。亦可直接在载玻片上制薄的涂片，注意取菌不要太多。
微生实验报告
姓名：
xx
专业年级：2011级生物技术
学号：1032
实验二细菌的简单染色和革兰氏染色
一、实验目的
学习细菌的简单染色法和革兰氏染色法的实验原理和实验操作。
二、实验原理
用于生物染色的染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类。碱性染料的离子带正电荷，能和带负电荷的物质结合。因细菌蛋白质等电点较低，当它生长于中性、碱性或弱酸性的溶液中时常带负电荷，所以通常采用碱性染料（如美蓝、结晶紫、碱性复红或孔雀绿等）使其着色。酸性染料的离子带负电何，能与带正电荷的物质结合。当细菌分解糖类产酸使培养基pH值下降时，细菌所带正电荷增加，因此易被伊红、酸性复红、或刚果红等酸性染料着色。中性染料是前两者的结合物，又称复合染料，如伊红美蓝、伊红天青等。
(2)革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌无色。
4、你认为革兰氏染色中，哪一个步骤可以省去而不影响最终结果？在什么情况下可以采用？
细菌的简单染色和革兰氏染色实验报告
细菌的简单染色和革兰氏染色实验报告细菌的简单染色和革兰氏染色实验报告细菌是微生物中最常见的一类生物，它们广泛存在于自然界的各个角落，包括土壤、水体、空气等。
为了更好地了解细菌的形态和结构，科学家们开展了许多实验，其中包括细菌的简单染色和革兰氏染色。
一、细菌的简单染色实验细菌的简单染色是一种常用的染色方法，通过给细菌染色，可以使其在显微镜下更加清晰可见。
这种染色方法主要使用了一种叫做甲基蓝的染料。
在实验中，首先需要制备好细菌的涂片。
将一根无菌的钢丝棒蘸取一小滴细菌悬液，然后将其均匀地涂抹在玻璃片上。
待涂片干燥后，将其固定在火焰上加热的玻璃柱上，以使细菌附着在玻璃片上。
接下来，将制备好的涂片放入染色盒中，加入适量的甲基蓝染料，浸泡片刻。
然后，用蒸馏水轻轻冲洗涂片，直至水洗液不再有颜色流出。
最后，用纸巾轻轻吸干涂片上的水分，将其放入显微镜下观察。
在显微镜下观察，我们可以清楚地看到细菌的形态和结构。
不同种类的细菌可能会呈现出不同的形状，例如球状、杆状、螺旋状等。
通过简单染色，我们可以更好地观察和研究细菌的特征。
二、革兰氏染色实验革兰氏染色是一种常用的细菌染色方法，它可以将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。
这种染色方法主要使用了紫晶染料和碘酒。
在实验中，首先需要制备好细菌的涂片，方法与简单染色相同。
然后，将涂片放入染色盒中，加入适量的紫晶染料，浸泡片刻。
接着，用蒸馏水轻轻冲洗涂片，直至水洗液不再有颜色流出。
接下来，将碘酒滴在涂片上，使其浸润全片，然后用蒸馏水轻轻冲洗涂片。
随后，滴入乙醇或酒精醛溶液，使其浸润全片，然后用蒸馏水轻轻冲洗涂片。
最后，滴入蓝色染料，浸泡片刻后用蒸馏水冲洗涂片。
在显微镜下观察，我们可以看到细菌的染色效果。
革兰氏阳性菌会呈现紫色或蓝色，而革兰氏阴性菌则呈现红色或粉色。
这是因为革兰氏阳性菌的细胞壁含有较多的胆固醇，可以吸附紫晶染料和碘酒，而革兰氏阴性菌的细胞壁则较薄，无法吸附这些染料。
微生实验报告2012.10.10实验一细菌的简单染色和革兰氏染色
微生实验报告姓名:王晶晖专业年级：2011级生物技术学号:040312011032实验二细菌的简单染色和革兰氏染色一、实验目的学习细菌的简单染色法和革兰氏染色法的实验原理和实验操作。
二、实验原理用于生物染色的染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类。
碱性染料的离子带正电荷，能和带负电荷的物质结合。
因细菌蛋白质等电点较低，当它生长于中性、碱性或弱酸性的溶液中时常带负电荷,所以通常采用碱性染料(如美蓝、结晶紫、碱性复红或孔雀绿等）使其着色.酸性染料的离子带负电何，能与带正电荷的物质结合。
当细菌分解糖类产酸使培养基pH值下降时，细菌所带正电荷增加，因此易被伊红、酸性复红、或刚果红等酸性染料着色。
中性染料是前两者的结合物，又称复合染料，如伊红美蓝、伊红天青等。
简单染色法是只用一种染料使细菌着色以显示其形态的方法，简单染色一般难于辨别细菌细胞的构造。
革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C。
Gram所创立的。
革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G—）两大类,是细菌学上最常用的鉴别染色法。
该染色法之所以能将细菌分为G+菌和G—菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的.G-菌的细胞壁中含有较多的易被乙醇溶解的类脂质,增加了细胞壁的通透性，使处染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色,再经番红复染后就成红色。
G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，草酸铵结晶紫与碘的复合物不易被脱掉，因此细菌仍保留处染时的紫色。
三、实验器材1、菌种:金色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌。
2、染色剂和试剂：草酸铵结晶紫染液,卢哥氏碘液,95%酒精，番红复染液，复红染液,吕氏美蓝染液，显微镜擦拭液(乙醚:乙醇=7：3）,香柏油.3、器材：废液缸,洗瓶，载玻片，接种环，酒精灯，擦镜纸，双层瓶，显微镜。
四、实验方法（一）简单染色1．涂片：取干净载玻片一片，在载玻片的左右各加一滴生理盐水,按无菌操作法取菌涂片，左边涂金黄色葡萄球菌，右边涂大肠杆菌，做成浓菌悬液。
微生物的革兰氏染色实验报告doc
微生物的革兰氏染色实验报告.doc 微生物的革兰氏染色实验报告一、实验目的和要求本次实验的目的是学习并掌握革兰氏染色的基本原理和操作方法，了解革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的细胞壁结构和染色特性的差异，以及革兰氏染色在微生物学研究和临床诊断中的应用价值。
实验要求学生掌握革兰氏染色的步骤和注意事项，能独立进行革兰氏染色操作，并能对染色结果进行正确分析和解释。
二、实验原理和方法革兰氏染色是一种常用的细菌分类和鉴定方法，其基本原理是通过不同的染色步骤和处理条件，使细菌细胞壁上的化学成分产生不同的反应，从而导致细菌细胞呈现出不同的颜色。
革兰氏阳性菌的细胞壁较厚，主要由肽聚糖和磷壁酸组成，能够抵抗革兰氏染色的脱色剂乙醇的处理，因此能够保留结晶紫的颜色，呈现出紫色。
而革兰氏阴性菌的细胞壁较薄，主要由脂蛋白、磷脂和脂多糖组成，容易被乙醇脱色，再用复染剂番红染色后呈现出红色。
革兰氏染色的具体步骤如下：1.涂片：在干净的载玻片上滴一滴无菌水，用接种环取少量细菌与水滴充分混合，制成薄而均匀的涂片。
2.固定：将涂片在空气中自然干燥或用火焰固定。
3.初染：用结晶紫染色液染色1-2分钟，用水冲洗。
4.媒染：用碘液媒染1分钟，用水冲洗。
5.脱色：用95%乙醇脱色30秒-1分钟，用水冲洗。
6.复染：用番红染色液染色1-2分钟，用水冲洗。
7.镜检：用油镜观察并记录细菌的颜色和形态。
三、实验步骤和结果本次实验选用大肠杆菌（E. coli）和金黄色葡萄球菌（S. aureus）作为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的代表，按照上述步骤进行革兰氏染色操作。
具体步骤如下：1.在干净的载玻片上滴一滴无菌水，用接种环取少量大肠杆菌和金黄色葡萄球菌分别与水滴充分混合，制成薄而均匀的涂片。
2.将涂片在空气中自然干燥或用火焰固定。
3.用结晶紫染色液染色1-2分钟，用水冲洗。
4.用碘液媒染1分钟，用水冲洗。
5.用95%乙醇脱色30秒-1分钟，用水冲洗。
6.用番红染色液染色1-2分钟，用水冲洗。
实验细菌的简单染色与革兰氏染色
掌握简单染色和革兰氏染色的操作方法
简单染色
将细菌涂片或培养物直接与染料混合 ，然后进行观察。操作简单，适用于 初步观察细菌形态。
革兰氏染色
一种特殊的染色方法，通过结晶紫初 染、碘液媒染、酒精脱色和沙黄复染 等步骤，将细菌分为革兰氏阳性菌和 革兰氏阴性菌两类。
出版年份：XXXX年
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简单染色方法简便，操作相对容易，但只能显示细菌的形态 和结构，不能提供细菌的种类信息。
革兰氏染色原理
01
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革兰氏染色是一种常用 的细菌鉴别染色法，通 过使用结晶紫、碘液和 酒精等染料对细菌进行 染色，能够将细菌分为 革兰氏阳性菌和革兰氏 阴性菌两大类。
革兰氏染色的原理主要 是基于细菌细胞壁的成 分和结构不同，导致对 染料的吸附和着色能力 。
复染
将涂片浸入稀释后的伊 红或沙黄染色液中，染
色一定时间后取出。
冲洗
用清水冲洗涂片，去除 染色液。
观察
在显微镜下观察染色结 果，判断细菌是革兰氏
阳性还是阴性。
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实验结果与分析
简单染色结果与分析
染色结果
通过简单染色法，细菌被 染上了不同的颜色，如红 色或紫色。
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涂片制备
将细菌均匀涂在载玻片上，晾 干。
染色
将涂片浸入染色液中，染色一 定时间后取出。
冲洗
用清水冲洗涂片，去除染色液 。
观察
在显微镜下观察染色结果，判 断细菌类型。
革兰氏染色步骤
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02
03
涂片制备
环境中微生物的检测,细菌的简单染色,细菌的革兰氏染色
实验一：环境中微生物的检测，细菌的简单染色，细菌的革兰氏染色作业题：1、为什么在培养过程中要将培养基平板倒置答：倒置的原因为1、防止培养基水汽凝结后流下到培养基上，从而冲散菌落并造成多菌落的污染串染，不利于细菌菌落的计数统计；2、同时培养基倒置后，可以有效防止外部空气进入，防止杂菌污染培养基2、为什么在实验中要留空白对照答：预留空白对照组，可以通过观察空白对照组中菌落生长情况，排除可能的因操作原因造成的无关杂菌、无关变量的污染干扰。
同时可以验证菌落生长长势不因为培养基制备的原因而产生误差。
3、比较测试培养皿和对照培养皿中的菌落数说明什么问题答：测试培养皿和对照培养皿同时进行操作，可以通过观察对照空白培养皿中的菌落数，对照排除测试培养皿中因培养基制作或培养皿自身灭菌等操作误差引起的染菌因素。
便于判定测试培养皿中哪些是来自环境中的微生物，哪些是来自于培养皿本身所携带微生物。
4、通过实验谈谈你对无菌操作的认识答：通过第一次的实验，我们已经认识到环境中的微生物是无处不在的。
在微生物实验中，只要不注意，就很有可能造成杂菌的污染而影响到正常实验。
在实验课上我们学到的是最基本的无菌操作技术，而更重要的是树立无菌操作的意识，比如在操作的时候尽量不说话、不用手去触碰非无菌区域，对菌落进行接种时应该靠近火焰，操作完后再次在火焰上方灼烧消毒等等。
5、制片时为什么要固定？固定时应该注意什么事项？答：制片时固定的意义在于防止后期在染色和冲洗玻片时细菌会随着流水冲散甚至冲走，造成制片失败。
固定时应注意不应直接将玻片放于酒精灯外焰灼烧，否则会造成细菌因迅速脱水而无法顺利固定在玻片上。
同时不能灼烧过度否则会造成细菌缩水变形。
6、在使用和清理油镜过程中应注意哪些过程？答：油镜属精密仪器，需轻拿轻放并不能将镜子反向放置。
在使用前，需对油镜用擦镜纸的光面蘸取少量松柏油擦拭油镜镜头，同时在样品玻片上样品处滴加少量松柏油。
放置好后调至油镜，先调节粗准焦螺旋待其离样本距离很近时，换用细准焦螺旋调节，待其与样本上松柏油接触形成一条油线。
细菌简单染色及革兰氏染色实验
细菌简单染色一、实验器材1、菌种：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物。
2、溶液和试剂：草酸铵结晶紫溶液、齐氏石炭酸复红溶液、吕氏碱性美蓝溶液、革兰氏染色用碘液、乳酸石炭酸棉蓝染液。
3、仪器和其他用品：酒精灯、载玻片、显微镜、双层瓶、擦镜纸、接种环、镊子、平皿、滴管、生理盐水、50%乙醇等。
二、目的要求1、学习病掌握微生物的制片及简单染色的基本技术2、初步了解细菌、酵母菌及霉菌的形态特征和相互区别3、巩固显微镜操作技术及无菌操作技术三、基本原理利用单一染料对菌体进行染色的方法称为简单染色。
用于染色的染料是一类苯环上带有发色基团和助色基团的有机化合物。
发色基团赋予染料颜色特征，而助色基团使染料能够成盐。
常用的微生物细胞染料都是盐，分碱性染料和酸性染料，前者包括美蓝、结晶紫、碱性复红、沙黄（番红）及孔绿绿等，后者包括选型复红、伊红及刚果红灯。
通常常用碱性染料进行简单染色，原因在于微生物细胞在碱性、中性及弱酸性溶液中通常带负电荷，而染料电离后染色部分带正电荷，很容易与细胞结合使其着色，有利于观察。
对个体较小的细菌进行制片时采取涂片发，通过涂抹使细胞个体在载玻片均匀分布，避免菌体堆积而无法观察个体形态，通过加热固体使细胞质凝固，使细胞固定在载玻片上，这种加热处理还可以杀死大多数细菌而且不破坏细胞形态。
四、操作步骤1、涂片取一块载玻片，用记号笔平均分为两个区域并标记；各滴一小滴生理盐水于两个区域中央；用接种环无菌操作分别挑取少许枯草芽孢杆菌、大肠杆菌及金黄色葡萄球菌营养琼脂斜面菌苔于载玻片上的生理盐水中，涂抹菌苔使其成均匀的薄膜。
2、干燥自然干燥或用电吹风干燥。
3、固定涂菌面朝上，通过火焰2-3次。
4、染色将载玻片平放于载玻片支架上，滴加染液覆盖涂菌部位即可，吕氏碱性美蓝1.5min，草酸铵结晶紫染液或齐氏石炭酸复红染液1min。
5、水洗用吸水纸吸去多余水分，自然干燥或电吹风吹干。
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微生实验报告
姓名：王晶晖
专业年级：2011级生物技术
学号：************
实验二细菌的简单染色和革兰氏染色
一、实验目的
学习细菌的简单染色法和革兰氏染色法的实验原理和实验操作。
二、实验原理
用于生物染色的染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类。
碱性染料的离子带正电荷，能和带负电荷的物质结合。
因细菌蛋白质等电点较低，当它生长于中性、碱性或弱酸性的溶液中时常带负电荷，所以通常采用碱性染料（如美蓝、结晶紫、碱性复红或孔雀绿等）使其着色。
酸性染料的离子带负电何，能与带正电荷的物质结合。
当细菌分解糖类产酸使培养基pH值下降时，细菌所带正电荷增加，因此易被伊红、酸性复红、或刚果红等酸性染料着色。
中性染料是前两者的结合物，又称复合染料，如伊红美蓝、伊红天青等。
简单染色法是只用一种染料使细菌着色以显示其形态的方法，简单染色一般难于辨别细菌细胞的构造。
革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C.Gram所创立的。
革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G—）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。
该染色法之所以能将细菌分为G+菌和G—菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。
G—菌的细胞壁中含有较多的易被乙醇溶解的类脂质，增加了细胞壁的通透性，使处染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经番红复染后就成红色。
G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，草酸铵结晶紫与碘的复合物不易被脱掉，因此细菌仍保留处染时的紫色。
三、实验器材
1、菌种：金色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌。
2、染色剂和试剂：草酸铵结晶紫染液，卢哥氏碘液，95%酒精，番红复染液，复红染液，吕氏美蓝染液，显微镜擦拭液（乙醚：乙醇=7:3），香柏油。
3、器材：废液缸，洗瓶，载玻片，接种环，酒精灯，擦镜纸，双层瓶，显微镜。
四、实验方法
（一）简单染色
1．涂片：取干净载玻片一片，在载玻片的左右各加一滴生理盐水，按无菌操作法取菌涂片，左边涂金黄色葡萄球菌，右边涂大肠杆菌，做成浓菌悬液。
再取干净载玻片一块将刚制成的金黄色葡萄球菌浓菌悬液挑1~2环涂在左边制成薄的涂片，将大肠杆菌的浓菌悬液取1~2环涂在右边制成薄涂片。
亦可直接在载玻片上制薄的涂片，注意取菌不要太多。
2．晾干：让涂片自然晾干。
3．固定：手执玻片一端，让菌膜朝上，通过火焰（通常2~3次）固定（具体温度以不烫手为宜）。
4．染色：将固定过的涂片加复红染色1~2min
5．水洗：用水洗去涂片上的染色液。
6．干燥：将吸过地涂片放在空气中晾干或用吸水纸吸干。
7．镜检：先用低倍镜观察，再用高倍镜观察，找出适当的视野后，将高倍镜转出，在涂片上滴加香柏油一滴，将油镜头浸入油滴中仔细调焦观察细菌形态。
（二）革兰氏染色
1.涂片：涂片方法与简单染色法涂片相同。
2.晾干：与简单染色法相同。
3.固定：与简单染色法相同。
4.结晶紫染色：将玻片加适量（盖满细菌涂面）的结晶紫染色液染色1min。
5.水洗：倾去染色液，用自来水小心地冲洗至流出的水无色为止。
6.媒染：滴加卢哥氏碘液，媒染1min。
7.水洗：用自来水洗去碘液。
8.脱色：将玻片倾斜，连续点滴95%乙醇通过涂面脱色20~25s至流出液无色，立即水洗。
9.复染：滴加番红复染1~3min。
10.水洗：用自来水洗去涂片上的番红染色液。
11.晾干：将染好的涂片方空气中晾干或者用吸水纸吸干。
12.镜检：镜检时先用低倍物镜，再用高倍物镜，最后用油镜观察，并判断菌体的革兰氏染色反应性。
13.实验完毕的处理：将浸过油的镜头按下述步骤擦拭干净。
先用擦镜纸将油镜上的油擦去。
再用擦镜纸沾少许显微镜镜头擦拭液将镜头擦2~3次。
最后用干净的擦镜纸将镜头擦2~3次。
注意：擦镜头时向一个方向擦拭。
五、实验报告
绘出金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和大肠杆菌的形态图，并注明两菌的革兰氏染色的反应性。
六、实验分析
第一次做微生物的实验，总体来说还可以，但对革兰氏染色的方法还是不是很熟悉，实验结果感觉一般，效果不是十分明显，应该是制片做的不是很成功，还有第一次接触油镜，用起来不是很顺手，望以后能实验顺利。
七、思考题
1、对未知菌进行革兰氏染色时，怎样确保你的染色正确、结果可靠？
答：找事先已知的且和未知菌形态明显不同的G+和G-分别做混合涂片，当和G+做时G+正确显紫色和当和G-做时G-正确显红色，看这个未知菌分别显什么色，若一致，则可确定此菌为G+或G-。
再回过头单做此未知菌的革兰氏染色，显现正确那就证明此染色技术操作正确。
也可在开始做已知的与此菌形态明显不同的G+和G-三者混合涂片，一下知晓此未知菌的阴阳性，再回过头来染色。
2、做革兰氏染色涂片为什么不能过于浓厚？
答：1、如果过于浓厚，菌体会很难吸附到载玻片上，染色冲洗过程中很容易被冲下来
2、表层被染色，但是内层菌体很难染色。
3、显微镜观察时很难看清，细胞重叠。
3、革兰氏染色时，处染前能加碘液吗？乙醇脱色后复染前，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌
应分别是什么颜色？
答：(1)不能，初染之前加的话，就会先和染料结合成大分子，使得染料分子不能穿过细胞壁进入细菌的质膜，达不到初染的效果。
(2)革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌无色。
4、你认为革兰氏染色中，哪一个步骤可以省去而不影响最终结果？在什么情况下可以采用？
答：当菌体为革兰氏阳性菌时，可以省去复染这个步骤。
5、用油镜观察时为什么要完全晾干？
答：因为用油镜观察时,镜头离玻片会很近.如果未完全干燥,载玻片上的液体会污染油镜镜头.镜头非常精密,被污染后不利于下次观察.正常情况下,观察前要用擦镜纸擦拭干净.另外,一
般作细菌装片不用盖盖玻片,所以待干燥后才能观察.如果盖上盖玻片后就不用考虑需要干燥的问题.
6、革兰氏染色成败的关键是什么？
答：染色时，乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节，脱色不足，阴性菌被误染成阳性菌，脱色过度，阳性菌被误染成阴性菌。
7、叙述无菌操作时应注意的问题？
答：1、使用前超净工作台开15分钟紫外线
2、注意开通风
3、使用的器皿注意消毒
4、操作时戴无菌手套或并用75%酒精消毒
5、操作时尽量靠近酒精灯火焰。